流式細(xì)胞儀基本原理及應(yīng)用課件

流式細(xì)胞儀在臨床檢測(cè)和臨床科研中的應(yīng)用李柏青蚌埠醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室流式細(xì)胞儀在臨床檢測(cè)和臨床科研中的應(yīng)用李柏青-2-流式細(xì)胞儀和流式細(xì)胞術(shù)－概述流式細(xì)胞儀的工作原理和測(cè)量參數(shù)流式細(xì)胞儀在臨床檢測(cè)和科研中的應(yīng)用免疫學(xué)檢測(cè)和科研應(yīng)用血液病檢測(cè)和科研應(yīng)用腫瘤學(xué)檢測(cè)和科研應(yīng)用流式細(xì)胞儀的基本工作原理以及在基礎(chǔ)和臨床科研中的應(yīng)用-2-流式細(xì)胞儀和流式細(xì)胞術(shù)－概述流式細(xì)胞儀的基本工作原理以-3-一、流式細(xì)胞儀和流式細(xì)胞術(shù)的基本概念流式細(xì)胞儀(FlowCytometer，F(xiàn)CM):是集合光電子物理，光電測(cè)量技術(shù)，液流技術(shù)，計(jì)算機(jī)技術(shù)等現(xiàn)代高科技技術(shù)為一體的細(xì)胞測(cè)量和分析儀器。-3-一、流式細(xì)胞儀和流式細(xì)胞術(shù)的基本概念流式細(xì)胞儀(Flo-4-一、流式細(xì)胞儀和流式細(xì)胞術(shù)的基本概念流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry，F(xiàn)CM):是應(yīng)用流式細(xì)胞儀，對(duì)處于快速流動(dòng)液體中的細(xì)胞或生物顆粒進(jìn)行多參數(shù)、快速測(cè)量和定量分析，以及分選的技術(shù)。-4-一、流式細(xì)胞儀和流式細(xì)胞術(shù)的基本概念流式細(xì)胞術(shù)(Flo-5-一、流式細(xì)胞儀和流式細(xì)胞術(shù)－特點(diǎn)多參數(shù)測(cè)量和分析（散射光和熒光）；快速測(cè)量和分析每秒可達(dá)1000-10000個(gè)細(xì)胞分選純度可達(dá)99%以上。獲取的數(shù)據(jù)分析結(jié)果更具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；通常測(cè)量的對(duì)象如各種細(xì)胞細(xì)胞必須處在單個(gè)細(xì)胞懸液中。此外，也可測(cè)量微生物等生物顆粒，或者工合成微球非生物顆粒，-5-一、流式細(xì)胞儀和流式細(xì)胞術(shù)－特點(diǎn)多參數(shù)測(cè)量和分析（散射-6-臺(tái)式機(jī)——FACSCalibur雙激光

488nm 635nm四熒光參數(shù)分選、濃縮系統(tǒng)-6-臺(tái)式機(jī)——FACSCalibur雙激光77-8-大型機(jī)——FACSVantageSE科研型八熒光參數(shù)高速分選多路分選-8-大型機(jī)——FACSVantageSE-9-

流式細(xì)胞儀與熒光顯微鏡比較

流式細(xì)胞儀熒光顯微鏡

流動(dòng)的細(xì)胞靜止的細(xì)胞樣本數(shù)量大數(shù)量少高速分選樣本難以再利用細(xì)胞群體特征量分布可揭示細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)信息-9-流式細(xì)胞儀與熒光顯微鏡比較流式細(xì)胞儀-10-二、流式細(xì)胞儀的工作原理和測(cè)量參數(shù)光路系統(tǒng)：

激光光源，光路系統(tǒng)（透鏡、濾光片）電子系統(tǒng)：光電倍增管（PMT），補(bǔ)償電路液流系統(tǒng)：

鞘液系統(tǒng)，樣品流動(dòng)系統(tǒng)數(shù)據(jù)系統(tǒng)：計(jì)算機(jī)，數(shù)據(jù)測(cè)量和分析軟件。細(xì)胞分選系統(tǒng)（一）流式細(xì)胞儀的結(jié)構(gòu)

-10-二、流式細(xì)胞儀的工作原理和測(cè)量參數(shù)光路系統(tǒng)：（一）-11-流式細(xì)胞儀－光路系統(tǒng)激光(Laser)是一種相干光源，它能提供單一波長(zhǎng)、單一方向、同步的穩(wěn)定光照激光波長(zhǎng):488nm,635nm光收集系統(tǒng)是由若干組透鏡,濾波片,小孔組成，將產(chǎn)生的光信號(hào)引導(dǎo)至檢測(cè)器-11-流式細(xì)胞儀－光路系統(tǒng)激光(Laser)是一種相干光-12-光路系統(tǒng)-12-光路系統(tǒng)-13-InjectorTip-13-Injector-14-InjectorTipFluorescencesignalsFocusedlaserbeamSheathfluid-14-InjectorFluorescencesigna-15-流式細(xì)胞儀－光學(xué)系統(tǒng)激發(fā)光源與熒光標(biāo)記物-15-流式細(xì)胞儀－光學(xué)系統(tǒng)激發(fā)光源與熒光標(biāo)記物-16-光學(xué)檢測(cè)信號(hào)-16-光學(xué)檢測(cè)信號(hào)-17-流式細(xì)胞儀的光學(xué)系統(tǒng)FACSCalibur-17-流式細(xì)胞儀的光學(xué)系統(tǒng)FACSCalibur-18-流式細(xì)胞儀－液流系統(tǒng)-18-流式細(xì)胞儀－液流系統(tǒng)-19-液流系統(tǒng)：鞘液系統(tǒng)＋樣品流動(dòng)系統(tǒng)-19-液流系統(tǒng)：鞘液系統(tǒng)＋樣品流動(dòng)系統(tǒng)-20-流式細(xì)胞儀的電子系統(tǒng)

信號(hào)檢測(cè)和分析當(dāng)細(xì)胞攜帶熒光素,通過激光照射區(qū),受到激發(fā)產(chǎn)生不同波長(zhǎng)的、代表細(xì)胞內(nèi)不同物質(zhì)的熒光信號(hào)熒光信號(hào)由光電接收器接收，轉(zhuǎn)變?yōu)殡娒}沖信號(hào)，電脈沖信號(hào)經(jīng)A/D轉(zhuǎn)換成數(shù)字信號(hào)數(shù)字信號(hào)傳送到計(jì)算機(jī)，進(jìn)行儲(chǔ)存、作圖和統(tǒng)計(jì)分析-20-流式細(xì)胞儀的電子系統(tǒng)信號(hào)檢測(cè)和分析-21-數(shù)據(jù)系統(tǒng)-21-數(shù)據(jù)系統(tǒng)-22-（二）流式細(xì)胞儀可檢測(cè)的細(xì)胞參數(shù)細(xì)胞結(jié)構(gòu)細(xì)胞大小細(xì)胞顆粒性程度細(xì)胞表面面積核漿比例DNA含量與細(xì)胞周期RNA含量細(xì)胞功能細(xì)胞表面蛋白抗原細(xì)胞胞漿內(nèi)蛋白性抗原細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子細(xì)胞增殖細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度二、流式細(xì)胞儀的工作原理和測(cè)量參數(shù)-22-（二）流式細(xì)胞儀可檢測(cè)的細(xì)胞參數(shù)細(xì)胞結(jié)構(gòu)細(xì)胞功能二-23-（二）流式細(xì)胞儀可檢測(cè)的細(xì)胞的參數(shù)：

