基因敲除小鼠技術專題課件

A原核顯微注射、胚胎干細胞顯微注射技術一直以來經久不衰，并逐漸從基礎研究實驗室轉向商業(yè)模式，成為一項高度標準化的新興產業(yè)。

轉基因、基因敲入/敲除動物技術已經A原核顯微注射、胚胎干細胞顯微注射技術一直以來經久不衰，并逐1成為現代生命科學基礎研究和藥物研發(fā)領域不可或缺的重要技術，該技術從上世紀七八十年代誕生以來，至今已有近四十年的歷史，經典技術如DNA原核顯微注射、胚胎干細胞顯微成為現代生命科學基礎研究和藥物研發(fā)領域不可或缺的重要技術，該2注射技術一直以來經久不衰，在小鼠模型構建方面日趨完善，并且如同剪切酶和抗體等常規(guī)分子生物學試劑的制備技術一樣，逐漸從基礎研究實驗室轉向商業(yè)模式，成為一項高度標準注射技術一直以來經久不衰，在小鼠模型構建方面日趨完善，并且如3化的新興產業(yè)，催生了數以百計的創(chuàng)新藥物和數以千計的優(yōu)秀文章。盡管如此，傳統(tǒng)技術仍然存在一些難以克服的缺陷，如步驟繁瑣、周期漫長、成功率低、費用高昂等，而ZFN和化的新興產業(yè)，催生了數以百計的創(chuàng)新藥物和數以千計的優(yōu)秀文章。4TALEN等新技術的出現，或有可能將這一局面徹底改變。

基因敲除鼠技術是上世紀80年代中后期基于DNA同源重組的原理發(fā)展起來的，Capecchi和SmithiTALEN等新技術的出現，或有可能將這一局面徹底改變。

基因5es在1987年根據同源重組（homologousrecombination）的原理，首次實現了ES的外源基因的定點整合（targetedintegrationes在1987年根據同源重組（homologousrecom6），這一技術稱為"基因打靶"（genetargeting）或"基因敲除"（geneknockout），利用這種ES的顯微），這一技術稱為"基因打靶"（genet7注射就可以制作出基因敲出小鼠（KOMice:knockoutmice）;由于這一工作，Capecchi和Smithies于2007年與Evans分享了諾貝爾醫(yī)學注射就可以制作出基因敲出小鼠（KOMice:knockout8獎。

同源重組（homologousrecombination）定義：是指發(fā)生在姐妹染色單體（sisterchromatin)之間或同一染色體上含有同源序列的獎。

同源重組（homologousrecombinatio9DNA分子之間或分子之內的重新組合。在基因敲除小鼠制作過程中，需要針對目的基因兩端特異性片段設計帶有相同片段的重組載體，將重組載體導入到胚胎干細胞后外源的重組載DNA分子之間或分子之內的重新組合。在基因敲除小鼠制作過程中10體與胚胎干細胞中相同的片段會發(fā)生同源重組，如圖1所示：

圖2.基因敲除鼠制作過程示意圖

1、Knockout載體設計與構建

根據研究項目具體情況和要求體與胚胎干細胞中相同的片段會發(fā)生同源重組，如圖1所示：

圖11把目的基因和與細胞內靶基因特異片段同源的DNA片段都重組到帶有標記基因(如neo基因，TK基因等)的載體上，成為重組的Knockout載體。

2、Knoc把目的基因和與細胞內靶基因特異片段同源的DNA片段都重組到帶12koutES細胞篩選

Knockout載體測序驗證正確后，將載體線性化，然后電轉入ES細胞，通過載體上的正負篩選基因獲得陽性的KnockoutES克隆。選取PkoutES細胞篩選

Knockout載體測序驗證正確后，將13CR鑒定打靶載體正確插入的ES基因組DNA用于SouthernBlot鑒定，將SouthernBlot鑒定的KnockoutES擴大培養(yǎng)并液氮保存。

