Mic微生物感染的實(shí)驗(yàn)室診斷課件

實(shí)驗(yàn)室診斷的意義明確患者的臨床診斷選擇有效的治療措施預(yù)防疾病繼續(xù)傳播與流行判斷患者預(yù)后實(shí)驗(yàn)室診斷的意義明確患者的臨床診斷1實(shí)驗(yàn)室診斷方法分類鏡下直接觀察病原微生物分離、培養(yǎng)和鑒定病原微生物的抗原檢測特異性RNA或DNA片段檢測抗體和細(xì)胞免疫指征的檢測實(shí)驗(yàn)室診斷方法分類鏡下直接觀察2樣本的采集、運(yùn)輸、樣本前期處理形態(tài)學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、分子生物學(xué)和生物學(xué)等方法檢查出病原微生物及其型別動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、細(xì)菌毒素檢測和藥物敏感性實(shí)驗(yàn)細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)室診斷樣本的采集、運(yùn)輸、樣本前期處理細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)室診斷3采集操作：無菌操作，做好標(biāo)記采集部位：組織、血、尿液、糞便、痰、腦脊液、分泌物、嘔吐物、胸腹穿刺物及解剖樣品等采集時(shí)機(jī)：根據(jù)病程發(fā)展的不同階段采集不同部位的樣品運(yùn)輸：應(yīng)遵循安全、快捷的原則前期處理：濃縮標(biāo)本采集和運(yùn)送采集操作：無菌操作，做好標(biāo)記標(biāo)本采集和運(yùn)送4

形態(tài)學(xué)檢查細(xì)菌的培養(yǎng)特征觀察：顏色、氣味、溶血性、菌落形態(tài)、細(xì)菌動(dòng)力及在液體、半固體、固體培養(yǎng)基中的生長狀態(tài)顯微鏡檢查法：形態(tài)、基本結(jié)構(gòu)、染色性、排列方式、數(shù)量非染色檢查法染色檢查法負(fù)染色檢查法

形態(tài)學(xué)檢查細(xì)菌的培養(yǎng)特征觀察：5細(xì)菌分離培養(yǎng)法臨床標(biāo)本細(xì)菌分離：分區(qū)劃線細(xì)菌培養(yǎng)挑取單菌落，純培養(yǎng)鑒定細(xì)菌分離培養(yǎng)法臨床標(biāo)本細(xì)菌分離：分區(qū)劃線細(xì)菌培養(yǎng)挑取單菌落6細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)室診斷程序

細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)室診斷程序 7免疫學(xué)檢查免疫沉淀反應(yīng)

凝集反應(yīng)

補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)

免疫標(biāo)記技術(shù)

免疫學(xué)檢查免疫沉淀反應(yīng)8生物化學(xué)檢查糖代謝試驗(yàn)糖發(fā)酵試驗(yàn)甲基紅試驗(yàn)V-P試驗(yàn)蛋白質(zhì)代謝試驗(yàn)硫化氫產(chǎn)生試驗(yàn)?zāi)蛩胤纸庠囼?yàn)碳源和氮源利用試驗(yàn)枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)呼吸酶類試驗(yàn)過氧化氫酶試驗(yàn)氧化酶試驗(yàn)生物化學(xué)檢查糖代謝試驗(yàn)9分子生物學(xué)檢查G+C測定技術(shù)核酸雜交技術(shù)聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)質(zhì)粒指紋圖譜技術(shù)蛋白質(zhì)芯片技術(shù)DNA芯片技術(shù)分子生物學(xué)檢查G+C測定技術(shù)10生物學(xué)檢查噬菌體裂解試驗(yàn)細(xì)菌素分型技術(shù)抗菌譜試驗(yàn)生物學(xué)檢查噬菌體裂解試驗(yàn)11動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及細(xì)菌毒素檢測小鼠豚鼠家兔*LD50*ID50動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及細(xì)菌毒素檢測小鼠豚鼠家兔*LD5012藥物敏感性試驗(yàn)紙片擴(kuò)散法液體稀釋法E測定法(Etest)自動(dòng)化藥敏測定法耐藥基因測定法藥物敏感性試驗(yàn)紙片擴(kuò)散法13病毒感染的實(shí)驗(yàn)室診斷病毒感染的實(shí)驗(yàn)室診斷14標(biāo)本的采集和送檢標(biāo)本采集部位：鼻咽分泌液或痰液、腦脊液、糞便、血液標(biāo)本采集時(shí)間

