不同移植途徑對人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療 大鼠腦缺血卒中的歸巢行為及療效的影響課件

不同移植途徑對人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療

大鼠腦缺血卒中的歸巢行為及療效的影響背景腦血管疾病是臨床常見的高致殘率、致死率的疾病缺血性腦血管病在我國占到全部腦血管病的70％左右臨床治療沒有十分有效的治療措施，干細(xì)胞治療臨床前研究結(jié)果令人鼓舞腦缺血卒中后動態(tài)病理變化FrankCBarone,GioraZFeuerstein.InflammatoryMediatorsandStroke:NewOpportunitiesforNovelTherapeutics.JournalofCerebralBloodFlow&Metabolism,1999,19:819–834干細(xì)胞歸巢機(jī)制歸巢性是hBMSCs重要的特點之一,基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1α與其受體CXCR4信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)對hBMSCs特異的歸巢到腦梗死及缺血半暗帶區(qū)域起到重要作用EricM.Green,RichardT.LeeProteinsandSmallMoleculesforCellularRegenerativeMedicine.PhysiolRev.2013Jan;93(1):311–325.臨床應(yīng)用前所面臨的問題病人選擇治療時間窗選擇治療途徑的選擇*相關(guān)機(jī)制研究*研究內(nèi)容不同移植途徑對人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療大鼠腦缺血卒中的歸巢行為的影響不同移植途徑對人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療大鼠腦缺血卒中的療效的影響研究目的建立動物模型，模擬臨床移植方式：頸動脈、股靜脈、腦實質(zhì)、腦室、腰蛛網(wǎng)膜下腔移植觀察移植途徑對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療效果影響探討其作用機(jī)制篩選適合臨床需要的移植途徑檢測指標(biāo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的遷移分布：HuN行為學(xué)梗塞面積測定：HE神經(jīng)元凋亡：NeuN、Bcl-2、Bax神經(jīng)功能重塑：PSD-95、Synaptophysin神經(jīng)損害評分和粘貼物移除實驗線圖顯示各種途徑移植干細(xì)胞治療后神經(jīng)損害評分和粘貼物移除實驗變化趨勢，細(xì)胞治療在移植后都有一定的治療效果，其中A、B、C組動物在移植后1周至4周功能恢復(fù)明顯（P＜0.05），E組與F組比較第四周時未見明顯差異，D組效果介于以上之間

相對梗死體積各種途徑移植后4周各組的相對梗死體積情況。其中ABCD組與對照組F比較均有顯著差異，E組與F組在之間比較未見明顯差異，但總體上仍有改善（*vs.F組p＜0.05）

梗塞灶周圍皮層神經(jīng)元細(xì)胞計數(shù)梗塞灶周圍皮層神經(jīng)元細(xì)胞計數(shù)。腦缺血后梗塞灶周圍大量神經(jīng)元凋亡，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植后可增加梗塞灶周圍神經(jīng)元存活數(shù)量，AB組與F組比較有顯著差異，CDE組與F組比較未見明顯差異（*vs.F組p＜0.05）

皮層梗塞區(qū)周邊Bax表達(dá)皮層梗塞區(qū)周邊Bax表達(dá)情況（3d）。圖示可見在梗塞灶皮層周圍有大量Bax陽性表達(dá)細(xì)胞，×20倍鏡下計數(shù)Bax陽性細(xì)胞率，ABC與對照F組比較Bax陽性細(xì)胞率顯著減低，DE組與F組比較未見差異（*vs.F組p＜0.05）

皮層梗塞區(qū)周邊Bcl-2表達(dá)皮層梗塞區(qū)周邊Bcl-2表達(dá)情況（3d）。圖示可見在梗塞灶皮層周圍有大量Bcl-2陽性表達(dá)細(xì)胞，×20倍鏡下計數(shù)Bax陽性細(xì)胞率，AB組與對照F組比較Bcl-2陽性細(xì)胞率顯著增高，CDE組與F組比較未見差異

皮層梗塞區(qū)周邊Syp表達(dá)皮層梗塞區(qū)周邊Syp表達(dá)情況。圖示可見Syn主要在神經(jīng)氈內(nèi)表達(dá)，高倍（×40）視野下見圍繞神經(jīng)元胞體外側(cè)環(huán)狀顆粒狀陽性表達(dá)（箭頭所示），在梗塞灶周邊表達(dá)增強(qiáng)，ABCD組與對照F組比較有顯著差異（*vs.F組p＜0.05）

皮層梗塞區(qū)周邊PSD-95表達(dá)WesternblotWesternblot法檢測梗塞側(cè)大腦半球與神經(jīng)功能重塑相關(guān)的蛋白在不同治療途徑移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞后表達(dá)差異情況。Syp蛋白檢測結(jié)果顯示ABC組與DEF組比較有顯著統(tǒng)計學(xué)差異，A組與BC組比較有顯著差異，BC組之間比較未見顯著性差異。PSD-95蛋白檢測結(jié)果顯示AB組與CDEF組比較有顯著統(tǒng)計學(xué)差異，A組與B組比較有顯著差異，CDEF組之間比較未見顯著性差異。討論1.不同移植途徑對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞遷移的影響頸動脈途徑移植保證了高細(xì)胞濃度，高效率移植股靜脈途徑移植需要承受“首過效應(yīng)”腦實質(zhì)移植分布范圍局限于注射點周圍腦室途徑移植細(xì)胞則聚集于側(cè)腦室脈絡(luò)叢組織腰蛛網(wǎng)下腔移植2周后，只在側(cè)腦室內(nèi)發(fā)現(xiàn)少數(shù)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞而C組優(yōu)于B組，充分說明治療效果是與達(dá)到梗塞灶周圍的細(xì)胞數(shù)量存在量效關(guān)系血管途徑移植具有空間分布上的優(yōu)勢，而腦實質(zhì)注射移植則具備了數(shù)量優(yōu)勢。3.不同移植途徑對神經(jīng)元凋亡的影響A組結(jié)果顯示動脈移植可以明顯的起到抑制凋亡，促進(jìn)增殖和減小梗塞面積的作用E組的效果不明顯4.不同移植途徑對神經(jīng)功能重塑的影響各種途徑移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)入梗塞區(qū)后，明顯增加了Syp和PSD-95表達(dá)突觸功能重塑可能是腦缺血晚期神經(jīng)功能恢復(fù)的原因突觸特異蛋