結(jié)核病的實驗室診斷技術(shù)及應(yīng)用培訓(xùn)課件

結(jié)核病的實驗室診斷技術(shù)及應(yīng)用結(jié)核病的實驗室診斷技術(shù)及應(yīng)用1（優(yōu)選）結(jié)核病的實驗室診斷技術(shù)及應(yīng)用（優(yōu)選）結(jié)核病的實驗室診斷技術(shù)及應(yīng)用2結(jié)核病檢測技術(shù)發(fā)展歷程分子診斷時代DNA診斷：PCRLAMPGeneXpert基因芯片RNA診斷：TMANASBA免疫學(xué)檢測：AbAgPPDT-SPOT細菌法：直接鏡檢體外培養(yǎng)SAT19世紀中葉20世紀60年代20世紀80年代20世紀90年代靈敏度低檢測周期長成本低交叉污染儀器要求復(fù)雜反應(yīng)抑制高靈敏度高特異性交叉污染少血清學(xué)檢測WHO不推薦r-干擾素釋放實驗結(jié)核病檢測技術(shù)發(fā)展歷程結(jié)核病檢測技術(shù)發(fā)展歷程分子診斷時代DNA診斷：RNA診斷：免3一、細菌法直接涂片

（陽性率低—5000以上細菌/ml；

不能區(qū)分真假、死活）一、細菌法直接涂片

（陽性率低—50004一、細菌法結(jié)核菌的培養(yǎng)

結(jié)核病病原學(xué)診斷的金標準(培養(yǎng)時間長是其軟肋)一、細菌法結(jié)核菌的培養(yǎng)結(jié)核病病原學(xué)診斷5一、細菌學(xué)檢測的新方法

—提高陽性率發(fā)光二極管熒光顯微鏡（LED）液體培養(yǎng)（可同時縮短培養(yǎng)時間）自動化涂片/染色技術(shù)（夾層杯法）不能區(qū)分真假、死活；培養(yǎng)仍是金標準但耗時長、一、細菌學(xué)檢測的新方法

—提高陽性率發(fā)光二極管熒光顯微6分枝桿菌固體培養(yǎng)與液體培養(yǎng)比較液體培養(yǎng)（BDMGIT960）固體培養(yǎng)（羅氏L-J）疑似新發(fā)患者報陽時間（d）13.63±7.1428.67±10.04復(fù)診患者報陽時間(d)22.94±9.5528.53±10.40疑似新發(fā)患者陽性率32.00%17.90%復(fù)診患者陽性率9.30%2.60%污染率6.57%4.0%液體培養(yǎng)在提高陽性率、縮短報陽時間上均優(yōu)于固體培養(yǎng)。吳學(xué)兵，陸彬，桂曉虹等。液體MGIT培養(yǎng)法在結(jié)核分枝桿菌檢測中的應(yīng)用評估。檢驗醫(yī)學(xué)，2013,3（28）：211-214仍然不能滿足臨床快速診斷的需要分枝桿菌固體培養(yǎng)與液體培養(yǎng)比較液體培養(yǎng)固體培養(yǎng)疑似新發(fā)患者報7二、免疫學(xué)檢測

血清學(xué)檢測（抗體、抗原）結(jié)核菌素試驗（靈敏度、特異性？）結(jié)核感染T細胞檢測（γ干擾素檢測）二、免疫學(xué)檢測血清學(xué)檢測（抗體、抗原）8WHO關(guān)于血清學(xué)檢測聲明2011年7月20日，世界衛(wèi)生組織（WHO）正式聲明，要求禁止將血清學(xué)檢測方法（抗原，抗體，蛋白芯片等）用于肺結(jié)核和肺外結(jié)核的診斷。WHOwarnsagainsttheuseofinaccuratecommercialserologicaltestsforpulmonaryandextra-pulmonaryTB.蛋白質(zhì)組學(xué)的發(fā)展3、4、7種結(jié)核桿菌優(yōu)勢表位抗原（16KD、38KD、MPT64、ESAT-6、CFP10、Mtb8、Mtb8.4、Mtb16.3）制備多靶點蛋白微陣列大量的文獻報道其敏感性特異性均顯著高于涂片與培養(yǎng)法可用于結(jié)核病的臨床輔助診斷，提高痰涂片和痰培養(yǎng)假陰性的檢測率參考文獻略WHO關(guān)于血清學(xué)檢測聲明2011年7月20日，世界衛(wèi)生組織（9γ-干擾素釋放實驗（IGRAs)10Interferon-GammaReleaseAssaysγ-干擾素釋放實驗（IGRAs)10Interferon-G10結(jié)核桿菌特異抗原：ESAT-6與CFP10由結(jié)核桿菌基因組RD1區(qū)相同的操縱子編碼的蛋白所有的卡介苗（BCG）均丟失RD1和RD2絕大多數(shù)的環(huán)境分枝桿菌(NTM)也不存在RD1和RD2區(qū)11ESAT-6

:早期抗原靶6（EarlySecretedAntigenicRarget6）CFP10

:培養(yǎng)濾液蛋白10（CultureFiltrateProtein10）結(jié)核桿菌特異抗原：ESAT-6與CFP10由結(jié)核桿菌基因組R1112結(jié)核桿菌特異抗原：ESAT-6與CFP10結(jié)核菌群抗原ESAT6CFP-10Mtuberculosis++Mafricanum++Mbovis++BCGsubstrain

gothenburg--moreau--tice--tokyo--danish--glaxo--montreal--pasteur--抗原

ESAT6CFP-10Mabcessus--Mavium--Mbranderi--Mcelatum--Mchelonae--Mfortuitum--Mgordonii++Mintracellulare--++Mmalmoense--Mmarinum++Moenavense--Mcrofulaceum----Mszulgai++Mterrae--Mvaccae--Mxenopi--環(huán)境分枝桿菌MsmegmatisMkansasii--12結(jié)核桿菌特異抗原：ESAT-6與CFP10結(jié)核菌群抗原E12準確—TSPOT臨床診斷性能

特異性只針對結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群敏感，與絕大多數(shù)環(huán)境分枝桿菌和卡介苗（BCG）無交叉反應(yīng)美國FDA數(shù)據(jù)：特異性97.1%(297/306)國內(nèi)臨床數(shù)據(jù)：特異性94.1%(478/508)

