產(chǎn)前診斷中絨毛、臍血、羊水取樣及標(biāo)本培養(yǎng)課件

產(chǎn)前診斷中絨毛、臍血、羊水取樣及標(biāo)本培養(yǎng)南京大學(xué)附屬鼓樓醫(yī)院婦產(chǎn)科產(chǎn)前診斷中心李潔副主任醫(yī)生2006年11月產(chǎn)前診斷中絨毛、臍血、羊水取樣及標(biāo)本培養(yǎng)南京大學(xué)附屬鼓樓醫(yī)院產(chǎn)前診斷指征夫婦任一方有染色體異常；曾生育過染色體病患者；夫婦任一方為單基因病患者；曾生育過單基因病患者；有不明原因的自然流產(chǎn)史、畸胎史、死產(chǎn)或新生兒死亡史；產(chǎn)前診斷指征夫婦任一方有染色體異常；產(chǎn)前診斷指征羊水過多的孕婦；夫婦任一方曾接觸致畸因素；孕婦年齡大于35歲；有遺傳病家族史的近親婚配的夫婦。產(chǎn)前篩查高風(fēng)險(xiǎn)的孕婦超聲胎兒結(jié)構(gòu)篩查胎兒有結(jié)構(gòu)異常的孕婦產(chǎn)前診斷指征羊水過多的孕婦；產(chǎn)前診斷的方法羊膜腔穿刺取樣（amniocentesis）絨毛穿刺取樣（chorionvillussampling,cvs）臍帶血取樣（periumbilicalcordbloodsampling,PUBS）植入前診斷（preimplantatongeneticdiagnosis,PGD）產(chǎn)前診斷的方法羊膜腔穿刺取樣（amniocentesis）產(chǎn)前診斷的方法胎兒組織取樣（皮膚、肝臟）胎兒鏡（fetoscope）胚胎鏡（embryoscope）胎兒超聲波圖象（fetalultrasoundimaging）母體外周血胎兒細(xì)胞檢測（cell-storing）產(chǎn)前診斷的方法胎兒組織取樣（皮膚、肝臟）絨毛穿刺取樣—?dú)v史1975年我國鞍山鋼鐵公司鐵東醫(yī)院首次問世（經(jīng)宮頸盲吸法，準(zhǔn)確率95%，自然流產(chǎn)率9.3%，出生嬰兒未發(fā)現(xiàn)異常）莫斯科產(chǎn)科研究所（超聲引導(dǎo)下經(jīng)宮頸吸樣）1983您Ward和Brambati分別于英國和意大利發(fā)表文章介紹絨毛取樣及核型分析絨毛穿刺取樣—?dú)v史1975年我國鞍山鋼鐵公司鐵東醫(yī)院首次問絨毛穿刺取樣—時(shí)間妊娠9—11周絨毛穿刺取樣—時(shí)間妊娠9—11周絨毛穿刺取樣—抽取量20mg左右（染色體核型分析約需10mg，DNA分析約需5mg，生化測定約需5-10mg）絨毛穿刺取樣—抽取量20mg左右（染色體核型分析約需10m絨毛穿刺取樣—并發(fā)癥胎兒丟失胎兒肢體發(fā)育缺陷（LRD）絨毛穿刺取樣—并發(fā)癥胎兒丟失CVS并發(fā)癥—胎兒丟失CVS的流產(chǎn)率不比amniocentesis高經(jīng)宮頸和經(jīng)腹取樣安全性相同（Jackson,1992）多胎取樣高于單胎取樣（Pergament,1992）CVS并發(fā)癥—胎兒丟失CVS的流產(chǎn)率不比amniocenteCVS并發(fā)癥－LRD1999年WHO發(fā)布CVS綜合性資料認(rèn)為CVS與LRD無關(guān)（216，381例CVS中115例出現(xiàn)LRD發(fā)生率1：1881，總的人群發(fā)生率1：1642）世界各地相關(guān)資料綜合，9周以下CVS出現(xiàn)LRD的機(jī)會高，但原因尚不清楚CVS不應(yīng)在小于孕10周的條件下進(jìn)行CVS并發(fā)癥－LRD1999年WHO發(fā)布CVS綜合性資料認(rèn)為絨毛穿刺取樣—方法經(jīng)宮頸（transcervical）經(jīng)腹（transabdorminal）絨毛穿刺取樣—方法經(jīng)宮頸（transcervical）CVS方法—經(jīng)宮頸取樣B超采用高分辨的扇掃式或凸陣式實(shí)時(shí)超聲診斷儀，經(jīng)腹探頭頻率3.5MHz,經(jīng)陰道探頭頻率5-7MHz。采用特制較細(xì)的滋養(yǎng)層活檢導(dǎo)管（多聚乙烯導(dǎo)管），其塑料導(dǎo)管外徑1.4–1.6mm,長20cm,帶有導(dǎo)管芯，導(dǎo)管前端稍彎，外形似宮腔探子。導(dǎo)管另一端連接10-20ml含有2-4ml生理鹽水的注射器CVS方法—經(jīng)宮頸取樣B超采用高分辨的扇掃式或凸陣式實(shí)時(shí)超聲CVS方法—經(jīng)腹取樣雙針活檢系統(tǒng)由1根長15cm、外徑1.2mm的18號引導(dǎo)套針，及1根長20cm、外徑0.8mm的22號活檢針組成。在超聲引導(dǎo)下，先將引導(dǎo)套針經(jīng)腹壁及子宮穿刺入胎盤絨毛邊緣部分，拔出針芯，然后將活檢針經(jīng)引導(dǎo)套針內(nèi)送入胎盤絨毛組織,連接含2-4ml生理鹽水的20ml注射器，以5ml的負(fù)壓上下移動活檢針吸取絨毛組織CVS方法—經(jīng)腹取樣雙針活檢系統(tǒng)由1根長15cm、外徑1.2CVS注意事項(xiàng)動作要輕柔穿刺部位在胎盤絨毛葉抽吸次數(shù)不宜過多CVS注意事項(xiàng)動作要輕柔羊膜腔穿刺—?dú)v史1956年Fucks進(jìn)行羊膜腔穿刺行胎兒性別鑒定及胎兒Rh溶血診斷1966年Marksteele和RoyBreg從羊水中分離出羊水細(xì)胞培養(yǎng)成功并行胎兒核型分析羊膜腔穿刺—?dú)v史1956年Fucks進(jìn)行羊膜腔穿刺行胎兒性羊膜腔穿刺—時(shí)間16—20周羊膜腔穿刺—時(shí)間16—20周羊膜腔穿刺—抽取量20—30ml羊膜腔穿刺—抽取量20—30ml抽取的羊水用途核型分析——診斷染色體病DNA分析——診斷單基因病生化測定——診斷NTD、代謝性疾病抽取的羊水用途核型分析——診斷染色體病羊水穿刺穿刺前孕婦俯臥位搖動腹部超聲波定位引導(dǎo)采用22號或21號帶芯長腰穿刺針頭垂直、快速進(jìn)針抽取羊水2ml棄置，換空針抽取羊水羊水穿刺羊膜腔穿刺—并發(fā)癥胎兒丟失羊膜腔感染羊水滲漏穿刺部位的出血、血腫羊膜腔穿刺—并發(fā)癥胎兒丟失羊穿并發(fā)癥---胎兒丟失1976年，NihdRegistry報(bào)道流產(chǎn)率3.5%1986年，Taboretal報(bào)道流產(chǎn)率1.7%1995年，Bombardetal報(bào)道流產(chǎn)率1.3%2000年,Antsaklis報(bào)道流產(chǎn)率2.1%羊穿并發(fā)癥---胎兒丟失1976年，NihdRegistr臍帶血穿刺—?dú)v史1972年，Valenti用兒科膀胱鏡在中期妊娠孕婦行子宮切開術(shù)插入羊膜腔，獲取臍血標(biāo)本。1979年，Rodeck和Campell應(yīng)用胎兒鏡行臍帶血管穿刺，但由于并發(fā)癥高，應(yīng)用受到限制。