液質(zhì)聯(lián)用操作規(guī)程完整

WORD格式整理液質(zhì)聯(lián)用儀操作規(guī)程第1頁(yè)共8頁(yè)SOP?I-Xevo-TQSFSIDC1.適用范圍本設(shè)備配備ACQUITYUPLC液相色譜儀、TQSMS/MS質(zhì)譜儀，適用于食品、藥品中各種有機(jī)物的定性、定量分析，是一種具有高靈敏度的檢測(cè)儀器，儀器由主機(jī)、計(jì)算機(jī)和數(shù)據(jù)處理軟件等組成。.職責(zé)操作人員按照本規(guī)程操作儀器，認(rèn)真填寫(xiě)實(shí)驗(yàn)使用記錄。保管人員負(fù)責(zé)對(duì)儀器進(jìn)行定期維護(hù)和保養(yǎng)?？剖邑?fù)責(zé)人負(fù)責(zé)監(jiān)督檢查規(guī)程的執(zhí)行。.操作程序日常操作步驟：準(zhǔn)備UPLC ?設(shè)置樣品表 ?運(yùn)行樣品 ?定量 ?打印報(bào)告。注：如果一個(gè)星期內(nèi)不運(yùn)行樣品請(qǐng)不要關(guān)質(zhì)譜儀，使其保持真空。建立新方法和project的操作步驟：準(zhǔn)備UPLC--?建立新的project--?用標(biāo)準(zhǔn)品調(diào)諧一-?編輯質(zhì)譜方法一-?編輯UPLC方法 ?設(shè)置樣品表 ?運(yùn)行樣品 ?定量 ?打印報(bào)告。開(kāi)機(jī)：徹底開(kāi)機(jī)順序（儀器已關(guān)閉）確定MS及其它儀器電源電纜已連接，開(kāi)氮?dú)獍l(fā)生器、開(kāi)氬氣，小表<0.1mpa。打開(kāi)計(jì)算機(jī)電源>等待windows正常啟動(dòng)>電腦界面右下角網(wǎng)絡(luò)圖標(biāo)紅叉。打開(kāi)UPLC自動(dòng)進(jìn)樣器電源，等到電腦界面右下角網(wǎng)絡(luò)圖標(biāo)出現(xiàn)感嘆號(hào)！。打開(kāi)UPLC泵電源，等約30s或者是有響聲。打開(kāi)質(zhì)譜電源，等待5min,離子源透視鏡里面亮。打開(kāi)Masslynx軟件，masslynx主界面 左側(cè)instrument Masstune 界面菜單欄vacuum pump同樣界面左側(cè)偏上diagnostics vacuum analyserMS1turbospeed[%]要在5分鐘內(nèi)升到80。至少抽真空4個(gè)小時(shí)>查看真空狀態(tài)主界面massconsole 界面左側(cè)xevotqmsdetector加號(hào)展開(kāi)msdisplay>碰撞室真空度>達(dá)專業(yè)知識(shí)分享WORD格式整理液質(zhì)聯(lián)用儀操作規(guī)程第2頁(yè)共8頁(yè)SOP?I-Xevo-TQSFSIDC至7.xe-5mbar。日常開(kāi)機(jī)順序（儀器未關(guān)閉）開(kāi)氮?dú)獍l(fā)生器、開(kāi)氬氣，小表<0.1mpa,打開(kāi)Masslynx軟件，進(jìn)入工作站。建立項(xiàng)目點(diǎn)擊file下的projectwizard,出現(xiàn)對(duì)話框，單擊yes出現(xiàn)對(duì)話框，輸入project,location為C:\MSDATA,單擊next,選擇createexistingprojectastemplate,并以c:\masslynx\為模板，單擊finish.點(diǎn)擊OK。準(zhǔn)備UPLC系統(tǒng)準(zhǔn)備液相的一般流程：準(zhǔn)備流動(dòng)相〉準(zhǔn)備樣品>灌注二元泵>灌注自動(dòng)進(jìn)樣器>建立液相方法〉平衡液相準(zhǔn)備流動(dòng)相用0.22um的膜過(guò)濾緩沖液，所有的緩沖液和超純水都要新配制，超純水和緩沖液使用不得超過(guò)二天，緩沖鹽一定要是可揮發(fā)的，而且濃度不要大于10mM。樣品要求所有樣品都要用流動(dòng)相初始梯度比例的溶劑來(lái)溶解，并用0.22um的膜過(guò)濾。注二元泵在Masslynx主界面，單擊MSConsole,進(jìn)入U(xiǎn)PLC交互顯示界面，點(diǎn)擊左欄AcquityUPLCSystem>Control>StartUpSystem，單擊QSM,選擇需要用到的流動(dòng)相位置，如A和B,選擇sealwash,時(shí)間設(shè)為3分鐘。單擊SM,選擇StrongWash5cycles,Samplesyringe20單擊EquilibratetoMethod,將流速設(shè)為0，單擊Start開(kāi)始灌注.時(shí)間大約為9min左右。