外周血淋巴細(xì)胞微核檢測(cè)課件

外周血淋巴細(xì)胞微核檢測(cè)

佛山市中醫(yī)院檢驗(yàn)科陳海生外周血淋巴細(xì)胞微核檢測(cè)佛山市中醫(yī)院檢驗(yàn)科陳海生1概念：微核是位于細(xì)胞漿中獨(dú)立于主核的核小體主核完全脫離,直徑約為主核的1/20～1/3。形態(tài)是較規(guī)整的圓形或橢圓形小體。染色質(zhì)結(jié)構(gòu)與主核相似,邊緣光滑,染色同染色質(zhì)或稍淡,無(wú)明顯折光性。在生物、物理、化學(xué)等外界因素作用下,細(xì)胞染色體丟失或斷裂,在細(xì)胞分裂后期,這種染色體如果仍留在子細(xì)胞質(zhì)內(nèi),形成一個(gè)或幾個(gè)規(guī)則的次核,即為微核(衛(wèi)星核)概念：微核是位于細(xì)胞漿中獨(dú)立于主核的核小體主核完全2微核的形成微核形成與染色體斷裂、缺失,以及染色體畸變的發(fā)生高度相關(guān),檢測(cè)微核可以間接反映染色體受損情況。通常檢測(cè)微核反映機(jī)體所受環(huán)境誘變劑、致癌劑、X射線及其他有害因素所引起的染色體損傷程度微核的形成微核形成與染色體斷裂、缺失,以及染色體畸變的發(fā)生高3參數(shù)①微核人員檢出率:檢出淋巴細(xì)胞微核的人員占該組總?cè)藬?shù)的百分率。②微核陽(yáng)性檢出率:超出微核正常值上限的人數(shù)占該組總檢出人數(shù)百分率③微核細(xì)胞率:每1000個(gè)淋巴細(xì)胞中含微核的淋巴細(xì)胞數(shù)量④微核率:每1000個(gè)淋巴細(xì)胞的微核數(shù)量。后兩者均以千分率表示。參數(shù)①微核人員檢出率:檢出淋巴細(xì)胞微核的人員占該組總?cè)藬?shù)的百4方法一.淋巴細(xì)胞普通培養(yǎng)法二.微量血直接推片法三.明膠制片法方法一.淋巴細(xì)胞普通培養(yǎng)法5方法采取耳垂血0.1ml,肝素抗凝,與1/2量的3%明膠放入離心管中,加蓋混勻,垂直至于37oC水浴箱中自然沉降40分鐘左右。吸取上清液，注入離心管中，1000rpm/5分鐘，棄上清，取沉淀物推片，干后，甲醇固定1分鐘，瑞-姬氏染色10分鐘。方法采取耳垂血0.1ml,肝素抗凝,與1/2量的3%明膠6微核計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)：在油鏡下觀察1000個(gè)淋巴細(xì)胞，按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)確定微核，即微核大小為主核的1/20～1/3，與主核核膜完全分離，形態(tài)較規(guī)正，圓形或橢圓形，染色性與主核相似或稍淡，無(wú)明顯折光性。進(jìn)行以下指標(biāo)的檢測(cè)。微核計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)：在油鏡下觀察1000個(gè)淋巴細(xì)胞，按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)確7外周血淋巴細(xì)胞微核檢測(cè)在良性、癌前病變及惡性疾病中的意義目前惡性腫瘤的發(fā)生率逐年升高。惡性腫瘤是癌細(xì)胞的惡性克隆性異常,其發(fā)生與機(jī)體細(xì)胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)損傷有著密切關(guān)系。由于微核與染色體畸變高度相關(guān),近年來(lái)微核檢測(cè)在惡性疾病研究方面受到極大重視。外周血淋巴細(xì)胞微核檢測(cè)在良性、癌前病變及惡性疾病中的意義8國(guó)外研究-微核與惡性疾病國(guó)外新近研究顯示：未經(jīng)治療白血病患者的微核率明顯高于正常對(duì)照組,分別為:正常對(duì)照組(0.187±0.175)‰、急性淋巴細(xì)胞白血病(3.165±1.147)‰、急性髓系白血病(3.155±1.124)‰、慢性淋巴細(xì)胞白血病(3.103±1.105)‰。國(guó)外研究-微核與惡性疾病國(guó)外新近研究顯示：未經(jīng)治療白血病患者9國(guó)外研究-微核與惡性疾病據(jù)研究：提示白血病患者存在染色體斷裂、丟失等異常,表現(xiàn)為染色體不穩(wěn)定性改變,導(dǎo)致同位、臨位原癌基因激活,抑癌基因失活,而發(fā)生腫瘤。