1983年，TernandDaffos超聲引導(dǎo)下經(jīng)皮臍血管穿刺取血（Cordocentesis）臍帶血穿刺—?dú)v史1972年，Valenti用兒科膀胱鏡在中期臍帶血穿刺—時(shí)間16周—分娩（最佳24—28周）臍帶血穿刺—時(shí)間16周—分娩（最佳24—28周）臍帶血穿刺—取血量3—5ml20周后抽取6—8ml對胎兒循環(huán)無不良影響臍帶血穿刺—取血量3—5ml臍帶血穿刺—適應(yīng)癥胎兒核型分析或基因檢測（胎兒畸形、嚴(yán)重的FGR、羊水或絨毛細(xì)胞培養(yǎng)失敗、羊水或絨毛培養(yǎng)結(jié)果為嵌合體、非免疫性胎兒水腫、脆性X綜合癥等）胎兒血液疾病分析（血型、血小板計(jì)數(shù)等）胎兒感染（弓形蟲、病毒感染等）胎兒情況評估（酸堿平衡、甲功等）遺傳性疾?。▎位虿?、凝血障礙、血紅蛋白病、代謝性疾病等）胎兒治療（宮內(nèi)輸血、宮內(nèi)藥物治療等）臍帶血穿刺—適應(yīng)癥胎兒核型分析或基因檢測（胎兒畸形、嚴(yán)重的F臍帶血穿刺—并發(fā)癥穿刺部位的出血臍帶血腫短暫性胎心減慢宮內(nèi)感染胎兒丟失（流產(chǎn)、早產(chǎn)）大多數(shù)并發(fā)癥為短暫性和非致命性臍帶血穿刺—并發(fā)癥穿刺部位的出血臍帶血穿刺并發(fā)癥—胎兒丟失Maxwell1991年報(bào)道胎兒超聲結(jié)構(gòu)篩查示正常超聲者臍穿的流產(chǎn)率為1%（1/76）；異常超聲者流產(chǎn)率為7%（5/76）；胎兒結(jié)構(gòu)明顯異常者流產(chǎn)率為25%（9/36）Antsaklis1998年報(bào)道胎兒超聲結(jié)構(gòu)篩查示正常超聲者臍穿的流產(chǎn)率1%（2/191）；異常超聲者流產(chǎn)率為13%（11/84）臍帶血穿刺并發(fā)癥—胎兒丟失Maxwell1991年報(bào)道胎兒臍帶穿刺部位臍帶穿刺部位臍血穿刺—確定胎兒血樣血紅蛋白電泳Kleihauer-Betke試驗(yàn)：胎兒紅細(xì)胞在酸中穩(wěn)定APT試驗(yàn)：NaOH中胎兒血為粉紅色有核紅細(xì)胞的出現(xiàn)臍血穿刺—確定胎兒血樣血紅蛋白電泳臍血穿刺—排除臍血中母血污染X染色體DMD基因內(nèi)部5對CA重復(fù)序列的連鎖分析臍血穿刺—排除臍血中母血污染X染色體DMD基因內(nèi)部5對CA重絨毛組織、羊水細(xì)胞、臍血細(xì)胞培養(yǎng)絨毛組織、羊水細(xì)胞、臍血細(xì)胞培養(yǎng)絨毛組織的培養(yǎng)直接法培養(yǎng)法（懸浮培養(yǎng)、貼壁培養(yǎng)）絨毛組織的培養(yǎng)直接法絨毛組織的染色體檢查—直接法孕早期Langhan’s細(xì)胞有較高的有絲分裂活性，能提供足以分析的良好有絲分裂相，較絨毛培養(yǎng)簡易可靠、操作簡單快速絨毛組織的染色體檢查—直接法孕早期Langhan’s細(xì)胞有較絨毛組織的染色體檢查—直接法絨毛組織的分離洗脫加秋水仙素（終濃度2ug/ml，可一次加，也可分次少量加）37OC5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)45分鐘低滲（1%枸櫞酸鈉低滲10分鐘或1%枸櫞酸鈉和0.075mol/l1：1低滲40分鐘）預(yù)固定（甲醇：冰醋酸3：1）10分鐘固定（甲