靈敏度基本不受免疫力低下/受抑制影響，在肺外結(jié)核患者中有很高的檢出率美國FDA數(shù)據(jù)：靈敏度95.6%(175/183)國內(nèi)臨床數(shù)據(jù)：靈敏度95.3%(624/655)13陰性預(yù)測值：93.9%（478/509）陽性預(yù)測值：95.4%（624/654）準確—TSPOT臨床診斷性能特異性13陰性預(yù)測值：93.13TSPOT相關(guān)指南TSPOT?.TB是采用γ干擾素釋放試驗（IGRA）原理，獲得美國FDA認證、歐盟CE認證和首個中國CFDA認證的商業(yè)化產(chǎn)品列入歐美25個國家結(jié)核診療指南2011年英國NICE指南、2010年美國最新結(jié)核診療指南、2010年加拿大結(jié)核指南美國CDC推薦—卡介苗（BCG）接種人群結(jié)核感染檢測首選國內(nèi)風(fēng)濕科和消化科已列入專家共識14TSPOT相關(guān)指南TSPOT?.TB是采用γ干擾素釋放試驗14快速—TSPOT的實驗步驟用BDCPT管或Ficoll提取液收集外周血單個核細胞結(jié)核特異抗原（ESAT-6/CFP10）刺激結(jié)核特異的效應(yīng)T淋巴細胞使其分泌γ-干擾素效應(yīng)T淋巴細胞分泌的γ-干擾素與膜板預(yù)包被的抗γ-干擾素抗體結(jié)合并固定在細胞周圍1個斑點=1個效應(yīng)T細胞加入顯色液，觀察結(jié)果過夜孵育，洗板，加入酶標二抗15快速—TSPOT的實驗步驟用BDCPT管或Ficoll提15DNA需要一段時間降解4%（624/654）GeneXpert應(yīng)用一個斑點=一個結(jié)核效應(yīng)淋巴細胞自動化涂片/染色技術(shù)（夾層杯法）gothenburgJOURNALOFCLINICALMICROBIOLOGY,Jan.2011年英國NICE指南、2010年美國最新結(jié)核診療指南、2010年加拿大結(jié)核指南（優(yōu)選）結(jié)核病的實驗室診斷技術(shù)及應(yīng)用三、結(jié)核DNA檢測技術(shù)Msmegmatis顯色目測或SYBRGreenI等熒光染料不能區(qū)分是活動性和潛伏性結(jié)核求禁止將血清學(xué)檢測方法（抗原，抗體，蛋白芯片等）用TB—SAT檢測技術(shù)Mcrofulaceum美國CDC推薦—卡介苗（BCG）接種人群結(jié)核感染檢測首選2011年英國NICE指南、2010年美國最新結(jié)核診療指南、2010年加拿大結(jié)核指南—無其它結(jié)核患病證據(jù)復(fù)診患者報陽時間(d)實驗效果圖陰性結(jié)果陽性結(jié)果空白對照抗原AESAT-6抗原BCFP10陽性對照（PHA）一個斑點=一個結(jié)核效應(yīng)淋巴細胞DNA需要一段時間降解實驗效果圖陰性結(jié)果陽性結(jié)果空白對照一個16T-SPOT結(jié)果的解讀-陽性結(jié)果活動性結(jié)核病

—典型結(jié)核中毒癥狀

—影像學(xué)支持

—排除其他診斷MTB感染狀態(tài)

—典型結(jié)核中毒癥狀

—未發(fā)現(xiàn)結(jié)核患病證據(jù)潛伏性結(jié)核感染

—無結(jié)核中毒癥狀

—無其它結(jié)核患病證據(jù)陳舊性結(jié)核

—無結(jié)核中毒癥狀

—既往TB史或明確TB證據(jù)NTM（四種）感染高孟秋，γ-干擾素釋放試驗檢測結(jié)果的臨床意義解讀，中華結(jié)核和呼吸雜志，2014T-SPOT結(jié)果的解讀-陽性結(jié)果活動性結(jié)核病潛伏性結(jié)核感染N17T-SPOT結(jié)果解讀-陰性結(jié)果除外結(jié)核感染

—所用抗原為MTB特異性抗原

—機體沒有結(jié)核特異抗原致敏的T淋巴細胞

—目前未感染結(jié)核分枝桿菌假陰性：感染階段不同（窗口期）少數(shù)免疫系統(tǒng)功能不全/基礎(chǔ)疾病的情況，如HIV感染者、腫瘤患者、嬰幼兒等特殊肺外結(jié)核：結(jié)核性腦膜炎、粟粒性結(jié)核靈敏度相對較低實驗非正常操作：細胞計數(shù)不夠等高孟秋，γ-干擾素釋放試驗檢測結(jié)果的臨床意義解讀，中華結(jié)核和呼吸雜志，2014T-SPOT結(jié)果解讀-陰性結(jié)果除外結(jié)核感染假陰性：高孟秋，18TSPOT的應(yīng)用優(yōu)點使用血液標本，取樣簡單；可用于肺內(nèi)和肺外結(jié)核檢測；陰性預(yù)測值很高，可用于排除結(jié)核感染。缺點陽性預(yù)測值約80%，不能用于結(jié)核的確診不能確定是否是肺結(jié)核（肺外）不能區(qū)分是活動性和潛伏性結(jié)核不能區(qū)分某些非結(jié)核分枝桿菌（堪薩斯、蘇氏、戈登、海分枝桿菌）操作復(fù)雜，時間長；對于原發(fā)感染初期或免疫低下人群，可能存在假陰性。能否療效監(jiān)測？——無大量數(shù)據(jù)TSPOT的應(yīng)用優(yōu)點使用血液標本，取樣簡單；可用于肺內(nèi)和肺外19

三、結(jié)核DNA檢測技術(shù)測序——金標準熒光定量PCR環(huán)介導(dǎo)恒溫擴增法（LAMP）基因芯片檢測鑒定技術(shù)基因XpertMTB/RIF檢測技術(shù)三、結(jié)核DNA檢測技術(shù)測序——金標準201.熒光定量PCR是應(yīng)用最為廣泛的TBDNA定量PCR檢測方法具有靈敏度高（10CFU/ml）、特異性強、線性關(guān)系好、操作簡單等優(yōu)點。1.熒光定量PCR是應(yīng)用最為廣泛的TBDNA定量PCR檢21

2.環(huán)介導(dǎo)恒溫擴增法（LAMP）

是在恒溫下進行PCR擴增，因此操作更為簡便，反應(yīng)更加快速。65℃擴增40min即可用肉眼觀察結(jié)果。擴增陽性標本呈現(xiàn)綠色熒光，反之為陰性。是結(jié)核分枝桿菌DNA檢測技術(shù)的代表靈敏、快速、特異、簡捷將會極大地推動結(jié)核病的防治工作2.環(huán)介導(dǎo)恒溫擴增法（LAMP）

