銀杏黃酮提取

.銀杏葉概述銀杏（GinkgobilobaL.）又名白果，或鴨腳、公孫樹(shù)，為銀杏科、銀杏屬落葉喬木，是現(xiàn)存種子植物中最古老的孑遺植物，有植物界“活化石”之稱(chēng)。銀杏是我國(guó)的特產(chǎn)植物，占世界總量的70%以上，它的葉和果都有較高的藥用價(jià)值。銀杏葉中藥成分主要包括：銀杏黃酮（Flavonoids）、萜內(nèi)酯、聚異戊烯醇、有機(jī)酸、銀杏酸等，其中銀杏黃酮和萜內(nèi)酯含量較大，其效用也被廣為認(rèn)可。另外銀杏葉還含有39種營(yíng)養(yǎng)及功能成分，這其中包括：蛋白質(zhì)、糖、維生素C、維生素E、胡蘿卜素、18種氨基酸、25種礦質(zhì)營(yíng)養(yǎng)微量元素，其中鈣、磷、硼、硒含量較高，其他如人體所需的鐵、氟、銅、錳、鋅、鉻等含量也較豐富，其中維生素C、維生素E、胡蘿卜素、硒、鋅、銅等作為營(yíng)養(yǎng)性抗氧化劑與非營(yíng)養(yǎng)性抗氧化劑-銀杏黃酮、萜內(nèi)酯、兒茶素、多酚類(lèi)等對(duì)保護(hù)機(jī)體不受自由基所致的氧化和損傷發(fā)揮著重要的作用[1]。表1.1銀杏中的主要化學(xué)成分[2]組成物質(zhì)分子式存在部位白果酸（ginkgoicacid）C22H34O3外種皮、果肉氫化白果酸(hydroginkgoicacid)C22H36O3外種皮、果肉氫化白果亞酸(hydroginkolinicacid)C21H34O3外種皮、果肉白果酚(ginkgol)C21H34O外種皮、果肉銀杏酚酚(bilobol)外種皮、果肉白果醇(ginnolo)C29H60O外種皮白果二酚C21H31O2外種皮銀杏內(nèi)酯A(ginkgolideA)葉、根皮銀杏內(nèi)酯B(ginkgolideB)葉、根皮銀杏內(nèi)酯C(ginkgolideC)葉、根皮銀杏內(nèi)酯D(ginkgolideD)葉、根皮白果葉素C32H22O10葉莽草酸C7H10O5葉白果內(nèi)酯(bilobalide)葉黃酮類(lèi)化合物(flavonoides)葉、種皮原兒茶酸(protocatechuicacid)種皮兒茶酚(pyrocatechol)種皮胡蘿卜苷(duacosterol)種皮芝麻素C22H18O6莖白果酮C15H20O2莖現(xiàn)存最早文獻(xiàn)《本草品匯精要》(明.劉文泰)記載，5000年前我國(guó)用銀杏葉作藥，用于肺虛咳喘、胸悶心痛等癥。隨著科學(xué)進(jìn)步，對(duì)銀杏葉制劑的現(xiàn)代藥理學(xué)較深入研究，以及臨床應(yīng)用已表明，銀杏葉制劑具有擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、增加腦血流、改善微循環(huán)、抗血小板聚集、降血黏度、降血脂、降血壓等功效。所以，它能防治冠心病、高血脂癥、高血壓病、腦出血、腦動(dòng)脈硬化、腦栓塞、腦中風(fēng)和老年性癡呆癥等心腦血管疾病，還能促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)、保護(hù)皮膚。因此，銀杏葉制劑已成為世界許多國(guó)家研究開(kāi)發(fā)的熱門(mén)藥物[3]。隨著研究工作的深入，提取有效成分的工藝也不斷更新，總的趨勢(shì)是朝著提高有效成分收率，減少有害成分和雜質(zhì)在藥物中的殘留，減少環(huán)境污染等方向發(fā)展。1.1黃酮類(lèi)化合物及應(yīng)用1.1.1黃酮類(lèi)化合物黃酮類(lèi)化合物屬于酚類(lèi)化合物。在銀杏葉中黃酮類(lèi)化合物含量較高。迄今為止，從銀杏葉中已經(jīng)分離出約30多種黃酮類(lèi)化合物，已經(jīng)明確結(jié)構(gòu)的有20多種，根據(jù)其化學(xué)結(jié)構(gòu)可分為3類(lèi)：?jiǎn)吸S酮類(lèi)、雙黃酮類(lèi)、兒茶素類(lèi)。