設(shè)定流速，平衡液相在Masslynx主界面，單擊InletMethod圖標(biāo)，打開(kāi)液相方法編輯窗口，單擊status>ACQUITYAdditionalStatus，進(jìn)入液相控制臺(tái)，單擊A或B或流速的位置，出現(xiàn)流速、比例設(shè)定對(duì)話框，設(shè)定液相流速與比例，單擊對(duì)勾，開(kāi)始平衡液相，如果后面要做調(diào)諧，可設(shè)定流速0.2ml/min,有機(jī)相與水相的比例為50:50。專業(yè)知識(shí)分享WORD格式整理液質(zhì)聯(lián)用儀操作規(guī)程第3頁(yè)共8頁(yè)SOP?I-Xevo-TQSFSIDC準(zhǔn)備質(zhì)譜.計(jì)算化合物單同位素質(zhì)量數(shù)Masslynx主界面》單擊Tools>MolecularWeightCalculator,輸入化合物的分子式（大寫(xiě)-注意Cl、Br等正確的輸入方法），注意選單同位素Monoiso,IonMode:離子化模式，+ve正離子，-ve負(fù)離子，單擊Calculateo用Intellistart進(jìn)行自動(dòng)調(diào)諧在Masslynx主界面單擊MSTune圖標(biāo)，打開(kāi)調(diào)諧窗口，單擊IonMode>ES+或ES-，單擊APIGas圖標(biāo)打開(kāi)氮?dú)?，單擊打開(kāi)高壓選擇MSMode圖標(biāo)，設(shè)定液相流速0.2ml/min,水：乙腈的比例為50:50。把標(biāo)準(zhǔn)品調(diào)諧液放入質(zhì)譜儀塑料瓶位置處的A（或B或C）號(hào)位（注：濃度在200ppb左右）單擊Fluidics,選擇Reservoir為A,FlowState為L(zhǎng)C模式，點(diǎn)擊Purge圖標(biāo)。Purge結(jié)束后，將FlowState改為Combine模式，設(shè)定Function為MS1scan,Mass為計(jì)算出化合物的質(zhì)量數(shù)，span為5,點(diǎn)擊進(jìn)樣，開(kāi)始進(jìn)樣，直到離子的響應(yīng)比較穩(wěn)定。保存調(diào)諧文件：File>SaveAs至已建的項(xiàng)目下。在Masslynx主界面，選擇MsConsole>XevoTQMSDetector選擇Intellistart，選擇SampleTuneandDevelopMethod,ES+單擊Start圖標(biāo)，出現(xiàn)Intellistart自動(dòng)調(diào)諧編輯窗口，選擇SwitchtoAdvancedmode，輸入Compoundname（化合物名稱），MolecularMass/Formula（分子量或分子式）AdductA+（[M+H]+,選擇LoadExistingSampleTune，在SampleTuneName方框后的“。。?！碧幷{(diào)用開(kāi)始保存的調(diào)諧文件，在DevelopMRMMethod前的方框打鉤，并在方框出輸入MRM方法的文件名，路徑為已建的項(xiàng)目下。在PrintReport前方框打鉤，ConeVoltage,CollisionEnergy處為默認(rèn)值，F(xiàn)luidics下的FlowPath選擇Combined模式，SampleReservoir和SampleFlowRate參數(shù)與Fuldics下Combined模式下的進(jìn)樣參數(shù)保持一致。單擊右邊的專業(yè)知識(shí)分享WORD格式整理Start開(kāi)始自動(dòng)調(diào)諧。調(diào)諧成功，會(huì)有綠勾出現(xiàn)，查看intellistart報(bào)告液質(zhì)聯(lián)用儀操作規(guī)程第4頁(yè)共8頁(yè)SOP?I-Xevo-TQSFSIDC查看intellistart中自動(dòng)生成的質(zhì)譜方法：從MassLynx主窗口，單擊MSMethod,出現(xiàn)MSMethod編輯對(duì)話框，選擇File>open,選擇Intellistart中保存的質(zhì)譜方法的文件，雙擊方法，如發(fā)現(xiàn)自動(dòng)調(diào)諧生產(chǎn)的質(zhì)譜方法中部分參數(shù)有誤，則可以在Channels窗口手動(dòng)修改參數(shù)，填寫(xiě)relentinonwindow中的end時(shí)間，此時(shí)間必須與液相色譜方法運(yùn)行時(shí)間保持一一致，選擇AutoDwell,單擊OK，點(diǎn)擊File>SaveAs,保存質(zhì)譜方法文件。