生化檢測常識課件

生化檢測常識

生化檢測常識

目錄

第一章生化檢測基本常識

1.1標(biāo)本的獲得第二章常規(guī)生化檢測項目簡介

2.1生化項目的臨床意義第三章生化儀參數(shù)測量原理

3.1自動生化儀的分類

3.2分立式生化儀結(jié)構(gòu)

3.3生化檢驗的原理和方法3.4生化分析儀測定方法的分類及應(yīng)用度的計算3.5.測定值計算方程

3.6定標(biāo)參數(shù)和濃度的計算

第四章幾個重要概念

5．1試劑空白5．2樣本空白

5．3水空白

5．4樣本

5．5質(zhì)控物質(zhì)

5．6底物控制

生化檢測基本常識

生化檢測是醫(yī)院檢驗科（或化驗室）常用的檢測手段，通常以人的血清為標(biāo)本，通過測量血清中各生化成份的含量，為臨床診斷提供依據(jù)。

生化檢測基本常識

生化檢測是醫(yī)院檢驗科（或化驗室）常用的檢測1.1標(biāo)本的獲得

一般要求病人空腹時采靜脈血（全血）。全血經(jīng)過離心機(jī)離心，分層為血清和血細(xì)胞，正常情況下，上層顏色淺且透明（血清），下層顏色深且不透明（血細(xì)胞）。有的血清較為特殊，或分層不明顯（融血），或血清不透明（脂血，呈牛奶狀）。1.1標(biāo)本的獲得

一般要求病人空腹時采靜脈血（全血）。全血經(jīng)第二章常規(guī)生化檢測項目簡介

第二章常規(guī)生化檢測項目簡介

2.1生化項目的臨床意義丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）：又稱為谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）是衡量肝功能的重要指標(biāo)，許多低端醫(yī)療機(jī)構(gòu)在做體檢時僅測此一項生化項目。正常人一般在40U/L以內(nèi)。干粉試劑復(fù)溶后為單試劑，液體試劑一般為雙試劑，應(yīng)用動力學(xué)法可計算結(jié)果。2.1生化項目的臨床意義丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）：又稱為谷蛋白蛋白：通常測白蛋白（ALB）和總蛋白（TP），終點法。一般用單試劑，有的TP試劑為雙試劑，可用兩點終點法測。蛋白質(zhì)是血清的主要成份，大部份由肝細(xì)胞合成。通過蛋白的測定可以協(xié)助某些疾病的診斷。蛋白蛋白：通常測白蛋白（ALB）和總蛋白（TP），終點法。一血糖血糖：血液中的葡萄糖簡稱血糖（GLU）。常用于糖尿病的診斷。正常人空腹血糖一般為3.9～6.1mmol/L。市場上單、雙試劑的商品化試劑盒都有，可用終點法（單試劑）或兩點終點法測量（雙試劑）。血糖血糖：血液中的葡萄糖簡稱血糖（GLU）。常用于糖尿病的診門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）：又稱為谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT），主要用于心肌和肝膽疾病及骨骼肌病的診斷。是肝功能測試的常用指標(biāo)之一。正常人一般在40U/L以內(nèi)。同ALT一樣，無論單、雙試劑，用動力學(xué)法可計算結(jié)果。門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）：又堿性磷酸酶（ALP）堿性磷酸酶（ALP）：主要用于肝膽疾病及骨骼病的診斷。是肝功能測試的常用指標(biāo)之一。正常人一般在240U/L以內(nèi)。用動力學(xué)法計算結(jié)果。

堿性磷酸酶（ALP）堿性磷酸酶（ALP）：主要用于肝膽疾病及γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（GGT）γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（GGT）：主要用于肝膽疾病診斷。是肝功能測試的常用指標(biāo)之一。正常人一般在50U/L以內(nèi)。用動力學(xué)法計算結(jié)果。γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（GGT）γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（GGT）：主要用膽紅素（BiL）膽紅素（BiL）：膽紅素的測定，能準(zhǔn)確反映黃疸的程度，判斷黃疸的類型。一般測量總膽紅素（TBil）和直接膽紅素（DBil）。膽紅素（BiL）膽紅素（BiL）：膽紅素的測定，能準(zhǔn)確反映黃甘油三酯（TG甘油三酯（TG）：其含量測定是血脂分析的重要內(nèi)容之一。

甘油三酯（TG甘油三酯（TG）：其含量測定是血脂分析的重要內(nèi)總膽固醇（CHOL）總膽固醇（CHOL）：是游離膽固醇和膽固醇酯的總稱，其測定對高脂蛋白血癥和冠心病的診斷及發(fā)病機(jī)理的研究有一定意義?？偰懝檀迹–HOL）總膽固醇（CHOL）：是游離膽固醇和膽固高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）：主要在肝臟中合成，是血清中顆粒數(shù)最多的脂蛋白。其含量是冠心病診斷的重要依據(jù)之一。高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）高密度脂蛋白膽固醇（HDL-肌酐（CREA）肌酐（CREA）：是肌酸代謝的最終產(chǎn)物，由腎臟排出。是腎功能的重要指標(biāo)之一。

肌酐（CREA）肌酐（CREA）：是肌酸代謝的最終產(chǎn)物，由腎尿素（Urea）尿素（Urea）：是蛋白質(zhì)分解代謝的終產(chǎn)物。血尿素測定是腎功能的最敏感指標(biāo)。

尿素（Urea）尿素（Urea）：是蛋白質(zhì)分解代謝的終產(chǎn)物。載脂蛋白A1(APOA1):載脂蛋白A1(APOA1):

是高密度脂蛋白的主要組成成分，臨床上主要用于腦血管病風(fēng)險度的估計。載脂蛋白A1(APOA1):載脂蛋白A1(APOA1):是載脂蛋白B(APOB):載脂蛋白B(APOB):

是低密度脂蛋白的主要組成成分，臨床上主要用于冠心病的風(fēng)險度的估計。載脂蛋白B(APOB):載脂蛋白B(APOB):是低密度脂肌酸激酶（CK）肌酸激酶（CK）：肌酸激酶通常存在于動物的心臟、肌肉以及腦等組織的細(xì)胞漿和線粒體中，是一個與細(xì)胞內(nèi)能量運轉(zhuǎn)、肌肉收縮、ATP再生有直接關(guān)系的重要激酶。可用于早期診斷急性心肌梗，常見肌病(如進(jìn)行性肌營養(yǎng)不良發(fā)作期、病毒性心肌炎、多發(fā)性肌炎、擠壓綜合征等嚴(yán)重肌肉損傷)及腦血管疾病的診斷。

肌酸激酶（CK）肌酸激酶（CK）：肌酸激酶通常存在于動物的心α-羥丁酸脫氫酶（HBDH）α-羥丁酸脫氫酶（HBDH）：與肌酸激酶相同，用于診斷心肌梗死。

α-淀粉酶（AMY）：在臨床應(yīng)用方面，α-淀粉酶活力升高與急性胰腺炎、胰腺管道阻塞、腹內(nèi)疾病、流行性腮腺炎及細(xì)菌性腮腺炎。

α-羥丁酸脫氫酶（HBDH）α-羥丁酸脫氫酶（HBDH）：與鈣、氯、鐵、鉀、鈉、鎂、磷：這7項都屬于離子組合，用于診斷人體中離子的含量。鈣、氯、鐵、鉀、鈉、鎂、磷：這7項都屬于離子組合，用于診斷人常用檢測項目表

序號項目名稱縮寫組合參考值白蛋白：ALB，肝功能35～55g/L總蛋白：TP，60～80g/L堿性磷酸酶：ALP，15～112U/L門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶：AST（GOT），8～37U/L丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶：ALT（GPT），0～65U/Lγ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶：GGT，0～50U/L直接膽紅素：DB，0～6umol/L總膽紅素：TB，0～18umol/L肌酐：CREA腎功能：53～115μmol/L尿酸：UA，210～430umol/L尿素：UREA，2.5～6.4mmol/L常用檢測項目表

