艾滋病實驗室的質(zhì)量管理

（優(yōu)選）艾滋病實驗室的質(zhì)量管理第一頁，共五十七頁。一、質(zhì)量保證(QA）質(zhì)量保證是指從接收樣本起，到實驗室發(fā)出報告止，為確保實驗室最終報告結(jié)果的正確性所進行的全過程，包括采取各種行政和技術上的措施和方法。第二頁，共五十七頁。行政支持（行政部門關心實驗室發(fā)展、建設，人員穩(wěn)定，足夠經(jīng)費）人員培訓（新人員上崗前培訓獲得合格證書，接受復訓，篩查實驗室人員至少2年一次。檢測人員應分為檢驗人、復核人、簽發(fā)人。復核人和簽發(fā)人應具備對檢測過程進行分析和解決問題的能力）環(huán)境條件（實驗室設置、建筑、設備符合要求）標本采集、運送和處理檢測方法和試劑的選擇設備維護與校準（酶標儀、移液器、高壓滅菌器、溫度計等）文件和文件管理第三頁，共五十七頁。檢測方法和試劑的選擇使用經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準的試劑，選擇敏感性高，特異性好的，根據(jù)參比室組織的國家級艾滋病診斷試劑臨床質(zhì)量評價各實驗室更換試劑批號時，應進行平行試驗所有試劑盒要嚴格按照要求條件保存。第四頁，共五十七頁。設備維護與校準第五頁，共五十七頁。目前常用的艾滋病檢測設備類安全類：生物安全柜、洗眼器、普通冰箱、超低溫冰箱、高壓滅菌器。檢測類：微量加樣器、搖擺平臺、全自動蛋白印跡儀、普通離心機、震蕩器、移液器、恒溫水浴、酶標儀+洗板機、病毒載量儀、流式細胞儀其它：計算機、空調(diào)第六頁，共五十七頁。規(guī)范化管理的意義遵照《全國艾滋病檢測技術規(guī)范》、《全國艾滋病檢測工作管理辦法》。檢測質(zhì)量保證延長設備的使用時間便于設備的管理節(jié)約資源第七頁，共五十七頁。HIV實驗室的設備維護日常維護定期檢定和校準第八頁，共五十七頁。設備對環(huán)境的普通要求電源：電壓一定要匹配，插線板合適，專用的.經(jīng)常停電或電壓不穩(wěn)的實驗室，建議配備穩(wěn)壓器和不間斷電源環(huán)境：清潔，溫、濕度合適良好通風長時間不用的設備，注意特別容易壞第九頁，共五十七頁。酶標儀第十頁，共五十七頁。移液器的檢定一年至少檢定一次需檢定的原因-經(jīng)常使用-要求高的準確性第十一頁，共五十七頁。超低溫冰箱定期清理灰塵過濾器（建議每月一次）

第十二頁，共五十七頁。超低溫冰箱注意事項要求環(huán)境溫度控制在28度以下空間的清潔穩(wěn)定的電源供應不宜放得太擠第十三頁，共五十七頁。生物安全柜HEPA-過濾裝置容納有害生物氣體。需提供人員保護也為產(chǎn)品提供保護(按等級而定)二級生物安全柜第十四頁，共五十七頁。生物安全柜的維護每年檢定一次安全柜保持所有操作在窗扇4英寸以內(nèi)清潔物質(zhì)和污染物隔離開，減少相互干擾使用后及時清理柜內(nèi)不宜放太多的物品，不能儲藏化學物質(zhì)第十五頁，共五十七頁。離心機的維護第十六頁，共五十七頁。轉(zhuǎn)頭、套桶第十七頁，共五十七頁。使用離心機的注意事項離心力、離心速度平穩(wěn)的儀器臺不用時，松轉(zhuǎn)頭；使用時，擰緊轉(zhuǎn)子保持平衡使用安全：蓋子要嚴使用后要擦干或開蓋至晾干防止液體泄漏到腔內(nèi)第十八頁，共五十七頁。高壓滅菌器第十九頁，共五十七頁。滅菌器的維護壓力表需要定期檢驗（一年兩次）等氣壓和溫度下降到正常后,再開閥高壓時,放入指示紙,以便判定滅菌效果第二十頁，共五十七頁。設備的檢定和校準