是在恒溫下進行P22DNA檢測LAMP結(jié)果判讀：顯色目測或SYBRGreenI等熒光染料DNA檢測LAMP結(jié)果判讀：23LAMP法和其他PCR法的比較LAMP法和其他PCR法的比較24LAMP法在結(jié)核菌檢測中的應(yīng)用臨床試驗——

LAMP法和對照試劑（BD快速培養(yǎng)）對比結(jié)果靈敏度＝89.54%陽性結(jié)果預(yù)期值＝98.13%特異性＝98.93%陰性結(jié)果預(yù)期值＝93.77%總符合率＝95.31%LAMP法在結(jié)核菌檢測中的應(yīng)用臨床試驗——LAMP法和對照2526

JournalofClinicalMicrobiology.2010,48(10):3654–3660.結(jié)核

胞內(nèi)通量：可同時檢測16-22種常見分枝桿菌速度：6小時靈敏度：103CFU/ml可自動或肉眼判讀結(jié)果

3.基因芯片檢測技術(shù)26JournalofClinicalMicro26檢測全程僅需6小時檢測全程僅需6小時27MSM恥垢分枝桿菌MTC結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群MTR次要分枝桿菌MIN胞內(nèi)分枝桿菌MAV鳥分枝桿菌MGA胃分枝桿菌MKA堪薩斯分枝桿菌MSC瘰癘分枝桿菌MUA母牛分枝桿菌MCH龜分枝桿菌龜亞種MAB龜分枝桿菌膿腫亞種MSZ蘇爾加分枝桿菌MMA海/潰瘍分枝桿菌MXE蟾蜍分枝桿菌MDI迪氏分枝桿菌MFO偶發(fā)/豬分枝桿菌MGI淺黃分枝桿菌MSI猿猴分枝桿菌MTE土分枝桿菌MPH草分枝桿菌CC質(zhì)控點MNO不產(chǎn)色分枝桿菌MGO戈登分枝桿菌同時鑒定MTC與21種NTMMSM恥垢分枝桿菌MTC結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群MTR次要分枝桿28擴增陽性標本呈現(xiàn)綠色熒光，反之為陰性。多數(shù)研究報告提示：耐藥的發(fā)生與結(jié)核桿菌的基因突變有關(guān)。蔡杏珊,馬品云,張院良，譚耀駒

中國防癆雜志,2014,36(6):458-461不能區(qū)分某些非結(jié)核分枝桿菌（堪薩斯、蘇氏、戈登、海分枝桿菌）—無其它結(jié)核患病證據(jù)TB-SAT顯著提高結(jié)核分枝桿菌的陽性檢出率，對早期發(fā)現(xiàn)傳染性肺結(jié)核患者，控制結(jié)核病傳染源有極其重要的意義是在恒溫下進行PCR擴增，因此操作更為簡便，反應(yīng)更加快速。耐藥分子診斷檢測的靈敏度：103CFU/ml一個斑點=一個結(jié)核效應(yīng)淋巴細胞1%(297/306)2009更新關(guān)于分子診斷技術(shù)在TB實驗室診斷的指南50-70%katG基因突變擴增陽性標本呈現(xiàn)綠色熒光，反之為陰性。TB是采用γ干擾素釋放試驗（IGRA）原理，獲得美國FDA認證、歐盟CE認證和首個中國CFDA認證的商業(yè)化產(chǎn)品優(yōu)點使用血液標本，取樣簡單；環(huán)介導(dǎo)恒溫擴增法（LAMP）GABRIELLEM.固液體培養(yǎng)（時間、生物安全等）——LAMP法和對照試劑（BD快速培養(yǎng)）對比結(jié)果DNA需要一段時間降解非結(jié)核分枝桿菌（NTM）：4.XpertMTB/RIF檢測技術(shù)

擴增陽性標本呈現(xiàn)綠色熒光，反之為陰性。4.XpertMT29GeneXpert應(yīng)用1、TB復(fù)合群鑒定。2、利福平耐藥檢測。3、WHO推薦4、Xpert?MTB/RIF檢測試劑的陽性檢出率低于人們對分子生物學(xué)診斷試劑高敏感度的預(yù)期值，（1000CFU/ml）GeneXpert應(yīng)用30DNA用于臨床檢驗的不足“死菌檢測呈陽性”，與臨床相關(guān)性差不能區(qū)分“潛伏感染”“活動性感染”

易交叉污染

反應(yīng)易受抑制DNA用于臨床檢驗的不足“死菌檢測呈陽性”，與臨床相關(guān)性差31NASBA（國外）TMA（國外）SAT（國內(nèi)）四、常見的RNA檢測技術(shù)NASBA（國外）四、常見的RNA檢測技術(shù)32SAT技術(shù)是將核酸恒溫擴增和實時熒光檢測相結(jié)合的一種新型RNA檢測技術(shù)。TB—SAT檢測技術(shù)SAT技術(shù)是將核酸恒溫擴增和實時熒光33TB-RNA釋放恒溫擴增實時檢測超聲波（300W）15min痰液預(yù)處理42℃40min與反應(yīng)液混合60℃10min42℃5minTB-SAT操作流程50μl稀釋液全程2小時，會做PCR，就學(xué)的會SATTB-RNA釋放恒溫擴增超聲波（300W）痰液預(yù)處理42℃34TBSAT檢測技術(shù)優(yōu)點TBSAT檢測技術(shù)優(yōu)點35RNA診斷技術(shù)的優(yōu)勢靈敏度高：RNA≥DNA拷貝數(shù)與臨床相關(guān)性好：區(qū)分“死活菌”：