建立液相方法編輯液相方法在液相方法編輯窗口，單擊Inlet，輸入溶劑名稱，runtime及梯度洗脫程序，梯度洗脫程序中最后階段時(shí)間必須與runtime符合，單擊OK,選擇File>SaveAs保存方法，單擊LoadMethod，平衡液相。建立樣品列表在Masslynx主窗口，選擇File>New建立一個(gè)空白的表samplelist。輸入文件名FileName，樣品信息FileText，雙擊MSFile，選擇質(zhì)譜方法，雙擊InletFile,選擇液相方法，在Bottle中輸入樣品瓶的位置，在InjectVolume中輸入進(jìn)樣體積，可右鍵〉A(chǔ)dd,增加樣品表的行數(shù)，保存樣品表：File>SaveAs。3.6數(shù)據(jù)采集和處理.選中要采集的樣品，單擊Run>Start,選擇AcquireSampleDataonly,，單擊OK開(kāi)始進(jìn)樣并采集。在采集過(guò)程中，可查看色譜圖，點(diǎn)擊Chromatogram窗口，點(diǎn)擊Real-timeUpdateicon.如果不能見(jiàn)整個(gè)TIC圖，單擊DefaultRange圖標(biāo)。如果方法中包括多個(gè)通道，可通過(guò)Display>Mass查看如果方法中包括多個(gè)檢測(cè)器或多個(gè)Function,可通過(guò)Display>TIC查看處理多個(gè)Function的數(shù)據(jù)專業(yè)知識(shí)分享WORD格式整理如果質(zhì)譜方法中有多個(gè)Function,如有三個(gè)Function,如想看第二個(gè)Function,MSScan的數(shù)據(jù)。液質(zhì)聯(lián)用儀操作規(guī)程第5頁(yè)共8頁(yè)SOP?I-Xevo-TQSFSIDC在色譜圖窗口，點(diǎn)擊Display>TIC,選中MSScan，選擇Addtrace,單擊OK。如想查第二個(gè)Function,DaughterScan質(zhì)譜圖，在色譜圖中，選擇Display>TIC,選擇ScanWaveDSAddtrace，單擊OK。.選擇Process>Combinespectra.分別用右鍵輸入信號(hào)和本底噪音.單擊OK.得到DaughterScan的質(zhì)譜圖，單擊Process>Smooth…，單擊OK。數(shù)據(jù)處理-外標(biāo)定量法在Masslynx主頁(yè)面單擊Targetlynx/Editmethod,出現(xiàn)定量方法編輯對(duì)話框，單擊新建方法圖標(biāo)，新建一個(gè)定量方法。單擊Addnewcompound（添加新的化合物）圖標(biāo)，添加一■個(gè)新的化合物。單擊菜單欄update,選中QuantitationIon和CompoundName（前面打勾）在Masslynx主頁(yè)面，打開(kāi)中等偏下低濃度標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖，Display/Masschromatogram選出要定量的化合物的離子對(duì)，一■般強(qiáng)度高的化合物用來(lái)做為定量離子，另一個(gè)離子對(duì)則作為確證離子，用鼠標(biāo)右鍵在定量離子對(duì)色譜圖上拉一下，貝compoundname,AcquisitionFunctionNumber,QuantificationTrace,PredictedRetentionTime和RetentionTimewindow將自動(dòng)輸入到定量方法中。注意：在色譜圖上拉的時(shí)候，要遵循兩個(gè)原則，拉的位置要以色譜峰的峰尖左右對(duì)稱，拉的寬度要超過(guò)峰的起點(diǎn)和終點(diǎn)。單擊工作曲線圖標(biāo)，在工作曲線設(shè)置頁(yè)面，填入ConcentrationUnits:濃度單位，例如ng/ml,ug/kg,ppb,ppm等。ConcentrationofStandard:Level-選擇Conc.A。PolynomialType-選擇Linear.（可根據(jù)自己行業(yè)的規(guī)定）CalibrationOrigin_選擇exclude（排除原點(diǎn)），include（包含原點(diǎn)），force（強(qiáng)制過(guò)原點(diǎn)）專業(yè)知識(shí)分享WORD格式整理WeithtingFunction（權(quán)重）_1/x（根據(jù)自己行業(yè)規(guī)定）PropagateCalibrationParameterS—如果所有的化合物均用相同的工作曲線的參數(shù)，選Yes液質(zhì)聯(lián)用儀操作規(guī)程第6頁(yè)共8頁(yè)SOP?I-Xevo-TQSFSIDC打開(kāi)積分參數(shù)列表，選中ApexTrackEnabled（打勾，YES）,IntegrationWindowExtent輸入2,選中PropagateIntegrationParameters打勾），如果色譜峰并不是很對(duì)稱的色譜圖，可先在色譜圖上先設(shè)定參數(shù)，積分，好積分參數(shù)滿意之后，process/integrate…/copy，在Targetlynx方法中Edit/Past就可將其粘貼到Targetlynx方法中。