考點(diǎn)1：微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)1

Sw-x1-2014-8考點(diǎn)1微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)1執(zhí)筆人：cln審核人：clnPAGEPAGE8一、學(xué)習(xí)目標(biāo)：了解有關(guān)培養(yǎng)基和無菌技術(shù)的基礎(chǔ)知識二、學(xué)習(xí)導(dǎo)航：自主學(xué)習(xí)（一）、微生物類群：微生物是指自然界那些形態(tài)微小，結(jié)構(gòu)簡單，通常要用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能看清楚的生物。包括沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu)的_________、原核生物界、真菌界和原生生物界。（二）、微生物培養(yǎng)基：1、概念：培養(yǎng)基是指人們按照微生物對________的不同需求，配制出供其________的營養(yǎng)基質(zhì)。2、成分：在配制培養(yǎng)基時(shí)，一般都含有_______、_______、碳源（提供碳元素的物質(zhì)，可分為無機(jī)碳源，如_______和有機(jī)碳源，如_______、花生粉餅、石油等）和氮源（提供氮元素的物質(zhì),如N2、氨、銨鹽、硝酸鹽等、尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等），此外，培養(yǎng)基還需要滿足微生物對_______、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及________的需求。3、種類：分類依據(jù)分類特點(diǎn)作用物理性質(zhì)_____培養(yǎng)基加大量瓊脂，呈固態(tài)微生物的分離和計(jì)數(shù)等半固體培養(yǎng)基加少量瓊脂，容器放倒不致流出，劇烈震蕩則破散觀察微生物的運(yùn)動(dòng)，鑒定菌種等_____培養(yǎng)基不加瓊脂，呈液體常用于_________用途_____培養(yǎng)基在一般培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物生長，促進(jìn)所需微生物的生長_____菌種,如青霉素分離出酵母菌和霉菌；高濃度食鹽可選擇出金黃色葡萄球菌鑒別培養(yǎng)基在一般培養(yǎng)基中加入某種________或化學(xué)藥品，以鑒別不同種類的微生物_____菌種，如伊紅和美藍(lán)遇大腸桿菌呈深紫色，略帶金屬光澤化學(xué)成分合成培養(yǎng)基化學(xué)成分_________分類和鑒定等天然培養(yǎng)基由___________配制而成，化學(xué)成分不明確用于工業(yè)生產(chǎn)（三）、無菌技術(shù)1、概念：指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有______的方法。2、獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是。分類：在操作中需要進(jìn)行消毒和滅菌處理，消毒是指使用溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部_______對人體有害的微生物（不包括________和_________）。常用的消毒方法有：煮沸消毒法____、和_____________。滅菌則是使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外______微生物（包括_______和________）常用的滅菌方法有____、和_____________。合作探究培養(yǎng)基中一般都含有哪些成分，結(jié)合細(xì)胞中元素組成的知識，討論為什么大多數(shù)培養(yǎng)基中都含有這四類物質(zhì)？消毒和滅菌的區(qū)別（閱讀教材填充表格）項(xiàng)目概念常用方法應(yīng)用范圍消毒消毒是指使用溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部_______對人體有害的微生物（不包括________和_________）。煮沸消毒法：在100℃下煮沸_______min。一般物品__________：70-75℃煮30min或在80℃下煮15min。一些不耐高溫的液體，如_______化學(xué)藥劑消毒法如用________擦拭雙手、用_______消毒水源等。_______________：30W紫外線燈照射30min。__________滅菌滅菌則是使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外______微生物（包括_______和________）__________：用酒精燈火焰______________：160-170℃下滅菌1-2h。