臨床PCR實驗室的分區(qū)設計及工作流程

臨床PCR實驗室的分區(qū)設計及工作流程衛(wèi)生部臨床檢驗中心李金明Telmail:ljm63hn@2010.1.12-13福州臨床基因擴增檢驗實驗室的設計依據：衛(wèi)生部頒發(fā)的《臨床基因擴增檢驗實驗室管理暫行辦法》（衛(wèi)醫(yī)發(fā)[2002]10號）臨床標本的接收通常的工作流程：標本采集血清分離編號保存或檢測應在四個測定區(qū)域之外的地方或區(qū)域內接收接收的標本應收集在原始容器中在核酸提取時帶入至標本制備區(qū)標本的接收區(qū)的儀器設備要求如果在標本接收區(qū)分離血清（漿）標本，有1臺分離血清（漿）用離心機、1臺生物安全柜、1臺冰箱、加樣器及相應一次性經高壓處理的消耗品如帶濾芯吸頭、標本接收編號記錄本以及記號筆等即可。如果不在標本接收區(qū)分離血清（漿）標本，只是簡單的接收，則就不需要分離血清（漿）用離心機、生物安全柜、加樣器及其消耗品。理想的PCR實驗室分區(qū)設計模式A產物分析區(qū)空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向緩沖間緩沖間緩沖間專用走廊工作流向擴增區(qū)標本制備區(qū)試劑準備區(qū)產物分析區(qū)空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向緩沖間緩沖間緩沖間專用走廊工作流向擴增區(qū)標本制備區(qū)試劑準備區(qū)理想的PCR實驗室分區(qū)設計模式B門試劑準備區(qū)標本制備區(qū)擴增區(qū)產物分析區(qū)外走廊門門門門試劑準備區(qū)標本制備區(qū)擴增及產物分析區(qū)外走廊門門門門AB試劑準備區(qū)標本制備區(qū)擴增及產物分析區(qū)門門門門空氣流向空氣流向空氣流向走廊走廊試劑準備區(qū)標本制備區(qū)擴增和產物分析區(qū)空氣流向空氣流向空氣流向其他實驗室其他實驗室其他實驗室其他實驗室其他實驗室其他實驗室其他實驗室門試劑準備區(qū)標本制備區(qū)擴增及產物分析區(qū)門門門空氣流向空氣流向+空氣流向++走廊走廊試劑準備區(qū)標本制備區(qū)擴增和產物分析區(qū)空氣流向空氣流向+空氣流向++其他實驗室其他實驗室其他實驗室其他實驗室其他實驗室其他實驗室其他實驗室空氣流向臨床PCR實驗室設計的一般原則各區(qū)獨立注意風向因地制宜方便工作“十六字口訣”產物分析區(qū)空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向緩沖間緩沖間緩沖間專用走廊工作流向擴增區(qū)標本制備區(qū)試劑準備區(qū)傳遞窗傳遞窗傳遞窗符合基本要求的臨床PCR實驗室的條件（1）試劑準備區(qū)、標本制備區(qū)和擴增及產物分析區(qū)等三個或四個區(qū)域在物理空間上，必須是完全相互獨立的，各區(qū)域無論是在空間還是在使用中，應始終處于完全的分隔狀態(tài)，不能有空氣的直接相通。（2）各區(qū)的可移動的儀器設備及各種物品包括實驗記錄本、記號筆、試管架及清潔用具等必須專用。（3）應在標本制備區(qū)、擴增及產物分析區(qū)等相對有可能出現(xiàn)“污染物”的區(qū)域安裝排風扇或其它排風和有效的裝置，以使空氣按試劑準備區(qū)標本制備區(qū)擴增（及產物分析）區(qū)方向流動。臨床PCR實驗室的工作流程試劑準備區(qū)標本制備區(qū)擴增區(qū)產物分析區(qū)試劑準備區(qū)PCR實驗室中最為“潔凈”的區(qū)域，不應有任何核酸的存在，包括試劑中所帶的標準品和陽性對照。所有實驗用潔凈物品如離心管、吸頭等的存放和準備處。商品試劑盒：

75%乙醇、焦碳酸二乙酯（DEPC）處理水、NaOH等可能需要自配自制試劑：一次較大量配制，然后分裝成小瓶保存，每次檢測時，取出一小瓶使用，未用完的即棄掉，不再使用。儀器設備主要有加樣器、天平、離心機和冰箱等，最好配備超凈工作臺。標本制備區(qū)儀器設備主要有生物安全柜、超凈臺、加樣器、高速臺式（冷凍）離心機、加熱模塊或水浴箱、冰箱等。生物安全柜不應放在實驗室門口等易受人員走動影響的地方，也不應直對分體式空調。主要是用于核酸樣本的提取，標本的制備應在生物安全柜內進行，可防止標本氣溶膠的擴散。加樣器吸頭必須帶濾芯。使用加熱模塊時，如在模塊孔中填入二氧化硅細砂，然后將標本管置于細砂中溫育，可得到較為一致的溫育溫度。標本制備區(qū)經高溫溫育后的標本，應冷至室溫后再離心。標本制備的全過程中都應戴一次性手套，并經常更換（感覺有污染時）。設備都應定期或在有明顯已知污染后，使用中性消毒劑如異丙醇、戊二醇等或10%次氯酸鈉溶液消毒，使用10%次氯酸鈉溶液消毒后，應再用70%乙醇洗滌去除殘留的次氯酸鈉。生物安全：洗眼器，并配備一個急救箱，箱內可放置75%酒精、絡合碘、棉簽、創(chuàng)可貼等必要的急用藥具。擴增區(qū)擴增反應體系的配制和提取核酸的加入，可在標本制備區(qū)也可在本區(qū)內進行，關鍵是要防止產物的污染。如果空間允許的話，也可在一個獨立的區(qū)域內進行。采用“巢式”PCR方法的第二輪擴增的加樣，必須在本區(qū)進行。加樣時，先加提取的核酸模板樣本，每加完一個即蓋好蓋子，然后加陽性質控核酸模板，再就是標本制備陰性質控和僅含按樣本一樣稀釋的主反應混合液的擴增陰性質控，這樣做的目的是，最大可能地測出以前擴增產物的交叉污染。擴增區(qū)熱循環(huán)儀的電源應專用，并配備一個不間斷電源（UPS）或穩(wěn)壓電源。每次擴增后，可使用可移動紫外燈對擴增熱循環(huán)儀進行照射。擴增儀應定期進行校準。產物分析區(qū)產物分析區(qū)是臨床基因擴增檢驗的最后一個工作區(qū)域，也是需要打開擴增后反應管進行擴增產物分析檢測的地方。是PCR實驗室“最不潔凈”的區(qū)域