對檢驗的準確性和有效性有影響的儀器設備必須進行檢定和校準。

有國家計量檢定規(guī)程的儀器設備，由法定計量檢定機構(gòu)或經(jīng)計量行政部門授權的技術機構(gòu)進行檢定；

沒有國家檢定規(guī)程的，可以由廠家、自行檢定和校準。第二十一頁，共五十七頁。制訂儀器設備檢定計劃。經(jīng)檢定的儀器設備校驗結(jié)果貼上標志：合格標志為綠色、準用標志為黃色、停用標志為紅色。凡檢定不合格或超過檢定有效期的儀器設備，一律不得用于檢驗工作。對超過檢定期，但暫時不用的儀器設備，貼上停用標志。

第二十二頁，共五十七頁。強制檢定的工作計量器具目錄

HIV檢測強制檢定儀器：加樣器、酶標儀、溫度計、高壓滅菌器

第二十三頁，共五十七頁。強制檢定的周期，由執(zhí)行強制檢定的計量檢定機構(gòu)根據(jù)計量檢定規(guī)程確定。

屬于強制檢定的工作計量器具，未按照本辦法規(guī)定申請檢定或者經(jīng)檢定下合格的，任何單位或者個人不得使用。

第二十四頁，共五十七頁。文件及文件管理

1.標準操作程序

(SOP)

2.實驗原始記錄表

3.結(jié)果報告

4.樣品登記和保存

5.文件存檔

第二十五頁，共五十七頁。

1.標準操作程序

(SOP)

艾滋病檢測實驗室要建立覆蓋主要工作內(nèi)容的SOP文件。

SOP由各崗位工作人員起草，實驗室主任審定，并應定期修訂。修訂應該在實驗室主管人員的領導下進行，每年至少一次。所有工作人員要在所從事工作的SOP文件上簽名表示已經(jīng)閱讀并掌握了有關內(nèi)容。.第二十六頁，共五十七頁。艾滋病檢測實驗室應建立以下SOP1、樣品的接收、登記、處理、保存和運輸2、檢測方法和步驟3、試劑使用方法和保存4、儀器的使用維護和校準5、實驗中的質(zhì)量控制要求及程序6、結(jié)果解釋與報告7、保密程序8、實驗室數(shù)據(jù)、相關文件記錄與保存9、不確定樣本的追蹤和處理10、實驗室安全防護及實驗室的的清理和消毒11、職業(yè)暴漏第二十七頁，共五十七頁。SOP通常包括以下內(nèi)容（1）標題和編號（2）編寫和修改日期（3）編寫和修訂人員姓名（4）方法、目的和應用范圍（5）相應的職業(yè)規(guī)范（6）檢測設備和試劑（7）安全防護相關步驟（8）結(jié)果的解釋和報告（9）附錄（包括相關的附加文件如標準表格、設備和試劑盒說明書等。）

第二十八頁，共五十七頁。寫你所做的做你所寫的第二十九頁，共五十七頁。2、實驗原始記錄表

應按實驗要求，設計操作的原始記錄表，標明空白對照、陽性對照、陰性對照、外部對照以及待檢樣品的位置，便于指導實驗人員加樣。要注明試劑廠家、測定方法、批號、有效期、操作人員和復核人員姓名及檢測日期。

第三十頁，共五十七頁。ELISA原始記錄快速原始記錄表實驗室樣本交接記錄08高壓滅菌器.實驗室所有設備的使用記錄和維護記錄第三十一頁，共五十七頁。

3、結(jié)果報告分析結(jié)果及發(fā)出檢測報告前，應注意須在試劑盒及外部質(zhì)控結(jié)果滿足要求的前提下，對樣品進行分析。試劑盒及外部質(zhì)控不合格，樣品需要重新檢測復核人對檢測結(jié)果進行仔細復核并對結(jié)果提出結(jié)論簽發(fā)人對試驗結(jié)論進行審核、分析、總結(jié)、簽字第三十二頁，共五十七頁。4、樣品登記和保存

