開展原位雜交技術(shù)可行性報告(FISH)

PAGEPAGE3熒光原位雜交技術(shù)-可行性報告******醫(yī)院FISH的發(fā)展前景 1FISH的原理 1FISH的技術(shù)特點 1開展FISH的重大意義 2FISH在臨床中的應(yīng)用及操作程序 8FISH項目給社會及醫(yī)院帶來的效益 11公司簡介 14售后服務(wù) 15開展熒光原位雜交（FISH）檢測項目一．FISH的發(fā)展前景隨著醫(yī)療水平的整體提高，“個體化診斷”、“分子診斷”和“靶向治療”受到愈來愈多的重視。以熒光原位雜交醫(yī)學(xué)檢測領(lǐng)域。由于技術(shù)本身操作簡單，重復(fù)性好、具有較高的靈敏性及特異性，因此很適應(yīng)于臨床醫(yī)學(xué)在美國，F(xiàn)ISHFDAFISH已成FISH的樣本種類較多，可以是羊水、絨毛、流產(chǎn)組織，也可以是外周血、骨髓、體液及各種腫瘤組織等。在中國，近幾年FISH已經(jīng)得到了越來越廣泛的應(yīng)用，尤其在血液病診斷、產(chǎn)前診斷和實體腫瘤檢測方面。二．FISH的原理原理：以核酸堿基互補配對原則為基礎(chǔ)所發(fā)展出來的檢測技術(shù),主要是利用DNA序列的互補性,通過熒光標(biāo)記的DNA探針與預(yù)處理的待測樣本的DNA進(jìn)行原位雜交，在熒光顯微鏡下,對熒光信號進(jìn)行辨別和計數(shù)，即可對細(xì)胞、組織樣本中的染色體或基因異常進(jìn)行檢測和診斷三.FISH的技術(shù)特點FISH技術(shù)具有以下幾個方面的優(yōu)勢：操作簡單－擁有離心機、水浴鍋等常規(guī)儀器即可完成實驗所需人工少－整個流程中人工操作時間在2-4結(jié)果報告快－常規(guī)FISH24結(jié)果直觀－結(jié)果觀察只需在熒光顯微鏡下判斷信號的數(shù)目即可，無需人員特殊培訓(xùn)四．開展FISH的重大意義1.4FISH結(jié)果判定是在熒光顯微鏡下觀察熒光信號數(shù)目，不存在主觀原因，F(xiàn)ISH1717目前比較公認(rèn)的HER-2IHCOHerceptin

1+ 2+ 3+Herceptinnotindicated FISH indicatedFISH- FISH+Herceptinindicated下圖是標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果圖，紅色信號代表HER-2基因，綠色信號用于檢測17號染色體數(shù)目，當(dāng)紅色和綠色信號數(shù)目比值大于2.2時即可判定為HER-2基因異常擴增。TOP2ATOP2A基因異常的乳腺癌患者對于含蒽環(huán)類藥物的治療方案更為敏感：TOP2ACMFCEF方案的病人擁有更長的無復(fù)發(fā)生存期及總生存期TOP2A基因異常的病人可以明顯受益于含有拓?fù)洚悩?gòu)TOP2ACEF51TOP2ACEF10%的死亡風(fēng)險。存在TOP2A基因異常的乳腺癌患者預(yù)后更差：對于乳腺癌的研究表明，TOP2A在乳腺癌組織的表達(dá)水平與其預(yù)后指標(biāo)存在一定的聯(lián)系，TOP2A基因5PAGEPAGE15異常的病人預(yù)示著更短的無復(fù)發(fā)生存期（recurrence-freesurvival，RFS）但總生存期（OS）并無改變；并且TOP2A缺失的病人預(yù)后更差2：FISH在宮頸癌中的應(yīng)用檢測項目：TERC基因?qū)m頸癌是全球35歲以下婦女第2位最常見的腫瘤，也是婦女生殖系統(tǒng)最常見的腫瘤，嚴(yán)重地危害婦女身體健康。在我國，每年約有新發(fā)宮頸癌病人10萬，死亡人數(shù)3-5萬。早期診斷是治療宮頸癌及提高患者預(yù)后的有效手段。國際上通用的篩查宮頸癌的方法一般為宮頸細(xì)胞涂片形態(tài)檢查及HPV病毒檢測。細(xì)胞涂片檢查敏感性一般在55％－80%左右，但一旦觀察到異常細(xì)胞，特異性可達(dá)到90%以上。HPV檢測雖敏感性高，在84%－100%之間，但特異性一般只在64%－95%之間，因為許多HPV陽性的病人在一年之內(nèi)可轉(zhuǎn)陰，并不會導(dǎo)致宮頸癌的發(fā)生。使篩查更準(zhǔn)確、可靠及更有預(yù)見性。由美國NIH直接領(lǐng)導(dǎo)的針對宮頸癌的研究表明，宮頸細(xì)胞由非典型性發(fā)育異常向?qū)m頸癌轉(zhuǎn)變的過程中幾乎都伴有3號染色體長臂擴增。