小鼠飼養(yǎng)常見問題問答

6/6小鼠飼養(yǎng)常見問題問答1.小鼠的特點小鼠性情溫順,膽小易驚,易于捕捉，夜間比較活躍,尤其是傍晚時更為活躍,其進食、交配、分娩多發(fā)生在夜間。喜歡群居于光線較暗的環(huán)境,多只一籠飼養(yǎng)時生長發(fā)育較單只飼養(yǎng)時快。對外來刺激敏感，如強光、噪音，不同氣味等刺激，可引發(fā)“吃仔"現(xiàn)象。雄性好斗，性成熟的雄鼠放在一起時，易發(fā)生互斗并咬傷，但同窩雄性鼠離乳時放在同籠內(nèi)，可避免互斗.雄鼠分泌醋酸銨臭氣，是引起室內(nèi)恃異臭氣的主要原因.小鼠是嚙齒動物，門齒終生生長，因此小鼠有啃咬習慣，以此來磨損門齒并保持其長短的恒定。小鼠不耐饑餓，不耐熱,對環(huán)境適應性差，對疾病抵抗力低。實驗小鼠自發(fā)腫瘤多。白化小鼠怕強光。2.小鼠的生殖生理小鼠發(fā)育速度較快，一般在14-20ｇ之間可供進行動物實驗.但做種子的小鼠必須根據(jù)動物的生物學特性及育種要求進行選種.小鼠性成熟早（雄鼠36日齡時,可在附睪精液中找到運動活潑的精子，雌鼠３7日齡即可發(fā)情排卵）,性成熟一般在36—42日齡，小鼠具有明顯的性周期,性周期為４—5天，雄性小鼠的體成熟為７0－80日齡，雌性小鼠為65－７5日齡。因此,小鼠開始繁殖的適宜日齡在65-9０日之間。小鼠一年四季均有性活動,分娩后24小時內(nèi)又可受孕。雌鼠的性活動一般可分為發(fā)情前期、發(fā)情期、發(fā)情后期和發(fā)情休息期，性周期各階段的特征,可用陰道分泌物涂片和組織學檢查加以區(qū)分。雌鼠的這些變化,受卵巢機能所控制.卵巢能分泌兩類激素，一類是由卵巢上皮細胞分泌的雌激素；一類是由黃體細胞分泌的孕激素。雌激素能促進子宮、輸卵管的發(fā)育,促進副性征的出現(xiàn)和乳腺導管的發(fā)育，誘導動情,孕激素是黃體激素,在整個妊娠期中,都需要黃體的存在，其主要功能是保護受精卵的附植及維護妊娠，并促進乳腺的發(fā)育,它是子宮維持正常機能的主激素。3．如何操作小鼠絕大多數(shù)品系的小鼠經(jīng)過長期的馴養(yǎng)和人為的挑選,性格都是很溫馴的,除了被受到攻擊以外都不會咬人。小鼠實驗的操作過程中，要平穩(wěn)快速，如果在操作中發(fā)現(xiàn)小鼠變的焦躁不安，此時應停止對小鼠的動作而等其平靜下來后再重新開始操作小鼠。４。檢查陰栓小鼠交配后，精液在陰道內(nèi)凝固，如一白色栓塞堵在陰道中,叫做陰栓。小鼠的陰栓比較牢固,可在陰道內(nèi)留存較長時間。安排精確見栓的做法是:在每天光周期結束前，將雌性小鼠同確認有生育能力的雄鼠成對合籠（一般做法是下午5—6點鐘合籠），第二天上午7—8點左右檢查陰栓?？芍苯佑^察或用鑷子等器械來輔助觀察。假設配種行為是在黑暗期的中間（12小時光照、１2小時黑暗）發(fā)生的,則第二天中午便可假設為懷孕期的第0。5天。在檢查陰栓時，將小鼠移動至不銹鋼網(wǎng)罩上,以拇指及食指抓緊小鼠的尾端并將其它沒用到的手指放在小鼠的薦骨及腰部附近，向后上提,使前爪抓住網(wǎng)罩,身體繃直，易于觀察小鼠陰栓，如使用輔助器械時,切忌將器械深入小鼠陰道,觸碰小鼠子宮頸;觸碰后會引起小鼠機械性假孕。５。小鼠的抓取固定小鼠溫順,一般不會咬人，抓取時可先用右手抓住鼠尾提起，置于網(wǎng)罩上，使其前爪抓住網(wǎng)罩，身體拉直，有左手拇指和食指抓住小鼠的頸部皮膚，將小鼠握于左掌心,把后肢拉直，以無名指和小指按住鼠尾和后肢.抓頸部的動作好壞是小鼠保定的關鍵，要將小鼠保定好則得用手抓住小鼠頸部背后的所有疏松的皮，要做這樣的步驟得先將手放在小鼠的肩膀兩側,拇指放在一側而食指放置于另一側，此時小鼠背部的皮可用剩余的手指及手掌來抓住。若非常常在每天的某個特定時段操作小鼠,則可以發(fā)現(xiàn)小鼠在早晨至午后較容易操作保定，小鼠活動力最強的時候是在日照即將結束之前，所以此時會是一天中最難操作小鼠的時段。6。如何區(qū)別小鼠的雄雌