單黃酮苷類(lèi)的苷元主要有山奈黃素(Keampferrol)、槲皮素(quercetin)、異鼠李黃素(isorhamnetin)、黃色黃素(luteolin)等。山奈黃素和槲皮素相應(yīng)的苷類(lèi)即在C3-OH上與1或2個(gè)糖形成苷，常見(jiàn)的糖有葡萄糖、鼠李糖或葡萄糖與鼠李糖組成的雙糖。槲皮素不溶于水，溶于沸乙醇(1:23ml)，在無(wú)水乙醇中衛(wèi)1：290ml的溶解度。槲皮素的C3-OH與云香糖形成苷稱(chēng)為蘆丁(rutin)，由于在分子中引入強(qiáng)親水基，則溶解度提高。水(1:8L)、沸水(1:200ml)、沸甲醇(1:7ml)、微溶于乙醇。由于山奈黃素、黃色黃素、異鼠李黃素等苷元衍生的各類(lèi)苷的溶解度變化和槲皮素相似，因此，黃酮苷類(lèi)的提取以選用熱水或熱的甲醇、乙醇或其水溶液作為提取劑居多【4】。圖1.2黃酮類(lèi)化合物雙黃酮類(lèi)化合物有六種：銀杏黃素(ginkgetin)、異銀杏黃素(isoginkgetin)、白果黃素(pliobetin)、阿曼托黃素(amentolflavone)、西阿多黃素和5’-甲氧基白果黃素。兒茶素根據(jù)母核2位碳原子旋光度不同及5’位是否含有羥基分為4種：兒茶素、表兒茶素、沒(méi)食子酸兒茶素和表沒(méi)食子酸兒茶素。1.1.2應(yīng)用銀杏葉黃酮類(lèi)化合物能促進(jìn)大腦循環(huán)代謝，改善記憶功能，增加腦缺血時(shí)組織ATP和磷酸肌酸的含量，降低乳酸含量，對(duì)腦缺血具有明顯保護(hù)作用；能促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)，減少脫發(fā)，因此可應(yīng)用于護(hù)發(fā)劑中，能存進(jìn)體表毛細(xì)血管的血液循環(huán)，清除皮膚表面的過(guò)氧化物和自由基，所以提取物添加到護(hù)膚化妝品中能滋潤(rùn)皮膚，減少黑色素的形成，延緩皮膚的衰老過(guò)程；具有抗菌消炎、抑制致癌啟動(dòng)因子(TPA)及治療過(guò)敏癥和老年癡呆病等作用[5]。黃酮類(lèi)化合物對(duì)治療冠心病、心絞痛、高血壓和支氣管哮喘等有顯著效果，能夠調(diào)節(jié)生理功能，延緩衰老，增強(qiáng)免疫力[6]，防治由于血管老化和腦血管供血不足所致的疾病。銀杏黃酮有強(qiáng)烈的清除細(xì)胞內(nèi)自由基的作用，能降低細(xì)胞的氧化代謝,對(duì)腦和四肢動(dòng)脈血流失調(diào)引起的一系列心腦血管疾病有明顯和獨(dú)特的療效[7-11]。銀杏葉黃酮類(lèi)化合物除用于醫(yī)藥和化妝品上外，今年來(lái)又?jǐn)U展到食品、飲料和防治農(nóng)作物病蟲(chóng)害等方面。黃酮類(lèi)化合物在食品工業(yè)上有著廣泛的應(yīng)用，可作為天然著色劑、抗氧化劑和功能性食品的原料。1.2萜內(nèi)酯及應(yīng)用1.2.1萜內(nèi)酯類(lèi)化合物萜內(nèi)酯類(lèi)化合物是銀杏葉中獨(dú)有的具有特殊分子結(jié)構(gòu)和顯著藥理活性的成分，包括二萜內(nèi)酯和倍半萜內(nèi)酯，其中二萜內(nèi)酯有5種，即銀杏內(nèi)酯(ginkgolide)A、B、C和M，倍半萜內(nèi)酯一種即白果內(nèi)酯(bilobalide，BB)。結(jié)構(gòu)式如下：圖1.1內(nèi)酯類(lèi)化合物的結(jié)構(gòu)式1.2.2應(yīng)用銀杏萜內(nèi)酯A、B、C、J和M，是血小板活化因子的拮抗劑，能有效地抗血栓形成，對(duì)防治血管栓賽療效顯著，已用于臨床。在已知血小板活化因子對(duì)抗劑中，銀杏萜內(nèi)酯B對(duì)新陳代謝有較全面的調(diào)理作用，收到當(dāng)今藥學(xué)家的關(guān)注，導(dǎo)致半合成及這類(lèi)化合物細(xì)胞組織培養(yǎng)的研究。白果內(nèi)酯對(duì)神經(jīng)疾病(精神病、腦病、脊髓等)具有治療作用，它能確保神經(jīng)元和軸突完整無(wú)缺[12]。