第2講微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用復(fù)習(xí)課件

第1講微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用第1講微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用1第2講微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用復(fù)習(xí)課件2

一、微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用1.微生物的實驗室培養(yǎng)

(1)培養(yǎng)基①概念:人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求,配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。

一、微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用3②分類a．按培養(yǎng)基的物質(zhì)性質(zhì)可以分為液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基。b．按培養(yǎng)基的化學(xué)成分可以分為天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基。c．按培養(yǎng)基的用途可以分為基本培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。②分類4③培養(yǎng)基配方及營養(yǎng)要素

基本營養(yǎng)要素：各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽。此外還要滿足不同微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的需求。③培養(yǎng)基配方及營養(yǎng)要素5

【友情提醒】①微生物最常用的碳源是糖類，尤其是葡萄糖；最常利用的氮源是銨鹽、硝酸鹽。②對異養(yǎng)微生物來說，含C、H、O、N的有機化合物既是碳源，又是氮源、能源。③有些培養(yǎng)基不需要添加特殊營養(yǎng)物質(zhì)，生物自己能合成，如大腸桿菌能合成某些維生素，作為特殊營養(yǎng)物質(zhì)。④制備：計算→稱量→溶化→滅菌→倒平板。【友情提醒】①微生物最常用的碳源是糖類，尤其是葡萄糖；6

無菌技術(shù)主要操作要求a．實驗前應(yīng)對操作空間、操作人員消毒，對所用器具和培養(yǎng)基滅菌。b．實驗進(jìn)行時需在酒精燈火焰周圍無菌區(qū)操作，另外要避免已滅菌處理材料再次污染。

(2)無菌技術(shù)

(2)無菌技術(shù)72．純化大腸桿菌以及菌種的保藏(1)制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基：計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。(2)純化大腸桿菌①原理：在培養(yǎng)基上將細(xì)菌稀釋或分散成單個細(xì)胞，使其長成單個的菌落，這個菌落就是一個純化的細(xì)菌菌落。

2．純化大腸桿菌以及菌種的保藏8②方法：平板劃線法、稀釋涂布平板法。

平板劃線法是通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面；稀釋涂布平板法則是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。②方法：平板劃線法、稀釋涂布平板法。9(3)菌種的保藏①短期保存：固體斜面培養(yǎng)基上4℃保存，菌種易被污染或產(chǎn)生變異。②長期保存：－20℃甘油管在冷凍箱中保藏。

【友情提醒】平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的溫度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)；又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。(3)菌種的保藏10【例1】分析下面培養(yǎng)基的配方：KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、瓊脂。請回答：(1)在該培養(yǎng)基的配方中，為微生物的生長提供碳源和氮源的分別是________和________。(2)想一想這種培養(yǎng)基對微生物是否具有選擇作用？如果具有，又是如何進(jìn)行選擇的？____________________________________________。【例1】分析下面培養(yǎng)基的配方：KH2PO4、Na2HP11(3)培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、實驗操作者的雙手、空氣、牛奶所采用的滅菌及消毒方法依次是(

)①化學(xué)消毒②灼燒滅菌③干熱滅菌④紫外線滅菌⑤高壓蒸汽滅菌⑥巴氏消毒法A．⑤③②①④⑥B．①②③④⑤⑥C．⑥②③④①⑤D．③④②①⑥⑤(3)培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、實驗操作者的雙手、空12【解析】碳源是提供碳元素的物質(zhì)，氮源是提供氮元素的物質(zhì)。所以碳源是葡萄糖，氮源是尿素。絕大多數(shù)生物都能利用葡萄糖，但是，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，所以這種培養(yǎng)基對微生物有選擇作用。選擇的原則是只有能夠利用尿素的微生物才能夠生長。培養(yǎng)基用高壓蒸汽滅菌；培養(yǎng)皿能耐高溫，可用干熱滅菌；接種環(huán)可用灼燒滅菌達(dá)到迅速徹底的滅菌效果；實驗操作者的雙手可用化學(xué)藥劑進(jìn)行消毒，如用酒精擦拭雙手；空氣可用紫外線消毒；牛奶為不破壞其營養(yǎng)成分可采用巴氏消毒法?！窘馕觥刻荚词翘峁┨荚氐奈镔|(zhì)，氮源是提供氮元素的物質(zhì)13【答案】