玻璃器皿、金屬工具的滅菌_______________:121℃下滅菌15-30min。三、典型例題：例1：對硝化細(xì)菌的敘述正確的是（）①含有核糖體不含葉綠體②含有DNA和RNA，且DNA位于染色體上③因?yàn)樗切柩跣蜕锼院芯€粒體④遺傳不遵循基因的分離定律和自由組合定律⑤遺傳中會發(fā)生基因突變A.②③④B.①④⑤C.①②③⑤D.①②④⑤變式1-1：下列關(guān)于不同生物各自特征的敘述，正確的是（）①酵母菌②乳酸菌③硝化細(xì)菌④衣藻⑤金魚藻⑥煙草花葉病毒A．①②⑥都是原核生物，且都能發(fā)生突變B．①②③都不含葉綠素，且都是分解者編號成分含量①NH4HCO30.4g②KH2PO44.0g③FeSO40.5g④CaCl20.5g⑤H2O100mL⑥維生素少量C．①③都是異養(yǎng)生物，且都能進(jìn)行有氧呼吸D．③④⑤都具有細(xì)胞結(jié)構(gòu)，且都有細(xì)胞壁例2：右表是為培養(yǎng)某類微生物而配制的培養(yǎng)基的成分組成，有關(guān)敘述正確的是（）A．運(yùn)用上述培養(yǎng)基可培養(yǎng)自養(yǎng)型微生物B．該培養(yǎng)基從物理性質(zhì)來看，屬于固體培養(yǎng)基C．運(yùn)用此培養(yǎng)基也可以成功地進(jìn)行病毒的培養(yǎng)D．該培養(yǎng)基中NH4HCO3只提供氮源變式2-1：下列關(guān)于微生物營養(yǎng)的說法，正確的是（）A．同一種物質(zhì)不可能既作碳源又作氮源B．凡是碳源都能提供能量c．除水以外的無機(jī)物僅提供無機(jī)鹽D．無機(jī)氮源也能提供能量變式2-2：下表是有關(guān)4種生物的能源、碳源、氮源和代謝類型的概述。其中正確的是（）生物硝化細(xì)菌根瘤菌酵母菌乳酸菌能源氧化NH3N2的固定分解糖類等有機(jī)物光能碳源C02糖類糖類糖類氮源NH3N2NH4+、NO3-尿素代謝類型自養(yǎng)需氧型異養(yǎng)需氧型異養(yǎng)兼性厭氧型自養(yǎng)需氧型A．根瘤菌、乳酸菌B．硝化細(xì)菌、酵母菌C．酵母菌、乳酸菌D．硝化細(xì)菌、根瘤菌例3：獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是（）A．將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌B．接種純種細(xì)菌C．適宜環(huán)境條件下培養(yǎng)D．防止外來雜菌的入侵變式3-1：細(xì)菌培養(yǎng)過程中分別采用了高壓蒸氣、酒精、火焰灼燒等幾種不同的處理，這些方法依次用于殺滅哪些部位的雜菌()A．接種針、手、培養(yǎng)基B．高壓鍋、手、接種針C．培養(yǎng)基、手、接種針D．接種針、手、高壓鍋?zhàn)兪?-2：（14豐臺期末）下列操作屬于滅菌的方法的是：A、接種前用酒精棉球擦拭雙手和工作臺面B、接種中試管口等易被污染的部位通過火焰C、牛奶在80℃下煮15min以殺死其中的微生物D、氯化汞溶液浸泡外植體1-2min后無菌水沖洗四、反饋拓展：1．下列敘述錯(cuò)誤的是A．酵母菌有核膜，而固氮菌沒有 B．酵母菌有細(xì)胞膜，而固氮菌沒有C．黑藻細(xì)胞有線粒體，藍(lán)細(xì)菌則沒有 D．黑藻細(xì)胞有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，藍(lán)細(xì)菌則沒有2．下列關(guān)于病毒的描述，正確的是A．噬菌體通常在植物細(xì)胞中增殖B．病毒可作為基因工程的運(yùn)載體C．青霉素可有效抑制流感病毒增殖D．癌癥的發(fā)生于病毒感染完全無關(guān)3.不同的微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的需要各不相同。下列有關(guān)一種以CO2為唯一碳源的自養(yǎng)微生物營養(yǎng)的描述中，不正確的是（）A．氮源物質(zhì)為該微生物提供必要的氮素B．碳源物質(zhì)也是該微生物的能源物質(zhì)C．無機(jī)鹽是該微生物不可缺少的營養(yǎng)物質(zhì)D．水是該微生物的營養(yǎng)要素之一4.下列物質(zhì)中，不能作為異養(yǎng)型微生物碳源的是（） A．蛋白胨B．含碳有機(jī)物C．含碳無機(jī)物D．石油、花生粉餅5、有關(guān)培養(yǎng)基配制原則的表述正確的是A.任何培養(yǎng)基都必須含有碳源、氮源、水和無機(jī)鹽B.碳源和氮源必須有一定比例，碳元素的含量最多，其次是氮元素C.微生物的生長除受營養(yǎng)因素影響外，還受到PH、氧和滲透壓的影響D.營養(yǎng)物質(zhì)的濃度越高越好6、甲、乙、丙是三種微生物，下表Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ是用來培養(yǎng)微生物的三種培養(yǎng)基。甲、乙、丙都能在Ⅲ種正常生長繁殖；甲能在Ⅰ中正常生長繁殖，而乙和丙都不能；乙能在Ⅱ中正常生長繁殖，甲、丙都不能。下列說法正確的是（