散射光信號(hào)前向角散射光（FSC,ForwardScatter）

入射光的前向

(5)散射光信號(hào),可反映：細(xì)胞相對(duì)大小及其表面積側(cè)向角散射光（SSC,SideScatter）

入射光90角的散射光信號(hào)，可反映：細(xì)胞顆粒性程度

（胞內(nèi)成分和構(gòu)造和表面結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性）-23-（二）流式細(xì)胞儀可檢測(cè)的細(xì)胞的參數(shù)：

-24-散射光信號(hào)前向角散射光－FSCFALSSensorLaser-24-散射光信號(hào)前向角散射光－FSCFALSSensor-25-散射光信號(hào)側(cè)向角散射光－SSCFALSSensor90LSSensorLaser-25-散射光信號(hào)側(cè)向角散射光－SSCFALSSensor-26-流式細(xì)胞的基本信息:“形態(tài)”-26-流式細(xì)胞的基本信息:“形態(tài)”-27--27--28-外周全血細(xì)胞（紅細(xì)胞溶解后）

以散射光表示的雙參數(shù)點(diǎn)圖-28-外周全血細(xì)胞（紅細(xì)胞溶解后）

-29-外周全血細(xì)胞（紅細(xì)胞溶解后）

以散射光表示的雙參數(shù)點(diǎn)圖中性粒細(xì)胞單核細(xì)胞淋巴細(xì)胞-29-外周全血細(xì)胞（紅細(xì)胞溶解后）

-30-（二）流式細(xì)胞檢測(cè)細(xì)胞參數(shù):

特征信息－熒光（Fluorescence）信號(hào)熒光素吸收激光（激發(fā)光波長(zhǎng)）能量熒光素將吸收能量釋放，轉(zhuǎn)換為釋放較入射光波長(zhǎng)更長(zhǎng)的光量子（發(fā)射光波長(zhǎng)）熒光素與特異抗體結(jié)合（熒光抗體）熒光抗體與細(xì)胞抗原結(jié)合越多，產(chǎn)生熒光信號(hào)越強(qiáng) 熒光素與細(xì)胞核酸結(jié)合，熒光強(qiáng)度反映核酸含量-30-（二）流式細(xì)胞檢測(cè)細(xì)胞參數(shù):

特征信息－熒光（F-31-（二）流式細(xì)胞檢測(cè)細(xì)胞參數(shù):

特征信息－熒光（Fluorescence）信號(hào)Forwardscatter(FSC)Sidescatter(SSC)FL1（第一熒光）-FITC(異硫氰酸熒光素）FL2（第二熒光）-PE（藻紅蛋白）FL3（第三熒光）-PerCP,PeCy5等PL4（第四熒光）-APC（藻青蛋白）-31-（二）流式細(xì)胞檢測(cè)細(xì)胞參數(shù):

特征信息－熒光（F-32-熒光信號(hào)FluorescenceFALSSensorFluorescencedetector(PMT3,PMT4etc.)-32-熒光信號(hào)FluorescenceFALSSenso-33--33--34-熒光信號(hào)雙色直接染色-34-熒光信號(hào)雙色直接染色-35-（三）流式細(xì)胞儀分析數(shù)據(jù)常見圖形：

（二維）點(diǎn)陳圖(DotPlot)適用于：雙參數(shù)分析-35-（三）流式細(xì)胞儀分析數(shù)據(jù)常見圖形：

（二維）點(diǎn)陳圖-36-（三）流式細(xì)胞儀分析數(shù)據(jù)常見圖形：

直方圖(HistogramPlot)適用于：?jiǎn)螀?shù)分析僅需要觀察某個(gè)熒光強(qiáng)度的變化-36-（三）流式細(xì)胞儀分析數(shù)據(jù)常見圖形：

直方圖(Hi-37-流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞的熒光標(biāo)記方法單標(biāo)：

一種單抗:FL1,FSC,SSC（三參數(shù)）雙標(biāo)：兩種單抗：FL1,FL1,FSC,SSC（四參數(shù)）三標(biāo)：三種單抗：FL1,FL2,FL3,FSC,SSC（五參數(shù)）四標(biāo)－四種熒光標(biāo)記抗體：四種單抗：FL1,FL2,FL3,FL4,FSC,SSC（六參數(shù)）-37-流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞的熒光標(biāo)記方法單標(biāo)：-38-淋巴細(xì)胞亞群分析細(xì)胞凋亡

腫瘤學(xué)移植免疫三流式細(xì)胞儀在臨床檢測(cè)和科研中的應(yīng)用血小板其它-38-淋巴細(xì)胞亞群分析細(xì)胞凋亡腫瘤學(xué)移植免疫三-39-淋巴細(xì)胞亞群分析-39-淋巴細(xì)胞亞群分析-40-AdhesionMetabolic-40-AdhesionMetabolic-41--41--42--42--43-

T淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)：

Tcells,Tsubsets,NKcells,Bcells-43-T淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)：-44-淋巴細(xì)胞亞群T淋巴細(xì)胞(CD3+)名稱功能CD3+CD4+輔助性/誘導(dǎo)性T細(xì)胞(Th/Ti)輔助和誘導(dǎo)細(xì)胞免疫和體液免疫CD3+CD4+CD29+CD3+CD4+CD29-輔助性T細(xì)胞(Th)誘導(dǎo)性T細(xì)胞(Ti)輔助細(xì)胞免疫和體液免疫誘導(dǎo)細(xì)胞免疫和體液免疫CD3+CD8+抑制性/殺傷性T細(xì)胞(Ts/Tc)抑制免疫反應(yīng)/殺傷異源細(xì)胞CD3+CD8+CD28-CD3+CD4+CD29-抑制性T細(xì)胞(Ts)殺傷性T細(xì)胞(Tc)抑制細(xì)胞和體液免疫細(xì)胞毒性T細(xì)胞CD3+CD4+CD8+活化的T細(xì)胞在T細(xì)胞惡性增生時(shí)升高CD3+CD4-CD8-有調(diào)節(jié)功能的T細(xì)胞,其表達(dá)/T細(xì)胞受體(TCR/)CD4+/CD8+比值CD45RA+CD45RO-幼稚的/靜止的T淋巴細(xì)胞當(dāng)免疫系統(tǒng)沒有能力更新輔助性或抑制性/細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞的祖細(xì)胞時(shí)此細(xì)胞亞群較低CD45RA-CD45RO+記憶性T淋巴細(xì)胞病菌感染時(shí)升高,但在慢性病毒感染,如HIV患者中降低CD45RA+CD45RO+活化的T細(xì)胞,感染時(shí)升高感染時(shí)升高-44-淋巴細(xì)胞亞群T淋巴細(xì)胞(CD3+)名稱功能-45-淋巴細(xì)胞亞群活化T淋巴細(xì)胞名稱功能CD3+HLA-DR+活化T細(xì)胞CD4+HLA-DR+活化的輔助性/誘導(dǎo)性T細(xì)胞CD8+HLA-DR+活化的抑制性/殺傷性T細(xì)胞CD4+CD25+活化的輔助性/誘導(dǎo)性T細(xì)胞CD8+CD25+CD8+CD38+HLA-DR+活化的抑制性/殺傷性T細(xì)胞在病毒感染的患者中增加;其增加意味著HIV患者的預(yù)后較差B淋巴細(xì)胞(19+)CD19+CD23+活化的B細(xì)胞過敏患者中升高CD19+CD5+在自身免疫性疾病中升高CD19+CD5+CD23+慢性B細(xì)胞白血病及單克隆B淋巴細(xì)胞NK細(xì)胞CD3+CD(16+56)+自身免疫性疾病時(shí)降低,而病毒感染時(shí)升高CD3+CD57+CMV(巨細(xì)胞病毒)感染的強(qiáng)烈征兆-45-淋巴細(xì)胞亞群活化T淋巴細(xì)胞名稱功-46-淋巴細(xì)胞亞群與疾病疾病CD3CD4CD8CD4/CD8NK自身免疫性疾病系統(tǒng)性紅斑狼瘡類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎自身免疫性溶血性貧血重癥肌無(wú)力免疫缺陷病愛滋病病毒感染傳染性單核細(xì)胞增多癥慢性活動(dòng)性肝炎活動(dòng)性肝硬化腫瘤消化道癌,肝癌,肺癌再生障礙性貧血粒細(xì)胞減少癥-46-淋巴細(xì)胞亞群與疾病疾病CD3CD4CD8-47-淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)意義疾病機(jī)理研究

疾病輔助診斷移植后免疫檢測(cè)治療方案的確定及療效評(píng)價(jià)CD25高于正常值5-10%,表明即將或已發(fā)生排斥CD4/CD8比值下降提示并發(fā)兇險(xiǎn)感染

<0.2時(shí),必須停用免疫抑制劑CD2+HLA-DR+增加5-10%,且不伴有CD25的增加,提示巨細(xì)胞病毒感染慢性疲勞,感染后綜合征,纖維肌痛,類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎,過敏等

疾病預(yù)防-47-淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)意義疾病機(jī)理研究疾病輔助診斷移植后-48-淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)意義

Control（n=20)ActiveSLE(n=17)StableSLE(n=13)CD370.4±5.8765.8±10.968.5±8.95CD435.0±5.7022.1±4.15**34.5±4.23CD827.9±5.7345.7±9.58**32.7±9.01CD4/CD81.27±0.140.43±0.12**1.05±0.26*NK17.8±5.484.37±3.31**7.59±5.01**鑒別活動(dòng)期和非活動(dòng)期SLE-48-淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)意義Control（n=20)A-49-HIVANDAIDS-49-HIVANDAIDS-50-Th1/Th2細(xì)胞-50-Th1/Th2細(xì)胞-51-Th1/Th2細(xì)胞Th1型細(xì)胞因子介導(dǎo)細(xì)胞免疫反應(yīng)引起遲發(fā)型過敏反應(yīng)、巨噬細(xì)胞活化、局部炎癥刺激來源：病毒、某些細(xì)菌Th2型介導(dǎo)體液免疫反應(yīng)引起B(yǎng)細(xì)胞增殖、分泌多克隆免疫球蛋白、促進(jìn)I型變態(tài)反應(yīng)（過敏反應(yīng)）刺激來源：多細(xì)胞寄生蟲、過敏原-51-Th1/Th2細(xì)胞Th1型細(xì)胞因子介導(dǎo)細(xì)胞免疫反應(yīng)-52-Th1/Th2細(xì)胞PMA+Ionomycin刺激4-6hr-52-Th1/Th2細(xì)胞PMA+Ionomycin刺激4-53-流式細(xì)胞儀檢測(cè)胞內(nèi)細(xì)胞因子

新鮮分離PBMC

加PMA＋I(xiàn)o刺激后6h測(cè)定胞內(nèi)細(xì)胞因子IL-4和IFN-g

檢測(cè)免疫細(xì)胞表型和結(jié)合檢測(cè)胞內(nèi)細(xì)胞因子：操作和分析方法；

-53-流式細(xì)胞儀檢測(cè)胞內(nèi)細(xì)胞因子新鮮分離PBMC檢測(cè)免-54-四色標(biāo)記胞內(nèi)因子FCM檢測(cè)-54-四色標(biāo)記胞內(nèi)因子FCM檢測(cè)-55-Th1/Th2失衡相關(guān)疾病嗜酸性細(xì)胞增多和IgE升高相關(guān)疾病

Ommen’sSyndrome(Ommen’s綜合征)HyperosinophilicSyndrome(高嗜曙紅細(xì)胞綜合征)Kimura’sDisease(Kimura’s疾病)Well’sSyndrome(Well’s綜合征)傳染病

病毒性疾病

人類免疫缺陷性病毒感染和愛滋病(AIDS)

麻疹

呼吸道合胞體病毒感染

慢性活動(dòng)性乙型肝炎病毒感染

分枝桿菌和其它細(xì)菌感染

麻瘋病/肺結(jié)核

鳥結(jié)核分枝桿菌復(fù)合感染滑膜炎反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎

淋病和梅毒

-55-Th1/Th2失衡相關(guān)疾病嗜酸性細(xì)胞增多和IgE升高-56-Th1/Th2失衡相關(guān)疾病寄生蟲病

原寄生蟲感染：皮膚和內(nèi)臟利什曼病

蠕蟲?。航z蟲病和血吸蟲病真菌性疾病

過敏性支氣管肺霉菌病

念珠菌病

隱球菌病

類球孢子菌病球孢子菌病

組織胞漿菌病惡性腫瘤

皮膚基底細(xì)胞和鱗細(xì)胞癌

SezarySyndrome(Sezary綜合征)

