專題二：1微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)課件

課題1微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專題2:微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用微生物包括哪五類：病毒細(xì)菌放線菌真菌原生生物特點(diǎn)：結(jié)構(gòu)簡單,個(gè)體多數(shù)十分微小.通常要用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有的甚至沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu),且體內(nèi)一般不含有葉綠素,不能進(jìn)行光合作用.原核生物界原生生物界真菌界病毒界微生物基礎(chǔ)知識病毒的結(jié)構(gòu)SARS病毒、禽流感病毒朊病毒（蛋白質(zhì)病毒）病毒的增殖：細(xì)菌的外形與大小細(xì)菌：單細(xì)胞不分枝的原核微生物。細(xì)菌細(xì)胞微小而透明，通常用適當(dāng)染料染色后顯微鏡觀察圖1-1常見的三種細(xì)菌典型形態(tài)A.球菌B.桿菌

C.弧菌*細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：堅(jiān)韌且有彈性細(xì)胞壁有哪些功能？①固定細(xì)胞外形；

②保護(hù)細(xì)胞免受外力的損傷；

③阻攔大分子物質(zhì)進(jìn)人細(xì)胞；④使細(xì)胞具有致病性及對噬菌體的敏感性。傷寒桿菌細(xì)胞壁中含毒素菌落：單個(gè)或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時(shí)，就會形成一個(gè)肉眼可見的，具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫做菌落。菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。菌落細(xì)菌的菌落特征因種而異：大小、形狀、光澤度、顏色、硬度、透明度、邊緣整齊度、厚度等方面各有特征。S型菌落(光滑)R型菌落(粗糙)S型：菌落表面光滑，不被免疫系統(tǒng)識別，有多糖莢膜，使人患肺炎或小鼠得敗血癥，有毒性。R型：菌落表面粗糙，被免疫系統(tǒng)識別，沒有莢膜，無毒性。

肺炎雙球菌細(xì)菌的營養(yǎng)類型根據(jù)細(xì)菌所利用的能源和碳源的不同，將細(xì)菌分為兩大營養(yǎng)類型。1、自養(yǎng)菌（autotroph）2、異養(yǎng)菌（heterotroph）（1）腐生菌（2）寄生菌：大部分病原菌放線菌結(jié)構(gòu)：單細(xì)胞原核分支狀的菌絲（基內(nèi)菌絲、氣生菌絲）真菌如圖是酵母菌電子顯微鏡下的形態(tài)結(jié)構(gòu)酵母菌和霉菌青霉代謝類型基本碳源能源藍(lán)藻硝化細(xì)菌圓褐固氮菌乳酸菌酵母菌紅螺菌兼性營養(yǎng)型CO2與簡單有機(jī)物光光能自養(yǎng)需氧型化能自養(yǎng)需氧型化能異養(yǎng)需氧型化能異養(yǎng)厭氧型化能異養(yǎng)兼性型CO2CO2糖類是最重要的碳源，尤其是葡萄糖光NH4+有機(jī)物微生物的營養(yǎng)類型1、了解有關(guān)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識；2、進(jìn)行無菌技術(shù)的操作；3、進(jìn)行微生物的培養(yǎng)。

一、課題目標(biāo)：1、掌握培養(yǎng)基的制備、高壓蒸氣滅菌和平板劃線法等基本操作技術(shù)；2、熟練、規(guī)范地進(jìn)行無菌操作，成功地培養(yǎng)微生物。無菌技術(shù)的操作。二、課題重點(diǎn)和難點(diǎn)：三、技能目標(biāo)：一、基礎(chǔ)知識：（一）培養(yǎng)基