無論在任何時期,雄性小鼠外生殖器到肛門的距離皆大于雌性小鼠.小鼠在約2周齡時,雌性的乳頭可明顯的見到，此時雄性的并不可見。在成年的小鼠，雄性小鼠的陰囊（及外翻的睪丸)是相當明顯可觀察的特征.對性成熟之前的小鼠來說，可先調整好籠子的位置而讓小鼠可以攀爬在鐵蓋上，以拇指及食指抓住小鼠的尾巴,其余手指則放置在小鼠的背部并同時抵住使小鼠的尾端朝向操作者,此時小鼠會試著遠離而抓住鐵蓋上的橫桿，若能使小鼠完全的伸展開來,則這會是個容易觀察新生小鼠性別的操作方法。７。如何確定小鼠配種比例小鼠的配種要根據(jù)實驗的需要采用合適的配比,常見的是將一只雄鼠與一只或兩只雌鼠養(yǎng)在同一籠中。不同品系的雄鼠的交配能力有較大的區(qū)別,在選擇雌雄配比時，應考慮到這個差異.在仔鼠長大到要分籠之前及整個籠內(nèi)不會過于擁擠的情形之下，這些小鼠都可以一直養(yǎng)在一起。若僅需要某個性別的小鼠，可以在小鼠出生數(shù)天后將另一種性別的小鼠移走（產(chǎn)后24小時之內(nèi)不要打擾雌鼠）,此時剩下來未被移走的小鼠的生長會更加迅速。當雌鼠所需哺育的胎兒僅剩三只的時候，其會是一個相當好的雌親,這并不需要特別嚴格的篩選。若是需要迅速的增加小鼠的數(shù)量，則可在每天下午將正值動情周期的雌鼠與雄鼠合籠,并于次日早上檢查是否有陰栓，并可將有陰栓的日期相近的雌鼠飼養(yǎng)在一起直到仔鼠可以離乳分籠為止.8．如何避免雌鼠食仔將小鼠與其”朋友”關在一起時，此時對仔鼠的照顧會比較好(因為小鼠為社會性動物）?？蓪⒋剖笈c種雄鼠持續(xù)的關在一起，或將懷孕的雌鼠關在一起,或將懷孕及未懷孕的雌鼠關在一起,然而，絕對不要在雌鼠分娩前幾天再在籠舍中加入新的雌鼠，這樣會打擾到新生仔鼠的狀況.第一胎分娩或太過于年輕的雌鼠育成仔鼠的成功率低于有經(jīng)驗或較為年長的雌鼠。在分娩第一天不要打擾雌鼠與新生仔鼠，在第二天雌鼠則會表現(xiàn)出較多的雌性行為而較能容忍被打擾的狀況.突發(fā)的噪音或有害的震動等不利的環(huán)境控制都會造成負面的影響。在育成困難的情形下，可將仔鼠交給雌性較佳的雌鼠養(yǎng)育或是在雌鼠分娩前先將與雌性較佳的品系的雌鼠（同時或提前受孕的）關在一起，可以隨時維持數(shù)對遠交系的小鼠以作為代養(yǎng)之用。9．小鼠分籠小鼠應于出生3到4周后齡或雌鼠又生了另一胎的小鼠時進行分籠。分籠時的仔鼠應可見開眼、長牙及長出成鼠的毛,此時仔鼠或許需要用跳躍的方法才得以吃到飼料及飲水.在許多品系來說，接近可以分籠時的小鼠在籠蓋打開時會一直有跳躍的動作，所以操作時一定要避免動作大引起的驚擾.分籠后若擔心小鼠不能夠很好的照顧自己，可以在分籠的前幾天放置微軟(加少許水）的飼料在籠子的底部。１0。小鼠的常用標記方法A、剪耳：幫小鼠剪耳號的時候可不必做麻醉的動作.2周齡以后的小鼠的耳殼就已經(jīng)大到足夠可以做耳號的標記。但是耳號會因為剪耳號數(shù)周后傷口愈合的關系而變得難以辨認。