某免疫雞群的新城疫抗體效價(jià)監(jiān)測(cè)報(bào)告-0

某免疫雞群的新城疫抗體效價(jià)監(jiān)測(cè)報(bào)告_0某免疫雞群的新城疫抗體效價(jià)監(jiān)測(cè)報(bào)告核心提示:新城疫是由新城疫病毒引起的雞和火雞的一種急性、高度接觸性和毀滅性的傳染病。新城疫流行于世界各國(guó)，在150多個(gè)國(guó)家和地區(qū)都有此病發(fā)生。隨著高度集約化養(yǎng)雞業(yè)的發(fā)展，新城疫的防治也備受關(guān)注。近年來(lái)，新城疫的新城疫是由新城疫病毒引起的雞和火雞的一種急性、高度接觸性和毀滅性的傳染病。新城疫流行于世界各國(guó)，在150多個(gè)國(guó)家和地區(qū)都有此病發(fā)生。隨著高度集約化養(yǎng)雞業(yè)的發(fā)展，新城疫的防治也備受關(guān)注。近年來(lái)，新城疫的流行趨勢(shì)發(fā)生了變化，以發(fā)病率低、臨床癥狀不明顯、病理變化不典型、死亡率低、蛋雞產(chǎn)蛋量下降為特征的非典型新城疫，使得新城疫的防治變得更加復(fù)雜和棘手。新城疫目前仍然是嚴(yán)重危害我國(guó)養(yǎng)禽業(yè)的主要疾病之一，造成的經(jīng)濟(jì)損失十分巨大。除了大量死亡的直接損失外，還因幸存者生長(zhǎng)發(fā)育受阻、飼料轉(zhuǎn)化率低、產(chǎn)蛋量下降、受精率和孵化率降低以及封鎖隔離等措施花費(fèi)的大量人力和財(cái)力所造成的間接經(jīng)濟(jì)損失。由于機(jī)體免疫機(jī)能狀況等很多因素的綜合影響，使新城疫疫苗接種效果不佳，甚至免疫失敗，新城疫的發(fā)病次數(shù)仍然很高。再者，由于近十多年來(lái)養(yǎng)雞業(yè)的蓬勃發(fā)展，使雞場(chǎng)的數(shù)量巨增，星羅棋布，使疫病種類更加復(fù)雜化、病情程度更加嚴(yán)重。為了更加有效地防治雞新城疫，疫苗免疫后雞新城疫抗體效價(jià)監(jiān)測(cè)，常作為免疫效果評(píng)價(jià)的重要依據(jù)。檢測(cè)家禽血清中雞新城疫抗體的方法有很多種，包括單向輻射免疫擴(kuò)散試驗(yàn)、單向輻射溶血試驗(yàn)、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、雞胚中和試驗(yàn)及蝕斑中和試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)以及血凝抑制試驗(yàn)(HI)等，但常采用血凝試驗(yàn)(HA)與血凝抑制試驗(yàn)(HI)來(lái)定量測(cè)定雞新城疫抗體。ELISA可以半自動(dòng)化操作，其技術(shù)已經(jīng)普及，并且ELISA與HI有很好的相關(guān)性。迄今為止，雞紅細(xì)胞血凝抑制試驗(yàn)仍不失為一種快速準(zhǔn)確的試驗(yàn)手段。本次監(jiān)測(cè)采用HI方法，對(duì)市某戶新城疫疫苗已免疫雞群的1000只100日齡育成雞進(jìn)行檢驗(yàn)，并結(jié)合農(nóng)戶的敘述及實(shí)地考察，做出該雞群新城疫疫苗免疫效果評(píng)價(jià)，以便有的放矢地預(yù)防和控制該養(yǎng)雞場(chǎng)的新城疫。材料與方法材料抽檢雞涿州市某蛋雞場(chǎng)，從100日齡新城疫疫苗免疫育成雞1000只中分別在100日齡和150日齡時(shí)隨機(jī)抽取32只采血并分離血清。試劑和藥品雞新城疫HA抗原、新城疫陽(yáng)性和陰性血清，由中監(jiān)所生產(chǎn);氯化鈉、磷酸二氫鉀、氫氧化鈉、檸檬酸三鈉、葡萄糖、檸檬酸。儀器微量震蕩器微量加樣器、離心機(jī)、天平、手提式壓力蒸汽消毒器、90V型96孔血凝板、電冰箱。