）A.甲、乙、丙都是異養(yǎng)微生物B.甲、乙、丙都是自養(yǎng)微生物、丙是異養(yǎng)微生物C.甲是固氮微生物、乙是自養(yǎng)微生物、丙是異養(yǎng)微生物D.甲是異養(yǎng)微生物、乙是固氮微生物、丙是自養(yǎng)微生物7.下列有關(guān)細(xì)菌培養(yǎng)的敘述，正確的是（）A.在瓊脂固體培養(yǎng)基上長出的單個(gè)菌落含有多種細(xì)菌B.在培養(yǎng)基中加入青霉素可抑制真菌而促進(jìn)細(xì)菌生長C.向液體培養(yǎng)基中通人氧氣能促進(jìn)破傷風(fēng)桿菌的生長D.在半固體培養(yǎng)基中接種細(xì)菌培養(yǎng)后可以觀察其運(yùn)動(dòng)8、下列常用的無菌操作中，錯(cuò)誤的是A．用酒精擦拭雙手B．用氯氣消毒水源C．實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行D．玻璃器皿(吸管、培養(yǎng)皿)可用酒精擦拭9、牛奶、吸管、接種環(huán)、培養(yǎng)基、空氣滅菌的方式依次是 ①灼燒滅菌②巴氏消毒③干熱滅菌④紫外線消毒⑤高壓蒸汽滅菌A．②③①⑤④B．②⑤③①④C．②①③⑤④D．⑤①③②④10、下列是與微生物培養(yǎng)有關(guān)的問題，請回答：某細(xì)菌固體培養(yǎng)基的組成成分是KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4、葡萄糖、尿素、瓊脂和蒸餾水，其中凝固劑是____________，碳源是____________，氮源是______________。已知只有能合成脲酶的細(xì)菌才能在該培養(yǎng)基上生長，故該培養(yǎng)基屬于__________培養(yǎng)基。按照化學(xué)成分分類，該培養(yǎng)基屬于______培養(yǎng)基。從同化作用類型上看，用該培養(yǎng)基培養(yǎng)的細(xì)菌屬于___________。成分含量蛋白胨10.0g乳糖5.0g蔗糖5.0gK2HPO42.0g顯色劑0.2g瓊脂12.0g11、請回答下列與大腸桿菌有關(guān)的問題：（1）從生態(tài)系統(tǒng)的成分上看，大腸桿菌屬于；它的同化作用類型是。（2）下表是某公司研發(fā)的一種培養(yǎng)大腸桿菌菌群的培養(yǎng)基配方。將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1000mL根據(jù)用途劃分該培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)基(選擇、鑒別)。該培養(yǎng)基中的碳源是。（3）培養(yǎng)大腸桿菌時(shí)，為防止雜菌污染需要對培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行。（4）利用培養(yǎng)基不僅可以分離培養(yǎng)微生物，也可以進(jìn)行植物組織培養(yǎng)。與微生物培養(yǎng)明顯不同的是，用于組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基中還需要加入。12有些細(xì)菌可分解原油，從而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同學(xué)欲從污染的土壤中篩選出高效降解原油的菌株?；卮饐栴}：（1）在篩選過程中，應(yīng)將土壤樣品稀釋液接種于以

為惟一碳源的固體培養(yǎng)基上，從功能上講，該培養(yǎng)基屬于

培養(yǎng)基（2）純化菌種時(shí)，為了得到單菌落，常采用的接種方法有兩種，即

和

。（3）為了篩選出高效菌株，可比較單菌落周圍分解圈的大小，分解圈大說明該菌株的降解能力

。（4）通常情況下，在微生物培養(yǎng)過程中實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法有灼燒滅菌、