3、KnCR鑒定打靶載體正確插入的ES基因組DNA用于Souther14ockoutES細胞囊胚注射得到嵌合體小鼠

擴增經鑒定插入或置換片段位置正確的KnockoutES細胞，以囊胚顯微注射的方式將一定數量的KnockoutES細ockoutES細胞囊胚注射得到嵌合體小鼠

擴增經鑒定插入或15胞注入特定品系小鼠囊胚中，然后將囊胚移植到假孕的小鼠子宮中。待后代小鼠出生后，通過小鼠的毛色中來源于ES細胞毛色的比例判斷嵌合程度的高低，以及該小鼠的后代中可能胞注入特定品系小鼠囊胚中，然后將囊胚移植到假孕的小鼠子宮中。16獲得生殖系傳遞能力。

4、由嵌合體小鼠繁殖出生殖遺傳系Knockout小鼠

將嵌合體小鼠與適當品系的小鼠交配，后代小鼠出生后，通過PCR方式檢測小鼠是否含有獲得生殖系傳遞能力。

4、由嵌合體小鼠繁殖出生殖遺傳系Kno17打靶序列。如有，則該小鼠為具備生殖遺傳能力的Knockout小鼠(F1代鼠)。

5、Knockout小鼠生殖系傳遞鑒定

將嵌合體小鼠和適當品系野生型小鼠交配打靶序列。如有，則該小鼠為具備生殖遺傳能力的Knockout18，通過后代小鼠毛色或PCR基因型鑒定的方法驗證嵌合體小鼠生殖系傳遞能力。

常規(guī)基因敲除是通過基因打靶，把需要敲除的基因的幾個重要的外顯子或者功能區(qū)域用Ne，通過后代小鼠毛色或PCR基因型鑒定的方法驗證嵌合體小鼠生殖19oCassette替換掉。這樣的小鼠其全身所有的組織和細胞中都不表達該基因產物。此類基因敲除鼠一般用于研究某個基因在對小鼠全身生理病理的影響，而且這個基因沒有胚oCassette替換掉。這樣的小鼠其全身所有的組織和細胞中20胎致死性。

二、條件性基因敲除小鼠（ConditionalKnockout）

條件性基因敲除小鼠是通過基因打靶，把兩個loxP位點放到目的基因一個或幾個胎致死性。

二、條件性基因敲除小鼠（ConditionalK21重要的外顯子的兩邊。該小鼠和表達Cre酶小鼠雜交之前，其目的基因表達完全正常。當和組織特異性表達Cre酶的小鼠進行雜交后，可以在特定的組織或細胞中敲除該基因，而重要的外顯子的兩邊。該小鼠和表達Cre酶小鼠雜交之前，其目的22該基因在其他組織或細胞表達正常。

條件性基因敲除鼠適用范圍為：（1）該基因有胚胎致死性；（2）用于研究該基因在特定的組織或細胞中的生理病理功能。

三、基因敲該基因在其他組織或細胞表達正常。

條件性基因敲除鼠適用范圍為23入小鼠（Knockin）

一、ZFN技術制作基因敲除鼠

ZFN能夠識別并結合指定的基因序列位點，并高效精確地切斷。隨后細胞利用天然的DNA修復過程來實現入小鼠（Knockin）

一、ZFN技術制作基因敲除鼠

Z24DNA的插入、刪除和修改，這樣研究人員就能夠隨心所欲地進行基因組編輯。這在過去是無法想象的，傳統(tǒng)的基因敲除技術依賴細胞內自然發(fā)生的同源重組，其效率只有百萬分之一DNA的插入、刪除和修改，這樣研究人員就能夠隨心所欲地進行基25，而ZFN的基因敲除效率能達到10%。利用這些技術進行小鼠基因的定點敲除和敲入，可以把時間從一年縮短到幾個月。