醇：冰醋酸3：1）10-20分鐘冰醋酸解離絨毛細(xì)胞（輕吹打）制片絨毛組織的染色體檢查—直接法絨毛組織的分離洗脫絨毛組織的染色體檢查—懸浮培養(yǎng)法絨毛挑選洗脫絨毛組織剪成小塊入培養(yǎng)瓶（25ml培養(yǎng)瓶每瓶10mg）加特定培養(yǎng)液3ml培養(yǎng)3-6天收獲（加秋素、低滲、固定、制片）絨毛組織的染色體檢查—懸浮培養(yǎng)法絨毛挑選洗脫絨毛組織的染色體檢查—貼壁培養(yǎng)法絨毛組織挑選洗脫絨毛組織剪成小塊加0.25%+0.02%EDTA5ml37OC搖床中20分鐘加培養(yǎng)基終止消化，離心后棄上清加培養(yǎng)基接種培養(yǎng)5-10天收獲絨毛組織的染色體檢查—貼壁培養(yǎng)法絨毛組織挑選洗脫羊水細(xì)胞培養(yǎng)—細(xì)胞類型成纖維樣細(xì)胞（F細(xì)胞）上皮樣細(xì)胞（密集型上皮樣細(xì)胞-E細(xì)胞、鐮刀樣上皮細(xì)胞、圓形上皮細(xì)胞）羊水樣細(xì)胞（AF細(xì)胞）羊水細(xì)胞培養(yǎng)—細(xì)胞類型成纖維樣細(xì)胞（F細(xì)胞）羊水細(xì)胞培養(yǎng)—收獲方法原位法消化法刮取法羊水細(xì)胞培養(yǎng)—收獲方法原位法羊水細(xì)胞培養(yǎng)中存在的問題

——污染細(xì)菌真菌支原體病毒其他細(xì)胞羊水細(xì)胞培養(yǎng)中存在的問題

—羊水細(xì)胞培養(yǎng)中存在的問題

——母體細(xì)胞污染若胎兒為男性，由于母體細(xì)胞污染誤將胎兒診斷為嵌合體母體細(xì)胞在培養(yǎng)中占優(yōu)勢羊水細(xì)胞培養(yǎng)中存在的問題

—羊水細(xì)胞培養(yǎng)中存在的問題

——母體細(xì)胞污染的預(yù)防羊水穿刺時(shí)，把最先抽得的1-2ml羊水棄掉染色體多態(tài)現(xiàn)象的測試羊水細(xì)胞、母體細(xì)胞的HLA組織定型鑒別羊水細(xì)胞培養(yǎng)中存在的問題

—羊水細(xì)胞培養(yǎng)中存在的問題

——細(xì)胞不生長、不貼壁最常見的原因是支原體污染培養(yǎng)基PH不適當(dāng)，偏酸（＜6.4或偏堿＞7.4均不利最合適的穿刺時(shí)間16-20周羊水細(xì)胞培養(yǎng)中存在的問題

—羊水細(xì)胞培養(yǎng)中存在的問題

——細(xì)胞及染色體收獲少每天觀察細(xì)胞生長（梭形細(xì)胞背景上有透明透亮的圓形細(xì)胞）滾圓的細(xì)胞與有絲分裂的圓形細(xì)胞鑒別操作應(yīng)輕柔，胰酶消化法要掌握好胰酶消化的時(shí)間羊水中胎脂多時(shí)3-5天可輕輕動一動，減少胎脂貼壁占據(jù)空間低滲時(shí)間短于外周血（一般3-5分鐘）羊水細(xì)胞培養(yǎng)中存在的問題

—臍帶血細(xì)胞培養(yǎng)量少于外周血（一般5ml注射器小于14滴）其他同外周血臍帶血細(xì)胞培養(yǎng)量少于外周血（一般5ml注射器小于14滴）Thanks!Thanks!