淋巴瘤

EBV相關(guān)的B細(xì)胞和非何杰金氏淋巴瘤

何杰金氏淋巴瘤

大細(xì)胞退行性(CD30+)淋巴瘤

多發(fā)性骨髓瘤和Castleman’s綜合征

卡氏肉瘤-56-Th1/Th2失衡相關(guān)疾病寄生蟲病www.gotof-57-Th1/Th2失衡相關(guān)疾病變應(yīng)性疾病

皮膚性哮喘

變應(yīng)性哮喘

春季結(jié)膜炎炎性和自身免疫性疾病

巨細(xì)胞(暫時(shí)性的)動(dòng)脈炎

系統(tǒng)性紅斑狼瘡

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎

自身免疫性甲狀腺疾病

類肉瘤病

銀屑病(牛皮癬)IgA腎病

多發(fā)性硬化-57-Th1/Th2失衡相關(guān)疾病變應(yīng)性疾病www.goto-58-Th1/Th2細(xì)胞檢測(cè)意義疾病治療發(fā)病機(jī)制研究使用Th1和Th2相關(guān)的細(xì)胞因子

IFN-治療麻瘋病

用抗Th1和Th2相關(guān)細(xì)胞因子或其受體的抗體

抗IL-4抗體治療真菌和寄生蟲感染

使用調(diào)節(jié)Th2/Th2細(xì)胞因子平衡的藥物:

薩力多胺(Thaliodomide)治療巨細(xì)胞動(dòng)脈炎疾病治療監(jiān)測(cè)-58-Th1/Th2細(xì)胞檢測(cè)意義疾病治療發(fā)病機(jī)制研究使用T-59-

腫瘤學(xué)-59-腫瘤學(xué)-60-腫瘤發(fā)生發(fā)展-60-腫瘤發(fā)生發(fā)展-61-02004006008001000PI熒光強(qiáng)度(DNA含量)DNA含量分析2N4NCountsG0/G1G2/MS異倍體-61-02004006008001000PI熒光-62-DNA含量分析70%人類癌癥中存在著異倍體或細(xì)胞周期的改變1.RossJS.DNAPloidyandCellCycleAnalysisinPathology.NewYork:Igaku-Shoin;1996:47-60DNA倍體和S期比例--指導(dǎo)治療[2]卵巢癌，乳腺癌，結(jié)腸癌，子宮內(nèi)膜癌，原發(fā)部位不明的癌癥--早期(I/II期)DNA倍體和DNA指數(shù)--預(yù)后長(zhǎng)期和無(wú)病生存期[2]卵巢癌--晚期2.TheRecommendMedicareNationalCoveragePolicyforFlowCytometry.HCFAWebsite,1999-62-DNA含量分析70%人類癌癥中存在著異倍體或細(xì)胞周期-63-P53/Bcl-2-63-P53/B-64-P53乳腺癌

與病理學(xué)分級(jí)有關(guān),并與乳腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)大腸腫瘤

早期發(fā)現(xiàn)大腸癌胃癌

與預(yù)后相關(guān)肝細(xì)胞癌

與組織分級(jí),腫瘤預(yù)后,轉(zhuǎn)移及腫瘤大小密切相關(guān)-64-P53乳腺癌與病理學(xué)分級(jí)有關(guān),并與乳腺癌-65-Bcl-2Bcl-2在正常組織中的表達(dá)

造血系統(tǒng)細(xì)胞—淋巴,單核細(xì)胞等受激素或生長(zhǎng)因子調(diào)節(jié)的腺上皮—前列腺上皮,子宮內(nèi)膜等干細(xì)胞或增值細(xì)胞—皮膚的基底細(xì)胞,腸上皮壽命長(zhǎng)的分裂細(xì)胞—神經(jīng)元胚胎組織Bcl-2在腫瘤組織中的表達(dá)

腎臟腫瘤—腎癌,腎盂乳頭瘤,Wilms瘤,腎嗜酸細(xì)胞瘤前列腺癌

B細(xì)胞性淋巴瘤乳腺癌(43%)

甲狀腺癌-65-Bcl-2Bcl-2在正常組織中的表達(dá)造血-66-nm23nm23與多種腫瘤的轉(zhuǎn)移及預(yù)后相關(guān)

肝細(xì)胞癌甲狀腺腫瘤乳腺癌結(jié)腸癌肉瘤-66-nm23nm23與多種腫瘤的轉(zhuǎn)移及預(yù)后相關(guān)-67-CD44(CD44s/CD44v)-67-CD44(CD44s/CD44v)www.gotof-68-腫瘤多藥耐藥性(MDR)檢測(cè)P-gp在腫瘤組織中的表達(dá)

乳腺癌,膀胱癌,胃癌,食管癌,卵巢癌,前列腺癌等化療前高表達(dá)化療后高表達(dá)

腎細(xì)胞癌,結(jié)腸癌,肝癌,腎上腺皮質(zhì)癌,胰腺癌等化療前低表達(dá)

非何杰金氏淋巴瘤,成神經(jīng)細(xì)胞瘤,急性髓白血病等化療不敏感化療敏感化療不敏感-68-腫瘤多藥耐藥性(MDR)檢測(cè)P-gp在腫瘤組織中的表-69-乳腺癌石蠟切片脫臘ER(雌激素受體)ER抗體染色酶解流式檢測(cè)固定(多聚甲醛)破膜(70%甲醇)細(xì)胞-69-乳腺癌石蠟切片脫臘ER(雌激素受體)ER抗體染色酶解-70-Cyclin(細(xì)胞周期蛋白)-70-Cyclin(細(xì)胞周期蛋白)www.gotofcm.-71-細(xì)胞凋亡-71-細(xì)胞凋亡-72-細(xì)胞凋亡分析

-72-細(xì)胞凋亡分析-73-DNA斷裂-73-DNA斷裂-74-乳腺癌Fas/FasL與疾病慢性病毒性肝炎惡性腫瘤細(xì)胞-黑色素瘤、結(jié)腸癌、肺癌、肝癌等腦缺血后細(xì)胞凋亡自身免疫性疾病—系統(tǒng)性紅斑狼瘡Fas/FasL(CD95/CD95L)-74-乳腺癌Fas/FasL與疾病慢性病毒性肝炎惡性腫瘤細(xì)-75-乳腺癌Caspases早期細(xì)胞凋亡AnnexinV/PI-75-乳腺癌Caspases早期細(xì)胞凋亡AnnexinV-76-移植免疫-76-移植免疫-77-CD25高于正常值5-10%,表明即將或已發(fā)生排斥CD4/CD8比值下降提示并發(fā)兇險(xiǎn)感染