這項技術中設計特異性的ZFN是最關鍵的環(huán)節(jié)，目，而ZFN的基因敲除效率能達到10%。利用這些技術進行小鼠基26前研究者采用計算生物學方法設計高特異性的ZFN，但ZFN的脫靶（offtarget），也就是把不該切的地方切了的問題仍是一個挑戰(zhàn)。也正因為這個原因，利用ZFN技前研究者采用計算生物學方法設計高特異性的ZFN，但ZFN的脫27術進行小鼠的基因修飾還無法完全取代傳統(tǒng)技術。

二、TALEN技術制作基因敲除鼠

TALEN技術是一種嶄新的分子生物學工具。科學家發(fā)現，來自一種植物細菌的術進行小鼠的基因修飾還無法完全取代傳統(tǒng)技術。

二、TALE28TAL蛋白的核酸結合域的氨基酸序列與其靶位點的核酸序列有恒定的對應關系。利用TAL的序列模塊，可組裝成特異結合任意DNA序列的模塊化蛋白，從而達到靶向操作內源性TAL蛋白的核酸結合域的氨基酸序列與其靶位點的核酸序列有恒定29基因的目的，它克服了ZFN方法不能識別任意目標基因序列，以及識別序列經常受上下游序列影響等問題，而具有ZFN相等或更好的靈活性，使基因操作變得更加簡單方便。然而基因的目的，它克服了ZFN方法不能識別任意目標基因序列，以及30同樣因為脫靶的問題，利用TALEN技術進行小鼠的基因修飾仍然無法取代傳統(tǒng)技術。

一、什么是ES細胞顯微注射？

答：胚胎干細胞顯微注射是制作基因敲除小鼠的同樣因為脫靶的問題，利用TALEN技術進行小鼠的基因修飾仍然31一個最常用的方法。主要過程是將攜帶目的基因的胚胎干細胞注射到小鼠的囊胚腔中獲得嵌合體小鼠。所得嵌合體小鼠的組織，將同時含有來源于囊胚的細胞和胚胎干細胞。嵌合體小一個最常用的方法。主要過程是將攜帶目的基因的胚胎干細胞注射到32鼠必須和野生型小鼠配種以決定遺傳改變的生殖系能否傳遞，這樣可能獲得轉基因或打靶基因（來源于胚胎干細胞）穩(wěn)定的生殖系傳遞的小鼠。一般情況下，大約能獲得50%繼承了鼠必須和野生型小鼠配種以決定遺傳改變的生殖系能否傳遞，這樣可33目的基因的后代。

二、嵌合體

遺傳學上用以指不同遺傳性狀嵌合或混雜表現的個體。免疫學上的涵義則指一個機體身上有兩種或兩種以上染色體組成不同的細胞系同時存在,目的基因的后代。

二、嵌合體

遺傳學上用以指不同遺傳性狀嵌合34彼此能夠耐受,不產生排斥反應,相互間處在嵌合狀態(tài)。在基因敲除鼠中指通過向囊胚注射被外源基因轉化了的胚胎干細胞，使得發(fā)育成為的個體中含有不同基因型的細胞，產生的個彼此能夠耐受,不產生排斥反應,相互間處在嵌合狀態(tài)。在基因敲除35體也叫嵌合體，即該生物體中嵌合了兩種不同遺傳結構的細胞（一種是基因型被改變了的細胞，另一種是原來的基因型的細胞）。