收到樣品后，建立唯一編碼，及時登記有關信息，包括受檢者姓名或代號、試管編號、性別、職業(yè)、送檢單位、人群類別、檢測結(jié)果、送檢日期、報告日期、通訊地址第三十三頁，共五十七頁。5、文件存檔

實驗原始記錄表、打印數(shù)據(jù)、膜反應條帶或其照片、檢測記錄表、標本登記、標本保存記錄以及儀器設備維修和校準記錄等都應該妥善存檔保存10年以上。最好同時使用計算機保存各種文件和記錄。

第三十四頁，共五十七頁。二、質(zhì)量控制(QC)p15

質(zhì)量控制是指為確保實驗工作正常進行而在每一步實驗過程中必須采取的各種措施。是對檢驗結(jié)果的即時性評價，通過對質(zhì)控結(jié)果的連續(xù)觀察，監(jiān)測實驗室結(jié)果的精密性。第三十五頁，共五十七頁。

（一）抗體檢測的統(tǒng)計學室內(nèi)質(zhì)量控制

在所有實驗中必須包含有試劑盒內(nèi)部對照質(zhì)控血清和室內(nèi)質(zhì)控品（外部對照質(zhì)控血清）。1、試劑盒內(nèi)部對照質(zhì)控品即為試劑盒內(nèi)提供的陽性和陰性對照血清。試劑盒內(nèi)部對照用于判斷每次實驗的有效性，但不能做為室內(nèi)質(zhì)控品使用。內(nèi)部對照是質(zhì)量控制的基礎。每一次檢測必須使用內(nèi)部對照，而且只能在同批號的試劑盒中使用。內(nèi)部對照結(jié)果無效必須重新實驗。

第三十六頁，共五十七頁。2、室內(nèi)質(zhì)控品（外部對照）為非試劑盒組份的外部質(zhì)控品，是為了監(jiān)控檢測的重復性而設置的，包括強陽性、弱陽性和陰性質(zhì)控血清。也可以只設置一個弱陽性質(zhì)控，以該試劑盒臨界值（cutoff）的2-3倍為宜。外部質(zhì)控品的作用是，判斷該批臨床樣本檢測的有效性，因此，每次實驗必須包含室內(nèi)質(zhì)控品，其結(jié)果無效，必須重新實驗。室內(nèi)質(zhì)控品可以是商品或?qū)嶒炇易孕兄苽涞谌唔?，共五十七頁。室?nèi)質(zhì)控品的保存

（1）按一周實驗用量分裝、分類、標記、封口、-20℃凍存。

（2）外部對照血清不可反復凍融，一旦融化后應該存放2-8℃，一周內(nèi)使用。第三十八頁，共五十七頁。3、室內(nèi)質(zhì)控品的使用每一次實驗必須使用室內(nèi)質(zhì)控品，以便監(jiān)控實驗的重復性。同時可以了解各批試劑盒的批間差異或孔間差異，繪制質(zhì)量控制圖。

第三十九頁，共五十七頁。統(tǒng)計室內(nèi)質(zhì)控的主要方法----

建立質(zhì)控圖最常用的質(zhì)控圖是Levey-Jennings質(zhì)控圖，該圖使用累計和技術或趨勢分析技術的圖形提供系統(tǒng)偏移和漂移的狀況。下面以ELISA方法檢測HIV抗體為例，描述建立質(zhì)控圖步驟：第四十頁，共五十七頁。（二）質(zhì)控圖的建立及應用

1.建立質(zhì)控圖參數(shù)2.繪制質(zhì)控圖3.質(zhì)控圖的判斷和分析4.繪制和分析質(zhì)控圖的要點5.變異系數(shù)（CV）分析6.灰區(qū)

第四十一頁，共五十七頁。1、建立質(zhì)控圖參數(shù)