是人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)——培養(yǎng)基碳源、氮源、水和無機(jī)鹽等營養(yǎng)物質(zhì)，另外還需要滿足微生物生長對特殊營養(yǎng)物質(zhì),例如:生長因子(即細(xì)菌生長必需，而自身不能合成的化合物,如維生素、某些氨基酸、堿基)、pH、以及氧氣、二氧化碳、滲透壓等的要求。如：乳酸桿菌培養(yǎng)基中要加維生素；培養(yǎng)霉菌時(shí)PH要調(diào)至酸性；培養(yǎng)細(xì)菌PH要調(diào)至中性或微堿性；厭氧微生物要提供無氧條件等1、培養(yǎng)基的物質(zhì)組成：微生物所需的營養(yǎng)物質(zhì)營養(yǎng)物質(zhì)定義作用主要來源碳源（需要量最大，不同種類微生物對碳源要求差別很大）凡能提供所需碳元素的物質(zhì)構(gòu)成生物體的細(xì)胞物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物，有些是異養(yǎng)生物的能源物質(zhì)無機(jī)化合物（無機(jī)碳源）：CO2、NaHCO3有機(jī)化合物（有機(jī)碳源）：糖類、脂肪酸、花生粉餅、石油等；糖類是最主要的碳源，尤其是葡萄糖營養(yǎng)物質(zhì)定義作用主要來源氮源（最常用的氮源是銨鹽、硝酸鹽）凡能提供所需氮元素的物質(zhì)合成蛋白質(zhì)、核酸以及含氮的代謝產(chǎn)物無機(jī)化合物（無機(jī)氮源）：N2、NH3、銨鹽、硝酸鹽有機(jī)化合物（有機(jī)氮源）：尿素、牛肉膏、蛋白胨等生長因子生長必不可少的微量有機(jī)物酶和核酸的組成成分維生素、氨基酸、堿基等（酵母膏、蛋白胨、動植物組織提取液等天然物質(zhì)可提供）

構(gòu)成微生物細(xì)胞以C、H、O、N、P、S六種元素為主，約占細(xì)胞干重的95％以上；Ca、K、Mg、Fe為大量元素，以無機(jī)鹽陽離子形式被吸收，配培養(yǎng)基要加磷酸鹽、硫酸鹽。Zn、Ca、Mn、Co、Mo等微量元素，在微生物培養(yǎng)中有0.1PPM就可以了，自來水原料中已夠用，不需另加。無機(jī)鹽種類Cncnc-micro水Cncnc-micro

是細(xì)胞中生化反應(yīng)的良好介質(zhì)；營養(yǎng)物質(zhì)和代謝產(chǎn)物都必須溶解在水里，才能被吸收或排出體（細(xì)胞）外。水的比熱高，能有效的吸收代謝過程中放出的熱量，不致使細(xì)胞的溫度驟然上升。維持細(xì)胞的膨壓（控制細(xì)胞形態(tài)）。（1）按物理狀態(tài)來分：2.培養(yǎng)基的類型和用途固體培養(yǎng)基：用于菌種分離、計(jì)數(shù)和菌種鑒定；

半固體培養(yǎng)基：觀察微生物的運(yùn)動，保藏菌種；液體培養(yǎng)基：常用于發(fā)酵工業(yè)等；固體培養(yǎng)基：菌落，菌苔半固體培養(yǎng)基：無動力有動力(彌散)(是否運(yùn)動)

液體培養(yǎng)基：表面生長均勻混濁生長沉淀生長選擇培養(yǎng)基：加入某種化學(xué)物質(zhì)，抑制不需要的微生物的生長，促進(jìn)或選擇具有特定表型的微生物生長的培養(yǎng)基；如：青霉素的培養(yǎng)基:分離酵母菌、霉菌等真菌（抑制放線菌和細(xì)菌）高濃度食鹽的培養(yǎng)基:分離金黃色葡萄球菌（抑制多種細(xì)菌生長）

加入抗生素的培養(yǎng)基:分離導(dǎo)入目的因基的受體細(xì)胞加入氨基喋呤、次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷的（HAT）培養(yǎng)基:

分離雜交瘤細(xì)胞無氮培養(yǎng)基:分離固氮菌不加含碳有機(jī)物的無碳培養(yǎng)基:分離自養(yǎng)型微生物石油作唯一碳源的培養(yǎng)基：分離出分解石油污染的微生物（2）按功能來分，可分為選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基：據(jù)微生物代謝特點(diǎn)，加入某種指示劑或化學(xué)藥品，鑒別不同種類微生物的培養(yǎng)基.如：伊紅、美藍(lán)培養(yǎng)基：鑒別大腸桿菌等細(xì)菌（其代謝產(chǎn)物有機(jī)酸與伊紅和美藍(lán)結(jié)合)菌落呈深紫色并帶有金屬光澤大腸桿菌菌落呈深紫色,有金屬光澤大腸桿菌在伊紅美藍(lán)瓊脂(EMB)上典型特征