三、條件性敲除的原理？

答：Cre-Lo體也叫嵌合體，即該生物體中嵌合了兩種不同遺傳結構的細胞（一種36xP系統(tǒng)是源于P1噬菌體的一個DNA重組體系,由Cre酶和相應的LoxP位點組成,它能導致重組發(fā)生在特定的DNA序列處(LoxP位點),該系統(tǒng)可以將外源基因定點xP系統(tǒng)是源于P1噬菌體的一個DNA重組體系,由Cre酶和相37整合到染色體上或將特定DNA片段刪除。基于Cre-LoxP的基因打靶要分兩步來進行。首先要在胚胎干細胞的基因組中引入LoxP序列，這一步可以通過打靶載體的設計和整合到染色體上或將特定DNA片段刪除?；贑re-LoxP的38對同源重組子的篩選來實現。下一步通過Cre介導的重組來實現靶基因的遺傳修飾或改變。Cre-LoxP系統(tǒng)既可以在細胞水平上用Cre重組酶表達質粒轉染中靶細胞，通過對同源重組子的篩選來實現。下一步通過Cre介導的重組來實現靶39識別LoxP位點將抗性標記基因切除，又可以在個體水平上將重組雜合子小鼠與Cre轉基因小鼠雜交，篩選子代小鼠就可得到刪除外源標記基因的條件性敲除小鼠。

四、如何識別LoxP位點將抗性標記基因切除，又可以在個體水平上將重組40鑒定和挑選嵌合體？

答：動物只有部分組織細胞整合有外源基因，則稱為嵌合體動物。它的鑒定主要根據毛色去鑒定。注射的ES和囊胚來源不同的小鼠品系。它們的毛色不同。鑒定和挑選嵌合體？

答：動物只有部分組織細胞整合有外源基因，41因此可以根據毛色的嵌合率來鑒定和挑選嵌合體。

五、ROSA26與定點插入？

答：利用同源重組技術，把外面的cDNA片段或者其他DNA片段，定點插入到ROSA因此可以根據毛色的嵌合率來鑒定和挑選嵌合體。

五、ROSA24226位置。ROSA26是一個安全區(qū)域，外源性的基因定點插入這個位點不會影響其他基因的表達。

TaconicFarms,Inc.成立于1952年，是位于紐約26位置。ROSA26是一個安全區(qū)域，外源性的基因定點插入這43哈得孫河谷地區(qū)的一家家族企業(yè)。自成立以來，公司一直是世界上最大的實驗室嚙齒動物供應商之一，在持續(xù)生產高品質、定義明確的大鼠和小鼠方面擁有良好的口碑。Taconi哈得孫河谷地區(qū)的一家家族企業(yè)。自成立以來，公司一直是世界上最44c在轉基因小鼠的定制設計和生產、小鼠和大鼠育種、屏障系統(tǒng)、基因和動物健康方面的專業(yè)經驗為利用活體模型開展藥物開發(fā)的研究人員提供支持。Taconic在美國和歐洲設c在轉基因小鼠的定制設計和生產、小鼠和大鼠育種、屏障系統(tǒng)、基45有六個育種工廠和三個服務實驗室，員工人數超過1000名，致力于從事技術創(chuàng)新。

賽業(yè)生物科技是目前國內最大的轉基因/基因敲除鼠技術服務供應商，旗下的賽業(yè)轉基有六個育種工廠和三個服務實驗室，員工人數超過1000名，致力46因動物中心是國際頂尖的轉基因/基因敲除模式動物中心，中心擁有數千平方米實驗場地，動物種群規(guī)模超過10萬只，每年可構建轉基因鼠模型3000例及基因敲除鼠模型300因動物中心是國際頂尖的轉基因/基因敲除模式動物中心，中心擁有47例，累計構建轉基因/基因敲除鼠模型數千例。中心主要提供轉基因小鼠、基因敲除小鼠、基因敲入小鼠等技術服務。

環(huán)氧丙烷/zh/cas-75-56-9.html例，累計構建轉基因/基因敲除鼠模型數千例。中心主要提供轉基因48基因敲除小鼠技術專題課件49基因敲除小鼠技術專題課件50A原核顯微注射、胚胎干細胞顯微注射技術一直以來經久不衰，并逐漸從基礎研究實驗室轉向商業(yè)模式，成為一項高度標準化的新興產業(yè)。