產(chǎn)前診斷中絨毛、臍血、羊水取樣及標(biāo)本培養(yǎng)南京大學(xué)附屬鼓樓醫(yī)院婦產(chǎn)科產(chǎn)前診斷中心李潔副主任醫(yī)生2006年11月產(chǎn)前診斷中絨毛、臍血、羊水取樣及標(biāo)本培養(yǎng)南京大學(xué)附屬鼓樓醫(yī)院產(chǎn)前診斷指征夫婦任一方有染色體異常；曾生育過染色體病患者；夫婦任一方為單基因病患者；曾生育過單基因病患者；有不明原因的自然流產(chǎn)史、畸胎史、死產(chǎn)或新生兒死亡史；產(chǎn)前診斷指征夫婦任一方有染色體異常；產(chǎn)前診斷指征羊水過多的孕婦；夫婦任一方曾接觸致畸因素；孕婦年齡大于35歲；有遺傳病家族史的近親婚配的夫婦。產(chǎn)前篩查高風(fēng)險(xiǎn)的孕婦超聲胎兒結(jié)構(gòu)篩查胎兒有結(jié)構(gòu)異常的孕婦產(chǎn)前診斷指征羊水過多的孕婦；產(chǎn)前診斷的方法羊膜腔穿刺取樣（amniocentesis）絨毛穿刺取樣（chorionvillussampling,cvs）臍帶血取樣（periumbilicalcordbloodsampling,PUBS）植入前診斷（preimplantatongeneticdiagnosis,PGD）產(chǎn)前診斷的方法羊膜腔穿刺取樣（amniocentesis）產(chǎn)前診斷的方法胎兒組織取樣（皮膚、肝臟）胎兒鏡（fetoscope）胚胎鏡（embryoscope）胎兒超聲波圖象（fetalultrasoundimaging）母體外周血胎兒細(xì)胞檢測（cell-storing）產(chǎn)前診斷的方法胎兒組織取樣（皮膚、肝臟）絨毛穿刺取樣—?dú)v史1975年我國鞍山鋼鐵公司鐵東醫(yī)院首次問世（經(jīng)宮頸盲吸法，準(zhǔn)確率95%，自然流產(chǎn)率9.3%，出生嬰兒未發(fā)現(xiàn)異常）莫斯科產(chǎn)科研究所（超聲引導(dǎo)下經(jīng)宮頸吸樣）1983您Ward和Brambati分別于英國和意大利發(fā)表文章介紹絨毛取樣及核型分析絨毛穿刺取樣—?dú)v史1975年我國鞍山鋼鐵公司鐵東醫(yī)院首次問絨毛穿刺取樣—時(shí)間妊娠9—11周絨毛穿刺取樣—時(shí)間妊娠9—11周絨毛穿刺取樣—抽取量20mg左右（染色體核型分析約需10mg，DNA分析約需5mg，生化測定約需5-10mg）絨毛穿刺取樣—抽取量20mg左右（染色體核型分析約需10m絨毛穿刺取樣—并發(fā)癥胎兒丟失胎兒肢體發(fā)育缺陷（LRD）絨毛穿刺取樣—并發(fā)癥胎兒丟失CVS并發(fā)癥—胎兒丟失CVS的流產(chǎn)率不比amniocentesis高經(jīng)宮頸和經(jīng)腹取樣安全性相同（Jackson,1992）多胎取樣高于單胎取樣（Pergament,1992）CVS并發(fā)癥—胎兒丟失CVS的流產(chǎn)率不比amniocenteCVS并發(fā)癥－LRD1999年WHO發(fā)布CVS綜合性資料認(rèn)為CVS與LRD無關(guān)（216，381例CVS中115例出現(xiàn)LRD發(fā)生率1：1881，總的人群發(fā)生率1：1642）世界各地相關(guān)資料綜合，9周以下CVS出現(xiàn)LRD的機(jī)會高，但原因尚不清楚CVS不應(yīng)在小于孕10周的條件下進(jìn)行CVS并發(fā)癥－LRD1999年WHO發(fā)布CVS綜合性資料認(rèn)為絨毛穿刺取樣—方法經(jīng)宮頸（transcervical）經(jīng)腹（transabdorminal）絨毛穿刺取樣—方法經(jīng)宮頸（transcervical）CVS方法—經(jīng)宮頸取樣B超采用高分辨的扇掃式或凸陣式實(shí)時(shí)超聲診斷儀，經(jīng)腹探頭頻率3.5MHz,經(jīng)陰道探頭頻率5-7MHz。