減少抗生素濫用可以診斷“活動性感染”：

活動性感染：RNA轉(zhuǎn)錄活躍

潛伏感染：RNA不轉(zhuǎn)錄不易污染：靶標和擴增產(chǎn)物都是RNARNA診斷技術(shù)的優(yōu)勢靈敏度高：RNA≥DNA拷貝數(shù)36TBSAT檢測區(qū)分MTB和NTM結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群（MTB）：人型結(jié)核分枝桿菌牛型結(jié)核分枝桿菌非洲型結(jié)核分枝桿菌非結(jié)核分枝桿菌（NTM）：研究表明，TB-SAT可以區(qū)分如下NTM：堪薩斯分枝桿菌、胞內(nèi)分枝桿菌、龜分枝桿菌、戈登分枝桿菌、海分枝桿菌等18種TBSAT檢測區(qū)分MTB和NTM結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群（MTB）37活菌檢測技術(shù)，可用作肺結(jié)核治療效果評估據(jù)文獻報道每個結(jié)核分枝桿菌含有約2000個拷貝rRNA研究表明rRNA與結(jié)核分枝桿菌的生活力有著很好的相關(guān)性，rRNA可以反映結(jié)核分枝桿菌的死菌活菌狀態(tài)研究表明在用藥治療期內(nèi)，隨著結(jié)核分枝桿菌的死亡，rRNA大約在7天左右時間全部降解。而DNA含量幾乎保持不變VIVIANJONAS,etal.JOURNALOFCLINICALMICROBIOLOGY,Sept.1993,p.2410-2416CLAUDIOPIERSIMONI,etal.JOURNALOFCLINICALMICROBIOLOGY,Jan.1997,p.193–196.GABRIELLEM.E.ANTIMICROBIALAGENTSANDCHEMOTHERAPY,Sept.1994,p.1959-1965

活菌檢測技術(shù)，可用作肺結(jié)核治療效果評估據(jù)文獻報道每個結(jié)核分枝38免疫法常有既往感染問題SAT更有利于治愈判斷窗口期時間示意相對濃度示意抗體RNADNA病原體感染前后各檢測靶標的含量變化死菌的RNA快速降解，有助治愈判斷用藥治療DNA需要一段時間降解RNA快速降解免疫法常有既往感染問題SAT更有利于治愈判斷窗口期時間示意相3965℃擴增40min即可用肉眼觀察結(jié)果。結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群（MTB）：同時鑒定MTC與21種NTM與臨床相關(guān)性好：區(qū)分“死活菌”：TB-SAT檢測體液、病灶組織標本的靈敏度GABRIELLEM.—既往TB史或明確TB證據(jù)結(jié)核病實驗室檢驗規(guī)程.耐藥分子診斷檢測的靈敏度：103CFU/ml2011年英國NICE指南、2010年美國最新結(jié)核診療指南、2010年加拿大結(jié)核指南四、常見的RNA檢測技術(shù)擴增陽性標本呈現(xiàn)綠色熒光，反之為陰性。減少抗生素濫用結(jié)核桿菌特異抗原：ESAT-6與CFP10BCGsubstrainT-SPOT結(jié)果解讀-陰性結(jié)果AssessmentofMycobacterialViabilitybyRNAAmplification.4、Xpert?MTB/RIF檢測試劑的陽性檢出率低于人們對分子生物學(xué)診斷試劑高敏感度的預(yù)期值，（1000CFU/ml）相比DNA,RNA檢測能更好的體現(xiàn)療效服用利福平和氧氟沙星后，第三天和第七天DNA和RNA的滴度變化，相比DNA,RNA與藥物濃度變化的符合率更高，RNA檢測能更好的進行療效評估。GABRIELLEM.E.Assessment

of

Mycobacterial

Viability

by

RNA

Amplification.ANTIMICROBIALAGENTSANDCHEMOTHERAPY,Sept.1994,p.1959-1965

DNARNA65℃擴增40min即可用肉眼觀察結(jié)果。相比DNA,RNA檢40SAT與培養(yǎng)的監(jiān)測結(jié)果一致，可應(yīng)用于療效評估監(jiān)測項目陽性患者數(shù)（%）0月0.5月1月2月4月6月集菌涂片150（100.0）53（35.3）20（13.3）9（6.0）4（2.7）6（4.0）羅氏培養(yǎng)150（100.0）83（55.3）32（21.3）16（10.7）12（8.0）12（8.0）TB-PCR148（98.7）84（56.0）47（31.3）20（13.3）12（8.0）13（8.7）SAT法150（100.0）86（57.3）35（23.3）16（10.7）12（8.0）12（8.0）胡永領(lǐng)，劉成永，成松.應(yīng)用RNA恒溫擴增實時熒光檢測技術(shù)觀察抗結(jié)核藥物的療效.海峽藥學(xué),2015年第27卷第1期SAT在抗結(jié)核治療藥物效果檢測方面，雖不能直接作出藥物敏感試驗，但可以最快地直接判斷所用藥物的療效，及時調(diào)整藥物使用，可大大降低醫(yī)療成本和耐藥產(chǎn)生的機會，大幅度減少醫(yī)療時間和費用。SAT與培養(yǎng)的監(jiān)測結(jié)果一致，監(jiān)測項目41TB-SAT檢測體液、病灶組織標本的靈敏度蔡杏珊,馬品云,張院良，譚耀駒

中國防癆雜志,2014,36(6):458-461TB-SAT檢測體液、病灶組織標本的靈敏度蔡杏珊,馬品云,42小結(jié)TBSAT是國內(nèi)唯一的結(jié)核分枝桿菌RNA檢測產(chǎn)品，2小時報告結(jié)果，可以快速對開放性肺結(jié)核患者進行排查。TBSAT可以區(qū)分結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群和非結(jié)核分枝桿菌，準確鑒別出肺結(jié)核患者。中國防癆協(xié)會與結(jié)核病權(quán)威專家推崇TBSAT用于早期發(fā)現(xiàn)傳染性肺結(jié)核，減少肺結(jié)核導(dǎo)致的公共衛(wèi)生安全問題。小結(jié)TBSAT是國內(nèi)唯一的結(jié)核分枝桿菌RNA檢測產(chǎn)品，2小時43美國CDC關(guān)于RNA檢測技術(shù)

在TB診斷的指南1996美國首個結(jié)核病的RNA檢測技術(shù)通過FDA認證，配合培養(yǎng)法對涂陽患者進行診斷2000美國CDC指出RNA檢測技術(shù)用于TB疑似患者(涂陽、涂陰)痰液檢測、DNA檢測技術(shù)僅用于涂陽患者的痰液檢測2009更新關(guān)于分子診斷技術(shù)在TB實驗室診斷的指南至少一個痰液樣本使用分子診斷技術(shù)檢測TB實驗室初步診斷同時參照分子診斷和涂片的結(jié)果美國CDC關(guān)于RNA檢測技術(shù)