轉基因、基因敲入/敲除動物技術已經A原核顯微注射、胚胎干細胞顯微注射技術一直以來經久不衰，并逐51成為現代生命科學基礎研究和藥物研發(fā)領域不可或缺的重要技術，該技術從上世紀七八十年代誕生以來，至今已有近四十年的歷史，經典技術如DNA原核顯微注射、胚胎干細胞顯微成為現代生命科學基礎研究和藥物研發(fā)領域不可或缺的重要技術，該52注射技術一直以來經久不衰，在小鼠模型構建方面日趨完善，并且如同剪切酶和抗體等常規(guī)分子生物學試劑的制備技術一樣，逐漸從基礎研究實驗室轉向商業(yè)模式，成為一項高度標準注射技術一直以來經久不衰，在小鼠模型構建方面日趨完善，并且如53化的新興產業(yè)，催生了數以百計的創(chuàng)新藥物和數以千計的優(yōu)秀文章。盡管如此，傳統(tǒng)技術仍然存在一些難以克服的缺陷，如步驟繁瑣、周期漫長、成功率低、費用高昂等，而ZFN和化的新興產業(yè)，催生了數以百計的創(chuàng)新藥物和數以千計的優(yōu)秀文章。54TALEN等新技術的出現，或有可能將這一局面徹底改變。

基因敲除鼠技術是上世紀80年代中后期基于DNA同源重組的原理發(fā)展起來的，Capecchi和SmithiTALEN等新技術的出現，或有可能將這一局面徹底改變。

基因55es在1987年根據同源重組（homologousrecombination）的原理，首次實現了ES的外源基因的定點整合（targetedintegrationes在1987年根據同源重組（homologousrecom56），這一技術稱為"基因打靶"（genetargeting）或"基因敲除"（geneknockout），利用這種ES的顯微），這一技術稱為"基因打靶"（genet57注射就可以制作出基因敲出小鼠（KOMice:knockoutmice）;由于這一工作，Capecchi和Smithies于2007年與Evans分享了諾貝爾醫(yī)學注射就可以制作出基因敲出小鼠（KOMice:knockout58獎。

同源重組（homologousrecombination）定義：是指發(fā)生在姐妹染色單體（sisterchromatin)之間或同一染色體上含有同源序列的獎。

同源重組（homologousrecombinatio59DNA分子之間或分子之內的重新組合。在基因敲除小鼠制作過程中，需要針對目的基因兩端特異性片段設計帶有相同片段的重組載體，將重組載體導入到胚胎干細胞后外源的重組載DNA分子之間或分子之內的重新組合。在基因敲除小鼠制作過程中60體與胚胎干細胞中相同的片段會發(fā)生同源重組，如圖1所示：

圖2.基因敲除鼠制作過程示意圖

1、Knockout載體設計與構建

根據研究項目具體情況和要求體與胚胎干細胞中相同的片段會發(fā)生同源重組，如圖1所示：

圖61把目的基因和與細胞內靶基因特異片段同源的DNA片段都重組到帶有標記基因(如neo基因，TK基因等)的載體上，成為重組的Knockout載體。

2、Knoc把目的基因和與細胞內靶基因特異片段同源的DNA片段都重組到帶62koutES細胞篩選

Knockout載體測序驗證正確后，將載體線性化，然后電轉入ES細胞，通過載體上的正負篩選基因獲得陽性的KnockoutES克隆。選取PkoutES細胞篩選

Knockout載體測序驗證正確后，將63CR鑒定打靶載體正確插入的ES基因組DNA用于SouthernBlot鑒定，將SouthernBlot鑒定的KnockoutES擴大培養(yǎng)并液氮保存。