采用特制較細(xì)的滋養(yǎng)層活檢導(dǎo)管（多聚乙烯導(dǎo)管），其塑料導(dǎo)管外徑1.4–1.6mm,長20cm,帶有導(dǎo)管芯，導(dǎo)管前端稍彎，外形似宮腔探子。導(dǎo)管另一端連接10-20ml含有2-4ml生理鹽水的注射器CVS方法—經(jīng)宮頸取樣B超采用高分辨的扇掃式或凸陣式實(shí)時(shí)超聲CVS方法—經(jīng)腹取樣雙針活檢系統(tǒng)由1根長15cm、外徑1.2mm的18號引導(dǎo)套針，及1根長20cm、外徑0.8mm的22號活檢針組成。在超聲引導(dǎo)下，先將引導(dǎo)套針經(jīng)腹壁及子宮穿刺入胎盤絨毛邊緣部分，拔出針芯，然后將活檢針經(jīng)引導(dǎo)套針內(nèi)送入胎盤絨毛組織,連接含2-4ml生理鹽水的20ml注射器，以5ml的負(fù)壓上下移動活檢針吸取絨毛組織CVS方法—經(jīng)腹取樣雙針活檢系統(tǒng)由1根長15cm、外徑1.2CVS注意事項(xiàng)動作要輕柔穿刺部位在胎盤絨毛葉抽吸次數(shù)不宜過多CVS注意事項(xiàng)動作要輕柔羊膜腔穿刺—?dú)v史1956年Fucks進(jìn)行羊膜腔穿刺行胎兒性別鑒定及胎兒Rh溶血診斷1966年Marksteele和RoyBreg從羊水中分離出羊水細(xì)胞培養(yǎng)成功并行胎兒核型分析羊膜腔穿刺—?dú)v史1956年Fucks進(jìn)行羊膜腔穿刺行胎兒性羊膜腔穿刺—時(shí)間16—20周羊膜腔穿刺—時(shí)間16—20周羊膜腔穿刺—抽取量20—30ml羊膜腔穿刺—抽取量20—30ml抽取的羊水用途核型分析——診斷染色體病DNA分析——診斷單基因病生化測定——診斷NTD、代謝性疾病抽取的羊水用途核型分析——診斷染色體病羊水穿刺穿刺前孕婦俯臥位搖動腹部超聲波定位引導(dǎo)采用22號或21號帶芯長腰穿刺針頭垂直、快速進(jìn)針抽取羊水2ml棄置，換空針抽取羊水羊水穿刺羊膜腔穿刺—并發(fā)癥胎兒丟失羊膜腔感染羊水滲漏穿刺部位的出血、血腫羊膜腔穿刺—并發(fā)癥胎兒丟失羊穿并發(fā)癥---胎兒丟失1976年，NihdRegistry報(bào)道流產(chǎn)率3.5%1986年，Taboretal報(bào)道流產(chǎn)率1.7%1995年，Bombardetal報(bào)道流產(chǎn)率1.3%2000年,Antsaklis報(bào)道流產(chǎn)率2.1%羊穿并發(fā)癥---胎兒丟失1976年，NihdRegistr臍帶血穿刺—?dú)v史1972年，Valenti用兒科膀胱鏡在中期妊娠孕婦行子宮切開術(shù)插入羊膜腔，獲取臍血標(biāo)本。1979年，Rodeck和Campell應(yīng)用胎兒鏡行臍帶血管穿刺，但由于并發(fā)癥高，應(yīng)用受到限制。