其中，涉及到的最重要的基因可能是人類染色體末端酶（hTERC）基因。該基因的擴增可阻止細(xì)胞凋亡，因而可導(dǎo)致腫瘤產(chǎn)生。TERC基因檢測意義：準(zhǔn)確區(qū)分宮頸細(xì)胞高度癌前病變與低度癌前發(fā)育異常，即區(qū)分CIN2和CIN3及CIN190%預(yù)測CIN1/CIN2CIN3100%，特異性是70%對hTERCFISH3：FISH檢測項目：p16基因、3、7、17號染色體數(shù)目膀胱腫瘤是泌尿系統(tǒng)中發(fā)病率最高的腫瘤，約占中國所有惡性腫瘤發(fā)病的20%左右。膀胱癌多發(fā)于男3∶15065歲以上的老人。膀胱癌在初被診斷時大多局限于膀胱，但約有6%病人已有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)病治療中關(guān)鍵的一個部分。FDAFISH3179號染色體部分(如p163717可以確診膀胱癌；如一個指標(biāo)出現(xiàn)了復(fù)雜的異常，也可判斷為膀胱癌患者。心理和生理的刺激。更容易被患者接受。FISH檢測主要特點是：無創(chuàng)性早期診斷1｝結(jié)合膀胱鏡檢查監(jiān)視膀胱癌復(fù)發(fā)2｝檢測與膀胱癌進(jìn)展與分級相關(guān)的染色體異常3｝不受BCG免疫治療影響與現(xiàn)有的診斷方法相比，能在分子水平最先發(fā)現(xiàn)復(fù)發(fā)。4：FISH在產(chǎn)前檢測中的應(yīng)用檢測項目：13、18、21、X、Y染色體數(shù)目遺傳病中，很大的一部份是由于染色體異常而引起的，目前，發(fā)現(xiàn)的種類已經(jīng)超過1000多種。例如Down綜合癥，絕大部份就是由于21號染色體異常，呈現(xiàn)出三倍體的深色體組型而引起的，患者常具有嚴(yán)重的病癥，如發(fā)育遲緩、智力低下等，此外13號染色體的三倍體的患者也出現(xiàn)嚴(yán)重的病癥，如智力嚴(yán)重缺陷且伴有兔唇的表征。據(jù)統(tǒng)計，各種染色體疾病在人群中的爆發(fā)率相當(dāng)高，在新生兒中，發(fā)病率就高達(dá)7.3‰，其中某些染色體異常，如18號染色體三倍體所引發(fā)的Edward綜合癥在人群中的爆發(fā)率甚至高達(dá)1/2000。研究表明131821X和Y染色體上的異常從而引起的疾病占新生兒染色體疾病的85%-90即只需通過對上述五條染色體進(jìn)行分析，就可以對目前胎兒常見的唐氏綜合癥三體18號染色體三體13綜合癥、三X(47，XXX)XYY(47，XYY)綜合癥等進(jìn)行檢測。7天左右方可進(jìn)行樣品化驗，此種檢測方法耗時長、操作煩瑣5Mb熒光原位雜交技術(shù)作為準(zhǔn)確而快捷的分子診斷工具，在產(chǎn)前診斷領(lǐng)域的優(yōu)勢非常明顯：1｝對被測細(xì)胞并無特殊的要求，分裂期或間期細(xì)胞均可進(jìn)行檢測2｝無需細(xì)胞培養(yǎng)，可以做到即取即測3｝24小時即可出診斷報告，可及時為醫(yī)生、受檢者提供參考數(shù)據(jù)4｝操作簡便，利用不同顏色的熒光探針可在同一樣本中同時檢測多種染色體的異常5：FISH在血液腫瘤中的應(yīng)用慢性淋巴細(xì)胞性白血病（慢淋）檢測項目：RB1、P53、ATM、D13S25、CSP12存活幾個月，而有的病人則能生存超過20年。長期以來，人們對慢淋的認(rèn)識一直停留在臨床觀察上。近細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)，人們對慢淋病人的預(yù)后判斷也變得更為科學(xué)及準(zhǔn)確。基因丟失（平均生存32個月ATM基因缺失（平均生存79個月12號染色體三體（平均生存114個月）及13q14缺失（平均生存133個月）等，而檢測這些指標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)方法即是FISH研究的發(fā)現(xiàn)對臨床個體化治療提供了極有意義的理論依據(jù)及指導(dǎo)。多發(fā)性骨髓瘤檢測項目：RB1、P53、1q21、D13S319、IGH相應(yīng)的方案治療病人。因而，探索準(zhǔn)確的預(yù)后風(fēng)險評估指標(biāo)至關(guān)重要。