（3）據(jù)化學(xué)成分來分，可分為天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基配制：天然培養(yǎng)基化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì)配制而成如玉米粉、牛肉膏等；用途：發(fā)酵工業(yè)的生產(chǎn)；優(yōu)點(diǎn)：營養(yǎng)豐富，原料易得，配置方便簡單，培養(yǎng)效果好；缺點(diǎn)：成分復(fù)雜，影響對某些實(shí)驗(yàn)產(chǎn)物的提取和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析，對營養(yǎng)物質(zhì)的需要量難以確定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性差；易發(fā)生污染;配制：根據(jù)微生物生存所需物質(zhì)的種類和數(shù)量，用人工方法模擬合成的。合成培養(yǎng)基用成分已知的化學(xué)物質(zhì)配制而成，主要成分是氨基酸、維生素、碳水化合物、無機(jī)鹽和其它一些輔助物質(zhì)。用途：分類鑒定等科研實(shí)驗(yàn)優(yōu)點(diǎn)：組分和含量相對固定，營養(yǎng)成分含量準(zhǔn)確;缺點(diǎn)：缺少某些成分，一般微生物在上生長緩慢甚至不能生長，配置繁瑣，成本高。合成培養(yǎng)基:天然培養(yǎng)基：半合成培養(yǎng)基配制：一部分天然有機(jī)物作碳源、氮源和生長因子，然后根據(jù)微生物對某些物質(zhì)的需要量，適當(dāng)加入某些化學(xué)藥品配制而成；用途：在生產(chǎn)和實(shí)驗(yàn)中均應(yīng)用較多；優(yōu)點(diǎn)：營養(yǎng)豐富，培養(yǎng)效果好，某些成分易于控制，提高原料利用率；3.不同的微生物往往需要采用不同的培養(yǎng)基配方(參考教材附錄內(nèi)容)如：4、培養(yǎng)基配制原則：

（1）目的要明確：根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的等確定配制培養(yǎng)基的種類，因?yàn)椴煌奈⑸飳ε囵B(yǎng)物質(zhì)的需求不同。（2）營養(yǎng)要協(xié)調(diào)：注意各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例。（3）pH要適宜：各種微生物適宜生長的pH范圍不同。細(xì)菌pH為：6.5-7.5；放線菌pH為：7.5-8.5；

真菌pH為：5.0-6.0。（二）無菌技術(shù)1.無菌技術(shù)的概念

無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。無論是隨后將要學(xué)到的倒平板、平板劃線操作，還是平板稀釋涂布法，其操作中的每一步都需要做到“無菌”，即防止雜菌污染。只有熟練、規(guī)范地進(jìn)行無菌操作，才可能成功地培養(yǎng)微生物。2.消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別

（１）消毒定義：指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物。（不包括芽孢和孢子）區(qū)分為高程度消毒（High-levelDisinfection）中程度消毒（Intermediate-levelisinfection）低程度消毒（Low-levelDisinfection）三種方式。（2）滅菌的定義：

用強(qiáng)烈的理化因素（化學(xué)劑或物理方法）殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子，而達(dá)到完全無菌的過程。

滅菌與消毒技術(shù)是微生物有關(guān)工作中最普通也是最重要的技術(shù)。比較項(xiàng)理化因素的作用強(qiáng)度消滅微生物的數(shù)量芽孢和孢子能否被消滅消毒較為溫和部分生活狀態(tài)的微生物不能滅菌強(qiáng)烈全部微生物能消毒與滅菌的比較（1）對操作空間、操作者的衣著和手，進(jìn)行清潔和消毒；（2）培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基滅菌；（3）實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行（為避免環(huán)境中微生物帶來污染）；（4）操作時(shí)應(yīng)避免已滅菌處理的材料用具與周圍的物品接觸；3.無菌技術(shù)操作的幾個(gè)方面1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min，殺死微生物細(xì)胞和部分芽孢；2、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min，殺死不耐高溫的液體如牛奶中微生物，并使?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)不被破壞；3、化學(xué)藥劑消毒法:用75%酒精、新潔爾滅等進(jìn)行皮膚消毒;氯氣消毒水源；4、紫外線或化學(xué)藥物消毒:如接種室、超凈工作臺或接種箱使用前紫外線照射30分鐘，照射前適量噴灑石碳酸或煤酚皂溶液等消毒液可加強(qiáng)消毒效果，以殺死物體表面或空氣中的微生物；……(1)消毒的方法：4.常用的消毒與滅菌的方法1、灼燒滅菌：接種工具如接種環(huán)、接種針或其他金屬用具，在酒精燈火焰充分燃燒層灼燒，快速徹底滅菌，試管口、瓶口等易被污染的部位也可灼燒滅菌2、干熱滅菌：160-170℃下加熱1-2h。耐高溫、需保持干燥物品如玻璃器皿（吸管、培養(yǎng)皿）、金屬用具等（具體見附錄4）3、高壓蒸氣滅菌：100kPa、121℃下維持15-30min，如培養(yǎng)基滅菌；物品放入有水的高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，煮沸，徹底排出原有冷空氣后密閉，加熱滅菌，滅菌后徹底排氣后才可開鍋取出被滅菌物品；（具體見附錄5）(2)滅菌的方法：無菌技術(shù)