(1)葡萄糖尿素(2)有選擇作用。因為此配方中尿素是惟一氮源，因此，只有能夠利用尿素的微生物才能夠生長(3)A

【答案】14

二、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)

1．分離的原理土壤中的細(xì)菌能合成脲酶，能把尿素分解成無機物。2．分離分解尿素的細(xì)菌所使用的特定培養(yǎng)基分離分解尿素的細(xì)菌的培養(yǎng)基應(yīng)為選擇培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中的氮源只有尿素，理論上只有能合成脲酶的微生物才能在上面生長。其配方如下：二、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)1．15KH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2g

葡萄糖

10.0g

尿素(惟一氮源)1.0g

瓊脂15.0g

將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1000mL。KH2PO4163．統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法(1)顯微鏡直接計數(shù)法①原理：利用特定細(xì)菌計數(shù)板或血細(xì)胞計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量。②方法：用計數(shù)板計數(shù)。③缺點：不能區(qū)分死菌與活菌。

(2)間接計數(shù)法(活菌計數(shù)法)①原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。3．統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法17②操作a．設(shè)置重復(fù)組，增強實驗的說服力與準(zhǔn)確性。b．為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計數(shù)。③計算公式：每克樣品中的菌株數(shù)＝

×M，其中C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積(mL)，M代表稀釋倍數(shù)。②操作18

4．細(xì)菌分離與計數(shù)的實驗流程

土壤取樣→樣品稀釋→取樣涂布→微生物培養(yǎng)→觀察并記錄結(jié)果→細(xì)菌計數(shù)。4．細(xì)菌分離與計數(shù)的實驗流程19【例2】可以鑒定出分解尿素的細(xì)菌的方法是(

)A．以尿素為惟一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑B．以尿素為惟一氮源的培養(yǎng)基中加入二苯胺試劑C．以尿素為惟一氮源的培養(yǎng)基中加入蘇丹Ⅲ試劑D．以尿素為惟一氮源的培養(yǎng)基中加入雙縮脲試劑

【解析】在以尿素為惟一氮源的培養(yǎng)基中，不能分解尿素獲得氮源的細(xì)菌不能生長，而分解尿素的細(xì)菌能利用尿素作氮源，將尿素分解為氨，使pH升高。若培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，指示劑將變紅。此培養(yǎng)基既屬于選擇培養(yǎng)基，又屬于鑒別培養(yǎng)基。

A【例2】可以鑒定出分解尿素的細(xì)菌的方法是()A20

三、分解纖維素的微生物的分離1．分解纖維素的微生物的分離(1)實驗原理

即：可根據(jù)是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。三、分解纖維素的微生物的分離21(2)實驗流程

土壤取樣：富含纖維素的環(huán)境?！?/p>

選擇培養(yǎng)：用選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)，以增加纖維素分解菌的數(shù)量。↓

梯度稀釋↓

涂布平板：將樣品涂布于鑒別含CR的纖維素分解菌的培養(yǎng)基(固體)。↓

挑選產(chǎn)生透明圈的菌落：產(chǎn)生纖維素酶的菌落周圍出現(xiàn)透明圈。

(2)實驗流程22

【友情提醒】①選擇培養(yǎng)的目的是增加纖維素分解菌的濃度，確保能夠從樣品中分離到所需要的微生物。②涉及的微生物技術(shù)主要有：培養(yǎng)基的配制、無菌操作技術(shù)、稀釋涂布平板法、選擇培養(yǎng)基的作用、土壤取樣等?！居亚樘嵝选竣龠x擇培養(yǎng)的目的是增加纖維素分解菌的濃度，確23【例3】下圖為分離并統(tǒng)計分解纖維素的微生物的實驗流程，據(jù)此回答有關(guān)問題：(1)要從富含纖維素的環(huán)境中分離纖維素分解菌，從高溫?zé)崛袑ふ夷蜔峋?，這說明______________。【例3】下圖為分離并統(tǒng)計分解纖維素的微生物的實24(2)某同學(xué)根據(jù)需要，配制了纖維素分解菌的培養(yǎng)基如下，整個實驗過程嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作。