目前，公認(rèn)的較可靠的指標(biāo)有C—反應(yīng)蛋白、骨髓漿細(xì)胞形態(tài)，漿細(xì)胞增殖率，及分子細(xì)胞遺傳學(xué)改變等，而其中以分子24.7［若有14)和或t(1；16)易位或p53基因缺失42.3個月（若有13q14缺失）或50.5個月［僅有t(1；14)易位或沒有任何以上遺傳學(xué)改變。而檢測這些遺傳學(xué)改變的標(biāo)準(zhǔn)方法為FISH慢性粒細(xì)胞性白血病檢測項目：費城染色體檢測（BCR/ABL）慢性髓性白血?。＃榘准?xì)胞增加和脾腫大，其發(fā)病率為0.5人/10萬，30~40歲的人居多，男性發(fā)病率較女性稍高。性粒細(xì)胞性白血?。–ML）患者90%以上具有典型的Ph染色體，即染色體t(9;22)BCR/ABL10PhBCR/ABLPh染色體或BCR/ABL陽性已經(jīng)成為CML的主要診斷標(biāo)準(zhǔn)。針對BCR/ABL融合蛋白已經(jīng)發(fā)展出有特效的治療藥物STI571（格列衛(wèi)。多數(shù)患者可在半年內(nèi)達(dá)到細(xì)胞遺傳學(xué)緩解。應(yīng)用常規(guī)核型分析檢測方法可以檢測該異常，但核型分析存在以下幾個問題，分辯率有限，一般檢測5MB大小片斷的異?？梢杂洈?shù)的染色體分裂相有限，對于異常細(xì)胞含量少的樣本檢測比較困難需要細(xì)胞培養(yǎng)，耗時長對于臨床中應(yīng)用的PCR后期治療用藥指導(dǎo)性存在誤差FISH在這一領(lǐng)域有著完美的表現(xiàn)：FISH100kb左右的異常，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于核型分析的分辯率耗時短（24小時出結(jié)果，操作簡單目前FISH檢測費城染色可以應(yīng)用于以下幾個方面，疾病確診指導(dǎo)臨床用藥治療效果監(jiān)測移植效果監(jiān)測微小殘留檢測6：性染色體錯配骨髓移植檢測項目：X、Y染色體個環(huán)節(jié)。由于FISH方法需要樣本量少、檢測快速，在這一領(lǐng)域有著重要的應(yīng)用。目前很多骨髓移植醫(yī)院采用FISH7：在非小細(xì)胞肺癌當(dāng)中的應(yīng)用非小細(xì)胞肺癌檢測（EGFR）EGFR拷貝數(shù)的增加約占非小細(xì)胞肺癌的30％～40％EGFRgefitinib的有效率為35%,疾病控制率高達(dá)70%；9.8％EGFR（易瑞沙）的使用。實驗操作應(yīng)用熒光原位雜交技術(shù)對不同樣本進(jìn)行檢測時，主要的操作流程是一致的，包括以下幾個步驟：外周血、骨髓、羊水、尿液、外周血、骨髓、羊水、尿液、宮頸脫落細(xì)胞、石蠟樣本，耗樣本預(yù)處理2-4變性玻片樣本變性探針變性5雜交過夜雜交耗時30-40分鐘洗滌熒光顯微鏡下計數(shù)觀察六：社會效益.醫(yī)院效益.價格體系FISH檢測項目主要成本在于探針，以下為每人份檢測探針價格列表，檢測項目檢測項目探針名稱GLP13/GLP21CSP18/CSPX/CSPY每人份單價（元）產(chǎn)前染色體數(shù)目異常檢測試劑盒DiGeorge/VCFSGLPTUPLE1/GLPGLPRB1GLPP53多發(fā)性骨髓瘤檢測試劑盒慢性淋巴細(xì)胞性白血病檢測試劑盒GLPD13S319GLPIGHGLP1q21CSP12GLPGLPATMGLPRB1GLPP53乳腺癌檢測試劑盒GLPHER-2/CSP17子宮頸細(xì)胞檢測試劑盒GLPTERC/CSP3膀胱癌檢測試劑盒CSP3/CSP7GLPp16/CSP性染色體檢測試劑盒CSPX/CSPY費城染色體檢測試劑GLPBCR/GLPABL注：以上單價按照20人份探針報價計算多發(fā)性骨髓瘤單個探針*多發(fā)性骨髓瘤單個探針*427.5372.5－1072.5慢200761801項中明確了“熒光原位雜交”可以應(yīng)用于臨床檢測，網(wǎng)址：/newshtml/19264.htm。各級醫(yī)院可以根據(jù)實際情況開展FISH1200次，多色FISH/FISH800-1500FISH2000-3000元。院方效益FISH｛乳腺癌檢測試劑盒為例元/每人。計算以下內(nèi)容檢測項目探針成本/例（元）利潤空間（元）手術(shù)數(shù)量/去年/最低預(yù)盈利(元)估檢測數(shù)量GLP13/GLP21843.51156.5-2156.5DiGeorge/VCFS綜合癥檢測試劑盒309491－1191性淋巴細(xì)胞性白血病單個探針 422* 378