在TB診斷的指南1996美國首44中國結(jié)核病診斷專家共識結(jié)核病診斷專家組：莊玉輝、萬利亞潘毓瑄、成詩明趙雁林、王國治吳雪瓊、萬康林周林、許衛(wèi)國居金良、胡忠義專家共識：TB-SAT顯著提高結(jié)核分枝桿菌的陽性檢出率，對早期發(fā)現(xiàn)傳染性肺結(jié)核患者，控制結(jié)核病傳染源有極其重要的意義中國防癆協(xié)會，2012年6月中國結(jié)核病診斷專家共識結(jié)核病診斷專家組：專家共識：中國防癆協(xié)45結(jié)核實驗室檢測方法中推薦SAT胡忠義.實驗結(jié)核病學(xué).軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)出版社.2014.趙雁林.結(jié)核病實驗室檢驗規(guī)程.中國防癆協(xié)會.2015結(jié)核實驗室檢測方法中推薦SAT胡忠義.實驗結(jié)核病學(xué).軍46五、耐多藥結(jié)核病診斷現(xiàn)狀固液體培養(yǎng)（時間、生物安全等）分子生物學(xué)技術(shù)應(yīng)用使快速檢測耐藥成為可能MDR、XDR的出現(xiàn)對結(jié)核病的防控提出了嚴峻的考驗47五、耐多藥結(jié)核病診斷現(xiàn)狀固液體培養(yǎng)（時間、生物安全等）分結(jié)核耐藥分子診斷技術(shù)測序（金標準檢測突變的理想方法）實時熒光PCR探針溶解曲線法實時PCR技術(shù)（GeneXpert）線性探針雜交（HainLPA）基因芯片（Genechip）檢測已知的突變位點耐藥分子診斷檢測的靈敏度：103CFU/ml48結(jié)核耐藥分子診斷技術(shù)測序（金標準檢測突變的理想方法）檢測已知結(jié)核病耐藥與基因64-68%

rpsL基因突變70%embB基因突變70%65%耐藥基因93%95%95%

rpoB基因突變利福平異煙肼50-70%

katG基因突變5-10%

inhA基因突變6-13%

ahpC基因啟動子區(qū)域突變鏈霉素乙胺丁醇

多數(shù)研究報告提示：耐藥的發(fā)生與結(jié)核桿菌的基因突變有關(guān)?？傮w上是基因一個或幾個核苷酸突變（表現(xiàn)增加、缺失、替代），造成核苷酸編碼錯誤致氨基酸錯位排列，影響藥物與靶位酶結(jié)合產(chǎn)生耐藥結(jié)核病耐藥與基因64-68%rpsL基因突變70%e49結(jié)核耐藥分子診斷技術(shù)測序與標準序列進行比照檢測未知的突變位點（金標準檢測突變的理想方法；設(shè)備、檢測的費用昂貴）實時熒光PCR探針溶解曲線法檢測利福平、異煙肼、鏈霉素、乙胺丁醇已知的耐藥突變位點2小時實時PCR技術(shù)（GeneXpert）實時熒光定量PCR技術(shù)檢測rpoB基因突變確定利福平耐藥性，鑒定是否結(jié)核1小時50結(jié)核耐藥分子診斷技術(shù)測序與標準序列進行比照檢測未知的突變位點50結(jié)核病的實驗室診斷技術(shù)及應(yīng)用結(jié)核病的實驗室診斷技術(shù)及應(yīng)用51（優(yōu)選）結(jié)核病的實驗室診斷技術(shù)及應(yīng)用（優(yōu)選）結(jié)核病的實驗室診斷技術(shù)及應(yīng)用52結(jié)核病檢測技術(shù)發(fā)展歷程分子診斷時代DNA診斷：PCRLAMPGeneXpert基因芯片RNA診斷：TMANASBA免疫學(xué)檢測：AbAgPPDT-SPOT細菌法：直接鏡檢體外培養(yǎng)SAT19世紀中葉20世紀60年代20世紀80年代20世紀90年代靈敏度低檢測周期長成本低交叉污染儀器要求復(fù)雜反應(yīng)抑制高靈敏度高特異性交叉污染少血清學(xué)檢測WHO不推薦r-干擾素釋放實驗結(jié)核病檢測技術(shù)發(fā)展歷程結(jié)核病檢測技術(shù)發(fā)展歷程分子診斷時代DNA診斷：RNA診斷：免53一、細菌法直接涂片

（陽性率低—5000以上細菌/ml；

不能區(qū)分真假、死活）一、細菌法直接涂片

（陽性率低—500054一、細菌法結(jié)核菌的培養(yǎng)

結(jié)核病病原學(xué)診斷的金標準(培養(yǎng)時間長是其軟肋)一、細菌法結(jié)核菌的培養(yǎng)結(jié)核病病原學(xué)診斷55一、細菌學(xué)檢測的新方法

—提高陽性率發(fā)光二極管熒光顯微鏡（LED）液體培養(yǎng)（可同時縮短培養(yǎng)時間）自動化涂片/染色技術(shù)（夾層杯法）不能區(qū)分真假、死活；培養(yǎng)仍是金標準但耗時長、一、細菌學(xué)檢測的新方法

—提高陽性率發(fā)光二極管熒光顯微56分枝桿菌固體培養(yǎng)與液體培養(yǎng)比較液體培養(yǎng)（BDMGIT960）固體培養(yǎng)（羅氏L-J）疑似新發(fā)患者報陽時間（d）13.63±7.1428.67±10.04復(fù)診患者報陽時間(d)22.94±9.5528.53±10.40疑似新發(fā)患者陽性率32.00%17.90%復(fù)診患者陽性率9.30%2.60%污染率6.57%4.0%液體培養(yǎng)在提高陽性率、縮短報陽時間上均優(yōu)于固體培養(yǎng)。吳學(xué)兵，陸彬，桂曉虹等。液體MGIT培養(yǎng)法在結(jié)核分枝桿菌檢測中的應(yīng)用評估。檢驗醫(yī)學(xué)，2013,3（28）：211-214仍然不能滿足臨床快速診斷的需要分枝桿菌固體培養(yǎng)與液體培養(yǎng)比較液體培養(yǎng)固體培養(yǎng)疑似新發(fā)患者報57二、免疫學(xué)檢測