<0.2時(shí),必須停用免疫抑制劑CD2+HLA-DR+增加5-10%,且不伴有CD25的增加提示巨細(xì)胞病毒感染移植后免疫監(jiān)測(cè)-77-CD25高于正常值5-10%,表明即將或已發(fā)生排斥-78-血小板-78-血小板-79-血小板活化靜止血小板活化血小板-79-血小板活化靜止血小板活化血小板www.gotofcm-80-血小板活化-80-血小板活化-81-網(wǎng)織血小板ITP(特發(fā)性血小板減少癥)化療鑒別診斷骨髓移植-81-網(wǎng)織血小板ITP(特發(fā)性血小板減少癥)化療鑒別診斷骨-82-血小板計(jì)數(shù)新標(biāo)準(zhǔn)(間接雙平臺(tái)法)R=紅細(xì)胞數(shù)/血小板數(shù)(流式細(xì)胞術(shù))血小板數(shù)=紅細(xì)胞數(shù)(血球儀)/R(國(guó)際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(ICSH)/國(guó)際實(shí)驗(yàn)血液學(xué)協(xié)會(huì)(ISLH)2001)

靈敏度高(1-400x109/L)，重復(fù)性好，室內(nèi)/室外變異系數(shù)均很小尤其應(yīng)用于血小板預(yù)輸注病人的檢測(cè)(閾值:20x109/L)-82-血小板計(jì)數(shù)新標(biāo)準(zhǔn)(間接雙平臺(tái)法)R=紅細(xì)胞數(shù)/血-83-其它-83-其它-84-HLA-B27-84-HLA-B27-85-正常人患者HLA-B27-85-正常人患者HLA-B27www.gotofcm.c-86-細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用活靶細(xì)胞死靶細(xì)胞替代51Cr釋放實(shí)驗(yàn)-86-細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用活-87-HLA-B27檢測(cè)CalibrationbeadsHLA-B27calibrationbeadsDecisionmarkerHLA—B27FITC（MFI)

-87-HLA-B27檢測(cè)Calibrationbeads-88-流式臨床應(yīng)用發(fā)展白血病/淋巴瘤免疫分型HIV感染的CD4絕對(duì)計(jì)數(shù)CD34絕對(duì)計(jì)數(shù)/異體移植的免疫重建抗原特異性T細(xì)胞檢測(cè)樹突狀細(xì)胞（DC）循環(huán)微轉(zhuǎn)移腫瘤細(xì)胞IIIIIIIVMartiGE,MaryaliceSS,etal.IntroductiontoFlowcytometry.SeminarsinHematology,2001;38(2):93-99-88-流式臨床應(yīng)用發(fā)展白血病-89-

流式微球分析

CytometricBeadArray（CBA）-89-

流式微球分析CytometricBeadAr-90-CBA與ELISA相比優(yōu)點(diǎn)

“多元”和“同步”檢測(cè)

樣本量少

靈敏度相似穩(wěn)定性好

-90-CBA與ELISA相比優(yōu)點(diǎn)

91

以上有不當(dāng)之處，請(qǐng)大家給與批評(píng)指正，謝謝大家！91流式細(xì)胞儀在臨床檢測(cè)和臨床科研中的應(yīng)用李柏青蚌埠醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室流式細(xì)胞儀在臨床檢測(cè)和臨床科研中的應(yīng)用李柏青-93-流式細(xì)胞儀和流式細(xì)胞術(shù)－概述流式細(xì)胞儀的工作原理和測(cè)量參數(shù)流式細(xì)胞儀在臨床檢測(cè)和科研中的應(yīng)用免疫學(xué)檢測(cè)和科研應(yīng)用血液病檢測(cè)和科研應(yīng)用腫瘤學(xué)檢測(cè)和科研應(yīng)用流式細(xì)胞儀的基本工作原理以及在基礎(chǔ)和臨床科研中的應(yīng)用-2-流式細(xì)胞儀和流式細(xì)胞術(shù)－概述流式細(xì)胞儀的基本工作原理以-94-一、流式細(xì)胞儀和流式細(xì)胞術(shù)的基本概念流式細(xì)胞儀(FlowCytometer，F(xiàn)CM):是集合光電子物理，光電測(cè)量技術(shù)，液流技術(shù)，計(jì)算機(jī)技術(shù)等現(xiàn)代高科技技術(shù)為一體的細(xì)胞測(cè)量和分析儀器。-3-一、流式細(xì)胞儀和流式細(xì)胞術(shù)的基本概念流式細(xì)胞儀(Flo-95-一、流式細(xì)胞儀和流式細(xì)胞術(shù)的基本概念流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry，F(xiàn)CM):是應(yīng)用流式細(xì)胞儀，對(duì)處于快速流動(dòng)液體中的細(xì)胞或生物顆粒進(jìn)行多參數(shù)、快速測(cè)量和定量分析，以及分選的技術(shù)。-4-一、流式細(xì)胞儀和流式細(xì)胞術(shù)的基本概念流式細(xì)胞術(shù)(Flo-96-一、流式細(xì)胞儀和流式細(xì)胞術(shù)－特點(diǎn)多參數(shù)測(cè)量和分析（散射光和熒光）；快速測(cè)量和分析每秒可達(dá)1000-10000個(gè)細(xì)胞分選純度可達(dá)99%以上。獲取的數(shù)據(jù)分析結(jié)果更具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；通常測(cè)量的對(duì)象如各種細(xì)胞細(xì)胞必須處在單個(gè)細(xì)胞懸液中。此外，也可測(cè)量微生物等生物顆粒，或者工合成微球非生物顆粒，-5-一、流式細(xì)胞儀和流式細(xì)胞術(shù)－特點(diǎn)多參數(shù)測(cè)量和分析（散射-97-臺(tái)式機(jī)——FACSCalibur雙激光

488nm 635nm四熒光參數(shù)分選、濃縮系統(tǒng)-6-臺(tái)式機(jī)——FACSCalibur雙激光987-99-大型機(jī)——FACSVantageSE科研型八熒光參數(shù)高速分選多路分選-8-大型機(jī)——FACSVantageSE-100-

流式細(xì)胞儀與熒光顯微鏡比較

流式細(xì)胞儀熒光顯微鏡

流動(dòng)的細(xì)胞靜止的細(xì)胞樣本數(shù)量大數(shù)量少高速分選樣本難以再利用細(xì)胞群體特征量分布可揭示細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)信息-9-流式細(xì)胞儀與熒光顯微鏡比較流式細(xì)胞儀-101-二、流式細(xì)胞儀的工作原理和測(cè)量參數(shù)光路系統(tǒng)：