(pH7.0~7.2)磷酸緩沖鹽水：氯化鈉(GB1266-77)170克磷酸二氫鉀(GB1274-77)13.6克氫氧化鈉(GB-77)3.0克蒸餾水1000毫升高壓滅菌，4?保存，使用時(shí)作20倍稀釋阿氏(Aisevers)液配置。葡萄糖2.05克檸檬酸鈉0.8克檸檬酸0.055克氯化鈉0.42克加蒸餾水至1000l,加熱溶解后調(diào)pH值至6.1，69kPal5in高壓滅菌，4?保存?zhèn)溆谩７椒u新城疫紅細(xì)胞凝集(HA)試驗(yàn)參照文獻(xiàn)，以微量法測(cè)試新城疫抗原HA價(jià)。1%雞紅細(xì)胞懸液的制備:采取3只成年無(wú)禽流感和新城疫等抗體的健康公雞血與等體積阿氏液混合，用1倍稀釋液洗滌3次，每次均以lOOOr/分鐘離心10分鐘，洗滌后用1倍稀釋液配成1%(V/V)紅細(xì)胞懸液。4?保存?zhèn)溆?。HA試驗(yàn)：自左向右于96孔V型血凝板的每1孔中加1倍稀釋液25口L;吸取25口L的抗原滴加到第1孔，用微量加樣器充分混勻后移取25口L，加于第2孔，依此法從左向右進(jìn)行倍比稀釋至第11孔，從第11孔吸取25口L棄取，第12孔不加抗原作陰性對(duì)照;每孔再加25口L稀釋液;每孔均加1%紅細(xì)胞懸液25口L，置微量震蕩器震蕩2分鐘，室溫下(20?)作用30分鐘，將血凝板傾斜觀察結(jié)果。結(jié)果判定：以100%凝集的最大稀釋孔為新城疫抗原(HA)價(jià)，即一個(gè)凝集單位，不凝集者紅細(xì)胞沉于孔底呈點(diǎn)狀。第12孔為對(duì)照應(yīng)不凝集。雞新城疫紅細(xì)胞凝集抑制(HI)試驗(yàn)參照文獻(xiàn)，以微量法測(cè)試待檢血清中的新城疫血凝抑制抗體效價(jià)。4個(gè)血凝單位抗原的配置：根據(jù)以確定的新城疫抗原血凝價(jià)，計(jì)算4個(gè)單位抗原的稀釋倍數(shù)(血凝價(jià)/4)，以一倍的稀釋液配置出4單位抗原放入冷藏室待用。待檢血清的制備：采取32只待檢雞血液各5毫升置入試管中，靜置至血液凝集后以3000r/分鐘離心2分鐘，吸取血清待檢。HI試驗(yàn):于96孔V型血凝板上，自第1孔至第11孔各加稀釋液25微升，11孔和12孔分別為抗原和紅細(xì)胞對(duì)照;吸取25微升待檢血清滴加到第1孔，用微量加樣器充分混勻后移取25微升，加于第2孔，依此法從左向右進(jìn)行倍比稀釋至第10孔，吸取25微升棄去，12孔加稀釋液50微升;除12孔外每孔中滴加25微升4單位抗原，室溫下(20?)作用30分鐘;每孔均加1%紅細(xì)胞懸液25微升;振蕩2分鐘，室溫下(20?)作用40分鐘，待4單位抗原已凝集紅細(xì)胞可觀察結(jié)果。結(jié)果判定：以100%抑制凝集的血清最大稀釋度為該血清的滴度，即血凝抑制(HI)價(jià)。11孔的抗原對(duì)照應(yīng)為100%凝集，12孔紅細(xì)胞對(duì)照應(yīng)為100%不凝集。結(jié)果與分析新城疫抗原的血凝(HA)價(jià)由試驗(yàn)結(jié)果可知該新城疫抗原的凝集價(jià)為1?512，4個(gè)凝集單位抗原稀釋倍數(shù)為1?128。待檢血清的新城疫抗體的血凝抑制(HI)價(jià)由凝集試驗(yàn)可知，抗原對(duì)照均為100%凝集，紅細(xì)胞對(duì)照均為100%不凝集，各待檢血清的新城疫抗體血凝抑制價(jià);4份為lg2,14份為3lg2，12份為5lg2,4份為6lg2,4份為7lg2,4份為8lg2。就以上結(jié)果進(jìn)一步分析該雞群新城疫疫苗免疫雞，HI價(jià)?6lg2者占37.5%、?5lg2者占62.5%，其中？臨界值4lg2者占25%，表明該雞群免疫失敗，應(yīng)考慮重新進(jìn)行免疫。該雞群HI價(jià)均?8lg2,而且臨床健康，HI價(jià)分布離散，可判定未發(fā)生新城疫病毒感染。