建議用ApexTrack積分方法，Smooth方法建議用smoothiteration1,smoothwidth2。重復(fù)上面的過(guò)程，把其他幾個(gè)化合物的信息全部加入，保存方法：File/SaveAs,保存到當(dāng)前項(xiàng)目的MethDB文件夾中，正確的samplelist表格模板，除了前面進(jìn)樣時(shí)的選項(xiàng)之外，還要有sampletype,ConA,等選中要處理的樣品，單擊ProcessSamples,出現(xiàn)下圖的對(duì)話框，確保選中,Integrate、sample，calibrateStandard，QuantifySample,選擇剛才編輯的Targetlynx方法，單擊OK后，出現(xiàn)定量結(jié)果對(duì)話框?？筛鶕?jù)自己的需要，用鼠標(biāo)右鍵，ChangColumnOrder來(lái)增加或減少Summary中的選項(xiàng)。關(guān)機(jī)程序日常關(guān)機(jī)：如果流動(dòng)相中有緩沖鹽必須先將緩沖鹽換成水，灌注2分鐘，流速設(shè)為0.2ml/min，80%水相，沖洗至少30分鐘，換成80%有機(jī)相，沖洗至少20分鐘，停流速，水相，沖洗至少30分鐘，換成80%有機(jī)相，沖洗至少20分鐘，停流速，柱溫為室溫。關(guān)質(zhì)譜：主界面masstune或者電腦下面儀器圖標(biāo)——界面左側(cè)偏上fluidics flowstate選擇為waste、關(guān)氬氣，masstune界面或者電腦下面儀器圖標(biāo)工具欄第6個(gè)〉關(guān)高壓masstune界面右下角》等待去溶劑氣溫度降低至專業(yè)知識(shí)分享WORD格式整理100度以下masstune界面或者電腦下面儀器圖標(biāo)左側(cè)偏上。ES+source temperature desolvation>關(guān)氮?dú)?，點(diǎn)擊氮?dú)獍l(fā)生器開(kāi)啟開(kāi)關(guān)。徹底關(guān)機(jī)先完成日常關(guān)機(jī)液質(zhì)聯(lián)用儀操作規(guī)程第7頁(yè)共8頁(yè)SOP?I-Xevo-TQSFSIDC泄真空：tunepage>vacuum>vent yes>等待渦輪分子泵轉(zhuǎn)速降到10以下，masslynx主界面 左側(cè)instrument Masstune 界面左側(cè)偏上diagnostics vacuum sourceturbospeed[%]退出軟件，其他界面先退出，主界面最后退出關(guān)質(zhì)譜電源>關(guān)所有UPLC電源，計(jì)算機(jī)電源，儀器三個(gè)電源順序無(wú)所謂，關(guān)氮?dú)獍l(fā)生器，氬氣。如果有UPS，關(guān)閉UPS電源，計(jì)算機(jī)電源。4日常維護(hù)、保養(yǎng)及注意事項(xiàng)儀器室要保持整潔、干凈、無(wú)塵；配套設(shè)施布局合理。儀器室溫度應(yīng)相對(duì)穩(wěn)定，一般應(yīng)控制在20-25℃，保持恒溫；相對(duì)濕度最好為50-70%，室內(nèi)應(yīng)備有溫度計(jì)和濕度計(jì)，一般采用空調(diào)和吸濕機(jī)調(diào)節(jié)溫度和濕度。氣壓過(guò)濾機(jī)械泵油，停止樣品采集、停止流動(dòng)相、關(guān)閉高壓、關(guān)閉所有氣流，關(guān)閉離子源內(nèi)的真空隔離閥。用一字鑲絲刀順時(shí)針?lè)较驍Q開(kāi)機(jī)械泵上的GasBallast閥四分之一圈，運(yùn)行30分鐘后再把GasBallast閥旋轉(zhuǎn)到原來(lái)關(guān)閉的位置。對(duì)于ESI源，至少每星期做一次，對(duì)于APCI源，每天做一次。開(kāi)高壓之前一定要先開(kāi)氮?dú)?，關(guān)氮?dú)庵耙欢ㄒ汝P(guān)高壓。ESI離子化與溶劑密切相關(guān)，在使用某些溶劑和添加物需要注意以下幾個(gè)方面：三氟乙酸（TFA）多用于蛋白質(zhì)和多肽分析，但對(duì)ESI離子化有抑制效應(yīng)；三乙胺（TEA）在m/z102