序號項目名稱縮寫組合參考值膽固醇：CHOL

血脂：3.6～6.5mmol/L

甘油三酯：TG，0.45～1.81mmol/L

高密度脂蛋白：HDL，0.9～1.68mmol/L

低密度脂蛋白：LDL，2.7～3.1mmol/L

載脂蛋白：A1APOA，11.0～1.6g/L

載脂蛋白：BAPOB，0.6～1.1g/L

脂蛋白：Lp（a），0～30mg/dL

肌酸激酶：CK，心肌酶類21～190U/L膽固醇：CHOL

血脂：3.6～6.5m肌酸激酶同工酶：CK-MB，0～25U/L

α-羥丁酸脫氫酶：HBDH，70～180U/L

乳酸脫氫酶：LDH，114～240U/L

鈣：Ca離子，2.0～2.6mmol/L

氯：Cl，95～105mmol/L

鐵：Fe，9～30μmol/L

鉀：K，3.5～5.5mmol/L

鎂：Mg，0.6～1.1mmol/L

鈉；Na，135～145mmol/L

磷；P，0.8～1.6mmol/L

α-淀粉酶：AMY，其它100～220U/L

葡萄糖：GLU，3.9～5.8mmol/L肌酸激酶同工酶：CK-MB，0～25U/L

α-羥丁酸脫氫酶生化儀參數(shù)測量原理

生化儀參數(shù)測量原理

3.1自動生化儀的分類

3.1自動生化儀的分類

3.1.1連續(xù)流動式自動化分析儀

連續(xù)流動式自動化分析儀也叫管道式分析儀，其特點是測定項目相同的各待測樣本與試劑混合后的化學(xué)反應(yīng)，是在同一管道中經(jīng)流動過程完成的。這類儀器一般可分為空氣分段系統(tǒng)式和非分段系統(tǒng)式。所謂空氣分段系統(tǒng)是指在吸入管道的每一個樣品、試劑以及混合后的反應(yīng)液之間，均由一小段空氣間隔開；而非分段系統(tǒng)是靠試劑空白或緩沖液來間隔每個樣品的反應(yīng)液。在管道式分析儀中，以空氣分段系統(tǒng)式最多，且較典型，整套儀器是由樣品盤、比例泵、混合管、透析器、恒溫器、比色計和記錄器幾個部件所組成。管道內(nèi)的圓圈表示氣泡，氣泡可將樣品及試劑分隔為許多液柱，并起一定的攪拌作用。但氣泡影響比色，必須在比色前除去。

將幾個單通道管道式分析儀結(jié)合起來，對一個樣品同時測定幾個項目。著名的有12通道分析儀，命名為順序多項自動分析儀（sequentialmultipleautoanalyzer）簡稱SMA12/60。同時發(fā)展為SMAC，C為計算機(jī)（computer）的縮寫。這類大型分析儀至今仍有使用者。它對每個樣品可同時分析12個項目，每小時可分析60個樣品。后來發(fā)現(xiàn)不加入空氣泡，更有利于結(jié)果的檢測，發(fā)展為流動注射分析法（flowinjectionanalysis）。試劑的流動仍用比例泵驅(qū)動，樣品用轉(zhuǎn)動閥加入液流，反應(yīng)后比色檢測。

3.1.1連續(xù)流動式自動化分析儀

連續(xù)流動式自動化分析儀也叫3.1.2離心式生化分析儀

離心式分析儀是1969年以后發(fā)展起來的一種分析儀，由Anderson設(shè)計，其特點是化學(xué)反應(yīng)器裝在離心機(jī)的轉(zhuǎn)子位置，該圓形反應(yīng)器稱為轉(zhuǎn)頭，先將樣品和試劑分別置與轉(zhuǎn)頭內(nèi)，當(dāng)離心機(jī)開動后，圓盤內(nèi)的樣品和試劑受離心力的作用而相互混合發(fā)生反應(yīng)，最后流入圓盤外圈的比色槽內(nèi)，通過比色計進(jìn)行檢測。

離心式分析儀主要由兩部分組成，一為加樣部分，二為分析部分。加樣部分包括樣品盤、試劑盤、吸樣臂（或管）、試劑臂（加液器）和電子控制部分（鍵盤和顯示器等）。加樣時轉(zhuǎn)頭置于加樣部分。加樣完畢后將轉(zhuǎn)頭移至離心機(jī)上。分析部分，除安裝轉(zhuǎn)頭的離心機(jī)外，還有溫控和光學(xué)檢測系統(tǒng)，并有微機(jī)信息處理和顯示系統(tǒng)。3.1.2離心式生化分析儀

離心式分析儀是1969年以后發(fā)展1．3分立式生化分析儀

所謂分立式，是指按手工操作的方式編排程序，并以有節(jié)奏的機(jī)械操作代替手工，各環(huán)節(jié)用傳送帶連接起來，按順序依次操作。分立式分析儀與管道式分析儀在結(jié)構(gòu)上的主要區(qū)別為：前者各個樣品和試劑在各自的試管中起反應(yīng)，而后者是在同一管道中起反應(yīng)；前者采用由采樣器和加液器組成的稀釋器來取樣和加試劑，而不用比例泵；前者一般沒有透析器，如要除蛋白質(zhì)等干擾，需另行處理。恒溫器必須能容納需保溫的試管和試管架，所以比管道式分析儀的體積要大。除此以外，其它部件與管道式的基本相似。分立式分析儀的基本結(jié)構(gòu)如下圖所示。Depout公司還推出一種袋式分析儀，即試管變?yōu)樗芰洗?，反?yīng)在袋內(nèi)進(jìn)行，也以袋作比色杯。這種袋只能一次性使用。1．3分立式生化分析儀

所謂分立式，是指按手工操作的方式編排3.1.3干片式分析儀

干片式分析儀是80年代問世的。首先Eastmankodak公司以其精湛的化學(xué)工藝造出了測定血清中血糖、尿素、蛋白質(zhì)、膽固醇等的干式試劑片。當(dāng)加上定量的血清后，在干片的前面產(chǎn)生顏色反應(yīng)，用反射光度計檢測即可進(jìn)行定量。這類方法完全革除了液體試劑，故稱干化學(xué)法。BoehringerMannheim公司推出了用全血的干征試劑。即將血細(xì)胞排除于濾膜之外，而血漿與試劑發(fā)生反應(yīng)后顯色檢測。

3.1.3干片式分析儀

干片式分析儀是80年代問世的。首先E3.1.4模塊式自動化系列

7600系列全自動生化分析儀是日立公司于1998年開發(fā)出來的系列分析儀。它是由各種不同功能的模塊組合而成，功能模塊包括有樣本投入部、電解質(zhì)測定的ISE模塊、常規(guī)實驗項目測定的D模塊、特殊實驗項目測定的P模塊、復(fù)查樣本緩沖部和樣本收納部。根據(jù)D模塊和P模塊數(shù)目組合成不同型號的分析儀。

模塊組合式實驗室自動化系統(tǒng)包括：

樣品前處理系統(tǒng)，樣品輸送系統(tǒng)和樣品后處理系統(tǒng)（生化分析，電解質(zhì)分析，血液分析等）。樣品前處理系統(tǒng)由能獨立工作，不同功能的各模塊以同一標(biāo)準(zhǔn)來連接，通過計算機(jī)控制運行。由樣品投入部，離心分離部，開栓部，在線分注部，非在線分注部，貼條碼部，蓋栓部，樣品分注收存部，標(biāo)本接收部等模塊構(gòu)成前處理系統(tǒng)，每一模塊既是系統(tǒng)的一部分，又是獨立的單元，可根據(jù)不同需要選擇使用，具有靈活性和擴(kuò)展性。