如果將其中的纖維素粉換成________，菌落數(shù)____________________________________________，即可說明選擇培養(yǎng)基的作用。纖維素粉NaNO3Na2HPO4KH2PO45g1g1.2g0.9gMgSO4·7H2OKCl酵母膏0.5g0.5g適量(2)某同學(xué)根據(jù)需要，配制了纖維素分解菌的培養(yǎng)基如下25【解析】(1)因為纖維素分解菌與耐熱菌有不同的生活習(xí)性，生活在不同的環(huán)境中，故要根據(jù)目的菌株對生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找。(2)因為葡萄糖是纖維素水解產(chǎn)生的、能被微生物直接利用的有機小分子，所以如果將其中的纖維素粉換成葡萄糖，纖維素分解菌及其他細(xì)菌會生長繁殖得更快，故菌落數(shù)明顯多于選擇培養(yǎng)基。(3)因為稀釋涂布平板法要將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，故該法可根據(jù)稀釋體積計算每克樣品中的細(xì)菌數(shù)，而平板劃線法則不能這樣，所以本實驗宜采用稀釋涂布平板法接種?！窘馕觥?1)因為纖維素分解菌與耐熱菌有不同的生活習(xí)性26【答案】(1)不同的菌株生活在不同的環(huán)境中，根據(jù)目的菌株對生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找(2)葡萄糖明顯多于選擇培養(yǎng)基上的菌落數(shù)(3)稀釋涂布平板平板劃線法難以根據(jù)稀釋體積計算每克樣品中的細(xì)菌數(shù)【答案】(1)不同的菌株生活在不同的環(huán)境中，根據(jù)目的菌271．消毒和滅菌的區(qū)別1．消毒和滅菌的區(qū)別28用酒精消毒時，70%的酒精殺菌效果最好，原因是：濃度過高，使菌體表面蛋白質(zhì)凝固成一層保護(hù)膜，乙醇分子不能滲入其中；濃度過低，殺菌力減弱。2．操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)基；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到單菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。用酒精消毒時，70%的酒精殺菌效果最好，原因是：濃度過高，使29第2講微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用復(fù)習(xí)課件301.(2012·全國卷)下列關(guān)于細(xì)菌的敘述，正確的是()A．不同種類細(xì)菌的生長均需要相同碳源B．常用液體培養(yǎng)基分離獲得細(xì)菌單菌落C．細(xì)菌大量培養(yǎng)過程中，芽孢形成于細(xì)菌生長的調(diào)整期D．培養(yǎng)基中含有高濃度NaCl有利于金黃色葡萄球菌的篩選D1.(2012·全國卷)下列關(guān)于細(xì)菌的敘述，正確的是(31【解析】自養(yǎng)型微生物需要無機碳源，異養(yǎng)型微生物需要的是有機碳源，不同種類細(xì)菌的生長需要不同的碳源，A項錯誤；要獲得細(xì)菌單菌落只能用固體培養(yǎng)基，B項錯誤；細(xì)菌芽孢是幫助細(xì)菌度過不良環(huán)境的結(jié)構(gòu)，形成于穩(wěn)定期，C項錯誤；大部分細(xì)菌不能在含有高濃度NaCl的培養(yǎng)基中生存，而金黃色葡萄球菌可耐高濃度NaCl，所以培養(yǎng)基中含有高濃度NaCl有利于金黃色葡萄球菌的篩選，D項正確?！窘馕觥孔责B(yǎng)型微生物需要無機碳源，異養(yǎng)型微生物需要的是有機碳322.(2012·重慶卷)針對耐藥菌日益增多的情況，利用噬菌體作為一種新的抗菌治療手段的研究備受關(guān)注。下列有關(guān)噬菌體的敘述，正確的是()A．利用宿主菌的氨基酸合成子代噬菌體的蛋白質(zhì)B．以宿主菌DNA為模板合成子代噬菌體的核酸C．外殼抑制了宿主菌的蛋白質(zhì)合成，使該細(xì)菌死亡D．能在宿主菌內(nèi)以二分裂方式增殖，使該細(xì)菌裂解A2.