國(guó)外研究-微核與惡性疾病據(jù)研究：提示白血病患者存在染色體斷裂10國(guó)內(nèi)研究-微核與惡性疾病國(guó)內(nèi)研究報(bào)道：一組惡性實(shí)體腫瘤患者的淋巴細(xì)胞微核率明顯增高,超過(guò)正常對(duì)照組10倍以上。有專家立項(xiàng)“人類微核項(xiàng)目”(HUMN)的研究,針對(duì)日本、意大利、瑞典為主的實(shí)體腫瘤患者,其中包括肺、胃腸、肝膽、胰腺、乳腺腫瘤。結(jié)果顯示:高微核率與腫瘤發(fā)生高度相關(guān),膀胱癌與腎癌的相對(duì)危險(xiǎn)度(RR)可達(dá)8.123。國(guó)內(nèi)研究-微核與惡性疾病國(guó)內(nèi)研究報(bào)道：一組惡性實(shí)體腫瘤患者的11微核與惡性疾病反復(fù)地或長(zhǎng)期地處于致染色體突變環(huán)境下的高危人群,可發(fā)生染色體的異常。微核可以反映染色體的損傷,所以機(jī)體在致癌環(huán)境下可首先表現(xiàn)為微核率增多,這種異常的累積導(dǎo)致染色體突變,最終導(dǎo)致惡性腫瘤的發(fā)生。微核與惡性疾病12微核與惡性疾病因此,微核檢測(cè)可提前告知染色體可能發(fā)生畸變,警戒高危人群,脫離高危環(huán)境,防止繼續(xù)處于高危狀態(tài),最終出現(xiàn)染色體異常,導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。所以微核檢測(cè)的意義重在于預(yù)測(cè)和監(jiān)測(cè),具有早期預(yù)測(cè)篩查惡性疾病發(fā)生的重要意義。微核與惡性疾病因此,微核檢測(cè)可提前告知染色體可能發(fā)生畸變,警13微核與癌前病變動(dòng)物實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證實(shí),不論是成體或是胚胎期在出現(xiàn)惡性腫瘤前首先在血細(xì)胞或其他類型細(xì)胞中出現(xiàn)微核。微核先于癌前出現(xiàn),更早于臨床癥狀及體征。可以利用微核作為人體早期致癌危險(xiǎn)性的監(jiān)測(cè)。為癌癥及時(shí)發(fā)現(xiàn)與診斷、積極實(shí)行早期干預(yù)治療提供依據(jù)。微核與癌前病變動(dòng)物實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證實(shí),不論是成體或是胚胎期在出現(xiàn)惡14微核與MDS骨髓異常增生綜合征(MDS)是一組骨髓造血干/祖細(xì)胞克隆性異常疾病,臨床表現(xiàn)為一系或多系血細(xì)胞減少,骨髓或外周血細(xì)胞有病態(tài)造血,表現(xiàn)為同時(shí)或先后出現(xiàn)紅系、粒系和巨核系發(fā)育異常。其部分可以向白血病轉(zhuǎn)化,實(shí)際是血液系統(tǒng)的癌前病變。因此,骨髓異常增生綜合征的早期診斷及監(jiān)測(cè)其轉(zhuǎn)化具有重要意義。

微核與MDS骨髓異常增生綜合征(MDS)是一組骨髓造血15微核與MDS染色體異常是導(dǎo)致造血細(xì)胞異常的直接原因。MDS患者在診斷時(shí),40%～60%有染色體異常,隨著病程的進(jìn)展可高達(dá)80%?？傊?染色體異常在MDS中的RA或RARS發(fā)生率相對(duì)較低(15%～30%),而且多為單一異常;在RAEB或RAEBT的發(fā)生率高達(dá)45%～60%,而且多為復(fù)雜異常，并且隨著病程進(jìn)展,可出現(xiàn)異?？寺≡龆嗷虺霈F(xiàn)新的異常。微核與MDS染色體異常是導(dǎo)致造血細(xì)胞異常的直接原因。MDS患16微核與MDS骨髓造血干/祖細(xì)胞克隆性改變反映了病程演變是一個(gè)伴隨染色體異常的漸變過(guò)程。微核是滯留在細(xì)胞質(zhì)中的染色體斷片或染色單體。微核與MDS骨髓造血干/祖細(xì)胞克隆性改變反映了病程演變是一個(gè)17微核與MDS因此,微核是染色體畸變?cè)诩?xì)胞中的一種表現(xiàn)形式,它在一定程度上反映了機(jī)體染色體的損傷程度。近年來(lái)微核檢測(cè)在MDS方面的研究日益增多。微核與MDS因此,微核是染色體畸變?cè)诩?xì)胞中的一種表現(xiàn)形式,它18微核與MDS專家在對(duì)MDS患者中RA、RAS、RAEB和RAEBT各型的隨訪監(jiān)測(cè)中,發(fā)現(xiàn)MDS即將轉(zhuǎn)變?yōu)榘籽r(shí)微核率及微核細(xì)胞率顯著增高,可達(dá)到白血病水平。表明微核率增高,高度預(yù)示MDS向白血病轉(zhuǎn)化,達(dá)到一定水平時(shí),可以作為MDS轉(zhuǎn)化為白血病診斷指標(biāo)之一。微核與MDS專家在對(duì)MDS患者中RA、RAS、RAEB和RA19微核與MDS微核與MDS20微核與MDS微核與MDS21謝謝!謝謝!22外周血淋巴細(xì)胞微核檢測(cè)

佛山市中醫(yī)院檢驗(yàn)科陳海生外周血淋巴細(xì)胞微核檢測(cè)佛山市中醫(yī)院檢驗(yàn)科陳海生23概念：微核是位于細(xì)胞漿中獨(dú)立于主核的核小體主核完全脫離,直徑約為主核的1/20～1/3。形態(tài)是較規(guī)整的圓形或橢圓形小體。染色質(zhì)結(jié)構(gòu)與主核相似,邊緣光滑,染色同染色質(zhì)或稍淡,無(wú)明顯折光性。在生物、物理、化學(xué)等外界因素作用下,細(xì)胞染色體丟失或斷裂,在細(xì)胞分裂后期,這種染色體如果仍留在子細(xì)胞質(zhì)內(nèi),形成一個(gè)或幾個(gè)規(guī)則的次核,即為微核(衛(wèi)星核)概念：微核是位于細(xì)胞漿中獨(dú)立于主核的核小體主核完全24微核的形成微核形成與染色體斷裂、缺失,以及染色體畸變的發(fā)生高度相關(guān),檢測(cè)微核可以間接反映染色體受損情況。通常檢測(cè)微核反映機(jī)體所受環(huán)境誘變劑、致癌劑、X射線及其他有害因素所引起的染色體損傷程度微核的形成微核形成與染色體斷裂、缺失,以及染色體畸變的發(fā)生高25參數(shù)①微核人員檢出率:檢出淋巴細(xì)胞微核的人員占該組總?cè)藬?shù)的百分率。②微核陽(yáng)性檢出率:超出微核正常值上限的人數(shù)占該組總檢出人數(shù)百分率③微核細(xì)胞率:每1000個(gè)淋巴細(xì)胞中含微核的淋巴細(xì)胞數(shù)量④微核率:每1000個(gè)淋巴細(xì)胞的微核數(shù)量。后兩者均以千分率表示。參數(shù)①微核人員檢出率:檢出淋巴細(xì)胞微核的人員占該組總?cè)藬?shù)的百26方法一.淋巴細(xì)胞普通培養(yǎng)法二.微量血直接推片法三.明膠制片法方法一.淋巴細(xì)胞普通培養(yǎng)法27方法采取耳垂血0.1ml,肝素抗凝,與1/2量的3%明膠放入離心管中,加蓋混勻,垂直至于37oC水浴箱中自然沉降40分鐘左右。吸取上清液，注入離心管中，1000rpm/5分鐘，棄上清，取沉淀物推片，干后，甲醇固定1分鐘，瑞-姬氏染色10分鐘。方法采取耳垂血0.1ml,肝素抗凝,與1/2量的3%明膠28微核計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)：在油鏡下觀察1000個(gè)淋巴細(xì)胞，按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)確定微核，即微核大小為主核的1/20～1/3，與主核核膜完全分離，形態(tài)較規(guī)正，圓形或橢圓形，染色性與主核相似或稍淡，無(wú)明顯折光性。進(jìn)行以下指標(biāo)的檢測(cè)。微核計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)：在油鏡下觀察1000個(gè)淋巴細(xì)胞，按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)確29外周血淋巴細(xì)胞微核檢測(cè)在良性、癌前病變及惡性疾病中的意義目前惡性腫瘤的發(fā)生率逐年升高。惡性腫瘤是癌細(xì)胞的惡性克隆性異常,其發(fā)生與機(jī)體細(xì)胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)損傷有著密切關(guān)系。由于微核與染色體畸變高度相關(guān),近年來(lái)微核檢測(cè)在惡性疾病研究方面受到極大重視。外周血淋巴細(xì)胞微核檢測(cè)在良性、癌前病變及惡性疾病中的意義30國(guó)外研究-微核與惡性疾病國(guó)外新近研究顯示：未經(jīng)治療白血病患者的微核率明顯高于正常對(duì)照組,分別為:正常對(duì)照組(0.187±0.175)‰、急性淋巴細(xì)胞白血病(3.165±1.147)‰、急性髓系白血病(3.155±1.124)‰、慢性淋巴細(xì)胞白血病(3.103±1.105)‰。