血清學(xué)檢測（抗體、抗原）結(jié)核菌素試驗（靈敏度、特異性？）結(jié)核感染T細胞檢測（γ干擾素檢測）二、免疫學(xué)檢測血清學(xué)檢測（抗體、抗原）58WHO關(guān)于血清學(xué)檢測聲明2011年7月20日，世界衛(wèi)生組織（WHO）正式聲明，要求禁止將血清學(xué)檢測方法（抗原，抗體，蛋白芯片等）用于肺結(jié)核和肺外結(jié)核的診斷。WHOwarnsagainsttheuseofinaccuratecommercialserologicaltestsforpulmonaryandextra-pulmonaryTB.蛋白質(zhì)組學(xué)的發(fā)展3、4、7種結(jié)核桿菌優(yōu)勢表位抗原（16KD、38KD、MPT64、ESAT-6、CFP10、Mtb8、Mtb8.4、Mtb16.3）制備多靶點蛋白微陣列大量的文獻報道其敏感性特異性均顯著高于涂片與培養(yǎng)法可用于結(jié)核病的臨床輔助診斷，提高痰涂片和痰培養(yǎng)假陰性的檢測率參考文獻略WHO關(guān)于血清學(xué)檢測聲明2011年7月20日，世界衛(wèi)生組織（59γ-干擾素釋放實驗（IGRAs)60Interferon-GammaReleaseAssaysγ-干擾素釋放實驗（IGRAs)10Interferon-G60結(jié)核桿菌特異抗原：ESAT-6與CFP10由結(jié)核桿菌基因組RD1區(qū)相同的操縱子編碼的蛋白所有的卡介苗（BCG）均丟失RD1和RD2絕大多數(shù)的環(huán)境分枝桿菌(NTM)也不存在RD1和RD2區(qū)61ESAT-6

:早期抗原靶6（EarlySecretedAntigenicRarget6）CFP10

:培養(yǎng)濾液蛋白10（CultureFiltrateProtein10）結(jié)核桿菌特異抗原：ESAT-6與CFP10由結(jié)核桿菌基因組R6162結(jié)核桿菌特異抗原：ESAT-6與CFP10結(jié)核菌群抗原ESAT6CFP-10Mtuberculosis++Mafricanum++Mbovis++BCGsubstrain

gothenburg--moreau--tice--tokyo--danish--glaxo--montreal--pasteur--抗原

ESAT6CFP-10Mabcessus--Mavium--Mbranderi--Mcelatum--Mchelonae--Mfortuitum--Mgordonii++Mintracellulare--++Mmalmoense--Mmarinum++Moenavense--Mcrofulaceum----Mszulgai++Mterrae--Mvaccae--Mxenopi--環(huán)境分枝桿菌MsmegmatisMkansasii--12結(jié)核桿菌特異抗原：ESAT-6與CFP10結(jié)核菌群抗原E62準確—TSPOT臨床診斷性能

特異性只針對結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群敏感，與絕大多數(shù)環(huán)境分枝桿菌和卡介苗（BCG）無交叉反應(yīng)美國FDA數(shù)據(jù)：特異性97.1%(297/306)國內(nèi)臨床數(shù)據(jù)：特異性94.1%(478/508)

靈敏度基本不受免疫力低下/受抑制影響，在肺外結(jié)核患者中有很高的檢出率美國FDA數(shù)據(jù)：靈敏度95.6%(175/183)國內(nèi)臨床數(shù)據(jù)：靈敏度95.3%(624/655)63陰性預(yù)測值：93.9%（478/509）陽性預(yù)測值：95.4%（624/654）準確—TSPOT臨床診斷性能特異性13陰性預(yù)測值：93.63TSPOT相關(guān)指南TSPOT?.TB是采用γ干擾素釋放試驗（IGRA）原理，獲得美國FDA認證、歐盟CE認證和首個中國CFDA認證的商業(yè)化產(chǎn)品列入歐美25個國家結(jié)核診療指南2011年英國NICE指南、2010年美國最新結(jié)核診療指南、2010年加拿大結(jié)核指南美國CDC推薦—卡介苗（BCG）接種人群結(jié)核感染檢測首選國內(nèi)風(fēng)濕科和消化科已列入專家共識64TSPOT相關(guān)指南TSPOT?.TB是采用γ干擾素釋放試驗64快速—TSPOT的實驗步驟用BDCPT管或Ficoll提取液收集外周血單個核細胞結(jié)核特異抗原（ESAT-6/CFP10）刺激結(jié)核特異的效應(yīng)T淋巴細胞使其分泌γ-干擾素效應(yīng)T淋巴細胞分泌的γ-干擾素與膜板預(yù)包被的抗γ-干擾素抗體結(jié)合并固定在細胞周圍1個斑點=1個效應(yīng)T細胞加入顯色液，觀察結(jié)果過夜孵育，洗板，加入酶標二抗65快速—TSPOT的實驗步驟用BDCPT管或Ficoll提65DNA需要一段時間降解4%（624/654）GeneXpert應(yīng)用一個斑點=一個結(jié)核效應(yīng)淋巴細胞自動化涂片/染色技術(shù)（夾層杯法）gothenburgJOURNALOFCLINICALMICROBIOLOGY,Jan.2011年英國NICE指南、2010年美國最新結(jié)核診療指南、2010年加拿大結(jié)核指南（優(yōu)選）結(jié)核病的實驗室診斷技術(shù)及應(yīng)用三、結(jié)核DNA檢測技術(shù)Msmegmatis顯色目測或SYBRGreenI等熒光染料不能區(qū)分是活動性和潛伏性結(jié)核求禁止將血清學(xué)檢測方法（抗原，抗體，蛋白芯片等）用TB—SAT檢測技術(shù)Mcrofulaceum美國CDC推薦—卡介苗（BCG）接種人群結(jié)核感染檢測首選2011年英國NICE指南、2010年美國最新結(jié)核診療指南、2010年加拿大結(jié)核指南—無其它結(jié)核患病證據(jù)復(fù)診患者報陽時間(d)實驗效果圖陰性結(jié)果陽性結(jié)果空白對照抗原AESAT-6抗原BCFP10陽性對照（PHA）一個斑點=一個結(jié)核效應(yīng)淋巴細胞DNA需要一段時間降解實驗效果圖陰性結(jié)果陽性結(jié)果空白對照一個66T-SPOT結(jié)果的解讀-陽性結(jié)果活動性結(jié)核病

—典型結(jié)核中毒癥狀

—影像學(xué)支持

—排除其他診斷MTB感染狀態(tài)