(2012·重慶卷)針對耐藥菌日益增多的情況，利用噬菌體33【解析】噬菌體侵入宿主后，利用宿主菌的原料(氨基酸和核苷酸)，合成噬菌體的蛋白質(zhì)，所以A正確；子代噬菌體的核酸是以噬菌體的DNA為模板來復(fù)制的，B錯誤；噬菌體消耗細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)，導(dǎo)致細(xì)菌死亡，C錯誤；噬菌體沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu)，不能以二分裂方式增殖，而是在寄主菌體內(nèi)合成各個部件后，再組裝、釋放，使細(xì)菌裂解，D錯誤?！窘馕觥渴删w侵入宿主后，利用宿主菌的原料(氨基酸和核苷酸)343.(2011·重慶卷)下列有關(guān)細(xì)菌培養(yǎng)的敘述，正確的是()A．在瓊脂固體培養(yǎng)基上長出的單個菌落含有多種細(xì)菌B．在培養(yǎng)基中加入青霉素可抑制真菌而促進(jìn)細(xì)菌生長C．向液體培養(yǎng)基中通入氧氣能促進(jìn)破傷風(fēng)桿菌的生長D．在半固體培養(yǎng)基中接種細(xì)菌培養(yǎng)后可以觀察其運動D3.(2011·重慶卷)下列有關(guān)細(xì)菌培養(yǎng)的敘述，正確的是(35【解析】本題考查微生物的培養(yǎng)、生長、代謝等知識點。固體培養(yǎng)基上長出的單個菌落屬于一個種群；青霉素能抑制細(xì)菌的生長，但不能抑制真菌的生長；破傷風(fēng)桿菌為厭氧型細(xì)菌，在有氧條件下，其生長及代謝活動受到抑制；在半固體培養(yǎng)基中接種細(xì)菌經(jīng)培養(yǎng)后可對菌體運動進(jìn)行觀察?！窘馕觥勘绢}考查微生物的培養(yǎng)、生長、代謝等知識點。固體培養(yǎng)基364.下列關(guān)于培養(yǎng)基的敘述，錯誤的是()A．硝化細(xì)菌能以NH3作為氮源和能源物質(zhì)B．各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源和無機鹽四種營養(yǎng)要素C．特殊營養(yǎng)物質(zhì)是某些微生物生長過程中需要額外補充的營養(yǎng)物質(zhì)D．培養(yǎng)乳酸桿菌時培養(yǎng)基中不需要添加維生素D4.下列關(guān)于培養(yǎng)基的敘述，錯誤的是()D37【解析】微生物的培養(yǎng)基除了含碳源、氮源、無機鹽、水四種營養(yǎng)要素外，有的還要補充特殊營養(yǎng)物質(zhì)，如培養(yǎng)乳酸桿菌時需要在培養(yǎng)基中添加維生素?！窘馕觥课⑸锏呐囵B(yǎng)基除了含碳源、氮源、無機鹽、水四種營養(yǎng)要385.某同學(xué)在做細(xì)菌培養(yǎng)實驗過程中發(fā)現(xiàn)：某種細(xì)菌(記作S)的周圍其他細(xì)菌的生長繁殖受到抑制。他認(rèn)為，最可能的原因是S細(xì)菌產(chǎn)生了一種不利于其他細(xì)菌生存的物質(zhì)。為驗證這一假設(shè)，實驗組和對照組均使用相同的培養(yǎng)基，正確的接種方法應(yīng)是()A．實驗組接種S細(xì)菌，對照組接種其他細(xì)菌B．實驗組接種其他細(xì)菌，對照組接種S細(xì)菌5.某同學(xué)在做細(xì)菌培養(yǎng)實驗過程中發(fā)現(xiàn)：某種細(xì)菌(記作S)的周395.某同學(xué)在做細(xì)菌培養(yǎng)實驗過程中發(fā)現(xiàn)：某種細(xì)菌(記作S)的周圍其他細(xì)菌的生長繁殖受到抑制。他認(rèn)為，最可能的原因是S細(xì)菌產(chǎn)生了一種不利于其他細(xì)菌生存的物質(zhì)。為驗證這一假設(shè)，實驗組和對照組均使用相同的培養(yǎng)基，正確的接種方法應(yīng)是()C．實驗組接種其他細(xì)菌，對照組不接種，一段時間后，除去其他細(xì)菌，兩組再分別接種相同的S細(xì)菌D．實驗組接種S細(xì)菌，對照組不接種，一段時間后，除去S細(xì)菌，兩組再分別接種相同的其他細(xì)菌D5.某同學(xué)在做細(xì)菌培養(yǎng)實驗過程中發(fā)現(xiàn)：某種細(xì)菌(記作S)的周40【解析】根據(jù)實驗?zāi)康目芍瑢嶒灥淖兞渴荢細(xì)菌所產(chǎn)生的物質(zhì)，所以實驗組先接種S細(xì)菌，一段時間后除去S細(xì)菌，其產(chǎn)生的物質(zhì)殘留在培養(yǎng)基中，而對照組不接種，然后再分別接種相同的其他細(xì)菌來檢驗抑制物質(zhì)是否存在?！窘馕觥扛鶕?jù)實驗?zāi)康目芍瑢嶒灥淖兞渴荢細(xì)菌所產(chǎn)生的物質(zhì)，所416.