B、剪腳趾：當仔鼠小于一周齡時,要剪腳趾做記號并不需麻醉，但若大于一周齡則需先做麻醉后方可幫小鼠剪腳趾.Ｃ、染色法:用苦味酸或中性紅涂在小鼠身體的不同部位,來以示區(qū)分，此法適用于短期實驗的大、小白鼠，如實驗過程中出現(xiàn)褪色，可以再染。但須注意的是，如果為新生仔鼠,則可能染料會被雌鼠舔掉而必須隨時補上記號.D、芯片移植亦是一種作記號的方法，但其缺點為價錢過于昂貴，且亦不是完全的不會被消除掉。1１。雄鼠與雌鼠如何飼養(yǎng)將五只互相陌生的雌鼠群養(yǎng)在一起而不會有任何的問題，雄鼠則因為其有較高的打斗的傾向而必須特別注意。雄鼠一般不會跟在性成熟之前就關在一起的同伴打架；而在性成熟之后,兩只互不相識的雄鼠就會有打架的狀況發(fā)生.因此,要將雄鼠關在一起就必須在性成熟之前，不然就得一個籠子只能關一只雄鼠。要知道雄鼠之間是否有打架的情形可檢查是否有咬傷的傷口甚至是死亡。有時雌鼠也不見得會一直和睦相處,此時可由其尾部的毛是否柔順、其它地方是否有脫毛或是否有咬嚙背部、臀部或后腿等地方來判定，一般來說，減低籠內(nèi)的飼養(yǎng)密度,或將地位較高的雌鼠移走就可以解決雌鼠之間的問題。１2.如何確定一只雌鼠是不是處于發(fā)情期雌鼠發(fā)情的表征為陰門張開,以及陰道表皮黏膜抹片呈現(xiàn)角化現(xiàn)象.在發(fā)情前期，陰道涂片有含核上皮細胞以及一些角化上皮細胞;發(fā)情時角化上皮細胞占大多數(shù)。稍后的發(fā)情后期和間情期，角化現(xiàn)象減低,且白血球增多。小鼠為多次發(fā)情動物而且整年皆可繁殖。平均發(fā)情周期為4-5天，平均夜晚發(fā)情期為１2個小時。(一般發(fā)情開始于下午４點及晚上10點，持續(xù)１2至１4小時）,小鼠發(fā)情后８至11小時自發(fā)排卵.產(chǎn)后發(fā)情約在分娩后24小時內(nèi)發(fā)生，排卵發(fā)生約介于產(chǎn)后12至18個鐘頭間.在整窩仔鼠斷乳前,不會發(fā)情（乳泌期間不會發(fā)情)。小鼠生育力在７５日和3０0日齡間達到最高峰。1３.小鼠的繁殖特性信息素是多種物質或多種物質的混合，是由動物所制造的外在物質，可由其它同種的個體所感受到使產(chǎn)生特定的發(fā)情效果，信息素會改變小鼠正常的發(fā)情周期。布魯斯效應（Ｂrｕcｅ):雌鼠在交配后不久與陌生雄鼠直接接觸或暴露于含有陌生雄鼠化學氣味的環(huán)境中，會導致雌鼠妊娠終止（流產(chǎn))的可能性增加，4—5天后重新發(fā)情，而與配偶雄鼠及其氣味的接觸則不會產(chǎn)生這種現(xiàn)象。雌性小鼠在原配種后2４小時內(nèi)與陌生雄性小鼠接近,約有３０％母小鼠會有妊娠阻礙及胚胎著床受抑制現(xiàn)象.在第二只雄性小鼠與原配種雄性小鼠為不同品系時，會發(fā)生最大效應。李－波特氏（Lee—Bｏot）效應：當4只雌性小鼠或更多的雌性小鼠養(yǎng)在一起，這種群養(yǎng)雌鼠在缺乏雄鼠的刺激下，使得雌性小鼠發(fā)情受抑制，。小群飼養(yǎng)的雌性小鼠常在沒有交配情況下發(fā)生假懷孕現(xiàn)象。假如以30只或更多只關在一起，則會發(fā)生不發(fā)情現(xiàn)象?！苍谛∪猴曫B(yǎng)的雌鼠，F(xiàn)SH下降，傾向假懷孕;在較大的群聚雌鼠,FSH劇烈下降導致不發(fā)情〕魏頓氏(Whitten）效應:群體籠飼的雌性小鼠可能會進入一個連續(xù)的不發(fā)情期，一旦有雄性小鼠氣味或其尿液出現(xiàn)，則此種不發(fā)情會被雄性信息素所中斷。