1983年，TernandDaffos超聲引導(dǎo)下經(jīng)皮臍血管穿刺取血（Cordocentesis）臍帶血穿刺—?dú)v史1972年，Valenti用兒科膀胱鏡在中期臍帶血穿刺—時(shí)間16周—分娩（最佳24—28周）臍帶血穿刺—時(shí)間16周—分娩（最佳24—28周）臍帶血穿刺—取血量3—5ml20周后抽取6—8ml對胎兒循環(huán)無不良影響臍帶血穿刺—取血量3—5ml臍帶血穿刺—適應(yīng)癥胎兒核型分析或基因檢測（胎兒畸形、嚴(yán)重的FGR、羊水或絨毛細(xì)胞培養(yǎng)失敗、羊水或絨毛培養(yǎng)結(jié)果為嵌合體、非免疫性胎兒水腫、脆性X綜合癥等）胎兒血液疾病分析（血型、血小板計(jì)數(shù)等）胎兒感染（弓形蟲、病毒感染等）胎兒情況評估（酸堿平衡、甲功等）遺傳性疾病（單基因病、凝血障礙、血紅蛋白病、代謝性疾病等）胎兒治療（宮內(nèi)輸血、宮內(nèi)藥物治療等）臍帶血穿刺—適應(yīng)癥胎兒核型分析或基因檢測（胎兒畸形、嚴(yán)重的F臍帶血穿刺—并發(fā)癥穿刺部位的出血臍帶血腫短暫性胎心減慢宮內(nèi)感染胎兒丟失（流產(chǎn)、早產(chǎn)）大多數(shù)并發(fā)癥為短暫性和非致命性臍帶血穿刺—并發(fā)癥穿刺部位的出血臍帶血穿刺并發(fā)癥—胎兒丟失Maxwell1991年報(bào)道胎兒超聲結(jié)構(gòu)篩查示正常超聲者臍穿的流產(chǎn)率為1%（1/76）；異常超聲者流產(chǎn)率為7%（5/76）；胎兒結(jié)構(gòu)明顯異常者流產(chǎn)率為25%（9/36）Antsaklis1998年報(bào)道胎兒超聲結(jié)構(gòu)篩查示正常超聲者臍穿的流產(chǎn)率1%（2/191）；異常超聲者流產(chǎn)率為13%（11/84）臍帶血穿刺并發(fā)癥—胎兒丟失Maxwell1991年報(bào)道胎兒臍帶穿刺部位臍帶穿刺部位臍血穿刺—確定胎兒血樣血紅蛋白電泳Kleihauer-Betke試驗(yàn)：胎兒紅細(xì)胞在酸中穩(wěn)定APT試驗(yàn)：NaOH中胎兒血為粉紅色有核紅細(xì)胞的出現(xiàn)臍血穿刺—確定胎兒血樣血紅蛋白電泳臍血穿刺—排除臍血中母血污染X染色體DMD基因內(nèi)部5對CA重復(fù)序列的連鎖分析臍血穿刺—排除臍血中母血污染X染色體DMD基因內(nèi)部5對CA重絨毛組織、羊水細(xì)胞、臍血細(xì)胞培養(yǎng)絨毛組織、羊水細(xì)胞、臍血細(xì)胞培養(yǎng)絨毛組織的培養(yǎng)直接法培養(yǎng)法（懸浮培養(yǎng)、貼壁培養(yǎng)）絨毛組織的培養(yǎng)直接法絨毛組織的染色體檢查—直接法孕早期Langhan’s細(xì)胞有較高的有絲分裂活性，能提供足以分析的良好有絲分裂相，較絨毛培養(yǎng)簡易可靠、操作簡單快速絨毛組織的染色體檢查—直接法孕早期Langhan’s細(xì)胞有較絨毛組織的染色體檢查—直接法絨毛組織的分離洗脫加秋水仙素（終濃度2ug/ml，可一次加，也可分次少量加）37OC5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)45分鐘低滲（1%枸櫞酸鈉低滲10分鐘或1%枸櫞酸鈉和0.075mol/l1：1低滲40分鐘）預(yù)固定（甲醇：冰醋酸3：1）10分鐘固定（甲醇：冰醋酸3：1）10-20分鐘冰醋酸解離絨毛細(xì)胞（輕吹打）制片絨毛組織的染色體檢查—直接法絨毛組織的分離洗脫絨毛組織的染色體檢查—懸浮培養(yǎng)法絨毛挑選洗脫絨毛組織剪成小塊入培養(yǎng)瓶（25ml培養(yǎng)瓶每瓶10mg）加特定培養(yǎng)液3ml培養(yǎng)3-6天收獲（加秋素、低滲、固定、制片）絨毛組織的染色體檢查—懸浮培養(yǎng)法絨毛挑選洗脫