請分析回答下列問題：(1)無菌技術(shù)主要通過消毒和滅菌來避免雜菌的污染。常用的滅菌方法有

滅菌、干熱滅菌和

滅菌。灼燒高壓蒸汽(2)稀釋涂布平板法分離純化土壤中微生物的正確操作步驟是()①土壤取樣②稱取10g土壤加入盛有90mL無菌水的錐形瓶中，制備土壤提取液③吸取0.1mL溶液進(jìn)行平板涂布④依次稀釋至101、102、103、104、105、106、107的稀釋度C6.請分析回答下列問題：灼燒高壓蒸汽(2)稀釋涂布平板法42A．①②③④B．①③②④C．①②④③D．①④②③(3)利用酵母菌將葡萄汁發(fā)酵后是否有酒精產(chǎn)生，可以用重鉻酸鉀來檢驗。在酸性條件下，重鉻酸鉀與酒精反應(yīng)呈現(xiàn)

色。在發(fā)酵過程中，隨著酒精度的提高，發(fā)酵液逐漸呈現(xiàn)深紅色，原因是

?；揖G紅葡萄皮的色素進(jìn)入發(fā)酵液(4)從野生酵母菌群中分離純化酵母菌，最常使用的接種方法是

和

兩種。酵母菌適合生活在偏酸性環(huán)境

平板劃線法稀釋涂布平板法A．①②③④B．①③②43而放線菌則適合生活在偏堿性環(huán)境中，分離二者所用的培養(yǎng)基稱為

。(5)在腐乳制作的過程中，起主要作用的微生物是

，腐乳的制作是多種微生物的

作用，微生物的作用是

。選擇培養(yǎng)基毛霉協(xié)同微生物產(chǎn)生的蛋白酶將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶將脂肪水解成甘油和脂肪酸(6)腐乳制作過程中影響其風(fēng)味和品質(zhì)的因素有哪些？()①鹽的用量②酒的種類和用量③發(fā)酵溫度④發(fā)酵時間⑤辛香料的用量A．①②③④⑤B．①②③C．①②⑤D．③④A而放線菌則適合生活在偏堿性環(huán)境中，分離二者所用的培養(yǎng)基稱為447.

微生物在人們的生活生產(chǎn)中無處不在，為人們的生活增添了諸多樂趣。為獲得一種能高效降解農(nóng)藥的細(xì)菌(目的菌)，往培養(yǎng)基中加入某種化合物，將初步篩選得到的目的菌轉(zhuǎn)至固體培養(yǎng)基上，常采用的接種方法是

；獲得菌落后繼續(xù)篩選，接種過程中接種環(huán)常采用

滅菌；實驗結(jié)束后，使用過的培養(yǎng)基應(yīng)該進(jìn)行

處理后才能倒掉，這樣做是為了

，常用滅菌方法是

。平板劃線法灼燒滅菌防止造成環(huán)境污染高壓蒸汽滅菌7.微生物在人們的生活生產(chǎn)中無處不在，為人們的生活增添了諸45第1講微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用第1講微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用46第2講微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用復(fù)習(xí)課件47

一、微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用1.微生物的實驗室培養(yǎng)

(1)培養(yǎng)基①概念:人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求,配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。

