酶活力及其測(cè)定

情境七：蛋白質(zhì)和酶任務(wù)八：酶活力及其測(cè)定知識(shí)點(diǎn):酶活力及其測(cè)定課程：化學(xué)及生物物料的識(shí)用

酶活力也稱(chēng)為酶活性，是指酶催化一定化學(xué)反應(yīng)的能力。酶活力單位表示：（1）國(guó)際單位（IU）：每分鐘轉(zhuǎn)化1μmol底物所需的酶量1IU——1μmol·min-1

（2）Kat單位：每秒鐘轉(zhuǎn)化1mol底物所需的酶量

1Kat——1mol·s-1

IU＝16.67×10-9Kat常用的酶活力單位有二種：一、酶活力

比活力

酶純度表示

在特定條件下，每mg蛋白質(zhì)（或RNA）所具有的酶活力單位數(shù)，即酶比活力＝酶活力單位／mg（蛋白或RNA）常用μmol/min·mg蛋白表示。同一種酶在不同制品中比活力越高者，其純度也越高。一、酶活力二、酶活力測(cè)定酶活力測(cè)定是在一定條件下測(cè)定酶所催化的反應(yīng)速度。如何測(cè)定酶活力？?jī)煞N方法：◆測(cè)定單位時(shí)間內(nèi)底物的消耗量（－ｄ[S]/dt）；◆測(cè)定單位時(shí)間內(nèi)產(chǎn)物的生成量（ｄ[P]/dt）。

如將產(chǎn)物濃度對(duì)反應(yīng)時(shí)間作圖，反應(yīng)速度即圖中的斜率（ｄ[P]/dt），見(jiàn)圖。斜率=濃度/時(shí)間=V產(chǎn)物濃度時(shí)間酶促反應(yīng)的速度曲線V0如何測(cè)定酶活力？二、酶活力測(cè)定結(jié)論：

（1）在開(kāi)始一段時(shí)間內(nèi)反應(yīng)速率幾乎維持恒定（V0），即產(chǎn)物的生產(chǎn)量與時(shí)間成直線關(guān)系。（2）隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，曲線斜率逐漸降低，反應(yīng)速率逐漸降低。

斜率=濃度/時(shí)間=V產(chǎn)物濃度時(shí)間酶促反應(yīng)的速度曲線V0為什么？二、酶活力測(cè)定引起下降的原因很多：

底物濃度的降低酶在反應(yīng)中失活、產(chǎn)物對(duì)酶的抑制產(chǎn)物濃度增加而加速了逆反應(yīng)的進(jìn)行等。

因此研究酶反應(yīng)速度應(yīng)以酶促反應(yīng)的初速率（V0）為準(zhǔn)，這時(shí)，上述各種干擾因素尚未起作用，速度保持恒定不變。二、酶活力測(cè)定

一般測(cè)定酶促反應(yīng)的初速率

應(yīng)先繪出反應(yīng)過(guò)程的速率曲線，

根據(jù)由原點(diǎn)做曲線的切線或根據(jù)曲線的直線部分求出該直線的斜率。斜率=濃度/時(shí)間=V產(chǎn)物濃度時(shí)間酶促反應(yīng)的速度曲線V0二、酶活力測(cè)定1．酶活力測(cè)定方法酶活力測(cè)定的方法很多：

化學(xué)測(cè)定法光學(xué)測(cè)定法氣體測(cè)定法等二、酶活力測(cè)定2．酶活力測(cè)定步驟兩個(gè)階段：首先是在一定條件下，酶與底物反應(yīng)一段時(shí)間，然后再測(cè)定反應(yīng)體系中底物或產(chǎn)物的變化量。

二、酶活力測(cè)定二、酶活力測(cè)定二、酶活力測(cè)定3.酶活力測(cè)定示例----淀粉酶活力測(cè)定（1）測(cè)定原理淀粉酶α-淀粉酶可隨機(jī)地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷鍵，生成葡萄糖、麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原糖，同時(shí)使淀粉的粘度降低，因此又稱(chēng)為液化酶。β-淀粉酶可從淀粉的非還原性末端進(jìn)行水解，每次水解下一分子麥芽糖，又被稱(chēng)為糖化酶。淀粉酶催化產(chǎn)生還原糖二、酶活力測(cè)定淀粉酶催化產(chǎn)生還原糖能使3,5-二硝基水楊酸還原，生成棕紅色的3-氨基-5-硝基水楊酸，其反應(yīng)如下：兩種淀粉酶特性不同:α-淀粉酶不耐酸，在pH3.6以下迅速鈍化。

β-淀粉酶不耐熱，在70℃15min鈍化。根據(jù)它們的這種特性，在測(cè)定活力時(shí)鈍化其中之一，就可測(cè)出另一種淀粉酶的活力。棕紅色二、酶活力測(cè)定

在底物淀粉濃度已知而且過(guò)量的條件下，反應(yīng)后加入碘液與未被催化水解的淀粉結(jié)合成藍(lán)色復(fù)合物。碘-淀粉比色法操作簡(jiǎn)便迅速實(shí)用其藍(lán)色深淺與未經(jīng)酶促反應(yīng)的空白管比較，從而計(jì)算出淀粉的剩余量，再計(jì)算出淀粉酶的活力。二、酶活力測(cè)定（2）測(cè)定方法測(cè)定淀粉酶活力