后處理系統(tǒng)有電解質(zhì)分析系統(tǒng)，生化分析系統(tǒng)以及血液分析系統(tǒng)等。3.1.4模塊式自動化系列

7600系列全自動生化分析儀是日1．6全實驗室自動化分析系統(tǒng)

從檢驗標(biāo)本處理開始，即標(biāo)本的識別、傳輸、處理（分離血清等）、分注、分類（按項目分類）、檢測和收費的自動化流水作業(yè)，到分析后自動儲存標(biāo)本，檢驗結(jié)果的自動分析、報告與傳送，自動提示異常值或危險值，申請檢驗醫(yī)師隨時查詢檢驗結(jié)果的全過程實現(xiàn)自動化、網(wǎng)絡(luò)化。

1．6全實驗室自動化分析系統(tǒng)

從檢驗標(biāo)本處理開始，即標(biāo)本的識3.2分立式生化儀結(jié)構(gòu)

全自動生化分析儀一般由以下部分構(gòu)成：探針系統(tǒng)、攪拌和沖洗系統(tǒng)、恒溫系統(tǒng)、反應(yīng)盤、光路系統(tǒng)構(gòu)成。

3.2分立式生化儀結(jié)構(gòu)

全自動生化分析儀一般由以下部分構(gòu)成：2．1探針系統(tǒng)

液面檢測技術(shù)：通過檢測阻抗或電容、電流的變化，感知到空氣和液面，可保證探針的感應(yīng)裝置至液面時會自動停止下降，即可增加速度也可減少污染，防止堵塞。2．1探針系統(tǒng)

液面檢測技術(shù)：通過檢測阻抗或電容、電流的變化2．2攪拌和沖洗系統(tǒng)

攪拌系統(tǒng)是讓樣品和試劑混合后迅速分布均勻，保障測試正常進(jìn)行。常用的攪拌方法為沖入空氣、攪拌、振蕩等，但是都容易產(chǎn)生氣泡和外溢等問題。目前最好的方法是螺旋式攪拌棒附著特富龍涂層，一方面減少氣泡，另一方面減少攜帶和污染。

清洗系統(tǒng)一般包括試劑針的內(nèi)外臂清洗、樣本針的內(nèi)外臂清洗、比色杯的清洗。2．2攪拌和沖洗系統(tǒng)

攪拌系統(tǒng)是讓樣品和試劑混2．3恒溫系統(tǒng)

全自動生化儀一般都設(shè)有30和37度兩種溫度。目前常見的有水浴、空氣浴，最新的是恒溫液循環(huán)加溫方式。

水浴的優(yōu)點是溫度均勻、穩(wěn)定；缺點是升溫緩慢，開機(jī)預(yù)熱時間長，因水質(zhì)化（微生物、礦物質(zhì)沉積）影響測定，因此要定期換水和比色杯。

空氣浴的優(yōu)點是升溫迅速，無需保養(yǎng)；缺點是溫度易受外界環(huán)境影響。

恒溫液循環(huán)加溫集干式空氣浴和水浴的優(yōu)點，即有水浴溫度穩(wěn)定、均勻的優(yōu)點，又有空氣浴升溫迅速、無需維護(hù)保養(yǎng)的優(yōu)點。2．3恒溫系統(tǒng)

全自動生化2．4反應(yīng)盤

現(xiàn)在大多數(shù)采用硬質(zhì)玻璃比色杯（石英杯），其透光性好，易清潔，不易磨損。2．4反應(yīng)盤

現(xiàn)在大多數(shù)采用硬質(zhì)玻璃比色杯（石英杯），其透光2．5光路系統(tǒng)光源：光源分為鹵素?zé)艉透邏洪W爍氙燈。相對而言鹵素?zé)魤勖L，價格低，是大部分生化儀的首先。

2．5光路系統(tǒng)光源：光源分為鹵素?zé)艉透邏洪W爍3.3生化檢驗的原理和方法

臨床生化檢驗，主要在技術(shù)方面的應(yīng)用方面上探討生化檢驗新技術(shù)以及新的標(biāo)記物的選擇和評價，用于幫助診斷，又稱“診斷生化”。主要應(yīng)用于下列技術(shù)：光譜技術(shù)、電化學(xué)分析技術(shù)、層析技術(shù)、電泳技術(shù)、離心技術(shù)、抗原抗體特異性反應(yīng)和標(biāo)記技術(shù)、核酸擴(kuò)增、雜交及序列分析技術(shù)等，其中生化分析儀主要運用了光譜技術(shù)中的吸收光譜法和比濁法。3.3生化檢驗的原理和方法

臨床生化檢驗，主分別介紹如下分別介紹如下3．1吸收光譜法

3．1吸收光譜法

3．1．1光譜范圍和電子躍遷

波長從200nm—400nm的電磁輻射，稱為紫外光，波長從400nm—760nm的電磁輻射，稱為可見光。3．1．1光譜范圍和電子躍遷

波長從200nm—4003．1．2吸收曲線

以波長（λ）為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)而繪制出的一條曲線稱為吸收曲線。

在一段波長范圍內(nèi)，有最大吸收波長λmax和最小吸收波長λmin在最大吸收波長處測定可獲得最大的測定靈敏度。3．1．2吸收曲線

以波長（λ）為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)3．1．3吸光度的定義

一束強(qiáng)度為IO的平行單色光通過一個含有濃度為C的吸光物質(zhì)、厚度為L的吸收池時，如上圖，一些光子被吸收，光強(qiáng)從IO衰減為It，則該溶液的吸光度A等于：

3．1．3吸光度的定義

一束強(qiáng)度為IO的平行單色光通過一個含3．1．4Lamber-Beer定律

A=?CL

其中?為吸光系數(shù)，有兩種表示方法摩爾吸光系數(shù)和比吸光系數(shù)，摩爾吸光系數(shù)的意義為1摩爾濃度的溶液在厚度為1cm時的吸光度，比吸光系數(shù)的意義為濃度為1%（w/u）的溶液在厚度為1cm時的吸光度；C為溶液的濃度；L為吸收池的厚度（單位為cm，亦稱光徑）。

Lamber-Beer定律的意義為：某溶液的吸光度等于該物質(zhì)的吸光系數(shù)?、濃度C和光徑L（cm）的乘積，當(dāng)光徑不變時，濃度和吸光度成正比，這是生化分析儀利用吸收光譜法進(jìn)行定量測定的基礎(chǔ)，見下圖：

Lamber-Beer定律成立的前提條件是：（1）被吸收光為單色平行光，（2）待測定溶液為稀溶液。

除特種蛋白外的大部分臨床生化項目，配以相應(yīng)的試劑，均可利用吸收光譜法在生化分析儀上進(jìn)行測定。如：

酶類：包括ALT、AST、ALP、ACP、r-GT、a-HBDH、LDH、CK、CK-MB、a-AMY、等。

底物/代謝產(chǎn)物類：包括TG、TC、HDL-C、LDL-C、UA、UREA、Cr、Glu、TP、Alb、T-Bil、D-Bil、NH4+、CO2等。

無機(jī)離子類：包括Ca、P、Mg、Cl等。

3．1．4Lamber-Beer定律

A=?CL

其中?為吸3．2比濁法

3．2比濁法

3．2．1比濁法分兩類：透射比濁法和散射比濁法。帶有小粒的懸浮液和膠體溶液都具有向四面八方散射入射光的性質(zhì)，當(dāng)一束平行光通過含有懸浮質(zhì)點的懸浮液或膠體溶液時，同時受到散射和吸收兩個因素的影響，使光的強(qiáng)度減弱。在光源的光路方向上測量透射光（實際上還包括散射光）強(qiáng)度與入射光強(qiáng)度比值，并通過該比值測定出懸浮液或膠體溶液中質(zhì)點的溶度，稱為投射比濁法；在光路的其他方向上測量散射光強(qiáng)度，從而測定出懸浮液或膠體溶液中質(zhì)點的濃度，稱為散射比濁法。3．2．1比濁法分兩類：透射比濁法和散射比濁法。帶有小粒的懸3．2．2測定原理