激光光源，光路系統(tǒng)（透鏡、濾光片）電子系統(tǒng)：光電倍增管（PMT），補(bǔ)償電路液流系統(tǒng)：

鞘液系統(tǒng)，樣品流動(dòng)系統(tǒng)數(shù)據(jù)系統(tǒng)：計(jì)算機(jī)，數(shù)據(jù)測(cè)量和分析軟件。細(xì)胞分選系統(tǒng)（一）流式細(xì)胞儀的結(jié)構(gòu)

-10-二、流式細(xì)胞儀的工作原理和測(cè)量參數(shù)光路系統(tǒng)：（一）-102-流式細(xì)胞儀－光路系統(tǒng)激光(Laser)是一種相干光源，它能提供單一波長(zhǎng)、單一方向、同步的穩(wěn)定光照激光波長(zhǎng):488nm,635nm光收集系統(tǒng)是由若干組透鏡,濾波片,小孔組成，將產(chǎn)生的光信號(hào)引導(dǎo)至檢測(cè)器-11-流式細(xì)胞儀－光路系統(tǒng)激光(Laser)是一種相干光-103-光路系統(tǒng)-12-光路系統(tǒng)-104-InjectorTip-13-Injector-105-InjectorTipFluorescencesignalsFocusedlaserbeamSheathfluid-14-InjectorFluorescencesigna-106-流式細(xì)胞儀－光學(xué)系統(tǒng)激發(fā)光源與熒光標(biāo)記物-15-流式細(xì)胞儀－光學(xué)系統(tǒng)激發(fā)光源與熒光標(biāo)記物-107-光學(xué)檢測(cè)信號(hào)-16-光學(xué)檢測(cè)信號(hào)-108-流式細(xì)胞儀的光學(xué)系統(tǒng)FACSCalibur-17-流式細(xì)胞儀的光學(xué)系統(tǒng)FACSCalibur-109-流式細(xì)胞儀－液流系統(tǒng)-18-流式細(xì)胞儀－液流系統(tǒng)-110-液流系統(tǒng)：鞘液系統(tǒng)＋樣品流動(dòng)系統(tǒng)-19-液流系統(tǒng)：鞘液系統(tǒng)＋樣品流動(dòng)系統(tǒng)-111-流式細(xì)胞儀的電子系統(tǒng)

信號(hào)檢測(cè)和分析當(dāng)細(xì)胞攜帶熒光素,通過激光照射區(qū),受到激發(fā)產(chǎn)生不同波長(zhǎng)的、代表細(xì)胞內(nèi)不同物質(zhì)的熒光信號(hào)熒光信號(hào)由光電接收器接收，轉(zhuǎn)變?yōu)殡娒}沖信號(hào)，電脈沖信號(hào)經(jīng)A/D轉(zhuǎn)換成數(shù)字信號(hào)數(shù)字信號(hào)傳送到計(jì)算機(jī)，進(jìn)行儲(chǔ)存、作圖和統(tǒng)計(jì)分析-20-流式細(xì)胞儀的電子系統(tǒng)信號(hào)檢測(cè)和分析-112-數(shù)據(jù)系統(tǒng)-21-數(shù)據(jù)系統(tǒng)-113-（二）流式細(xì)胞儀可檢測(cè)的細(xì)胞參數(shù)細(xì)胞結(jié)構(gòu)細(xì)胞大小細(xì)胞顆粒性程度細(xì)胞表面面積核漿比例DNA含量與細(xì)胞周期RNA含量細(xì)胞功能細(xì)胞表面蛋白抗原細(xì)胞胞漿內(nèi)蛋白性抗原細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子細(xì)胞增殖細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度二、流式細(xì)胞儀的工作原理和測(cè)量參數(shù)-22-（二）流式細(xì)胞儀可檢測(cè)的細(xì)胞參數(shù)細(xì)胞結(jié)構(gòu)細(xì)胞功能二-114-（二）流式細(xì)胞儀可檢測(cè)的細(xì)胞的參數(shù)：

散射光信號(hào)前向角散射光（FSC,ForwardScatter）

入射光的前向

(5)散射光信號(hào),可反映：細(xì)胞相對(duì)大小及其表面積側(cè)向角散射光（SSC,SideScatter）

入射光90角的散射光信號(hào)，可反映：細(xì)胞顆粒性程度

（胞內(nèi)成分和構(gòu)造和表面結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性）-23-（二）流式細(xì)胞儀可檢測(cè)的細(xì)胞的參數(shù)：

-115-散射光信號(hào)前向角散射光－FSCFALSSensorLaser-24-散射光信號(hào)前向角散射光－FSCFALSSensor-116-散射光信號(hào)側(cè)向角散射光－SSCFALSSensor90LSSensorLaser-25-散射光信號(hào)側(cè)向角散射光－SSCFALSSensor-117-流式細(xì)胞的基本信息:“形態(tài)”-26-流式細(xì)胞的基本信息:“形態(tài)”-118--27--119-外周全血細(xì)胞（紅細(xì)胞溶解后）

以散射光表示的雙參數(shù)點(diǎn)圖-28-外周全血細(xì)胞（紅細(xì)胞溶解后）

-120-外周全血細(xì)胞（紅細(xì)胞溶解后）

以散射光表示的雙參數(shù)點(diǎn)圖中性粒細(xì)胞單核細(xì)胞淋巴細(xì)胞-29-外周全血細(xì)胞（紅細(xì)胞溶解后）

-121-（二）流式細(xì)胞檢測(cè)細(xì)胞參數(shù):

特征信息－熒光（Fluorescence）信號(hào)熒光素吸收激光（激發(fā)光波長(zhǎng)）能量熒光素將吸收能量釋放，轉(zhuǎn)換為釋放較入射光波長(zhǎng)更長(zhǎng)的光量子（發(fā)射光波長(zhǎng)）熒光素與特異抗體結(jié)合（熒光抗體）熒光抗體與細(xì)胞抗原結(jié)合越多，產(chǎn)生熒光信號(hào)越強(qiáng) 熒光素與細(xì)胞核酸結(jié)合，熒光強(qiáng)度反映核酸含量-30-（二）流式細(xì)胞檢測(cè)細(xì)胞參數(shù):

特征信息－熒光（F-122-（二）流式細(xì)胞檢測(cè)細(xì)胞參數(shù):

特征信息－熒光（Fluorescence）信號(hào)Forwardscatter(FSC)Sidescatter(SSC)FL1（第一熒光）-FITC(異硫氰酸熒光素）FL2（第二熒光）-PE（藻紅蛋白）FL3（第三熒光）-PerCP,PeCy5等PL4（第四熒光）-APC（藻青蛋白）-31-（二）流式細(xì)胞檢測(cè)細(xì)胞參數(shù):