發(fā)病早期或急性期標(biāo)本運(yùn)送對熱不穩(wěn)定，裝有冰塊或干冰的容器內(nèi)立即送檢加入青霉素、鏈霉素等抗生素，抑制細(xì)菌和真菌生長標(biāo)本的采集和送檢標(biāo)本采集部位：15形態(tài)學(xué)檢查光學(xué)顯微鏡檢查

包涵體（inclusion）：某些病毒感染宿主細(xì)胞后,可在細(xì)胞核或漿內(nèi)出現(xiàn)一個(gè)或數(shù)個(gè)、呈圓形或不規(guī)則、大小不一、嗜酸性或嗜堿性的結(jié)構(gòu)電鏡檢查

直接電鏡法免疫電鏡法形態(tài)學(xué)檢查光學(xué)顯微鏡檢查16輪狀病毒負(fù)染的電鏡照片輪狀病毒負(fù)染的電鏡照片17病毒分離和培養(yǎng)動(dòng)物接種小白鼠、大白鼠、豚鼠、兔、雞、猴，采用鼻腔、腦內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、腹腔、靜脈等方式雞胚培養(yǎng)組織培養(yǎng)器官培養(yǎng)組織培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)原代細(xì)胞培養(yǎng)：2~3代用于診斷和疫苗制備

二倍體細(xì)胞培養(yǎng)：40±10代

傳代細(xì)胞培養(yǎng)：無限傳代用于分離多種病毒，但不能用于制備疫苗

病毒分離和培養(yǎng)動(dòng)物接種18絨毛尿囊膜接種（痘病毒單純皰疹病毒）卵黃囊接種（蟲媒病毒）羊膜腔接種（流感病毒初次分離）尿囊腔接種（流感病毒、腮腺炎病毒）氣室絨毛尿囊膜接種卵黃囊接種羊膜腔接種（流感病毒初次分離）尿囊腔19病毒生長繁殖的指標(biāo)與鑒定細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)紅細(xì)胞吸附

紅細(xì)胞凝集

干擾作用

細(xì)胞代謝反應(yīng)空斑形成單位（PFU）

病毒生長繁殖的指標(biāo)與鑒定細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathic20細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)

培養(yǎng)的單層細(xì)胞接種病毒后導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生圓縮、溶解、脫落等病變的現(xiàn)象。病變細(xì)胞正常細(xì)胞細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)21redbloodcell紅細(xì)胞吸附virus+susceptiblecells+viralproteinsexpressedonthecellmembraneredblood紅細(xì)胞吸附virus+susceptibl22redbloodcell紅細(xì)胞凝集virus+susceptiblecells+virusesreleasedfromthecells

redblood紅細(xì)胞凝集virus+susceptibl23virusA+susceptiblecellsvirusB+CPE(-)virusB+CPE(+)susceptiblecells病毒干擾作用virusA+susceptiblevirusB+CPE24空斑plaque由病毒感染細(xì)胞后在培養(yǎng)瓶的瓊脂層上形成的一個(gè)壞死病灶空斑形成單位PFU(plaqueformationunit)每毫升空斑形成單位空斑plaque25病毒蛋白的檢測SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳

免疫熒光技術(shù)

酶免疫技術(shù)

固相放射免疫技術(shù)

蛋白印記分析

病毒蛋白的檢測SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳26EnzymeImmunoAssay(EIA)Ex.SandwichimmunoassayAgAbEnzymeImmunoAssay(EIA)AgAb27

病毒核酸的檢測核酸分子雜交技術(shù)

核酸分子擴(kuò)增技術(shù)

基因芯片技術(shù)

病毒核酸的檢測核酸分子雜交技術(shù)28血清學(xué)診斷補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)

中和試驗(yàn)