3．2．2測定原理

透射比濁法

顆粒大小與光源波長接近，一束強(qiáng)度為I0的平行單色光通過一個含有懸浮質(zhì)點（顆粒大小與光源波長接近）的懸浮液或膠體溶液時，如上圖，其透射光強(qiáng)度I可用下式表示：

I=IOe-τL

式中,L為懸浮液或膠體溶液在光前進(jìn)方向上的長度，τ為濁度系數(shù)，與懸浮質(zhì)點的濃度C成線性關(guān)系。令τ=2.3KC，則：

該式與Lamber-Beer

顆粒大小遠(yuǎn)小于光源波長

定律相似，這是生化分析儀利用投射比濁法進(jìn)行定量測定的基礎(chǔ)，該法可以與吸收光譜法共用一個檢測器，所以生化分析儀，不需增加任何部件，均可利用此法進(jìn)行測定。大部分特種蛋白，如載脂蛋白類（apoAI,apoB等）、補體類（C3，C4等）免疫球蛋白類（IgG,IgM等）等，配以相應(yīng)的試劑，可利用此法在生化分析儀上進(jìn)行測定。透射比濁法

顆粒大小與光源波長接近，一束強(qiáng)度為I0散射比濁法

一束強(qiáng)度為IO平行單色光通過一個含有懸浮質(zhì)點（顆粒大小遠(yuǎn)小于光源波長）的懸浮液或膠體溶液時，如上圖，與入射光垂直方向上，其散射光強(qiáng)度I可用下式表示：

式中，n1,n2分別表示質(zhì)點與介質(zhì)的折射率，V表示單位體積內(nèi)的質(zhì)點數(shù)，r表示質(zhì)點半徑?？梢娚⑸涔鈴?qiáng)度與懸浮質(zhì)點的濃度成正比，這是利用散射比濁法進(jìn)行定量測定的基礎(chǔ)，因另需在光路垂直方向上增加一檢測器，目前只有極少數(shù)生化分析儀可利用散射比濁法進(jìn)行定量測定，而幾乎所有的特種蛋白分析儀、免疫分析儀等都能利用散射比濁法進(jìn)行定量測定。散射比濁法

一束強(qiáng)度為IO平行單色光通過一個含有懸浮質(zhì)點（3．2．3方法學(xué)分析

（1）散射比濁法與透射比濁法：

散射比濁法靈敏度高，線性范圍寬，但干擾因素多。

（2）比濁法與吸收光譜法：

比濁法特異性差，靈敏度低。3．2．3方法學(xué)分析

（1）散射比濁法與透射比濁法：

散射3.4生化分析儀測定方法的分類及應(yīng)用度的計算

3.4生化分析儀測定方法的分類及應(yīng)用度的計算

4.4.1終點法

4.4.1終點法

4.4.1概述

指經(jīng)過一段時間（一般為10分鐘左右）的反應(yīng)，整個反應(yīng)達(dá)到平衡，由于反應(yīng)的平衡常數(shù)很大，可認(rèn)為所有的被測定物已轉(zhuǎn)變?yōu)楫a(chǎn)物，反應(yīng)液的吸光度不在增加（或降低），吸光度的增加（或降低）程度與被測定物的濃度成正比。如下圖：

如圖所示：t1時刻加入試劑（體積為V），t2時刻加入樣本（體積為S），然后攪拌并反應(yīng)，之后測量反應(yīng)液的吸光度，在t3時刻反應(yīng)達(dá)到終點。T2—t3為測定時間。

4.4.1概述

指經(jīng)過一段時間（一般為10分鐘左右）的反應(yīng)，4．4．2反應(yīng)度R（Response）的計算

結(jié)果的計算包括三個部分：反應(yīng)度R（Response）的計算、定標(biāo)參數(shù)的計算和濃度（或活性）的計算。這里僅介紹R的計算，定標(biāo)參數(shù)的計算和濃度（或活性）的計算在后面專門討論。

1）單試劑單波長終點法

反應(yīng)度R=t3時刻吸光度-t2前一時刻吸光度ⅹ（體積校正因子)

或R=t3時刻吸光度-單試劑空白吸光度。

2）雙試劑單波長終點法

t1時刻加入第一試劑（體積為V1），t2時刻加入樣本（體積為S），之后攪拌，t3時刻加入第二試劑（體積為V2）并立即攪拌，t4時刻反應(yīng)打到終點。t3-t2為孵育時間，t4-t3為測定時間。

反應(yīng)度R=t4時刻吸光度-雙試劑空白吸光度

4．4．2反應(yīng)度R（Response）的計算

結(jié)果的計算包括4.4.2一級動力學(xué)

4.4.2一級動力學(xué)

4.4.2概述

一級動力學(xué)是指在被測物參與反應(yīng)的條件下，在一定的反應(yīng)時間內(nèi)，反應(yīng)速度與反應(yīng)物濃度的一次方成正比，由于反應(yīng)物在不斷的消耗，因此整個反應(yīng)速度在不斷的減小，表現(xiàn)為吸光度的增加（或降低）速度越來越小，由于這類反應(yīng)達(dá)到平衡的時間很長，且平衡常數(shù)不算很大，必需在特定時間段內(nèi)進(jìn)行監(jiān)測，該段時間內(nèi)吸光度的增加（或）降低與被測定物的濃度成正比，見下圖。一級動力學(xué)法又被稱為初速率法、固定時間法、二點動力學(xué)等。

如圖所示：t1時刻加入試劑（體積為V），之后測量試劑空白的吸光度，t2時刻加入樣本（體積為S），t3時刻反應(yīng)穩(wěn)定，t4時刻停止對反應(yīng)進(jìn)行監(jiān)測；t2-t3為延遲時間，t3-t4為測定時間。

4.4.2概述

一級動力學(xué)是指在被測物參與反應(yīng)的條件下，在一4.2.2反應(yīng)度R的計算（單、雙試劑相同）

反應(yīng)度R=t4時刻吸光度—t3時刻吸光度

4.2.2反應(yīng)度R的計算（單、雙試劑相同）

反應(yīng)度R=t4時4.4.3零級動力學(xué)法

4.4.3零級動力學(xué)法

4.4.31概述

指反應(yīng)速度與被測定物濃度的零次方成正比，也就是與被測定物濃度無關(guān)，因此，在整個反應(yīng)過程中，反應(yīng)物可以勻速地生成某個產(chǎn)物，導(dǎo)致被測定溶液在某一波長下吸光度均勻地減小或增加，減小或增加的速度（?A/min）與被測物的活性或濃度成正比。零級動力學(xué)法即通常所說的動力學(xué)法，也被稱為連續(xù)監(jiān)測法，主要用于酶活性的測定。

實際上，由于底物濃度不可能足夠大，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，底物消耗到一定的程度后，反應(yīng)速度不再與酶活性成正比，因此，零級動力學(xué)法是針對于特定時間段而言的，各試劑商對這段時間有嚴(yán)格規(guī)定，見下圖中的t3-tn:

t1時刻加入試劑（體積為V），t2時刻加如樣本（體積為S），t3時刻反應(yīng)穩(wěn)定，tn時刻停止對反應(yīng)進(jìn)行監(jiān)測；t3到tn之間的時間內(nèi)，吸光度勻速變化，變化的速率和反應(yīng)物的濃度成線性關(guān)系。t3-t2為延遲時間，tn-t3為測定時間。4.4.31概述