大多數(shù)的雌性小鼠會在第三個夜晚(72小時）進入發(fā)情期，出現(xiàn)發(fā)情的高峰，即所謂的Whiｔten效應.群聚之雌性小鼠與雄性小鼠交配,在受到雄性小鼠信息素刺激的第三天會進入配種的高潮。在大鼠同樣也有此種現(xiàn)象，但較不顯著１4．雌鼠不哺乳時，有無方法來改善繁殖的狀況8月齡以下的小鼠的哺育行為較佳，所以得持續(xù)注意繁育小鼠的年齡狀況，及時更新。15．將突變基因導入近交系將突變基因小鼠培育成近交系，一般需要7年左右，而采用將突變基因導入近交系的方法，可大大縮短育成時間，也易獲得成功。方法：以突變純和基因的個體(這個個體近交系承受1/2基因)再與近交系回交，產(chǎn)生回交２代(N2表示帶有3/4近交系的基因),再由回交2代選擇具有突變基因的個體,與近交系回交，產(chǎn)生回交3代(N3表示帶有7/８的近交基因)，如此一代代的繼續(xù)下去,其近交系的基因概率為1－（?）n(n是指回交次數(shù)),一直回交到8代，其近交系基因導入率為99。6％。突變基因導入率為0。4％，可稱為突變導入系.如果需要純化突變基因時,可選擇回交８代以后的不同性別和帶有突變基因的個體進行交配，即可育成純合型的近交系。其導入方法如下：a。每代回交法(a）顯性突變基因導入法.以野生色基因（AA)導入黑色(aａ）C57BL近交系為例，說明如下：C57ＢL黑色×野生色親代(AA)C57BL黑色×野生色回交1代(aa）（Aａ）Ｃ57BL黑色×野生色黑色回交2代（aａ）(Aa)(aa）C57BL黑色×野生色黑色回交3代（aa）（Aa)（aa)C57BL黑色×野生色黑色回交4代(aa)（Aa）(aａ）圖1圖1的親代野生色小鼠（基因型為AA或aa)與黑色Ｃ57ＢL(基因型為aa）交配。如野生色基因是AA時,所生子代全部是野生色（Aa）。如是雜合型（Aa)時，所生子代為野生色(Ａa)和黑色(aa)。每代都使野生色(Ａa）小鼠與C５7BL(ａa）交配，一直回交8次。B。代間隔回交法當純合的隱性突變個體無繁育能力或繁育能力低，可采用此法進行維持。如１２9／Re-dｙ（肌肉萎縮癥),C5７BL／6J－Ob（肥胖癥)，KK－Ay（肥胖糖尿癥）等就是采用此法進行維持和繁殖?，F(xiàn)以無胸腺裸鼠(nu/nu）為例，加以說明(圖3）ＴA1×未定背景的裸鼠親代(+/+)（nu/ｎu)正常×正常第一代（互交)（+／nｕ）(+/ｎu)ＴA1×裸鼠正常正常第二代(回交）(+/+）（ｎu／nｕ)（＋／nu）(+/+）正?！琳５谌ɑソ唬?／nu）(+/ｎu)TＡ1×裸鼠正常正常第四代(回交)（+/＋）(nu/nu）（+/nu）(+/+）圖3其親代裸鼠(nｕ／nｕ)和TA1近交系雜交,所生的第1代仔全部為雜合型（+/ｎu)，使其兄妹互交所生的第２代仔鼠有裸鼠(ｎｕ/nu）和正常鼠(+／+,+/nｕ），再將其裸鼠與TA1回交，所生的子3代，仍為雜合型(+/ｎu),以此類推.通過裸鼠與TA1的回交與其子代雜合型的互交，由Ｎ1，N2，Ｎ3，…,N8，即可將ｎu基因導入TA1近交系。循環(huán)６次(12代)其ＴＡ1近交系的基因導入率可達99.9％。１6。近交衰退在近交系的培育過程中，到6-7代時，易出現(xiàn)生殖能力減退，生產(chǎn)下降，后代減少、后代弱小或后代不育的現(xiàn)象，而使世代延續(xù)發(fā)生困難，若繼續(xù)采用兄妹交配,易遭失敗。