血凝抑制試驗(yàn)

膠乳凝集試驗(yàn)

間接血凝試驗(yàn)

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

血清學(xué)診斷補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)29CPEPFU熟悉微生物檢測的常用方法掌握病原菌分離鑒定步驟，并能根據(jù)待檢標(biāo)本設(shè)計(jì)檢測程序掌握病毒分離培養(yǎng)的雞胚培養(yǎng)方法SummaryCPESummary30實(shí)驗(yàn)室診斷的意義明確患者的臨床診斷選擇有效的治療措施預(yù)防疾病繼續(xù)傳播與流行判斷患者預(yù)后實(shí)驗(yàn)室診斷的意義明確患者的臨床診斷31實(shí)驗(yàn)室診斷方法分類鏡下直接觀察病原微生物分離、培養(yǎng)和鑒定病原微生物的抗原檢測特異性RNA或DNA片段檢測抗體和細(xì)胞免疫指征的檢測實(shí)驗(yàn)室診斷方法分類鏡下直接觀察32樣本的采集、運(yùn)輸、樣本前期處理形態(tài)學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、分子生物學(xué)和生物學(xué)等方法檢查出病原微生物及其型別動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、細(xì)菌毒素檢測和藥物敏感性實(shí)驗(yàn)細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)室診斷樣本的采集、運(yùn)輸、樣本前期處理細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)室診斷33采集操作：無菌操作，做好標(biāo)記采集部位：組織、血、尿液、糞便、痰、腦脊液、分泌物、嘔吐物、胸腹穿刺物及解剖樣品等采集時(shí)機(jī)：根據(jù)病程發(fā)展的不同階段采集不同部位的樣品運(yùn)輸：應(yīng)遵循安全、快捷的原則前期處理：濃縮標(biāo)本采集和運(yùn)送采集操作：無菌操作，做好標(biāo)記標(biāo)本采集和運(yùn)送34

形態(tài)學(xué)檢查細(xì)菌的培養(yǎng)特征觀察：顏色、氣味、溶血性、菌落形態(tài)、細(xì)菌動(dòng)力及在液體、半固體、固體培養(yǎng)基中的生長狀態(tài)顯微鏡檢查法：形態(tài)、基本結(jié)構(gòu)、染色性、排列方式、數(shù)量非染色檢查法染色檢查法負(fù)染色檢查法

形態(tài)學(xué)檢查細(xì)菌的培養(yǎng)特征觀察：35細(xì)菌分離培養(yǎng)法臨床標(biāo)本細(xì)菌分離：分區(qū)劃線細(xì)菌培養(yǎng)挑取單菌落，純培養(yǎng)鑒定細(xì)菌分離培養(yǎng)法臨床標(biāo)本細(xì)菌分離：分區(qū)劃線細(xì)菌培養(yǎng)挑取單菌落36細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)室診斷程序

細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)室診斷程序 37免疫學(xué)檢查免疫沉淀反應(yīng)

凝集反應(yīng)

補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)

免疫標(biāo)記技術(shù)

免疫學(xué)檢查免疫沉淀反應(yīng)38生物化學(xué)檢查糖代謝試驗(yàn)糖發(fā)酵試驗(yàn)甲基紅試驗(yàn)V-P試驗(yàn)蛋白質(zhì)代謝試驗(yàn)硫化氫產(chǎn)生試驗(yàn)?zāi)蛩胤纸庠囼?yàn)碳源和氮源利用試驗(yàn)枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)呼吸酶類試驗(yàn)過氧化氫酶試驗(yàn)氧化酶試驗(yàn)生物化學(xué)檢查糖代謝試驗(yàn)39分子生物學(xué)檢查G+C測定技術(shù)核酸雜交技術(shù)聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)質(zhì)粒指紋圖譜技術(shù)蛋白質(zhì)芯片技術(shù)DNA芯片技術(shù)分子生物學(xué)檢查G+C測定技術(shù)40生物學(xué)檢查噬菌體裂解試驗(yàn)細(xì)菌素分型技術(shù)抗菌譜試驗(yàn)生物學(xué)檢查噬菌體裂解試驗(yàn)41動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及細(xì)菌毒素檢測小鼠豚鼠家兔*LD50*ID50動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及細(xì)菌毒素檢測小鼠豚鼠家兔*LD5042藥物敏感性試驗(yàn)紙片擴(kuò)散法液體稀釋法E測定法(Etest)自動(dòng)化藥敏測定法耐藥基因測定法藥物敏感性試驗(yàn)紙片擴(kuò)散法43病毒感染的實(shí)驗(yàn)室診斷病毒感染的實(shí)驗(yàn)室診斷44標(biāo)本的采集和送檢標(biāo)本采集部位：鼻咽分泌液或痰液、腦脊液、糞便、血液標(biāo)本采集時(shí)間

