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第二次實(shí)驗(yàn)課程－

食物中之膽固醇定量實(shí)驗(yàn)原理利用酵素反應(yīng)法使樣品中的cholesterolester經(jīng)cholesterolesterase及cholesteroloxidase

反應(yīng)後變成4-cholesten-3-one及H2O2，而所生成之H2O2

會(huì)與4-amino-antipyrine藉由peroxidase

的作用生成redquinone，可於500nm下測(cè)其生成量。其反應(yīng)式如下:cholesterolester＋H2O------------------->cholesterol＋fattyacidcholesterolesterasecholesteroloxidase

cholesterol＋O2------------------------>4quinone＋4H2O-cholesten-3-one＋H2O2H2O2＋phenol＋4-amino-antipyrine--------------->redperoxidase

實(shí)驗(yàn)藥品Calibrator(standard)200mg/dlWorkingreagents:

PIPESbufferpH6.940mmol/lPhenol24mmol/lPeroxidase>100U/lCholesterolesterase>250U/lCholesteroloxidase>200U/l4-amino-antipyrine(4-AA)0.05mmol/l實(shí)驗(yàn)步驟將A、B及C於水浴37℃下5分鐘，再分別於500nm下測(cè)量其吸光值。所得之個(gè)別吸光值帶入公式計(jì)算後，可得知樣品之膽固醇含量（mg/dl）ABCReagentblank(μl)Standard(μl)Sample(μl)DH2O10--Standard-10-Sample--10Reagent100010001000計(jì)算公式ODofunknownConc.ofunknown＝---

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