該戶根據(jù)我們的建議用新城疫油乳劑滅活苗對(duì)雞群進(jìn)行了新城疫重新免疫，免疫50天后重新進(jìn)行抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果均?5lg2，且?8lg2表明該雞群新城疫免疫抗體合格對(duì)新城疫病毒有一定的抵抗力。討論免疫效果評(píng)價(jià)本次監(jiān)測(cè)新城疫疫苗免疫雞群，HI價(jià)低于5lg2者占62.5%,其中處于或者小于3lg2者占25%,該雞群存在被新城疫病毒感染的威脅，大于或等于6lg2者占37.5%,表明該雞群免疫失敗，應(yīng)考慮重新進(jìn)行免疫。該雞群的HI價(jià)均小于或等于8lg2，且HI價(jià)分布離散，可判定未發(fā)生新城疫病毒感染。該戶根據(jù)建議對(duì)雞群進(jìn)行了重新免疫后，經(jīng)監(jiān)測(cè)新城疫抗體合格。免疫失敗的因素疫苗效價(jià)不高農(nóng)戶貪圖便宜或方便就近從個(gè)體藥店買些效價(jià)不高的疫苗用于雞群免疫，致使免疫效果不佳。免疫方法不當(dāng)農(nóng)戶擔(dān)心疫苗效力不夠，選用3倍,4倍藥量飲水，致使部分雞能飲到超過(guò)正常劑量6倍,7倍的疫苗，這極易引起免疫麻痹或超過(guò)機(jī)體的免疫耐受力而使雞發(fā)病;同時(shí)部分雞只喝到很少一點(diǎn)疫苗，免疫力很差。疫苗應(yīng)用不合理養(yǎng)殖戶認(rèn)為滅活苗誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體水平較高，且維持時(shí)間長(zhǎng)，因而首免就選用新城疫滅活苗進(jìn)行肌肉注射，忽視了弱毒苗的免疫，造成免疫效果不佳。還有一些養(yǎng)殖戶為了省事方便，該進(jìn)行疫苗注射時(shí)不注射而采用飲水的方法進(jìn)行免疫。前面我們進(jìn)行監(jiān)測(cè)的這1戶就是在雞群60日齡時(shí)沒(méi)有用新城疫I系苗進(jìn)行肌肉注射，而是用I系苗進(jìn)行飲水免疫造成免疫不合格。頻繁免疫造成的免疫抑制近年來(lái)，農(nóng)村養(yǎng)雞戶越來(lái)越認(rèn)識(shí)到免疫的重要性，但有時(shí)在機(jī)體內(nèi)抗體效價(jià)還很高且均勻度很好的情況下，盲目進(jìn)行弱毒苗的免疫，容易造成抗體水平下降，雞群容易在抗體下降時(shí)感染新城疫病毒。另一方面，由于抗原的頻繁刺激，機(jī)體應(yīng)答反應(yīng)疲勞，形成免疫抑制。免疫間隔時(shí)間長(zhǎng)。由于雛雞受母源抗體的影響和免疫器官發(fā)育不完善，首免后的抗體效價(jià)往往不高，下降較快，因此使用弱毒苗，在首免后3周之內(nèi)應(yīng)進(jìn)行2免，時(shí)間間隔過(guò)長(zhǎng)，容易造成免疫斷當(dāng)而染病。養(yǎng)雞場(chǎng)因?yàn)殡u群狀況不佳，總想把病治好了再去免疫接種，人為推遲免疫時(shí)間，結(jié)果因健康狀況不佳，抵抗力下降。雞群免疫系統(tǒng)缺損影響雞體的營(yíng)養(yǎng)狀況。農(nóng)村養(yǎng)雞的飼料多是自配料，隨意性比較大，很容易造成某些營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，如某些必需氨基酸、維生素、微量元素的缺乏或不足，致使雞體因營(yíng)養(yǎng)不良而抑制免疫系統(tǒng)的功能。各種應(yīng)激因素的影響。如溫度濕度的急劇變化、擴(kuò)群、換料、饑渴等都能引起機(jī)體免疫系統(tǒng)功能的暫時(shí)性抑制，這時(shí)如果進(jìn)行疫苗免疫接種很容易造成免疫失敗。免疫抑制性疾病的干擾。如傳染性法氏囊病、傳染性支氣管病、馬立克氏病等疾病都能降低免疫應(yīng)答。缺乏綜合性防治措施。為降低養(yǎng)雞成本，農(nóng)村多采用大棚養(yǎng)殖，雞舍簡(jiǎn)