指反應(yīng)速度與被測定物濃度的零次方成正比，也4．3．2反應(yīng)度R的計算（單、雙試劑相同）

其中n=t3到tn間的數(shù)據(jù)個數(shù)

Ti=時間

Ai=某一時間的吸光度

4．3．2反應(yīng)度R的計算（單、雙試劑相同）

其中n=t3到t第四章幾個重要概念

第四章幾個重要概念

5．1試劑空白

由于生化測試測量的均為相對吸光度，所以從理論上說，所有終點法的測試都需要把試劑本身的吸光度扣除。試劑本身的吸光度就是試劑空白。測量方法是按照正常測試的試劑和樣本量，把樣本換成蒸餾水來測量。5．1試劑空白

由于生化測試測量的均為相對吸光度，所以從理5．2樣本空白

由于溶血、脂血、黃疸等情況，會導(dǎo)致樣本本身的吸光度對測試結(jié)果造成影響。所以對樣本本身吸光度的測量，即樣本空白，可以去處這方面的影響。測量方法是按照正常測試的試劑和樣本量，把試劑換成蒸餾水或生理鹽水來進(jìn)行測量。5．2樣本空白

由于溶血、脂血、黃疸等情況，會導(dǎo)致樣本本身5．3水空白

比色杯在加入水以后的吸光度。

5．3水空白

比色杯在加入水以后的吸光度。

5．4樣本

生化測試的樣本包括血清、血漿、尿液、腦脊髓液等體液，最常用的是血清。血清的制備是在采血后加入凝固劑或者在水浴箱中水浴，促使血液凝固，然后在離心機(jī)離心，血細(xì)胞和血漿沉在試管下部，上面的血清就是生化測試中所需的樣本血清。注意纖維蛋白可能漂浮在血清當(dāng)中，在制備樣本的過程當(dāng)中要挑出來。

5．4樣本

生化測試的樣本包括血清、血漿、尿液、腦脊髓液等體5．5質(zhì)控物質(zhì)

人工混合血清或者動物血清，有定值和未定值兩種，用于室內(nèi)和室間質(zhì)控。檢驗科通過每天的質(zhì)控測試，監(jiān)控測試的可靠性。5．5質(zhì)控物質(zhì)

人工混合血清或者動物血清，有定值和未定值兩5．6底物控制

僅對零級動力學(xué)有效，一些高濃度（活性）樣品使底物耗盡，使反應(yīng)不在為零級（零級動力學(xué)法）或1級（固定時間法）反應(yīng)，為能正確反應(yīng)測定結(jié)果，需設(shè)置底物控制（某一特定吸光度），該底物控制應(yīng)正好是反應(yīng)曲線中線性區(qū)與非線性區(qū)（零級動力學(xué)法）或1級反應(yīng)區(qū)與多級反應(yīng)區(qū)（固定時間法）的臨界點，是在反應(yīng)時間內(nèi)反應(yīng)沒有發(fā)生底物耗盡時所能達(dá)到的最?。ǚ磻?yīng)曲線向下）或最大（反應(yīng)曲線向上）的吸光度值。某一項目的底物控制值與所用試劑盒密切相關(guān)，就某一特定試劑盒來說，底物控制值應(yīng)由用戶預(yù)先用一系列已知濃度（或活性）的樣本來確定：觀測這些樣本的實時反應(yīng)曲線，找出反應(yīng)曲線上反應(yīng)時間內(nèi)線性區(qū)與非線性區(qū)的交叉點的吸光度，該吸光度就是該項目的底物控制值。更換試劑后，需用相同的方法重新確定。5．6底物控制

僅對零級動力學(xué)有效，一些高濃度（活性

生化檢測常識

生化檢測常識

目錄

第一章生化檢測基本常識

1.1標(biāo)本的獲得第二章常規(guī)生化檢測項目簡介

2.1生化項目的臨床意義第三章生化儀參數(shù)測量原理

3.1自動生化儀的分類

3.2分立式生化儀結(jié)構(gòu)

3.3生化檢驗的原理和方法3.4生化分析儀測定方法的分類及應(yīng)用度的計算3.5.測定值計算方程

3.6定標(biāo)參數(shù)和濃度的計算

第四章幾個重要概念

5．1試劑空白5．2樣本空白

5．3水空白

5．4樣本

5．5質(zhì)控物質(zhì)

5．6底物控制

生化檢測基本常識

生化檢測是醫(yī)院檢驗科（或化驗室）常用的檢測手段，通常以人的血清為標(biāo)本，通過測量血清中各生化成份的含量，為臨床診斷提供依據(jù)。

生化檢測基本常識

生化檢測是醫(yī)院檢驗科（或化驗室）常用的檢測1.1標(biāo)本的獲得

一般要求病人空腹時采靜脈血（全血）。全血經(jīng)過離心機(jī)離心，分層為血清和血細(xì)胞，正常情況下，上層顏色淺且透明（血清），下層顏色深且不透明（血細(xì)胞）。有的血清較為特殊，或分層不明顯（融血），或血清不透明（脂血，呈牛奶狀）。1.1標(biāo)本的獲得

一般要求病人空腹時采靜脈血（全血）。全血經(jīng)第二章常規(guī)生化檢測項目簡介

第二章常規(guī)生化檢測項目簡介

2.1生化項目的臨床意義丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）：又稱為谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）是衡量肝功能的重要指標(biāo)，許多低端醫(yī)療機(jī)構(gòu)在做體檢時僅測此一項生化項目。正常人一般在40U/L以內(nèi)。干粉試劑復(fù)溶后為單試劑，液體試劑一般為雙試劑，應(yīng)用動力學(xué)法可計算結(jié)果。2.1生化項目的臨床意義丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）：又稱為谷蛋白蛋白：通常測白蛋白（ALB）和總蛋白（TP），終點法。一般用單試劑，有的TP試劑為雙試劑，可用兩點終點法測。蛋白質(zhì)是血清的主要成份，大部份由肝細(xì)胞合成。通過蛋白的測定可以協(xié)助某些疾病的診斷。蛋白蛋白：通常測白蛋白（ALB）和總蛋白（TP），終點法。一血糖血糖：血液中的葡萄糖簡稱血糖（GLU）。常用于糖尿病的診斷。正常人空腹血糖一般為3.9～6.1mmol/L。市場上單、雙試劑的商品化試劑盒都有，可用終點法（單試劑）或兩點終點法測量（雙試劑）。血糖血糖：血液中的葡萄糖簡稱血糖（GLU）。常用于糖尿病的診門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）：又稱為谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT），主要用于心肌和肝膽疾病及骨骼肌病的診斷。是肝功能測試的常用指標(biāo)之一。正常人一般在40U/L以內(nèi)。同ALT一樣，無論單、雙試劑，用動力學(xué)法可計算結(jié)果。門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）：又堿性磷酸酶（ALP）堿性磷酸酶（ALP）：主要用于肝膽疾病及骨骼病的診斷。是肝功能測試的常用指標(biāo)之一。正常人一般在240U/L以內(nèi)。用動力學(xué)法計算結(jié)果。

堿性磷酸酶（ALP）堿性磷酸酶（ALP）：主要用于肝膽疾病及γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（GGT）γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（GGT）：主要用于肝膽疾病診斷。是肝功能測試的常用指標(biāo)之一。正常人一般在50U/L以內(nèi)。用動力學(xué)法計算結(jié)果。γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（GGT）γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（GGT）：主要用膽紅素（BiL）膽紅素（BiL）：膽紅素的測定，能準(zhǔn)確反映黃疸的程度，判斷黃疸的類型。一般測量總膽紅素（TBil）和直接膽紅素（DBil）。膽紅素（BiL）膽紅素（BiL）：膽紅素的測定，能準(zhǔn)確反映黃甘油三酯（TG甘油三酯（TG）：其含量測定是血脂分析的重要內(nèi)容之一。