此時應冷靜判斷,如不能再按所需特性發(fā)展，則應停止，如果仍能按選擇目標發(fā)展，只是繁殖能力低，可采用親子交配和非兄妹之間的交配，待繁殖力恢復后，再進行兄妹交配。近交衰退發(fā)生的原因是多方面的，從遺傳學的角度解釋主要有兩點:1．有害的隱性基因的暴露。一般病態(tài)的突變基因絕大多數(shù)都是隱性的，所以處于雜合狀態(tài)時是不表現(xiàn)出病態(tài)或不利的性狀.這些有害基因的作用可被顯性的雜合子等位基因所掩蓋，但經(jīng)過一段近親繁殖，純合的基因（純合子）比例漸漸增多,于是有害的隱性基因相遇成為純合子而顯出作用，出現(xiàn)了不利的性狀,對個體的生長發(fā)育、生活和生育等產(chǎn)生明顯的不利影響。例如雜種動物所帶有的不育的隱性基因往往被其顯性的等位基因所掩蓋,而不表達其不育的性狀，但由于純育，動物的純合性逐漸增高,不育的現(xiàn)象也就表現(xiàn)出來了.２．多基因平衡的破壞。個體的發(fā)育受多個基因共同作用的影響，雖然其中每個基因的作用效應微小。對環(huán)境適應較好的野生或雜交動物，由于自然選擇的作用有利于保存那些生物適應能力較強的基因組合具有平衡的多基因系統(tǒng)，近交繁殖往往會破壞這個平衡,造成個體發(fā)育的不穩(wěn)定.1７．小鼠有閉眼、眼睛過大、腫瘤、禿毛或猝死，到底是什么造成的小鼠有可能遭遇許多種疾病，這些疾病的成因有可能是因為品系、飼養(yǎng)環(huán)境及其它的控制所引起的。上述的情形是較常見于小鼠的疾病，遇到這些狀況時,最好常常跟獸醫(yī)師作討論及聯(lián)系。１8。需要維持多大的小鼠群體維持的小鼠群體的大小，依照所實際的實驗需求量而定;一般盡量維持在實驗所需最小的數(shù)量。19。需要特別注意發(fā)生突變的小鼠基因背景嗎基因背景對突變的基因有相當重要的影響，一般會希望突變是發(fā)生在像C5７ＢL/6這類有健全、完整且普遍的近交品系上.在發(fā)生突變的時候，可與C57BＬ/6背景的小鼠反復交配10代以上，此時便可預期其仔鼠有9９.８％的C5７BＬ/６的背景，且在此之后可繼續(xù)使其交配以保持該變異，然而如此持續(xù)這樣反復交配可能會造成新的突變基因固定在該品系小鼠中，所以這是應該要避免的。此外,對飼養(yǎng)繁殖、基因剔除、基因轉殖等小鼠除了用PCＲ作監(jiān)測之外,亦該偶爾使用南方墨點法來作測定(此乃因為ＰＣR的監(jiān)測有時會出現(xiàn)測不到的情形）。而因基因轉殖的品系時常會出現(xiàn)該轉殖基因的變異,所以對其每一代都做基因的監(jiān)測是較好的方法。20．應該作哪些飼養(yǎng)紀錄?應該追蹤什么飼養(yǎng)記錄的詳細程度應依個人的需求而定,對大的群體而言，過于詳細的記錄會造成顯著的資源浪費。然而，在問題出現(xiàn)的時候，詳細的記錄便是解決問題所必需的，記錄要同時保存在實驗室筆記本及動物房鼠籠上的牌卡上,以便備查.2１.如何運送/接收老鼠所有的實驗小鼠必須向有生產(chǎn)許可證的生產(chǎn)商購買,購買時必須索要動物質量合格證.從實驗機構引進小鼠時，需要供方提供檢測報告、設施合格證，為了避免因傳染性病原的潛伏期及運送過程中小鼠受到感染等的問題，小鼠運抵后需要在隔離檢疫房內(nèi)隔離，只有隔離檢疫合格才能接受；如不合格，必須進行生物凈化.此外,在運送時要注意氣溫狀況，避免在天氣過冷或過熱的時候運送，運送懷孕第一胎到第三胎的雌鼠時,則常會造成胚胎吸收的情