2.銀杏葉黃酮提取方法黃酮類(lèi)化合物多具有游離額酚羥基，一般易溶于極性較大的有機(jī)溶劑和堿性溶液中。黃酮類(lèi)化合物多以黃酮苷的形式存在，少數(shù)以黃酮苷元的形式存在。黃酮苷易溶于水、無(wú)水乙醇、甲醇和乙酸乙酯等，不溶于非極性有機(jī)溶劑。由于結(jié)構(gòu)上具有酚羥基，在稀堿液中能增加其溶解度。但提取此類(lèi)化合物時(shí)，除了考慮溶解度外，還需考慮其結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性、羥基存在部位及后處理工藝、設(shè)計(jì)合理的提取方法。目前，銀杏葉黃酮類(lèi)化合物的提取方法主要有：有機(jī)溶劑法、微波法、超臨界流體萃取法、超聲波法、吸附樹(shù)脂法等。2.1溶劑法溶劑法即通過(guò)有機(jī)溶劑(乙醇、丙酮、甲醇等)浸泡葉子，濃縮水析，離心過(guò)濾，得到銀杏浸膏，產(chǎn)率為12~15%，黃酮含量為2.10~5.10%；再用液-液萃取法，得率約0.17~1.10%，黃酮含量15~18%。溶劑提取法是目前國(guó)內(nèi)外應(yīng)用最廣泛的銀杏黃酮的提取方法之一。常用的溶劑主要有：甲醇、乙醇、丙酮、石油醚等。由于甲醇、丙酮等毒性強(qiáng)、揮發(fā)性較高，因此一般采用乙醇作為萃取劑比較適宜。乙醇作為萃取劑具有選擇性好、產(chǎn)品得率高等優(yōu)點(diǎn)，但是采用乙醇生產(chǎn)的較高成本使其應(yīng)用受到一定的限制。王曉等[13]采用乙醇為溶劑，用正交實(shí)驗(yàn)法確定制備銀杏葉提取物的最佳工藝條件：乙醇體積濃度60錒，回流溫度80℃，提取時(shí)間3h。張濟(jì)龍[14]等對(duì)幾種銀杏葉黃酮提取溶劑研究結(jié)果表明，NaOH-水溶液提取效果最好，NaOH-乙醇溶液次之。在0.25%NaOH-乙醇溶液中，銀杏葉黃酮的最大提取率比用乙醇提取提高28.4%，提取時(shí)間縮短0.5h；在0.1%NaOH-水溶液中，銀杏葉黃酮的最大提取率提高46.5%，提取時(shí)間縮短1h。2.2微波法微波法利用不同組分吸收微波能力的不同，選擇加熱一些成分，使之從體系中分離進(jìn)入萃取劑。近年來(lái)，微波因促進(jìn)反應(yīng)的高效性和強(qiáng)選擇性及其操作簡(jiǎn)便，副產(chǎn)物少，產(chǎn)率高及產(chǎn)物易提純等優(yōu)點(diǎn)，已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于生化蛋白質(zhì)水解和有機(jī)合成、酯化等反應(yīng)，科研人員已將微波應(yīng)用于天然產(chǎn)物的浸提過(guò)程，有效地提高了效率。陳金娥等[15]，利用單因素試驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)確定了微波法提取銀杏葉黃酮的最佳條件：溫度55℃，功率800W，液固質(zhì)量比70：1，時(shí)間6min，提取率可達(dá)3.578%。實(shí)驗(yàn)表明，提取率比傳統(tǒng)的溶劑法提高，提取速度也顯著提高，所需時(shí)間大幅度縮短，且溶劑較后者損耗少得多。因此，微波法較傳統(tǒng)索氏提取等優(yōu)勢(shì)顯著。微波能快速促進(jìn)銀杏葉細(xì)胞中有效活性成分的溶出，可能是交頻磁場(chǎng)、電場(chǎng)作用下，極性分子取向隨電場(chǎng)方向改變而變化，從而導(dǎo)致分子旋轉(zhuǎn)、振動(dòng)或擺動(dòng)，加劇反應(yīng)物分子運(yùn)動(dòng)及相線間碰撞頻繁率，使分子在極短時(shí)間內(nèi)達(dá)到活化狀態(tài)，比傳統(tǒng)加熱方式均勻、高效；且分子的劇烈運(yùn)動(dòng)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)的破壞，使黃酮分子從細(xì)胞里擴(kuò)散到細(xì)胞外的溶劑中，阻滯擴(kuò)散過(guò)程不存在了，只有黃酮分子的自由擴(kuò)散過(guò)程，擴(kuò)散阻力減少很多，所以微波提取的效率比傳統(tǒng)提取高得多，有效強(qiáng)化擴(kuò)散過(guò)程[16]。