甘油三酯（TG甘油三酯（TG）：其含量測定是血脂分析的重要內(nèi)總膽固醇（CHOL）總膽固醇（CHOL）：是游離膽固醇和膽固醇酯的總稱，其測定對高脂蛋白血癥和冠心病的診斷及發(fā)病機(jī)理的研究有一定意義?？偰懝檀迹–HOL）總膽固醇（CHOL）：是游離膽固醇和膽固高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）：主要在肝臟中合成，是血清中顆粒數(shù)最多的脂蛋白。其含量是冠心病診斷的重要依據(jù)之一。高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）高密度脂蛋白膽固醇（HDL-肌酐（CREA）肌酐（CREA）：是肌酸代謝的最終產(chǎn)物，由腎臟排出。是腎功能的重要指標(biāo)之一。

肌酐（CREA）肌酐（CREA）：是肌酸代謝的最終產(chǎn)物，由腎尿素（Urea）尿素（Urea）：是蛋白質(zhì)分解代謝的終產(chǎn)物。血尿素測定是腎功能的最敏感指標(biāo)。

尿素（Urea）尿素（Urea）：是蛋白質(zhì)分解代謝的終產(chǎn)物。載脂蛋白A1(APOA1):載脂蛋白A1(APOA1):

是高密度脂蛋白的主要組成成分，臨床上主要用于腦血管病風(fēng)險度的估計。載脂蛋白A1(APOA1):載脂蛋白A1(APOA1):是載脂蛋白B(APOB):載脂蛋白B(APOB):

是低密度脂蛋白的主要組成成分，臨床上主要用于冠心病的風(fēng)險度的估計。載脂蛋白B(APOB):載脂蛋白B(APOB):是低密度脂肌酸激酶（CK）肌酸激酶（CK）：肌酸激酶通常存在于動物的心臟、肌肉以及腦等組織的細(xì)胞漿和線粒體中，是一個與細(xì)胞內(nèi)能量運轉(zhuǎn)、肌肉收縮、ATP再生有直接關(guān)系的重要激酶?？捎糜谠缙谠\斷急性心肌梗，常見肌病(如進(jìn)行性肌營養(yǎng)不良發(fā)作期、病毒性心肌炎、多發(fā)性肌炎、擠壓綜合征等嚴(yán)重肌肉損傷)及腦血管疾病的診斷。

肌酸激酶（CK）肌酸激酶（CK）：肌酸激酶通常存在于動物的心α-羥丁酸脫氫酶（HBDH）α-羥丁酸脫氫酶（HBDH）：與肌酸激酶相同，用于診斷心肌梗死。

α-淀粉酶（AMY）：在臨床應(yīng)用方面，α-淀粉酶活力升高與急性胰腺炎、胰腺管道阻塞、腹內(nèi)疾病、流行性腮腺炎及細(xì)菌性腮腺炎。

α-羥丁酸脫氫酶（HBDH）α-羥丁酸脫氫酶（HBDH）：與鈣、氯、鐵、鉀、鈉、鎂、磷：這7項都屬于離子組合，用于診斷人體中離子的含量。鈣、氯、鐵、鉀、鈉、鎂、磷：這7項都屬于離子組合，用于診斷人常用檢測項目表

序號項目名稱縮寫組合參考值白蛋白：ALB，肝功能35～55g/L總蛋白：TP，60～80g/L堿性磷酸酶：ALP，15～112U/L門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶：AST（GOT），8～37U/L丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶：ALT（GPT），0～65U/Lγ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶：GGT，0～50U/L直接膽紅素：DB，0～6umol/L總膽紅素：TB，0～18umol/L肌酐：CREA腎功能：53～115μmol/L尿酸：UA，210～430umol/L尿素：UREA，2.5～6.4mmol/L常用檢測項目表

序號項目名稱縮寫組合參考值膽固醇：CHOL

血脂：3.6～6.5mmol/L

甘油三酯：TG，0.45～1.81mmol/L

高密度脂蛋白：HDL，0.9～1.68mmol/L

低密度脂蛋白：LDL，2.7～3.1mmol/L

載脂蛋白：A1APOA，11.0～1.6g/L

載脂蛋白：BAPOB，0.6～1.1g/L

脂蛋白：Lp（a），0～30mg/dL

肌酸激酶：CK，心肌酶類21～190U/L膽固醇：CHOL

血脂：3.6～6.5m肌酸激酶同工酶：CK-MB，0～25U/L

α-羥丁酸脫氫酶：HBDH，70～180U/L

乳酸脫氫酶：LDH，114～240U/L

鈣：Ca離子，2.0～2.6mmol/L

氯：Cl，95～105mmol/L

鐵：Fe，9～30μmol/L

鉀：K，3.5～5.5mmol/L

鎂：Mg，0.6～1.1mmol/L

鈉；Na，135～145mmol/L

磷；P，0.8～1.6mmol/L

α-淀粉酶：AMY，其它100～220U/L

葡萄糖：GLU，3.9～5.8mmol/L肌酸激酶同工酶：CK-MB，0～25U/L

α-羥丁酸脫氫酶生化儀參數(shù)測量原理

生化儀參數(shù)測量原理

3.1自動生化儀的分類

3.1自動生化儀的分類

3.1.1連續(xù)流動式自動化分析儀

連續(xù)流動式自動化分析儀也叫管道式分析儀，其特點是測定項目相同的各待測樣本與試劑混合后的化學(xué)反應(yīng)，是在同一管道中經(jīng)流動過程完成的。這類儀器一般可分為空氣分段系統(tǒng)式和非分段系統(tǒng)式。所謂空氣分段系統(tǒng)是指在吸入管道的每一個樣品、試劑以及混合后的反應(yīng)液之間，均由一小段空氣間隔開；而非分段系統(tǒng)是靠試劑空白或緩沖液來間隔每個樣品的反應(yīng)液。在管道式分析儀中，以空氣分段系統(tǒng)式最多，且較典型，整套儀器是由樣品盤、比例泵、混合管、透析器、恒溫器、比色計和記錄器幾個部件所組成。管道內(nèi)的圓圈表示氣泡，氣泡可將樣品及試劑分隔為許多液柱，并起一定的攪拌作用。但氣泡影響比色，必須在比色前除去。

將幾個單通道管道式分析儀結(jié)合起來，對一個樣品同時測定幾個項目。著名的有12通道分析儀，命名為順序多項自動分析儀（sequentialmultipleautoanalyzer）簡稱SMA12/60。同時發(fā)展為SMAC，C為計算機(jī)（computer）的縮寫。這類大型分析儀至今仍有使用者。它對每個樣品可同時分析12個項目，每小時可分析60個樣品。后來發(fā)現(xiàn)不加入空氣泡，更有利于結(jié)果的檢測，發(fā)展為流動注射分析法（flowinjectionanalysis）。試劑的流動仍用比例泵驅(qū)動，樣品用轉(zhuǎn)動閥加入液流，反應(yīng)后比色檢測。

3.1.1連續(xù)流動式自動化分析儀

連續(xù)流動式自動化分析儀也叫3.1.2離心式生化分析儀

離心式分析儀是1969年以后發(fā)展起來的一種分析儀，由Anderson設(shè)計，其特點是化學(xué)反應(yīng)器裝在離心機(jī)的轉(zhuǎn)子位置，該圓形反應(yīng)器稱為轉(zhuǎn)頭，先將樣品和試劑分別置與轉(zhuǎn)頭內(nèi)，當(dāng)離心機(jī)開動后，圓盤內(nèi)的樣品和試劑受離心力的作用而相互混合發(fā)生反應(yīng)，最后流入圓盤外圈的比色槽內(nèi)，通過比色計進(jìn)行檢測。

