馬錢子種子 超低溫保存技術(shù)規(guī)程

T/CSMAXXXX－2018馬錢子種子超低溫保存技術(shù)規(guī)程范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了馬錢子[Strychnos

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Linn.]種子超低溫保存過程中的術(shù)語和定義、保存種子的選擇、種子前處理、種子保存的量、種子冷凍方式、恢復(fù)培養(yǎng)等技術(shù)要求。本標(biāo)準(zhǔn)適用于馬錢子種子的超低溫長期貯藏。規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T3543.6農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程水分測定GB/T3543.7農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程其他項目檢驗術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。馬錢子Strychnosnux-vomicaLinn.為馬錢科（Loganiaceae）馬錢屬（StrychnosLinn.）常綠喬木，別稱番木鱉。其干燥成熟種子為《中國藥典（2015）》收載藥材，中醫(yī)學(xué)上以種子泡制后入藥，性寒，味苦，有通絡(luò)散結(jié)，消腫止痛之效。西醫(yī)學(xué)上用種子提取物，作中樞神經(jīng)興奮劑。此外，木材灰白色，結(jié)構(gòu)堅硬致密，可供車輛及農(nóng)具用料。馬錢子果實Strychnos

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Linn.fruits漿果圓球狀，直徑2~4cm，成熟時桔黃色，內(nèi)有種子1~4顆。馬錢子種子Strychnos

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Linn.seeds馬錢子的播種材料為完整種子，貯藏特性判斷為頑拗性種子。種子表面灰黃色，密被銀色絨毛，有絲樣XX。扁圓盤狀，一面隆起，一面凹下，寬2~4cm。質(zhì)堅硬，平行剝開可見淡黃色胚乳，角質(zhì)狀，子葉心形。種子有毒。種子超低溫保存seedofcryopreservation指將經(jīng)過前處理的馬錢子種子置于液氮（-196℃）中保存。保存種子的選擇果實采收8月至翌年1月，當(dāng)果皮顏色由綠色轉(zhuǎn)為黃色時，即可采收，去除果皮和果肉，取出種子。種子選擇挑選發(fā)育飽滿、均勻、健康的種子，置于10℃冰箱中保存?zhèn)溆茫ù娣艜r間不超過1個月）。種子前處理生活力檢測參照GB/T3543.7中的2，3，5-三苯基氯化四氮唑（TTC）法檢測種子生活力。隨機抽取30粒種子，剝?nèi)ネ鈱臃N皮，沿種脊小心將種子分成2爿后放培養(yǎng)皿內(nèi)，內(nèi)側(cè)面向下，滴入TTC溶液浸沒種子，室溫（25℃）避光放置4h后觀察染色結(jié)果。生活力計算直接用肉眼對染色結(jié)果進(jìn)行觀察鑒定。凡胚及胚乳全部染成有XX的鮮紅色，且組織狀態(tài)正常的，為有活力的種子；否則為無生活力的種子。計算：生活力=有活力的種子數(shù)/總的種子數(shù)×100%待保存的馬錢子種子生活力應(yīng)≥90%。含水量范圍用尼龍網(wǎng)袋包裹馬錢子種子，置于盛有變色硅膠的干燥器內(nèi)，硅膠與種子的體積比為800:1，室溫條件下干燥處理0~100h，在干燥過程中定期測定種子含水量，將種子含水量由32%~38%降至25%~32%。參照GB/T3543.6中的高恒溫烘干法（130℃烘干1h）測定種子含水量（W0），W0=（鮮重-絕干重）/鮮重×100%。種子保存量馬錢子種子保存量不少于400粒，以便后期的活力檢測使用。種子冷凍方式馬錢子種子超低溫保存的冷凍方式為直接冷凍法，即將待保存的馬錢子種子放入15mL凍存管（每管8粒種子）中，迅速投入液氮中保存?；謴?fù)培養(yǎng)種子解凍處理液氮中至少凍存24h后，取出6個凍存管，立即放入40℃水浴中快速解凍2min。凍后種子生活力檢測取出3管解凍后的種子，參照5.1~5.2生活力檢測方法，進(jìn)行超低溫保存后的初始生活力檢測。當(dāng)種子生活力≥50%時視為保存成功?；謴?fù)培養(yǎng)將剩下3管解凍后的馬錢子種子，播種到帶有無菌濾紙的發(fā)芽盒中，溫度25℃～30℃，濕度70%～85%條件下培養(yǎng)。附錄TTC的配制和保存方法精密稱取TTC1.00g，溶于100mL磷酸鹽緩沖液中，制成濃度為1%的TTC溶液，調(diào)pH至6.5~7.5，置棕色瓶內(nèi)4℃