一、微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用48②分類a．按培養(yǎng)基的物質(zhì)性質(zhì)可以分為液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基。b．按培養(yǎng)基的化學(xué)成分可以分為天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基。c．按培養(yǎng)基的用途可以分為基本培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。②分類49③培養(yǎng)基配方及營養(yǎng)要素

基本營養(yǎng)要素：各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽。此外還要滿足不同微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的需求。③培養(yǎng)基配方及營養(yǎng)要素50

【友情提醒】①微生物最常用的碳源是糖類，尤其是葡萄糖；最常利用的氮源是銨鹽、硝酸鹽。②對異養(yǎng)微生物來說，含C、H、O、N的有機化合物既是碳源，又是氮源、能源。③有些培養(yǎng)基不需要添加特殊營養(yǎng)物質(zhì)，生物自己能合成，如大腸桿菌能合成某些維生素，作為特殊營養(yǎng)物質(zhì)。④制備：計算→稱量→溶化→滅菌→倒平板?！居亚樘嵝选竣傥⑸镒畛Ｓ玫奶荚词翘穷?，尤其是葡萄糖；51

無菌技術(shù)主要操作要求a．實驗前應(yīng)對操作空間、操作人員消毒，對所用器具和培養(yǎng)基滅菌。b．實驗進(jìn)行時需在酒精燈火焰周圍無菌區(qū)操作，另外要避免已滅菌處理材料再次污染。

(2)無菌技術(shù)

(2)無菌技術(shù)522．純化大腸桿菌以及菌種的保藏(1)制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基：計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。(2)純化大腸桿菌①原理：在培養(yǎng)基上將細(xì)菌稀釋或分散成單個細(xì)胞，使其長成單個的菌落，這個菌落就是一個純化的細(xì)菌菌落。

2．純化大腸桿菌以及菌種的保藏53②方法：平板劃線法、稀釋涂布平板法。

平板劃線法是通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面；稀釋涂布平板法則是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。②方法：平板劃線法、稀釋涂布平板法。54(3)菌種的保藏①短期保存：固體斜面培養(yǎng)基上4℃保存，菌種易被污染或產(chǎn)生變異。②長期保存：－20℃甘油管在冷凍箱中保藏。

【友情提醒】平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的溫度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)；又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。(3)菌種的保藏55【例1】分析下面培養(yǎng)基的配方：KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、瓊脂。請回答：(1)在該培養(yǎng)基的配方中，為微生物的生長提供碳源和氮源的分別是________和________。(2)想一想這種培養(yǎng)基對微生物是否具有選擇作用？如果具有，又是如何進(jìn)行選擇的？____________________________________________。【例1】分析下面培養(yǎng)基的配方：KH2PO4、Na2HP56(3)培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、實驗操作者的雙手、空氣、牛奶所采用的滅菌及消毒方法依次是(

)①化學(xué)消毒②灼燒滅菌③干熱滅菌④紫外線滅菌⑤高壓蒸汽滅菌⑥巴氏消毒法A．⑤③②①④⑥B．①②③④⑤⑥C．⑥②③④①⑤D．③④②①⑥⑤(3)培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、實驗操作者的雙手、空57【解析】碳源是提供碳元素的物質(zhì)，氮源是提供氮元素的物質(zhì)。所以碳源是葡萄糖，氮源是尿素。絕大多數(shù)生物都能利用葡萄糖，但是，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，所以這種培養(yǎng)基對微生物有選擇作用。選擇的原則是只有能夠利用尿素的微生物才能夠生長。培養(yǎng)基用高壓蒸汽滅菌；培養(yǎng)皿能耐高溫，可用干熱滅菌；接種環(huán)可用灼燒滅菌達(dá)到迅速徹底的滅菌效果；實驗操作者的雙手可用化學(xué)藥劑進(jìn)行消毒，如用酒精擦拭雙手；空氣可用紫外線消毒；牛奶為不破壞其營養(yǎng)成分可采用巴氏消毒法。【解析】碳源是提供碳元素的物質(zhì)，氮源是提供氮元素的物質(zhì)58【答案】

(1)葡萄糖尿素(2)有選擇作用。因為此配方中尿素是惟一氮源，因此，只有能夠利用尿素的微生物才能夠生長(3)A

【答案】59

二、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)