離心式分析儀主要由兩部分組成，一為加樣部分，二為分析部分。加樣部分包括樣品盤、試劑盤、吸樣臂（或管）、試劑臂（加液器）和電子控制部分（鍵盤和顯示器等）。加樣時轉(zhuǎn)頭置于加樣部分。加樣完畢后將轉(zhuǎn)頭移至離心機(jī)上。分析部分，除安裝轉(zhuǎn)頭的離心機(jī)外，還有溫控和光學(xué)檢測系統(tǒng)，并有微機(jī)信息處理和顯示系統(tǒng)。3.1.2離心式生化分析儀

離心式分析儀是1969年以后發(fā)展1．3分立式生化分析儀

所謂分立式，是指按手工操作的方式編排程序，并以有節(jié)奏的機(jī)械操作代替手工，各環(huán)節(jié)用傳送帶連接起來，按順序依次操作。分立式分析儀與管道式分析儀在結(jié)構(gòu)上的主要區(qū)別為：前者各個樣品和試劑在各自的試管中起反應(yīng)，而后者是在同一管道中起反應(yīng)；前者采用由采樣器和加液器組成的稀釋器來取樣和加試劑，而不用比例泵；前者一般沒有透析器，如要除蛋白質(zhì)等干擾，需另行處理。恒溫器必須能容納需保溫的試管和試管架，所以比管道式分析儀的體積要大。除此以外，其它部件與管道式的基本相似。分立式分析儀的基本結(jié)構(gòu)如下圖所示。Depout公司還推出一種袋式分析儀，即試管變?yōu)樗芰洗?，反?yīng)在袋內(nèi)進(jìn)行，也以袋作比色杯。這種袋只能一次性使用。1．3分立式生化分析儀

所謂分立式，是指按手工操作的方式編排3.1.3干片式分析儀

干片式分析儀是80年代問世的。首先Eastmankodak公司以其精湛的化學(xué)工藝造出了測定血清中血糖、尿素、蛋白質(zhì)、膽固醇等的干式試劑片。當(dāng)加上定量的血清后，在干片的前面產(chǎn)生顏色反應(yīng)，用反射光度計檢測即可進(jìn)行定量。這類方法完全革除了液體試劑，故稱干化學(xué)法。BoehringerMannheim公司推出了用全血的干征試劑。即將血細(xì)胞排除于濾膜之外，而血漿與試劑發(fā)生反應(yīng)后顯色檢測。

3.1.3干片式分析儀

干片式分析儀是80年代問世的。首先E3.1.4模塊式自動化系列

7600系列全自動生化分析儀是日立公司于1998年開發(fā)出來的系列分析儀。它是由各種不同功能的模塊組合而成，功能模塊包括有樣本投入部、電解質(zhì)測定的ISE模塊、常規(guī)實驗項目測定的D模塊、特殊實驗項目測定的P模塊、復(fù)查樣本緩沖部和樣本收納部。根據(jù)D模塊和P模塊數(shù)目組合成不同型號的分析儀。

模塊組合式實驗室自動化系統(tǒng)包括：

樣品前處理系統(tǒng)，樣品輸送系統(tǒng)和樣品后處理系統(tǒng)（生化分析，電解質(zhì)分析，血液分析等）。樣品前處理系統(tǒng)由能獨立工作，不同功能的各模塊以同一標(biāo)準(zhǔn)來連接，通過計算機(jī)控制運行。由樣品投入部，離心分離部，開栓部，在線分注部，非在線分注部，貼條碼部，蓋栓部，樣品分注收存部，標(biāo)本接收部等模塊構(gòu)成前處理系統(tǒng)，每一模塊既是系統(tǒng)的一部分，又是獨立的單元，可根據(jù)不同需要選擇使用，具有靈活性和擴(kuò)展性。

后處理系統(tǒng)有電解質(zhì)分析系統(tǒng)，生化分析系統(tǒng)以及血液分析系統(tǒng)等。3.1.4模塊式自動化系列

7600系列全自動生化分析儀是日1．6全實驗室自動化分析系統(tǒng)

從檢驗標(biāo)本處理開始，即標(biāo)本的識別、傳輸、處理（分離血清等）、分注、分類（按項目分類）、檢測和收費的自動化流水作業(yè)，到分析后自動儲存標(biāo)本，檢驗結(jié)果的自動分析、報告與傳送，自動提示異常值或危險值，申請檢驗醫(yī)師隨時查詢檢驗結(jié)果的全過程實現(xiàn)自動化、網(wǎng)絡(luò)化。

1．6全實驗室自動化分析系統(tǒng)

從檢驗標(biāo)本處理開始，即標(biāo)本的識3.2分立式生化儀結(jié)構(gòu)

全自動生化分析儀一般由以下部分構(gòu)成：探針系統(tǒng)、攪拌和沖洗系統(tǒng)、恒溫系統(tǒng)、反應(yīng)盤、光路系統(tǒng)構(gòu)成。

3.2分立式生化儀結(jié)構(gòu)

全自動生化分析儀一般由以下部分構(gòu)成：2．1探針系統(tǒng)

液面檢測技術(shù)：通過檢測阻抗或電容、電流的變化，感知到空氣和液面，可保證探針的感應(yīng)裝置至液面時會自動停止下降，即可增加速度也可減少污染，防止堵塞。2．1探針系統(tǒng)

液面檢測技術(shù)：通過檢測阻抗或電容、電流的變化2．2攪拌和沖洗系統(tǒng)

攪拌系統(tǒng)是讓樣品和試劑混合后迅速分布均勻，保障測試正常進(jìn)行。常用的攪拌方法為沖入空氣、攪拌、振蕩等，但是都容易產(chǎn)生氣泡和外溢等問題。目前最好的方法是螺旋式攪拌棒附著特富龍涂層，一方面減少氣泡，另一方面減少攜帶和污染。

清洗系統(tǒng)一般包括試劑針的內(nèi)外臂清洗、樣本針的內(nèi)外臂清洗、比色杯的清洗。2．2攪拌和沖洗系統(tǒng)

攪拌系統(tǒng)是讓樣品和試劑混2．3恒溫系統(tǒng)

全自動生化儀一般都設(shè)有30和37度兩種溫度。目前常見的有水浴、空氣浴，最新的是恒溫液循環(huán)加溫方式。

水浴的優(yōu)點是溫度均勻、穩(wěn)定；缺點是升溫緩慢，開機(jī)預(yù)熱時間長，因水質(zhì)化（微生物、礦物質(zhì)沉積）影響測定，因此要定期換水和比色杯。

空氣浴的優(yōu)點是升溫迅速，無需保養(yǎng)；缺點是溫度易受外界環(huán)境影響。

恒溫液循環(huán)加溫集干式空氣浴和水浴的優(yōu)點，即有水浴溫度穩(wěn)定、均勻的優(yōu)點，又有空氣浴升溫迅速、無需維護(hù)保養(yǎng)的優(yōu)點。2．3恒溫系統(tǒng)

全自動生化2．4反應(yīng)盤

現(xiàn)在大多數(shù)采用硬質(zhì)玻璃比色杯（石英杯），其透光性好，易清潔，不易磨損。2．4反應(yīng)盤

現(xiàn)在大多數(shù)采用硬質(zhì)玻璃比色杯（石英杯），其透光2．5光路系統(tǒng)光源：光源分為鹵素?zé)艉透邏洪W爍氙燈。相對而言鹵素?zé)魤勖L，價格低，是大部分生化儀的首先。