微波應(yīng)用于提取，特點(diǎn)是：快速升溫，省時(shí)，提高效率；加熱過(guò)程不需對(duì)介質(zhì)加熱而直接加熱物料，能耗低[17]。與超臨界CO2萃取相比，微波萃取設(shè)備簡(jiǎn)單價(jià)廉，操作簡(jiǎn)便，適用面大更利于普及。微波法的局限在于不適合熱不穩(wěn)定成分的提取，而銀杏黃酮是熱穩(wěn)定的，理論上適用。2.3超聲波法植物藥材的有效成分多存在于細(xì)胞內(nèi)，結(jié)構(gòu)致密的細(xì)胞壁無(wú)疑是阻礙提取的重要屏障。超聲波提取利用超聲產(chǎn)生的強(qiáng)烈振動(dòng)，形成空化效應(yīng)，破壞植物藥材的細(xì)胞壁，從而促進(jìn)溶媒進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，加速有效成分溶解到溶媒中，超聲波提取可縮短提取時(shí)間，提高有效成分的提取率，減少溶劑用量，不需高溫條件，避免了對(duì)熱不穩(wěn)定成分的破壞，可與其他提取技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用。王延峰等[18]研究了銀杏葉黃酮的超聲提取法，并于連續(xù)熱回流中的索氏提取作了比較研究，得出了超聲提取法優(yōu)于索氏提取法的提取的結(jié)論。2.4酶解法藥材的有效成分多存在于細(xì)胞內(nèi)，結(jié)構(gòu)致密的細(xì)胞壁有纖維素等物質(zhì)構(gòu)成，則提取過(guò)程中需克服細(xì)胞壁產(chǎn)生的阻力。因此可采用酶解法破壞細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，減少傳質(zhì)阻力，酶解法即是在提取中利用酶催化的專(zhuān)一、高效且較溫和地分解植物組織的一種新方法，利用酶解加強(qiáng)提取的傳質(zhì)過(guò)程是酶解法的實(shí)質(zhì)。王敏等[19]利用纖維素酶輔助提取銀杏葉黃酮類(lèi)化合物的提取，實(shí)驗(yàn)表明，此方法提出的黃酮含量高于EGB761的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，提取率在傳統(tǒng)的醇提法的基礎(chǔ)上提高近三分之一。2.5吸附樹(shù)脂法以上幾種提取方法得到的一般是銀杏黃酮的粗提物，黃酮含量不高，還需進(jìn)一步精制以提高銀杏黃酮、萜內(nèi)酯的含量，降低銀杏酚酸類(lèi)物質(zhì)的量。吸附樹(shù)脂法是最常用的提純方法之一，用樹(shù)脂吸附時(shí)，效果主要取決于樹(shù)脂的吸附性能，吸附作用的本質(zhì)是吸附劑與吸附物質(zhì)分子間的范德華力，采用的樹(shù)脂主要有聚酰胺吸附樹(shù)脂、聚苯乙烯樹(shù)脂、硅膠、大孔樹(shù)脂以及硅藻土等。欽富華等[20]探討大孔吸附樹(shù)脂同時(shí)純化銀杏葉黃酮苷和萜類(lèi)內(nèi)酯的工藝，實(shí)驗(yàn)表明，采用D101型大孔樹(shù)脂分離純化效果最佳，工藝條件為：上樣液生藥質(zhì)量與樹(shù)脂比為1：1，20%(體積分?jǐn)?shù))乙醇濃度作為除雜溶劑，洗脫體積為5BV，60%(體積分?jǐn)?shù))乙醇溶液作為洗脫液，洗脫體積為4BV.純化物中黃酮苷和萜類(lèi)內(nèi)酯平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為24.93%和7.36%。Zhang等[21]使用聚酰胺吸附樹(shù)脂，優(yōu)化分離操作工藝，將銀杏提取物中總黃酮含量從24.0%提純至55.0%。