3、KnCR鑒定打靶載體正確插入的ES基因組DNA用于Souther64ockoutES細胞囊胚注射得到嵌合體小鼠

擴增經鑒定插入或置換片段位置正確的KnockoutES細胞，以囊胚顯微注射的方式將一定數量的KnockoutES細ockoutES細胞囊胚注射得到嵌合體小鼠

擴增經鑒定插入或65胞注入特定品系小鼠囊胚中，然后將囊胚移植到假孕的小鼠子宮中。待后代小鼠出生后，通過小鼠的毛色中來源于ES細胞毛色的比例判斷嵌合程度的高低，以及該小鼠的后代中可能胞注入特定品系小鼠囊胚中，然后將囊胚移植到假孕的小鼠子宮中。66獲得生殖系傳遞能力。

4、由嵌合體小鼠繁殖出生殖遺傳系Knockout小鼠

將嵌合體小鼠與適當品系的小鼠交配，后代小鼠出生后，通過PCR方式檢測小鼠是否含有獲得生殖系傳遞能力。

4、由嵌合體小鼠繁殖出生殖遺傳系Kno67打靶序列。如有，則該小鼠為具備生殖遺傳能力的Knockout小鼠(F1代鼠)。

5、Knockout小鼠生殖系傳遞鑒定

將嵌合體小鼠和適當品系野生型小鼠交配打靶序列。如有，則該小鼠為具備生殖遺傳能力的Knockout68，通過后代小鼠毛色或PCR基因型鑒定的方法驗證嵌合體小鼠生殖系傳遞能力。

常規(guī)基因敲除是通過基因打靶，把需要敲除的基因的幾個重要的外顯子或者功能區(qū)域用Ne，通過后代小鼠毛色或PCR基因型鑒定的方法驗證嵌合體小鼠生殖69oCassette替換掉。這樣的小鼠其全身所有的組織和細胞中都不表達該基因產物。此類基因敲除鼠一般用于研究某個基因在對小鼠全身生理病理的影響，而且這個基因沒有胚oCassette替換掉。這樣的小鼠其全身所有的組織和細胞中70胎致死性。

二、條件性基因敲除小鼠（ConditionalKnockout）

條件性基因敲除小鼠是通過基因打靶，把兩個loxP位點放到目的基因一個或幾個胎致死性。

二、條件性基因敲除小鼠（ConditionalK71重要的外顯子的兩邊。該小鼠和表達Cre酶小鼠雜交之前，其目的基因表達完全正常。當和組織特異性表達Cre酶的小鼠進行雜交后，可以在特定的組織或細胞中敲除該基因，而重要的外顯子的兩邊。該小鼠和表達Cre酶小鼠雜交之前，其目的72該基因在其他組織或細胞表達正常。

條件性基因敲除鼠適用范圍為：（1）該基因有胚胎致死性；（2）用于研究該基因在特定的組織或細胞中的生理病理功能。

三、基因敲該基因在其他組織或細胞表達正常。

條件性基因敲除鼠適用范圍為73入小鼠（Knockin）

一、ZFN技術制作基因敲除鼠

ZFN能夠識別并結合指定的基因序列位點，并高效精確地切斷。隨后細胞利用天然的DNA修復過程來實現入小鼠（Knockin）

一、ZFN技術制作基因敲除鼠

Z74DNA的插入、刪除和修改，這樣研究人員就能夠隨心所欲地進行基因組編輯。這在過去是無法想象的，傳統(tǒng)的基因敲除技術依賴細胞內自然發(fā)生的同源重組，其效率只有百萬分之一DNA的插入、刪除和修改，這樣研究人員就能夠隨心所欲地進行基75，而ZFN的基因敲除效率能達到10%。利用這些技術進行小鼠基因的定點敲除和敲入，可以把時間從一年縮短到幾個月。

這項技術中設計特異性的ZFN是最關鍵的環(huán)節(jié)，目，而ZFN的基因敲除效率能達到10%。利用這些技術進行小鼠基76前研究者采用計算生物學方法設計高特異性的ZFN，但ZFN的脫靶（offtarget），也就是把不該切的地方切了的問題仍是一個挑戰(zhàn)。也正因為這個原因，利用ZFN技前研究者采用計算生物學方法設計高特異性的ZFN，但ZFN的脫77術進行小鼠的基因修飾還無法完全取代傳統(tǒng)技術。