—典型結(jié)核中毒癥狀

—未發(fā)現(xiàn)結(jié)核患病證據(jù)潛伏性結(jié)核感染

—無結(jié)核中毒癥狀

—無其它結(jié)核患病證據(jù)陳舊性結(jié)核

—無結(jié)核中毒癥狀

—既往TB史或明確TB證據(jù)NTM（四種）感染高孟秋，γ-干擾素釋放試驗檢測結(jié)果的臨床意義解讀，中華結(jié)核和呼吸雜志，2014T-SPOT結(jié)果的解讀-陽性結(jié)果活動性結(jié)核病潛伏性結(jié)核感染N67T-SPOT結(jié)果解讀-陰性結(jié)果除外結(jié)核感染

—所用抗原為MTB特異性抗原

—機體沒有結(jié)核特異抗原致敏的T淋巴細胞

—目前未感染結(jié)核分枝桿菌假陰性：感染階段不同（窗口期）少數(shù)免疫系統(tǒng)功能不全/基礎(chǔ)疾病的情況，如HIV感染者、腫瘤患者、嬰幼兒等特殊肺外結(jié)核：結(jié)核性腦膜炎、粟粒性結(jié)核靈敏度相對較低實驗非正常操作：細胞計數(shù)不夠等高孟秋，γ-干擾素釋放試驗檢測結(jié)果的臨床意義解讀，中華結(jié)核和呼吸雜志，2014T-SPOT結(jié)果解讀-陰性結(jié)果除外結(jié)核感染假陰性：高孟秋，68TSPOT的應(yīng)用優(yōu)點使用血液標本，取樣簡單；可用于肺內(nèi)和肺外結(jié)核檢測；陰性預(yù)測值很高，可用于排除結(jié)核感染。缺點陽性預(yù)測值約80%，不能用于結(jié)核的確診不能確定是否是肺結(jié)核（肺外）不能區(qū)分是活動性和潛伏性結(jié)核不能區(qū)分某些非結(jié)核分枝桿菌（堪薩斯、蘇氏、戈登、海分枝桿菌）操作復(fù)雜，時間長；對于原發(fā)感染初期或免疫低下人群，可能存在假陰性。能否療效監(jiān)測？——無大量數(shù)據(jù)TSPOT的應(yīng)用優(yōu)點使用血液標本，取樣簡單；可用于肺內(nèi)和肺外69

三、結(jié)核DNA檢測技術(shù)測序——金標準熒光定量PCR環(huán)介導(dǎo)恒溫擴增法（LAMP）基因芯片檢測鑒定技術(shù)基因XpertMTB/RIF檢測技術(shù)三、結(jié)核DNA檢測技術(shù)測序——金標準701.熒光定量PCR是應(yīng)用最為廣泛的TBDNA定量PCR檢測方法具有靈敏度高（10CFU/ml）、特異性強、線性關(guān)系好、操作簡單等優(yōu)點。1.熒光定量PCR是應(yīng)用最為廣泛的TBDNA定量PCR檢71

2.環(huán)介導(dǎo)恒溫擴增法（LAMP）

是在恒溫下進行PCR擴增，因此操作更為簡便，反應(yīng)更加快速。65℃擴增40min即可用肉眼觀察結(jié)果。擴增陽性標本呈現(xiàn)綠色熒光，反之為陰性。是結(jié)核分枝桿菌DNA檢測技術(shù)的代表靈敏、快速、特異、簡捷將會極大地推動結(jié)核病的防治工作2.環(huán)介導(dǎo)恒溫擴增法（LAMP）

是在恒溫下進行P72DNA檢測LAMP結(jié)果判讀：顯色目測或SYBRGreenI等熒光染料DNA檢測LAMP結(jié)果判讀：73LAMP法和其他PCR法的比較LAMP法和其他PCR法的比較74LAMP法在結(jié)核菌檢測中的應(yīng)用臨床試驗——

LAMP法和對照試劑（BD快速培養(yǎng)）對比結(jié)果靈敏度＝89.54%陽性結(jié)果預(yù)期值＝98.13%特異性＝98.93%陰性結(jié)果預(yù)期值＝93.77%總符合率＝95.31%LAMP法在結(jié)核菌檢測中的應(yīng)用臨床試驗——LAMP法和對照7576

JournalofClinicalMicrobiology.2010,48(10):3654–3660.結(jié)核

胞內(nèi)通量：可同時檢測16-22種常見分枝桿菌速度：6小時靈敏度：103CFU/ml可自動或肉眼判讀結(jié)果

3.基因芯片檢測技術(shù)26JournalofClinicalMicro76檢測全程僅需6小時檢測全程僅需6小時77MSM恥垢分枝桿菌MTC結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群MTR次要分枝桿菌MIN胞內(nèi)分枝桿菌MAV鳥分枝桿菌MGA胃分枝桿菌MKA堪薩斯分枝桿菌MSC瘰癘分枝桿菌MUA母牛分枝桿菌MCH龜分枝桿菌龜亞種MAB龜分枝桿菌膿腫亞種MSZ蘇爾加分枝桿菌MMA海/潰瘍分枝桿菌MXE蟾蜍分枝桿菌MDI迪氏分枝桿菌MFO偶發(fā)/豬分枝桿菌MGI淺黃分枝桿菌MSI猿猴分枝桿菌MTE土分枝桿菌MPH草分枝桿菌CC質(zhì)控點MNO不產(chǎn)色分枝桿菌MGO戈登分枝桿菌同時鑒定MTC與21種NTMMSM恥垢分枝桿菌MTC結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群MTR次要分枝桿78擴增陽性標本呈現(xiàn)綠色熒光，反之為陰性。多數(shù)研究報告提示：耐藥的發(fā)生與結(jié)核桿菌的基因突變有關(guān)。蔡杏珊,馬品云,張院良，譚耀駒

中國防癆雜志,2014,36(6):458-461不能區(qū)分某些非結(jié)核分枝桿菌（堪薩斯、蘇氏、戈登、海分枝桿菌）—無其它結(jié)核患病證據(jù)TB-SAT顯著提高結(jié)核分枝桿菌的陽性檢出率，對早期發(fā)現(xiàn)傳染性肺結(jié)核患者，控制結(jié)核病傳染源有極其重要的意義是在恒溫下進行PCR擴增，因此操作更為簡便，反應(yīng)更加快速。耐藥分子診斷檢測的靈敏度：103CFU/ml一個斑點=一個結(jié)核效應(yīng)淋巴細胞1%(297/306)2009更新關(guān)于分子診斷技術(shù)在TB實驗室診斷的指南50-70%katG基因突變擴增陽性標本呈現(xiàn)綠色熒光，反之為陰性。TB是采用γ干擾素釋放試驗（IGRA）原理，獲得美國FDA認證、歐盟CE認證和首個中國CFDA認證的商業(yè)化產(chǎn)品優(yōu)點使用血液標本，取樣簡單；環(huán)介導(dǎo)恒溫擴增法（LAMP）GABRIELLEM.固液體培養(yǎng)（時間、生物安全等）——LAMP法和對照試劑（BD快速培養(yǎng)）對比結(jié)果DNA需要一段時間降解非結(jié)核分枝桿菌（NTM）：4.XpertMTB/RIF檢測技術(shù)