和

。無菌技術(shù)要求試驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈

附近進(jìn)行，以避免周圍環(huán)境中微生物的污染12.恒化器是微生物連續(xù)培養(yǎng)時(shí)使用的大型容器，容器中一部分舊的培養(yǎng)基以一定的速度流出，同時(shí)不斷有等量的新鮮培養(yǎng)基流入以保證微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的需要。研究人員將大腸桿菌JA122菌株接種到葡萄糖含量受到限制的培養(yǎng)基中，在恒化器內(nèi)連續(xù)培養(yǎng)773代，然后取樣分析其中存在的新菌株。請回答下列問題：（1）用于連續(xù)培養(yǎng)JA122大腸桿菌的培養(yǎng)基屬于。培養(yǎng)基中除了含葡萄糖作為外，還應(yīng)該含有。（2）樣品中共發(fā)現(xiàn)CV101、CV103、CV116三種新菌株，產(chǎn)生新菌株的原因是由于JA122大腸桿菌發(fā)生了導(dǎo)致的，產(chǎn)生三種不同類型的新菌株說明。（3）下圖表示將CV101、CV103、CV116三種新菌株混合在一起培養(yǎng)的生長情況，三者之間互為關(guān)系，并保持穩(wěn)定生長水平，沒有出現(xiàn)一個(gè)菌株生存而另外兩種菌株滅絕的現(xiàn)象，說明它們已經(jīng)具有了不同的適應(yīng)能力，這是的結(jié)果。（4）對三種菌株的代謝差異進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，CV103對葡萄糖吸收率最高，代謝終產(chǎn)物是醋酸鹽。進(jìn)一步研究表明，CV101可以在過濾的培養(yǎng)過CV103的培養(yǎng)基中生長，反過來CV103不能在過濾的培養(yǎng)過CV101的培養(yǎng)基中生長，據(jù)此作出的推測是：。請?jiān)O(shè)計(jì)并完成下列實(shí)驗(yàn)步驟，來驗(yàn)證你的觀點(diǎn)。①配制的培養(yǎng)基；②將CV101和CV103菌株分別接種到新配制的培養(yǎng)基中培養(yǎng)一段時(shí)間，并觀察記錄菌株的生長情況。③預(yù)期實(shí)驗(yàn)結(jié)果：三、反饋拓展四、反饋拓展：?！敬鸢浮浚?）稀釋涂布平板法滅菌（防止雜菌污染）（2）碳源氮源（3）時(shí)間水浴濾去不溶物（4）（實(shí)驗(yàn)）對照2、將接種后的培養(yǎng)基和一個(gè)未接種的培養(yǎng)基都放入37℃A．對比觀察培養(yǎng)基有沒有被微生物利用B．對比分析培養(yǎng)基是否被雜菌污染C．沒必要放入未接種的培養(yǎng)基D．為了下次接種時(shí)再使用例2海洋上的石油泄漏會對海洋造成污染。自然環(huán)境中假單孢桿菌能夠分解石油，請回答下列問題：（1）假單孢桿菌同化作用類型是，屬于生態(tài)系統(tǒng)成分的。欲從自然環(huán)境中分離提純假單孢桿菌，除了基礎(chǔ)營養(yǎng)外，可在培養(yǎng)基中必須加入石油，制成培養(yǎng)基。（2）下面是某實(shí)驗(yàn)小組做的假單孢桿菌分離和計(jì)數(shù)的實(shí)驗(yàn)方案及結(jié)果，其中有4處明顯錯(cuò)誤,請指出并改正。a．將溶化后的培養(yǎng)基倒平板備用。b．將接種環(huán)放在酒精燈的火焰上灼燒后立即沾取一環(huán)菌液，然后，將培養(yǎng)皿皿蓋輕輕放在桌面上，手拿培養(yǎng)皿，在火焰旁劃平行線，蓋上皿蓋。c．將接種過的培養(yǎng)皿倒置放入恒溫箱內(nèi)，在適應(yīng)條件下培養(yǎng)一段時(shí)間并觀察結(jié)果。d．統(tǒng)計(jì)出三個(gè)培養(yǎng)皿中菌落的數(shù)目分別為21、212和256，以這三個(gè)平板上菌落的平均值163作為統(tǒng)計(jì)結(jié)果。①②③④