發(fā)病早期或急性期標(biāo)本運(yùn)送對熱不穩(wěn)定，裝有冰塊或干冰的容器內(nèi)立即送檢加入青霉素、鏈霉素等抗生素，抑制細(xì)菌和真菌生長標(biāo)本的采集和送檢標(biāo)本采集部位：45形態(tài)學(xué)檢查光學(xué)顯微鏡檢查

包涵體（inclusion）：某些病毒感染宿主細(xì)胞后,可在細(xì)胞核或漿內(nèi)出現(xiàn)一個(gè)或數(shù)個(gè)、呈圓形或不規(guī)則、大小不一、嗜酸性或嗜堿性的結(jié)構(gòu)電鏡檢查

直接電鏡法免疫電鏡法形態(tài)學(xué)檢查光學(xué)顯微鏡檢查46輪狀病毒負(fù)染的電鏡照片輪狀病毒負(fù)染的電鏡照片47病毒分離和培養(yǎng)動(dòng)物接種小白鼠、大白鼠、豚鼠、兔、雞、猴，采用鼻腔、腦內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、腹腔、靜脈等方式雞胚培養(yǎng)組織培養(yǎng)器官培養(yǎng)組織培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)原代細(xì)胞培養(yǎng)：2~3代用于診斷和疫苗制備

二倍體細(xì)胞培養(yǎng)：40±10代

傳代細(xì)胞培養(yǎng)：無限傳代用于分離多種病毒，但不能用于制備疫苗

病毒分離和培養(yǎng)動(dòng)物接種48絨毛尿囊膜接種（痘病毒單純皰疹病毒）卵黃囊接種（蟲媒病毒）羊膜腔接種（流感病毒初次分離）尿囊腔接種（流感病毒、腮腺炎病毒）氣室絨毛尿囊膜接種卵黃囊接種羊膜腔接種（流感病毒初次分離）尿囊腔49病毒生長繁殖的指標(biāo)與鑒定細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)紅細(xì)胞吸附

紅細(xì)胞凝集

干擾作用

細(xì)胞代謝反應(yīng)空斑形成單位（PFU）

病毒生長繁殖的指標(biāo)與鑒定細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathic50細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)

培養(yǎng)的單層細(xì)胞接種病毒后導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生圓縮、溶解、脫落等病變的現(xiàn)象。病變細(xì)胞正常細(xì)胞細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)51redbloodcell紅細(xì)胞吸附virus+susceptiblecells+viralproteinsexpressedonthecellmembraneredblood紅細(xì)胞吸附virus+susceptibl52redbloodcell紅細(xì)胞凝集virus+susceptiblecells+virusesreleasedfromthecells

redblood紅細(xì)胞凝集virus+susceptibl53virusA+susceptiblecellsvirusB+CPE(-)virusB+CPE(+)susceptiblecells病毒干擾作用virusA+susceptiblevirusB+CPE54空斑plaque由病毒感染細(xì)胞后在培養(yǎng)瓶的瓊脂層上形成的一個(gè)壞死病灶空斑形成單位PFU(plaqueformationunit)每毫升空斑形成單位空斑plaque55病毒蛋白的檢測SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳

免疫熒光技術(shù)

酶免疫技術(shù)

固相放射免疫技術(shù)

蛋白印記分析

病毒蛋白的檢測SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳56EnzymeImmunoAssay(EIA)Ex.Sand