（1）算術平均值(x)代表一組S/CO值的平均值。為了統(tǒng)計學上有顯著性意義，應該采用至少20次(天)所測得的外部對照質(zhì)控血清S/CO值結(jié)果計算出平均值。（2）標準差(s)是描述樣本與均數(shù)之間離散程度的一個指標，是與對照值的均值有關的預期范圍。一組S/CO值的標準差以s表示。

第四十二頁，共五十七頁。

（3）控制限：外部對照S/CO值的±2s

（4）變異系數(shù)(cv)，是反映各次S/CO值相對于均值離散程度的一個指標，可以用來衡量檢測的重復性或精密度。

第四十三頁，共五十七頁。計算公式為：

Σx

x=──

n

s

計算公式為：───────

∑(xn-x)2

s=───────

n-1

cv

計算公式為：

s

cv=──x100%

x

第四十四頁，共五十七頁。2、繪制質(zhì)控圖

質(zhì)控圖是把檢測數(shù)據(jù)與計算出的“控制限”進行比較的圖，包含一條中心橫線和其上、下兩條平行的控制線，并有按時間順序點入的質(zhì)控血清測定值。

第四十五頁，共五十七頁。質(zhì)控圖的繪制步驟是

（1）在常規(guī)條件下，對同一批血清連續(xù)測定20次（天）或以上，獲得一組S/CO值，求均數(shù)(x)和標準差(s),超出2s或3s的數(shù)據(jù)不應刪除。

（2）將均值(x)和標準差(s)分別在質(zhì)控框架圖中標示出來。以S/CO值作縱座標(Y軸)，每一次(天)試驗作橫座標(x軸)，繪制質(zhì)控圖。

第四十六頁，共五十七頁。 （3）從第21次起，將每次檢測的質(zhì)控血清的結(jié)果依次點入該質(zhì)控框架圖中，檢驗進入質(zhì)控狀態(tài)。

第四十七頁，共五十七頁。質(zhì)控圖第四十八頁，共五十七頁。3、質(zhì)控圖的判定和分析

（1）告警：外部對照的S/CO值超出±2s，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應予以注意，是否可以繼續(xù)檢測需要進一步觀察。

(2)失控：外部對照的S/CO值超出±3s，稱為失控，則本次實驗結(jié)果不能被接受?？赡苁窍到y(tǒng)誤差或外部對照滴度下降造成。

（3）移漂：連續(xù)幾個（3-5次）外部對照S/CO值都落在均值的一側(cè)則稱為位移，提示實驗條件發(fā)生了較大的變化。應重新繪制質(zhì)控圖。

（4）趨勢：連續(xù)幾個（5-7個）外部對照質(zhì)控血清S/CO值幾乎按一個方向分布時稱為趨勢，通常由參數(shù)的緩慢改變引起。

第四十九頁，共五十七頁。4、繪制和分析質(zhì)控圖的要點

（1）要在最佳條件下建立質(zhì)控圖參數(shù)。

（2）用S/CO比值繪制質(zhì)控圖。

（3）由專人負責建立質(zhì)控圖，每月定期召開質(zhì)控分析會，討論本月的質(zhì)量控制情況。每次檢測之前都應了解質(zhì)控結(jié)果。

（4）建議長期和穩(wěn)定地使用一種質(zhì)量好的試劑盒。

第五十頁，共五十七頁。（5）更換不同廠家的試劑盒后，必須重新繪制質(zhì)控圖。改用新批號試劑盒如結(jié)果偏離較大也應重新制作質(zhì)控圖。使用新批號或不同廠家的試劑盒必須在質(zhì)控圖上注明使用日期。

（6）如發(fā)現(xiàn)質(zhì)控值劇烈位移或失控，應填寫報告單，上交質(zhì)量負責人，分析原因并決定是否發(fā)出檢測報告。

（7）使用新批次的外部對照質(zhì)控血清時，必須重新繪制質(zhì)控圖。

（8）及時發(fā)現(xiàn)質(zhì)控結(jié)果失