特征信息－熒光（F-123-熒光信號(hào)FluorescenceFALSSensorFluorescencedetector(PMT3,PMT4etc.)-32-熒光信號(hào)FluorescenceFALSSenso-124--33--125-熒光信號(hào)雙色直接染色-34-熒光信號(hào)雙色直接染色-126-（三）流式細(xì)胞儀分析數(shù)據(jù)常見圖形：

（二維）點(diǎn)陳圖(DotPlot)適用于：雙參數(shù)分析-35-（三）流式細(xì)胞儀分析數(shù)據(jù)常見圖形：

（二維）點(diǎn)陳圖-127-（三）流式細(xì)胞儀分析數(shù)據(jù)常見圖形：

直方圖(HistogramPlot)適用于：?jiǎn)螀?shù)分析僅需要觀察某個(gè)熒光強(qiáng)度的變化-36-（三）流式細(xì)胞儀分析數(shù)據(jù)常見圖形：

直方圖(Hi-128-流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞的熒光標(biāo)記方法單標(biāo)：

一種單抗:FL1,FSC,SSC（三參數(shù)）雙標(biāo)：兩種單抗：FL1,FL1,FSC,SSC（四參數(shù)）三標(biāo)：三種單抗：FL1,FL2,FL3,FSC,SSC（五參數(shù)）四標(biāo)－四種熒光標(biāo)記抗體：四種單抗：FL1,FL2,FL3,FL4,FSC,SSC（六參數(shù)）-37-流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞的熒光標(biāo)記方法單標(biāo)：-129-淋巴細(xì)胞亞群分析細(xì)胞凋亡

腫瘤學(xué)移植免疫三流式細(xì)胞儀在臨床檢測(cè)和科研中的應(yīng)用血小板其它-38-淋巴細(xì)胞亞群分析細(xì)胞凋亡腫瘤學(xué)移植免疫三-130-淋巴細(xì)胞亞群分析-39-淋巴細(xì)胞亞群分析-131-AdhesionMetabolic-40-AdhesionMetabolic-132--41--133--42--134-

T淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)：

Tcells,Tsubsets,NKcells,Bcells-43-T淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)：-135-淋巴細(xì)胞亞群T淋巴細(xì)胞(CD3+)名稱功能CD3+CD4+輔助性/誘導(dǎo)性T細(xì)胞(Th/Ti)輔助和誘導(dǎo)細(xì)胞免疫和體液免疫CD3+CD4+CD29+CD3+CD4+CD29-輔助性T細(xì)胞(Th)誘導(dǎo)性T細(xì)胞(Ti)輔助細(xì)胞免疫和體液免疫誘導(dǎo)細(xì)胞免疫和體液免疫CD3+CD8+抑制性/殺傷性T細(xì)胞(Ts/Tc)抑制免疫反應(yīng)/殺傷異源細(xì)胞CD3+CD8+CD28-CD3+CD4+CD29-抑制性T細(xì)胞(Ts)殺傷性T細(xì)胞(Tc)抑制細(xì)胞和體液免疫細(xì)胞毒性T細(xì)胞CD3+CD4+CD8+活化的T細(xì)胞在T細(xì)胞惡性增生時(shí)升高CD3+CD4-CD8-有調(diào)節(jié)功能的T細(xì)胞,其表達(dá)/T細(xì)胞受體(TCR/)CD4+/CD8+比值CD45RA+CD45RO-幼稚的/靜止的T淋巴細(xì)胞當(dāng)免疫系統(tǒng)沒有能力更新輔助性或抑制性/細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞的祖細(xì)胞時(shí)此細(xì)胞亞群較低CD45RA-CD45RO+記憶性T淋巴細(xì)胞病菌感染時(shí)升高,但在慢性病毒感染,如HIV患者中降低CD45RA+CD45RO+活化的T細(xì)胞,感染時(shí)升高感染時(shí)升高-44-淋巴細(xì)胞亞群T淋巴細(xì)胞(CD3+)名稱功能-136-淋巴細(xì)胞亞群活化T淋巴細(xì)胞名稱功能CD3+HLA-DR+活化T細(xì)胞CD4+HLA-DR+活化的輔助性/誘導(dǎo)性T細(xì)胞CD8+HLA-DR+活化的抑制性/殺傷性T細(xì)胞CD4+CD25+活化的輔助性/誘導(dǎo)性T細(xì)胞CD8+CD25+CD8+CD38+HLA-DR+活化的抑制性/殺傷性T細(xì)胞在病毒感染的患者中增加;其增加意味著HIV患者的預(yù)后較差B淋巴細(xì)胞(19+)CD19+CD23+活化的B細(xì)胞過敏患者中升高CD19+CD5+在自身免疫性疾病中升高CD19+CD5+CD23+慢性B細(xì)胞白血病及單克隆B淋巴細(xì)胞NK細(xì)胞CD3+CD(16+56)+自身免疫性疾病時(shí)降低,而病毒感染時(shí)升高CD3+CD57+CMV(巨細(xì)胞病毒)感染的強(qiáng)烈征兆-45-淋巴細(xì)胞亞群活化T淋巴細(xì)胞名稱功-137-淋巴細(xì)胞亞群與疾病疾病CD3CD4CD8CD4/CD8NK自身免疫性疾病系統(tǒng)性紅斑狼瘡類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎自身免疫性溶血性貧血重癥肌無(wú)力免疫缺陷病愛滋病病毒感染傳染性單核細(xì)胞增多癥慢性活動(dòng)性肝炎活動(dòng)性肝硬化腫瘤消化道癌,肝癌,肺癌再生障礙性貧血粒細(xì)胞減少癥-46-淋巴細(xì)胞亞群與疾病疾病CD3CD4CD8-138-淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)意義疾病機(jī)理研究

疾病輔助診斷移植后免疫檢測(cè)治療方案的確定及療效評(píng)價(jià)CD25高于正常值5-10%,表明即將或已發(fā)生排斥CD4/CD8比值下降提示并發(fā)兇險(xiǎn)感染

<0.2時(shí),必須停用免疫抑制劑CD2+HLA-DR+增加5-10%,且不伴有CD25的增加,提示巨細(xì)胞病毒感染慢性疲勞,感染后綜合征,纖維肌痛,類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎,過敏等

疾病預(yù)防-47-淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)意義疾病機(jī)理研究疾病輔助診斷移植后-139-淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)意義