2.6超臨界流體萃取技術(shù)超臨界流體萃取技術(shù)是一種環(huán)境友好的新興技術(shù)，應(yīng)用最普遍的萃取劑是CO2.超臨界流體是溫度及壓力均處于臨界點(diǎn)以上的流體(如圖2.1)，具有很強(qiáng)的溶解低揮發(fā)性物質(zhì)的能力。在超臨界條件下，流體的很多性質(zhì)都處于氣體和液體之間(黏度和擴(kuò)散系數(shù)與氣體相近，密度與液體相近)，此時(shí)溶解性能和傳質(zhì)能力良好。圖2.1純物質(zhì)經(jīng)典相圖超臨界萃取過(guò)程分萃取和分離兩個(gè)過(guò)程。萃取階段即改變條件(溫度和壓力)來(lái)改變?nèi)芙舛?，溶出目?biāo)成分，進(jìn)行萃??；分離階段即改變條件使CO2以氣態(tài)形式揮發(fā)與組分分離，萃取劑無(wú)殘留，且可循環(huán)使用，節(jié)約而環(huán)保。張玉祥等利用超臨界CO2萃取技術(shù)提取銀杏葉有效成分，所得GEB高于銀杏葉標(biāo)準(zhǔn)提取物的國(guó)際質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，黃酮含量可高達(dá)27%。超臨界CO2萃取技術(shù)省時(shí)、節(jié)能，同時(shí)適用于對(duì)于熱不穩(wěn)定和易氧化物質(zhì)的提取。但該技術(shù)的局限性在于設(shè)備投資費(fèi)用高，且為高壓設(shè)備存在安全等問(wèn)題，在工業(yè)上難于廣泛推廣。3.黃酮類(lèi)化合物的測(cè)定3.1含量測(cè)定方法目前，國(guó)內(nèi)外沒(méi)有有關(guān)銀杏葉黃酮類(lèi)化合物的測(cè)定公開(kāi)普遍的控制質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，常用的方法有：分光光度法、高效液相色譜法(HPLC)、毛細(xì)管電泳法(CE)和超臨界流體色譜法(SFC)等。3.1.1分光光度法國(guó)內(nèi)使用較多的是分光光度法，黃酮類(lèi)化合物與Al(NO3)3在堿性條件下絡(luò)合產(chǎn)生有色反應(yīng)，其機(jī)制是黃酮類(lèi)物質(zhì)在堿性條件下骨架的1，2號(hào)碳氧鍵打開(kāi)成查耳酮而顯色，蘆丁溶液為標(biāo)準(zhǔn)溶液，于510nm處測(cè)其吸光度。該方法簡(jiǎn)單易學(xué)，但若樣品未純化，含有雜質(zhì)，測(cè)定值略高于實(shí)際黃酮含量。在測(cè)定提取液中黃酮含量時(shí)可將顯色后的溶液先離心或過(guò)濾，除去絮凝物，再測(cè)定吸光值，這樣可改善分析結(jié)果。3.1.2高效液相色譜法(HPLC)HPLC是測(cè)定銀杏葉及制劑中黃酮類(lèi)化合物的有效方法，黃酮類(lèi)化合物是重要的天然產(chǎn)物，是HPLC最早分析的樣品之一，Hasler[C3-4]在1990年用HPLC方法定量地測(cè)定了銀杏葉中的黃酮含量并建立了模糊表征銀杏中33種黃酮的指紋圖譜。HPLC既可以直接分析黃酮苷的含量，也可以水解分析苷元的含量，再通過(guò)轉(zhuǎn)化系數(shù)求得黃酮總含量。3.1.3毛細(xì)管電泳法(CE)毛細(xì)管電泳(CE)是一類(lèi)以毛細(xì)管為分離通道、高壓電流電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力的新型液相分離技術(shù)，其原理是在緩沖體系中引入表面活性劑，利用溶質(zhì)在水相和膠束相中的分配差異進(jìn)行分離，具有高效、快速、用樣量少、重現(xiàn)性好、不易污染等優(yōu)點(diǎn)。YuhuaCao等[22]建立了快速、高效、高靈敏度、相對(duì)簡(jiǎn)單的毛細(xì)管電泳-電極法測(cè)定銀杏黃酮的方法，通過(guò)記錄圖形完成電色層分析,在最佳條件下分離并鑒定了表兒茶素、兒茶素、蘆丁、芹黃素、木犀草素、棚皮黃酮6種銀杏葉黃酮類(lèi)化合物。