定義常用方法微生物培養(yǎng)和組培中的應(yīng)用消毒使用較為溫和的物理或化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物煮沸玻璃儀器紫外線實(shí)驗(yàn)室、操作臺、衣物等酒精溶液手、外植體等次氯酸鈉溶液等外植體滅菌使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子高壓蒸汽培養(yǎng)基、玻璃儀器、棉塞、牛皮紙等灼燒接種環(huán)、涂布器干熱玻璃儀器1.無菌技術(shù)除了用來防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？2.請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。（1）培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2）玻棒、試管、燒瓶和吸管（3）實(shí)驗(yàn)操作者的雙手答：無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。答：（1）、（2）需要滅菌；（3）需要消毒。旁欄思考二、實(shí)驗(yàn)操作微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的基本操作程序1、器具的滅菌2、培養(yǎng)基的配制3、培養(yǎng)基的滅菌4、倒平板5、微生物接種6、恒溫箱中培養(yǎng)7、菌種的保存（一）制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)細(xì)菌）1．計(jì)算：據(jù)配方比例，計(jì)算100ml培養(yǎng)基的各種成分用量；2．稱量：準(zhǔn)確稱取各成分，牛肉膏在稱量紙上稱量，牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要迅速稱取并蓋好蓋子；3．溶化：牛肉膏溶化后用玻璃棒取出稱量紙，往燒杯中加入蛋白胨和氯化鈉攪拌使溶解充分，（調(diào)pH:pH7.0-7.2），加入1.5-2g瓊脂加熱熔化，并不斷攪拌防止溢出、糊底而至燒杯破裂，瓊脂完全融化后補(bǔ)加蒸餾水至100ml；操作步驟4．滅菌:將50ml培養(yǎng)基用玻棒轉(zhuǎn)移至三角瓶中，塞上棉塞，包上牛皮紙并用皮筋勒緊，再放入高壓蒸氣滅菌鍋，在壓力為100kPa、溫度為121℃，滅菌15～30min。將培養(yǎng)皿用舊報(bào)紙包裹（5-8套為一包），放入干熱滅菌箱內(nèi)，在160～170℃下滅菌2h。5．倒平板:

待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時(shí)（手摸不燙，但不能凝固時(shí)即可），在酒精燈火焰附近倒平板。（倒平板操作見課本）包器材包器材倒平板技術(shù)6．無菌檢查：將滅菌的培養(yǎng)基放入37℃的溫室中培養(yǎng)24—48小時(shí)，以檢查滅菌是否徹底。1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時(shí)，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？問題討論答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可以進(jìn)行倒平板了。2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。(二)純化大腸桿菌接種方法有：接種方法有很多，最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法1.平板劃線法:通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)畫線的操作,將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面.在數(shù)次畫線后,可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體,這就是菌落.平板劃線的操作方法交叉劃線法連續(xù)劃線法

平板劃線時(shí)不能劃破培養(yǎng)基1、一旦劃破，會造成劃線不均勻，難以達(dá)到分離單菌落的目的；2、二是存留在劃破處的單個(gè)細(xì)胞無法形成規(guī)矩的菌落，菌落會沿著劃破處生長，會形成一個(gè)條狀的菌落。問題討論

1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？

答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。3.在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落。2.稀釋涂布平板法:將菌液進(jìn)行一系列梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基表面進(jìn)行培養(yǎng)。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落（單細(xì)胞菌落）問題討論

涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第2步應(yīng)如何進(jìn)行無菌操作？

應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)保證“無菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等。微生物的恒溫培養(yǎng)微生物的恒溫培養(yǎng):將接種后的培養(yǎng)基和一個(gè)未接種的培養(yǎng)基都放入37℃恒溫箱中培養(yǎng)12—24h后，分別觀察并記錄結(jié)果：微生物的恒溫培養(yǎng)菌種的保藏：