二、TALEN技術制作基因敲除鼠

TALEN技術是一種嶄新的分子生物學工具。科學家發(fā)現，來自一種植物細菌的術進行小鼠的基因修飾還無法完全取代傳統(tǒng)技術。

二、TALE78TAL蛋白的核酸結合域的氨基酸序列與其靶位點的核酸序列有恒定的對應關系。利用TAL的序列模塊，可組裝成特異結合任意DNA序列的模塊化蛋白，從而達到靶向操作內源性TAL蛋白的核酸結合域的氨基酸序列與其靶位點的核酸序列有恒定79基因的目的，它克服了ZFN方法不能識別任意目標基因序列，以及識別序列經常受上下游序列影響等問題，而具有ZFN相等或更好的靈活性，使基因操作變得更加簡單方便。然而基因的目的，它克服了ZFN方法不能識別任意目標基因序列，以及80同樣因為脫靶的問題，利用TALEN技術進行小鼠的基因修飾仍然無法取代傳統(tǒng)技術。

一、什么是ES細胞顯微注射？

答：胚胎干細胞顯微注射是制作基因敲除小鼠的同樣因為脫靶的問題，利用TALEN技術進行小鼠的基因修飾仍然81一個最常用的方法。主要過程是將攜帶目的基因的胚胎干細胞注射到小鼠的囊胚腔中獲得嵌合體小鼠。所得嵌合體小鼠的組織，將同時含有來源于囊胚的細胞和胚胎干細胞。嵌合體小一個最常用的方法。主要過程是將攜帶目的基因的胚胎干細胞注射到82鼠必須和野生型小鼠配種以決定遺傳改變的生殖系能否傳遞，這樣可能獲得轉基因或打靶基因（來源于胚胎干細胞）穩(wěn)定的生殖系傳遞的小鼠。一般情況下，大約能獲得50%繼承了鼠必須和野生型小鼠配種以決定遺傳改變的生殖系能否傳遞，這樣可83目的基因的后代。

二、嵌合體

遺傳學上用以指不同遺傳性狀嵌合或混雜表現的個體。免疫學上的涵義則指一個機體身上有兩種或兩種以上染色體組成不同的細胞系同時存在,目的基因的后代。

二、嵌合體

遺傳學上用以指不同遺傳性狀嵌合84彼此能夠耐受,不產生排斥反應,相互間處在嵌合狀態(tài)。在基因敲除鼠中指通過向囊胚注射被外源基因轉化了的胚胎干細胞，使得發(fā)育成為的個體中含有不同基因型的細胞，產生的個彼此能夠耐受,不產生排斥反應,相互間處在嵌合狀態(tài)。在基因敲除85體也叫嵌合體，即該生物體中嵌合了兩種不同遺傳結構的細胞（一種是基因型被改變了的細胞，另一種是原來的基因型的細胞）。

三、條件性敲除的原理？

答：Cre-Lo體也叫嵌合體，即該生物體中嵌合了兩種不同遺傳結構的細胞（一種86xP系統(tǒng)是源于P1噬菌體的一個DNA重組體系,由Cre酶和相應的LoxP位點組成,它能導致重組發(fā)生在特定的DNA序列處(LoxP位點),該系統(tǒng)可以將外源基因定點xP系統(tǒng)是源于P1噬菌體的一個DNA重組體系,由Cre酶和相87整合到染色體上或將特定DNA片段刪除?；贑re-LoxP的基因打靶要分兩步來進行。首先要在胚胎干細胞的基因組中引入LoxP序列，這一步可以通過打靶載體的設計和整合到染色體上或將特定DNA片段刪除?；贑re-LoxP的88對同源重組子的篩選來實現。下一步通過Cre介導的重組來實現靶基因的遺傳修飾或改變。Cre-LoxP系統(tǒng)既可以在細胞水平上用