3.2抗氧化性能測(cè)定方法3.1.1黃酮類(lèi)化合物的抗氧化性黃酮類(lèi)化合物是天然的強(qiáng)抗氧化劑[23],主要表現(xiàn)在以下3個(gè)方面：一是清除自由基和活性氧[24]。黃酮具有很強(qiáng)的供氫能力，在體外具有清除自由基如羥基、超氧陰離子和過(guò)氧化氫自由基等功能；二是螯合金屬離子[25]。黃酮可以和金屬離子如銅離子等結(jié)合，催化脂質(zhì)過(guò)氧化物的分解反應(yīng)，引起自由基的減少。三是保護(hù)和還原體內(nèi)的抗氧化劑[26]。銀杏黃酮是使體內(nèi)的抗氧化劑如VE、VC重新恢復(fù)活性，起到抗氧化的作用。3.1.2抗氧化性的測(cè)定方法抗氧化劑的活性的測(cè)定方法有很多，蘇俊鋒等指出測(cè)定抗氧化劑活性有三要素：基質(zhì)體系、方式添加和測(cè)定方法種類(lèi)，改變其中任一要素都會(huì)引起結(jié)果的不同。因此，用一種測(cè)定方法準(zhǔn)確測(cè)定抗氧化劑活性是不可能的，需要多種體系多種方法的考察才能全面客觀的反映抗氧化劑的活性。黃酮類(lèi)化合物主要通過(guò)清除自由基來(lái)實(shí)現(xiàn)抗氧化作用的，不僅能清除自由基，而且可以直接捕獲自由基反應(yīng)鏈中的自由基，阻斷自由基鏈反應(yīng)，起到預(yù)防和斷鏈的雙重作用。黃酮類(lèi)化合物的抗氧化性測(cè)定方法主要有：DPPH自由基清除實(shí)驗(yàn)、羥自由基清除能力實(shí)驗(yàn)、還原力測(cè)定實(shí)驗(yàn)、H2O2清除能力測(cè)定實(shí)驗(yàn)、對(duì)抑制鼠腦組織勻漿中脂質(zhì)氧化的效果實(shí)驗(yàn)、對(duì)大豆油脂過(guò)氧化值的影響實(shí)驗(yàn)。4.本論文的意義及思路4.1意義銀杏是我國(guó)的特產(chǎn)植物，占世界總量的70%以上，它的葉和果都有較高的藥用價(jià)值。黃酮類(lèi)化合物為銀杏葉的主要有效成分，具有抗氧化、抗癌、降血糖、防治心腦血管疾病及抗炎、鎮(zhèn)痛等作用，可以應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、化妝品及農(nóng)林病蟲(chóng)害防治上。我國(guó)雖是世界銀杏的最大產(chǎn)地，但國(guó)內(nèi)黃酮類(lèi)化合物開(kāi)發(fā)利用技術(shù)較國(guó)外落后，且黃酮類(lèi)化合物在植物中的含量不高，提純工藝復(fù)雜得率不高，純度低，投資大，限制了其在實(shí)際中的應(yīng)用。綜上所述，研究銀杏黃酮的提取分離技術(shù)，研發(fā)出快速、有效、低耗的提取提取分離方法，朝著提高有效成分收率，減少有害成分和雜質(zhì)在藥物中的殘留，減少環(huán)境污染等方向發(fā)展，明確銀杏黃酮的有效活性形式，制備高質(zhì)量的銀杏黃酮提取物對(duì)提高我國(guó)銀杏產(chǎn)品的國(guó)際競(jìng)爭(zhēng)力，加快開(kāi)發(fā)利用銀杏資源具有重要的意義。4.2思路本論文主要內(nèi)容有兩大部分，一是銀杏黃酮的提取分離方法研究，二是銀杏黃酮的表征。關(guān)于銀杏黃酮類(lèi)化合物的提取分離方法研究，目前國(guó)內(nèi)大多采用醇提法，但醇提法的局限在于用時(shí)長(zhǎng)、溶劑耗損大且雜質(zhì)難以控制，所以應(yīng)該對(duì)此改善，結(jié)合其他方法。近年來(lái)，研究出了很多銀杏葉黃酮的提取新技術(shù)，比如：超臨界流體萃取技術(shù)、超聲法、微波法、酶解法等。超臨界流體萃取技術(shù)是環(huán)境友好的新興技術(shù)，萃取劑無(wú)殘留，且可循環(huán)使用，但其設(shè)備要求高，費(fèi)用高，難以在工業(yè)中推廣，所以本論文不采用該方法。本論文擬采用纖維素酶輔助微波提取工藝，采用單因素實(shí)驗(yàn)方法確定最佳工藝條件，考慮影響因素主要有纖維素酶的濃度、酶解時(shí)間、酶解溫度及酶解酸堿度、微波時(shí)間、料液比、乙醇濃度等，用石油醚萃取除去葉綠素及脂質(zhì)，再旋蒸濃縮干燥，采用分光光度法測(cè)定其濃度，得出得率及含量，確定其最佳工藝條件。