為保持菌種純凈，需進(jìn)行菌種保藏1、臨時(shí)保藏：（頻繁使用的菌種）接種到固體斜面培養(yǎng)基，適宜的溫度下培養(yǎng)，菌落長成后置于4℃冰箱保藏。后每3—6個(gè)月都要轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基上。缺點(diǎn)：保存時(shí)間不長；菌種易污染和變異；菌種的保藏：

為保持菌種純凈，需進(jìn)行菌種保藏2、甘油冷凍管藏法：長期保存；在3ml甘油瓶中裝入1ml甘油并滅菌，加入1ml菌液充分混勻在-20℃的冷凍箱中保存；四、課題成果評價(jià)

1、培養(yǎng)基的制作是否合格如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1～2d后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。2、接種操作是否符合無菌要求如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點(diǎn)，則說明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明接種過程中，無菌操作還未達(dá)到要求，需要分析原因，再次練習(xí)。3、是否進(jìn)行了及時(shí)細(xì)致的觀察與記錄培養(yǎng)12h與24h后的大腸桿菌菌落的大小會有明顯不同，及時(shí)觀察記錄的同學(xué)會發(fā)現(xiàn)這一點(diǎn)，并能觀察到其他一些細(xì)微的變化。這一步的要求主要是培養(yǎng)學(xué)生良好的科學(xué)態(tài)度與習(xí)慣。本課題知識小結(jié):【典例解析】例1．關(guān)微生物營養(yǎng)物質(zhì)的敘述中，正確的是A.是碳源的物質(zhì)不可能同時(shí)是氮源B.凡碳源都提供能量C.除水以外的無機(jī)物只提供無機(jī)鹽D.無機(jī)氮源也能提供能量解析：不同的微生物，所需營養(yǎng)物質(zhì)有較大差別，要針對微生物的具體情況分析。對于A、B選項(xiàng)，它的表達(dá)是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同時(shí)是氮源，如NH4HCO3；有的碳源同時(shí)是能源，如葡萄糖；有的碳源同時(shí)是氮源，也是能源，如蛋白胨。對于C選項(xiàng)，除水以外的無機(jī)物種類繁多，功能也多樣。如二氧化碳，可作為自養(yǎng)型微生物的碳源；NaHCO3，可作為自養(yǎng)型微生物的碳源和無機(jī)鹽；而NaCl則只能提供無機(jī)鹽。對于D選項(xiàng)，無機(jī)氮源提供能量的情況還是存在的，如NH3可為硝化細(xì)菌提供能量和氮源。答案：D例2．下面對發(fā)酵工程中滅菌的理解不正確的是A.防止雜菌污染B.消滅雜菌C.培養(yǎng)基和發(fā)酵設(shè)備都必須滅菌D.滅菌必須在接種前B解析：滅菌是微生物發(fā)酵過程的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。A說的是滅菌的目的，因?yàn)榘l(fā)酵所用的菌種大多是單一的純種，整個(gè)發(fā)酵過程不能混入其他微生物（雜菌），所以是正確的；B是錯(cuò)誤的，因?yàn)闇缇哪康氖欠乐闺s菌污染，但實(shí)際操作中不可能只消滅雜菌，而是消滅全部微生物。C是正確的，因?yàn)榕c發(fā)酵有關(guān)的所有設(shè)備和物質(zhì)都要滅菌；發(fā)酵所用的微生物是滅菌后專門接種的，滅菌必須在接種前，如果接種后再滅菌就會把所接菌種也殺死。編號成分含量①粉狀硫10g②（NH4）2SO40.4g③K2HPO44.0g④MgSO49.25g⑤FeSO40.5g⑥CaCl20.5g⑦H2O100ml例3．右表是某微生物培養(yǎng)基成分，請據(jù)此回答：（1）右表培養(yǎng)基可培養(yǎng)的微生物類型是

。（2）若不慎將過量NaCl加入培養(yǎng)基中。如不想浪費(fèi)此培養(yǎng)基，可再加入

.自養(yǎng)型微生物

含碳有機(jī)物

（3）若除去成分②，加入（CH2O），該培養(yǎng)基可用于培養(yǎng)

。（4）表中營養(yǎng)成分共有

類。（5）不論何種培養(yǎng)基，在各種成分都溶化后分裝前，要進(jìn)行的是

。（6）右表中各成分重量確定的原則是

。（7）若右