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文檔簡介

姜振玲一、基因芯片概念基因芯片（genechip）又稱DNA芯片，是指將許多特定的寡核苷酸片段或基因片段有序地、高密度地排列固定于支持物上，待測樣品核算分子經(jīng)過標(biāo)記，與固定在載體上的DNA陣列中的點(diǎn)按堿基配對原理同時進(jìn)行雜交。雜交形式屬于固液雜交。通過激光共聚焦熒光檢測系統(tǒng)進(jìn)行掃描以獲取樣品數(shù)量和序列信息。二、基因芯片的主要特征高通量－－提高信息量平行化－－提高信息的可比性微量化－－降低待測樣本的用量自動化－－提高工作效率低成本－－可迅速普及推廣三、基因芯片分類cDNA芯片寡核苷酸芯片寡核苷酸芯片和cDNA芯片的比較四、寡核苷酸芯片的特點(diǎn)序列經(jīng)過優(yōu)化，減少非特異雜交，能有效區(qū)分有同源序列的基因；減少二級結(jié)構(gòu)；雜交溫度均一，提高雜交效率；合成產(chǎn)物濃度均一，避免因樣品濃度差異而造成的點(diǎn)樣量差異；無需擴(kuò)增，防止擴(kuò)增失敗影響實(shí)驗五、寡核苷酸芯片分類根據(jù)寡核苷酸應(yīng)用方向的不同，可將其分為兩類：表達(dá)譜芯片：用于檢測基因的表達(dá)狀況（我公司目前使用的illumina表達(dá)譜芯片即為此類）檢測芯片:用于檢測特定基因是否存在（我公司使用的DRB檢測芯片為此類）六、寡核苷酸芯片的技術(shù)原理1.寡核苷酸表達(dá)譜芯片的技術(shù)方法流程：寡核苷酸探針的合成及純化與載體基片通過化學(xué)反應(yīng)連接對照組樣本雜交

激光共聚焦掃描檢測及數(shù)據(jù)統(tǒng)計

篩選不同處理后表達(dá)的差異基因

實(shí)驗組樣本

RNA分離RNA反轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增標(biāo)記完整RNA檢測:直接雜交探針Biotin標(biāo)記cRNA地址序列**********23mer50mer微珠50mer基因特異性探針每個微珠連接有近百萬探針每種類型微珠～30倍重復(fù)探針設(shè)計:生物信息學(xué)分析挑選幾個候選探針,動力學(xué)反應(yīng)掃描確定(專利)ScannedImageand

DataoutputanalyzedwithBeadStudio2、寡核苷酸檢測芯片技術(shù)方法流程寡核苷酸探針的合成及純化與載體基片通過化學(xué)反應(yīng)連接雜交

檢測及數(shù)據(jù)分析處理標(biāo)本（外周血或口腔粘膜）提取基因組DNAPCR擴(kuò)增并用引物標(biāo)記核酸分子雜交雜交前雜交后七、雜交結(jié)果的檢測方法激光共聚焦掃描DetectorConfocalpinholeFilterLaserbeamSubstrateObj

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