黃酮類(lèi)化合物的表征：對(duì)實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品進(jìn)行紅外、紫外-可見(jiàn)、高效液相色譜法進(jìn)行表征，且對(duì)實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品進(jìn)行抗氧化性能測(cè)定。參考文獻(xiàn)[1]張迪清，何照范.銀杏葉資源化學(xué)研究[M].北京:中國(guó)輕工業(yè)出版社，2000.191.[2]董雯雯.銀杏葉黃酮類(lèi)化合物的提取與分離技術(shù)的研究[D].山東科技大學(xué)，2008.[3]安鑫南.林產(chǎn)化學(xué)工藝學(xué)[M]北京：中國(guó)林業(yè)出版社，2002.355.[4]吳忠萌.林產(chǎn)精細(xì)化學(xué)品工藝學(xué)[M]北京：中國(guó)林業(yè)出版社，2002.303.[5]盧元芳，宮霞.銀杏葉黃酮類(lèi)化合物的提取和藥理作用[J].曲阜師范大學(xué)學(xué)報(bào)，1999,25(3):95-96.[6]高晗，孫俊良，孔瑾等.銀杏葉中黃酮類(lèi)化合物的最佳提取工藝研究[J].食品研究與開(kāi)發(fā)，2005，2(1)：82-84.[7]周維書(shū)，黃振安，鄭愛(ài)云編著.銀杏葉及其制劑[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，1995.22～45，73～75.[8]OyamaY,HayashiA,UehaT.Ca2+-inducedincreaseinoxidativemetabolismofdissociatedmammalianbrainneurosis:EffectofextractofGinkgobilobaleaves.JapanJPharmacol,1993,61(2):367～370.[9]OyamaY,FuchsPA,KatayamaN,etal.Myricetinandquercetin,theflavonoidconstituentsofGinkgobilobaextract,greatlyreduceoxidativemetabolisminbothrestingandCa2+--loadedbrainneurons.BrainResearch,1994,635(1):125～129.[10]RapinJR,YoaRG,BouvierC,etal.EffectsofrepeatedtreatmentswithanextractofGinkgobiloba(EGb761)andbilobalideonliverandmuscleglucogencontentsinthenon2insulin2dependantrat.DrugDevelopmentResearch,1997,40(1):68～74.[11]ImdronaiM,MarcocciL.PeroxylradicascavengingactivityofGinkgobilobaextractEGb761.BiochemicalPharmology,1995,49(11):1649～1655.[12]安鑫南.林產(chǎn)化學(xué)工藝學(xué)[M]北京：中國(guó)林業(yè)出版社，2002.357.[13]王曉，廖克儉，戴躍玲.銀杏葉有效成分提取工藝研究.東華理工學(xué)院學(xué)報(bào).2007,30(2):181-184.[14]張濟(jì)龍，張光先，張鳳秀等.銀杏葉黃酮提取溶劑研究.西南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào).1999，21(2):68-70.[15]陳金娥，匡強(qiáng)民，張海容.正交優(yōu)化-微波輔助提取提取銀杏葉黃