擴增陽性標本呈現(xiàn)綠色熒光，反之為陰性。4.XpertMT79GeneXpert應(yīng)用1、TB復(fù)合群鑒定。2、利福平耐藥檢測。3、WHO推薦4、Xpert?MTB/RIF檢測試劑的陽性檢出率低于人們對分子生物學(xué)診斷試劑高敏感度的預(yù)期值，（1000CFU/ml）GeneXpert應(yīng)用80DNA用于臨床檢驗的不足“死菌檢測呈陽性”，與臨床相關(guān)性差不能區(qū)分“潛伏感染”“活動性感染”

易交叉污染

反應(yīng)易受抑制DNA用于臨床檢驗的不足“死菌檢測呈陽性”，與臨床相關(guān)性差81NASBA（國外）TMA（國外）SAT（國內(nèi)）四、常見的RNA檢測技術(shù)NASBA（國外）四、常見的RNA檢測技術(shù)82SAT技術(shù)是將核酸恒溫擴增和實時熒光檢測相結(jié)合的一種新型RNA檢測技術(shù)。TB—SAT檢測技術(shù)SAT技術(shù)是將核酸恒溫擴增和實時熒光83TB-RNA釋放恒溫擴增實時檢測超聲波（300W）15min痰液預(yù)處理42℃40min與反應(yīng)液混合60℃10min42℃5minTB-SAT操作流程50μl稀釋液全程2小時，會做PCR，就學(xué)的會SATTB-RNA釋放恒溫擴增超聲波（300W）痰液預(yù)處理42℃84TBSAT檢測技術(shù)優(yōu)點TBSAT檢測技術(shù)優(yōu)點85RNA診斷技術(shù)的優(yōu)勢靈敏度高：RNA≥DNA拷貝數(shù)與臨床相關(guān)性好：區(qū)分“死活菌”：

減少抗生素濫用可以診斷“活動性感染”：

活動性感染：RNA轉(zhuǎn)錄活躍

潛伏感染：RNA不轉(zhuǎn)錄不易污染：靶標和擴增產(chǎn)物都是RNARNA診斷技術(shù)的優(yōu)勢靈敏度高：RNA≥DNA拷貝數(shù)86TBSAT檢測區(qū)分MTB和NTM結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群（MTB）：人型結(jié)核分枝桿菌牛型結(jié)核分枝桿菌非洲型結(jié)核分枝桿菌非結(jié)核分枝桿菌（NTM）：研究表明，TB-SAT可以區(qū)分如下NTM：堪薩斯分枝桿菌、胞內(nèi)分枝桿菌、龜分枝桿菌、戈登分枝桿菌、海分枝桿菌等18種TBSAT檢測區(qū)分MTB和NTM結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群（MTB）87活菌檢測技術(shù)，可用作肺結(jié)核治療效果評估據(jù)文獻報道每個結(jié)核分枝桿菌含有約2000個拷貝rRNA研究表明rRNA與結(jié)核分枝桿菌的生活力有著很好的相關(guān)性，rRNA可以反映結(jié)核分枝桿菌的死菌活菌狀態(tài)研究表明在用藥治療期內(nèi)，隨著結(jié)核分枝桿菌的死亡，rRNA大約在7天左右時間全部降解。而DNA含量幾乎保持不變VIVIANJONAS,etal.JOURNALOFCLINICALMICROBIOLOGY,Sept.1993,p.2410-2416CLAUDIOPIERSIMONI,etal.JOURNALOFCLINICALMICROBIOLOGY,Jan.1997,p.193–196.GABRIELLEM.E.ANTIMICROBIALAGENTSANDCHEMOTHERAPY,Sept.1994,p.1959-1965

活菌檢測技術(shù)，可用作肺結(jié)核治療效果評估據(jù)文獻報道每個結(jié)核分枝88免疫法常有既往感染問題SAT更有利于治愈判斷窗口期時間示意相對濃度示意抗體RNADNA病原體感染前后各檢測靶標的含量變化死菌的RNA快速降解，有助治愈判斷用藥治療DNA需要一段時間降解RNA快速降解免疫法常有既往感染問題SAT更有利于治愈判斷窗口期時間示意相8965℃擴增40min即可用肉眼觀察結(jié)果。結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群（MTB）：同時鑒定MTC與21種NTM與臨床相關(guān)性好：區(qū)分“死活菌”：TB-SAT檢測體液、病灶組織標本的靈敏度GABRIELLEM.—既往TB史或明確TB證據(jù)結(jié)核病實驗室檢驗規(guī)程.耐藥分子診斷檢測的靈敏度：103CFU/ml2011年英國NICE指南、2010年美國最新結(jié)核診療指南、2010年加拿大結(jié)核指南四、常見的RNA檢測技術(shù)擴增陽性標本呈現(xiàn)綠色熒光，反之為陰性。減少抗生素濫用結(jié)核桿菌特異抗原：ESAT-6與CFP10BCGsubstrainT-SPOT結(jié)果解讀-陰性結(jié)果AssessmentofMycobacterialViabilitybyRNAAmplification.4、Xpert?MTB/RIF檢測試劑的陽性檢出率低于人們對分子生物學(xué)診斷試劑高敏感度的預(yù)期值，（1000CFU/ml）相比DNA,RNA檢測能更好的體現(xiàn)療效服用利福平和氧氟沙星后，第三天和第七天DNA和RNA的滴度變化，相比DNA,RNA與藥物濃度變化的符合率更高，RNA檢測能更好的進行療效評估。GABRIELLEM.E.Assessment

of

Mycobacterial

Viability

by

RNA

Amplification.ANTIMICROBIALAGENTSANDCHEMOTHERAPY,Sept.1994,p.1959-1965

DNARNA65℃擴增40min即可用肉眼觀察結(jié)果。相比DNA,RNA檢90SAT與培養(yǎng)的監(jiān)測結(jié)果一致，可應(yīng)用于療效評估監(jiān)測項目