Control（n=20)ActiveSLE(n=17)StableSLE(n=13)CD370.4±5.8765.8±10.968.5±8.95CD435.0±5.7022.1±4.15**34.5±4.23CD827.9±5.7345.7±9.58**32.7±9.01CD4/CD81.27±0.140.43±0.12**1.05±0.26*NK17.8±5.484.37±3.31**7.59±5.01**鑒別活動(dòng)期和非活動(dòng)期SLE-48-淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)意義Control（n=20)A-140-HIVANDAIDS-49-HIVANDAIDS-141-Th1/Th2細(xì)胞-50-Th1/Th2細(xì)胞-142-Th1/Th2細(xì)胞Th1型細(xì)胞因子介導(dǎo)細(xì)胞免疫反應(yīng)引起遲發(fā)型過敏反應(yīng)、巨噬細(xì)胞活化、局部炎癥刺激來源：病毒、某些細(xì)菌Th2型介導(dǎo)體液免疫反應(yīng)引起B(yǎng)細(xì)胞增殖、分泌多克隆免疫球蛋白、促進(jìn)I型變態(tài)反應(yīng)（過敏反應(yīng)）刺激來源：多細(xì)胞寄生蟲、過敏原-51-Th1/Th2細(xì)胞Th1型細(xì)胞因子介導(dǎo)細(xì)胞免疫反應(yīng)-143-Th1/Th2細(xì)胞PMA+Ionomycin刺激4-6hr-52-Th1/Th2細(xì)胞PMA+Ionomycin刺激4-144-流式細(xì)胞儀檢測(cè)胞內(nèi)細(xì)胞因子

新鮮分離PBMC

加PMA＋I(xiàn)o刺激后6h測(cè)定胞內(nèi)細(xì)胞因子IL-4和IFN-g

檢測(cè)免疫細(xì)胞表型和結(jié)合檢測(cè)胞內(nèi)細(xì)胞因子：操作和分析方法；

-53-流式細(xì)胞儀檢測(cè)胞內(nèi)細(xì)胞因子新鮮分離PBMC檢測(cè)免-145-四色標(biāo)記胞內(nèi)因子FCM檢測(cè)-54-四色標(biāo)記胞內(nèi)因子FCM檢測(cè)-146-Th1/Th2失衡相關(guān)疾病嗜酸性細(xì)胞增多和IgE升高相關(guān)疾病

Ommen’sSyndrome(Ommen’s綜合征)HyperosinophilicSyndrome(高嗜曙紅細(xì)胞綜合征)Kimura’sDisease(Kimura’s疾病)Well’sSyndrome(Well’s綜合征)傳染病

病毒性疾病

人類免疫缺陷性病毒感染和愛滋病(AIDS)

麻疹

呼吸道合胞體病毒感染

慢性活動(dòng)性乙型肝炎病毒感染

分枝桿菌和其它細(xì)菌感染

麻瘋病/肺結(jié)核

鳥結(jié)核分枝桿菌復(fù)合感染滑膜炎反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎

淋病和梅毒

-55-Th1/Th2失衡相關(guān)疾病嗜酸性細(xì)胞增多和IgE升高-147-Th1/Th2失衡相關(guān)疾病寄生蟲病

原寄生蟲感染：皮膚和內(nèi)臟利什曼病

蠕蟲?。航z蟲病和血吸蟲病真菌性疾病

過敏性支氣管肺霉菌病

念珠菌病

隱球菌病

類球孢子菌病球孢子菌病

組織胞漿菌病惡性腫瘤

皮膚基底細(xì)胞和鱗細(xì)胞癌

SezarySyndrome(Sezary綜合征)

淋巴瘤

EBV相關(guān)的B細(xì)胞和非何杰金氏淋巴瘤

何杰金氏淋巴瘤

大細(xì)胞退行性(CD30+)淋巴瘤

多發(fā)性骨髓瘤和Castleman’s綜合征

卡氏肉瘤-56-Th1/Th2失衡相關(guān)疾病寄生蟲病www.gotof-148-Th1/Th2失衡相關(guān)疾病變應(yīng)性疾病

皮膚性哮喘

變應(yīng)性哮喘

春季結(jié)膜炎炎性和自身免疫性疾病

巨細(xì)胞(暫時(shí)性的)動(dòng)脈炎

系統(tǒng)性紅斑狼瘡

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎

自身免疫性甲狀腺疾病

類肉瘤病

銀屑病(牛皮癬)IgA腎病

多發(fā)性硬化-57-Th1/Th2失衡相關(guān)疾病變應(yīng)性疾病www.goto-149-Th1/Th2細(xì)胞檢測(cè)意義疾病治療發(fā)病機(jī)制研究使用Th1和Th2相關(guān)的細(xì)胞因子

IFN-治療麻瘋病

用抗Th1和Th2相關(guān)細(xì)胞因子或其受體的抗體

抗IL-4抗體治療真菌和寄生蟲感染

使用調(diào)節(jié)Th2/Th2細(xì)胞因子平衡的藥物:

薩力多胺(Thaliodomide)治療巨細(xì)胞動(dòng)脈炎疾病治療監(jiān)測(cè)-58-Th1/Th2細(xì)胞檢測(cè)意義疾病治療發(fā)病機(jī)制研究使用T-150-

腫瘤學(xué)-59-腫瘤學(xué)-151-腫瘤發(fā)生發(fā)展-60-腫瘤發(fā)生發(fā)展-152-02004006008001000PI熒光強(qiáng)度(DNA含量)DNA含量分析2N4NCountsG0/G1G2/MS異倍體-61-02004006008001000PI熒光-153-DNA含量分析70%人類癌癥中存在著異倍體或細(xì)胞周期的改變1.RossJS.DNAPloidyandCellCycleAnalysisinPathology.NewYork:Igaku-Shoin;1996:47-60DNA倍體和S期比例--指導(dǎo)治療[2]卵巢癌，乳腺癌，結(jié)腸癌，子宮內(nèi)膜癌，原發(fā)部位不明的癌癥--早期(I/II期)DNA倍體和DNA指數(shù)--預(yù)后長(zhǎng)期和無(wú)病生存期[2]卵巢癌--晚期2.TheRecommendMedicareNationalCoveragePolicyforFlowCytometry.HCFAWebsite,1999-62-DNA含量分析70%人類癌癥中存在著異倍體或細(xì)胞周期-154-P53/Bcl-2-63-P53/B-155-P53乳腺癌

與病理學(xué)分級(jí)有關(guān),并與乳腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)大腸腫瘤

早期發(fā)現(xiàn)大腸癌胃癌

與預(yù)后相關(guān)肝細(xì)胞癌

與組織分級(jí),腫瘤預(yù)后,轉(zhuǎn)移及腫瘤大小密切相關(guān)-64-P53乳腺癌與病理學(xué)分級(jí)有關(guān),并與乳腺癌-156-Bcl-2Bcl-2在正常組織中的表達(dá)

造血系統(tǒng)細(xì)胞—淋巴,單核細(xì)胞等受激素或生長(zhǎng)因子調(diào)節(jié)的腺上皮—前列腺上皮,子宮內(nèi)膜等干細(xì)胞或增值細(xì)胞—皮膚的基底細(xì)胞,腸上皮