2．5光路系統(tǒng)光源：光源分為鹵素?zé)艉透邏洪W爍3.3生化檢驗的原理和方法

臨床生化檢驗，主要在技術(shù)方面的應(yīng)用方面上探討生化檢驗新技術(shù)以及新的標(biāo)記物的選擇和評價，用于幫助診斷，又稱“診斷生化”。主要應(yīng)用于下列技術(shù)：光譜技術(shù)、電化學(xué)分析技術(shù)、層析技術(shù)、電泳技術(shù)、離心技術(shù)、抗原抗體特異性反應(yīng)和標(biāo)記技術(shù)、核酸擴(kuò)增、雜交及序列分析技術(shù)等，其中生化分析儀主要運用了光譜技術(shù)中的吸收光譜法和比濁法。3.3生化檢驗的原理和方法

臨床生化檢驗，主分別介紹如下分別介紹如下3．1吸收光譜法

3．1吸收光譜法

3．1．1光譜范圍和電子躍遷

波長從200nm—400nm的電磁輻射，稱為紫外光，波長從400nm—760nm的電磁輻射，稱為可見光。3．1．1光譜范圍和電子躍遷

波長從200nm—4003．1．2吸收曲線

以波長（λ）為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)而繪制出的一條曲線稱為吸收曲線。

在一段波長范圍內(nèi)，有最大吸收波長λmax和最小吸收波長λmin在最大吸收波長處測定可獲得最大的測定靈敏度。3．1．2吸收曲線

以波長（λ）為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)3．1．3吸光度的定義

一束強(qiáng)度為IO的平行單色光通過一個含有濃度為C的吸光物質(zhì)、厚度為L的吸收池時，如上圖，一些光子被吸收，光強(qiáng)從IO衰減為It，則該溶液的吸光度A等于：

3．1．3吸光度的定義

一束強(qiáng)度為IO的平行單色光通過一個含3．1．4Lamber-Beer定律

A=?CL

其中?為吸光系數(shù)，有兩種表示方法摩爾吸光系數(shù)和比吸光系數(shù)，摩爾吸光系數(shù)的意義為1摩爾濃度的溶液在厚度為1cm時的吸光度，比吸光系數(shù)的意義為濃度為1%（w/u）的溶液在厚度為1cm時的吸光度；C為溶液的濃度；L為吸收池的厚度（單位為cm，亦稱光徑）。

Lamber-Beer定律的意義為：某溶液的吸光度等于該物質(zhì)的吸光系數(shù)?、濃度C和光徑L（cm）的乘積，當(dāng)光徑不變時，濃度和吸光度成正比，這是生化分析儀利用吸收光譜法進(jìn)行定量測定的基礎(chǔ)，見下圖：

Lamber-Beer定律成立的前提條件是：（1）被吸收光為單色平行光，（2）待測定溶液為稀溶液。

除特種蛋白外的大部分臨床生化項目，配以相應(yīng)的試劑，均可利用吸收光譜法在生化分析儀上進(jìn)行測定。如：

酶類：包括ALT、AST、ALP、ACP、r-GT、a-HBDH、LDH、CK、CK-MB、a-AMY、等。

底物/代謝產(chǎn)物類：包括TG、TC、HDL-C、LDL-C、UA、UREA、Cr、Glu、TP、Alb、T-Bil、D-Bil、NH4+、CO2等。

無機(jī)離子類：包括Ca、P、Mg、Cl等。

3．1．4Lamber-Beer定律

A=?CL

其中?為吸3．2比濁法

3．2比濁法

3．2．1比濁法分兩類：透射比濁法和散射比濁法。帶有小粒的懸浮液和膠體溶液都具有向四面八方散射入射光的性質(zhì)，當(dāng)一束平行光通過含有懸浮質(zhì)點的懸浮液或膠體溶液時，同時受到散射和吸收兩個因素的影響，使光的強(qiáng)度減弱。在光源的光路方向上測量透射光（實際上還包括散射光）強(qiáng)度與入射光強(qiáng)度比值，并通過該比值測定出懸浮液或膠體溶液中質(zhì)點的溶度，稱為投射比濁法；在光路的其他方向上測量散射光強(qiáng)度，從而測定出懸浮液或膠體溶液中質(zhì)點的濃度，稱為散射比濁法。3．2．1比濁法分兩類：透射比濁法和散射比濁法。帶有小粒的懸3．2．2測定原理

3．2．2測定原理

透射比濁法

顆粒大小與光源波長接近，一束強(qiáng)度為I0的平行單色光通過一個含有懸浮質(zhì)點（顆粒大小與光源波長接近）的懸浮液或膠體溶液時，如上圖，其透射光強(qiáng)度I可用下式表示：

I=IOe-τL

式中,L為懸浮液或膠體溶液在光前進(jìn)方向上的長度，τ為濁度系數(shù)，與懸浮質(zhì)點的濃度C成線性關(guān)系。令τ=2.3KC，則：

該式與Lamber-Beer

顆粒大小遠(yuǎn)小于光源波長

定律相似，這是生化分析儀利用投射比濁法進(jìn)行定量測定的基礎(chǔ)，該法可以與吸收光譜法共用一個檢測器，所以生化分析儀，不需增加任何部件，均可利用此法進(jìn)行測定。大部分特種蛋白，如載脂蛋白類（apoAI,apoB等）、補體類（C3，C4等）免疫球蛋白類（IgG,IgM等）等，配以相應(yīng)的試劑，可利用此法在生化分析儀上進(jìn)行測定。透射比濁法

顆粒大小與光源波長接近，一束強(qiáng)度為I0散射比濁法

一束強(qiáng)度為IO平行單色光通過一個含有懸浮質(zhì)點（顆粒大小遠(yuǎn)小于光源波長）的懸浮液或膠體溶液時，如上圖，與入射光垂直方向上，其散射光強(qiáng)度I可用下式表示：

式中，n1,n2分別表示質(zhì)點與介質(zhì)的折射率，V表示單位體積內(nèi)的質(zhì)點數(shù)，r表示質(zhì)點半徑。可見散射光強(qiáng)度與懸浮質(zhì)點的濃度成正比，這是利用散射比濁法進(jìn)行定量測定的基礎(chǔ)，因另需在光路垂直方向上增加一檢測器，目前只有極少數(shù)生化分析儀可利用散射比濁法進(jìn)行定量測定，而幾乎所有的特種蛋白分析儀、免疫分析儀等都能利用散射比濁法進(jìn)行定量測定。散射比濁法

一束強(qiáng)度為IO平行單色光通過一個含有懸浮質(zhì)點（3．2．3方法學(xué)分析

（1）散射比濁法與透射比濁法：

散射比濁法靈敏度高，線性范圍寬，但干擾因素多。

（2）比濁法與吸收光譜法：

比濁法特異性差，靈敏度低。3．2．3方法學(xué)分析

（1）散射比濁法與透射比濁法：

散射3.4生化分析儀測定方法的分類及應(yīng)用度的計算

3.4生化分析儀測定方法的分類及應(yīng)用度的計算

4.4.1終點法

4.4.1終點法

4.4.1概述

指經(jīng)過一段時間（一般為10分鐘左右）的反應(yīng)，整個反應(yīng)達(dá)到平衡，由于反應(yīng)的平衡常數(shù)很大，可認(rèn)為所有的被測定物已轉(zhuǎn)變?yōu)楫a(chǎn)物，反應(yīng)液的吸光度不在增加（或降低），吸光度的增加（或降低）程度與被測定物的濃度成正比。如下圖：

如圖所示：t1時刻加入試劑（體積為V），t2時刻加入樣本（體積為S），然后攪拌并反應(yīng)，之后測量反應(yīng)液的吸光度，在t3時刻反應(yīng)達(dá)到終點。T2—t3為測定時間。

4.4.1概述

指經(jīng)過一段時間（一般為10分鐘左右）的反應(yīng)，4．4．2反應(yīng)度R（