國(guó)外研究-微核與惡性疾病國(guó)外新近研究顯示：未經(jīng)治療白血病患者31國(guó)外研究-微核與惡性疾病據(jù)研究：提示白血病患者存在染色體斷裂、丟失等異常,表現(xiàn)為染色體不穩(wěn)定性改變,導(dǎo)致同位、臨位原癌基因激活,抑癌基因失活,而發(fā)生腫瘤。國(guó)外研究-微核與惡性疾病據(jù)研究：提示白血病患者存在染色體斷裂32國(guó)內(nèi)研究-微核與惡性疾病國(guó)內(nèi)研究報(bào)道：一組惡性實(shí)體腫瘤患者的淋巴細(xì)胞微核率明顯增高,超過(guò)正常對(duì)照組10倍以上。有專家立項(xiàng)“人類微核項(xiàng)目”(HUMN)的研究,針對(duì)日本、意大利、瑞典為主的實(shí)體腫瘤患者,其中包括肺、胃腸、肝膽、胰腺、乳腺腫瘤。結(jié)果顯示:高微核率與腫瘤發(fā)生高度相關(guān),膀胱癌與腎癌的相對(duì)危險(xiǎn)度(RR)可達(dá)8.123。國(guó)內(nèi)研究-微核與惡性疾病國(guó)內(nèi)研究報(bào)道：一組惡性實(shí)體腫瘤患者的33微核與惡性疾病反復(fù)地或長(zhǎng)期地處于致染色體突變環(huán)境下的高危人群,可發(fā)生染色體的異常。微核可以反映染色體的損傷,所以機(jī)體在致癌環(huán)境下可首先表現(xiàn)為微核率增多,這種異常的累積導(dǎo)致染色體突變,最終導(dǎo)致惡性腫瘤的發(fā)生。微核與惡性疾病34微核與惡性疾病因此,微核檢測(cè)可提前告知染色體可能發(fā)生畸變,警戒高危人群,脫離高危環(huán)境,防止繼續(xù)處于高危狀態(tài),最終出現(xiàn)染色體異常,導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。所以微核檢測(cè)的意義重在于預(yù)測(cè)和監(jiān)測(cè),具有早期預(yù)測(cè)篩查惡性疾病發(fā)生的重要意義。微核與惡性疾病因此,微核檢測(cè)可提前告知染色體可能發(fā)生畸變,警35微核與癌前病變動(dòng)物實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證實(shí),不論是成體或是胚胎期在出現(xiàn)惡性腫瘤前首先在血細(xì)胞或其他類型細(xì)胞中出現(xiàn)微核。微核先于癌前出現(xiàn),更早于臨床癥狀及體征?？梢岳梦⒑俗鳛槿梭w早期致癌危險(xiǎn)性的監(jiān)測(cè)。為癌癥及時(shí)發(fā)現(xiàn)與診斷、積極實(shí)行早期干預(yù)治療提供依據(jù)。微核與癌前病變動(dòng)物實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證實(shí),不論是成體或是胚胎期在出現(xiàn)惡36微核與MDS骨髓異常增生綜合征(MDS)是一組骨髓造血干/祖細(xì)胞克隆性異常疾病,臨床表現(xiàn)為一系或多系血細(xì)胞減少,骨髓或外周血細(xì)胞有病態(tài)造血,表現(xiàn)為同時(shí)或先后出現(xiàn)紅系、粒系和巨核系發(fā)育異常。其部分可以向白血病轉(zhuǎn)化,實(shí)際是血液系統(tǒng)的癌前病變。因此,骨髓異常增生綜合征的早期診斷及監(jiān)測(cè)其轉(zhuǎn)化具有重要意義。

微核與MDS骨髓異常增生綜合征(MDS)是一組骨髓造血37微核與MDS染色體異常是導(dǎo)致造血細(xì)胞異常的直接原因。MDS患者在診斷時(shí),40%～60%有染色體異常,隨著病程的進(jìn)展可高達(dá)80%?？傊?染色體異常在MDS中的RA或RARS發(fā)生率相對(duì)較低(15%～30%),而且多為單一異常;在RAEB或RAEBT的發(fā)生率高達(dá)45%～60%,而且多為復(fù)雜異常，并且隨著病程進(jìn)展,可出現(xiàn)異?？寺≡龆嗷虺霈F(xiàn)新的異常。微核與MDS染色體異常是導(dǎo)致造血細(xì)胞異常的直接原因。MDS患38微核與MDS骨髓造血干/祖細(xì)胞克隆性改變反映了病程演變是一個(gè)伴隨染色體異常的漸變過(guò)程。微核是滯留在細(xì)胞質(zhì)中的染色體斷片或染色單體。微核與MDS骨髓造血干/祖細(xì)胞克隆性改變反映了病程演變是一個(gè)39微核與MDS因此,微核是染色體畸變?cè)诩?xì)胞中的一種表現(xiàn)形式,它在一定程度