1．分離的原理土壤中的細(xì)菌能合成脲酶，能把尿素分解成無機物。2．分離分解尿素的細(xì)菌所使用的特定培養(yǎng)基分離分解尿素的細(xì)菌的培養(yǎng)基應(yīng)為選擇培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中的氮源只有尿素，理論上只有能合成脲酶的微生物才能在上面生長。其配方如下：二、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)1．60KH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2g

葡萄糖

10.0g

尿素(惟一氮源)1.0g

瓊脂15.0g

將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1000mL。KH2PO4613．統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法(1)顯微鏡直接計數(shù)法①原理：利用特定細(xì)菌計數(shù)板或血細(xì)胞計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量。②方法：用計數(shù)板計數(shù)。③缺點：不能區(qū)分死菌與活菌。

(2)間接計數(shù)法(活菌計數(shù)法)①原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。3．統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法62②操作a．設(shè)置重復(fù)組，增強實驗的說服力與準(zhǔn)確性。b．為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計數(shù)。③計算公式：每克樣品中的菌株數(shù)＝

×M，其中C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積(mL)，M代表稀釋倍數(shù)。②操作63

4．細(xì)菌分離與計數(shù)的實驗流程

土壤取樣→樣品稀釋→取樣涂布→微生物培養(yǎng)→觀察并記錄結(jié)果→細(xì)菌計數(shù)。4．細(xì)菌分離與計數(shù)的實驗流程64【例2】可以鑒定出分解尿素的細(xì)菌的方法是(

)A．以尿素為惟一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑B．以尿素為惟一氮源的培養(yǎng)基中加入二苯胺試劑C．以尿素為惟一氮源的培養(yǎng)基中加入蘇丹Ⅲ試劑D．以尿素為惟一氮源的培養(yǎng)基中加入雙縮脲試劑

【解析】在以尿素為惟一氮源的培養(yǎng)基中，不能分解尿素獲得氮源的細(xì)菌不能生長，而分解尿素的細(xì)菌能利用尿素作氮源，將尿素分解為氨，使pH升高。若培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，指示劑將變紅。此培養(yǎng)基既屬于選擇培養(yǎng)基，又屬于鑒別培養(yǎng)基。

A【例2】可以鑒定出分解尿素的細(xì)菌的方法是()A65

三、分解纖維素的微生物的分離1．分解纖維素的微生物的分離(1)實驗原理

即：可根據(jù)是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。三、分解纖維素的微生物的分離66(2)實驗流程

土壤取樣：富含纖維素的環(huán)境?！?/p>

選擇培養(yǎng)：用選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)，以增加纖維素分解菌的數(shù)量。↓

梯度稀釋↓

涂布平板：將樣品涂布于鑒別含CR的纖維素分解菌的培養(yǎng)基(固體)。↓

挑選產(chǎn)生透明圈的菌落：產(chǎn)生纖維素酶的菌落周圍出現(xiàn)透明圈。

(2)實驗流程67

【友情提醒】①選擇培養(yǎng)的目的是增加纖維素分解菌的濃度，確保能夠從樣品中分離到所需要的微生物。②涉及的微生物技術(shù)主要有：培養(yǎng)基的配制、無菌操作技術(shù)、稀釋涂布平板法、選擇培養(yǎng)基的作用、土壤取樣等。【友情提醒】①選擇培養(yǎng)的目的是增加纖維素分解菌的濃度，確68【例3】下圖為分離并統(tǒng)計分解纖維素的微生物的實驗流程，據(jù)此回答有關(guān)問題：(1)要從富含纖維素的環(huán)境中分離纖維素分解菌，從高溫?zé)崛袑ふ夷蜔峋?，這說明______________?！纠?】下圖為分離并統(tǒng)計分解纖維素的微生物的實69(2)某同學(xué)根據(jù)需要，配制了纖維素分解菌的培養(yǎng)基如下，整個實驗過程嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作。

如果將其中的纖維素粉換成________，菌落數(shù)____________________________________________，即可說明選擇培養(yǎng)基的作用。纖維素粉NaNO3Na2HPO4KH2PO45g1g1.2g0.9gMgSO4·7H2OKCl酵母膏0.5g0.5g適量(2)某同學(xué)根據(jù)需要，配制了纖維素分解菌的培養(yǎng)基如下70【解析】(1)因為纖維素分解菌與耐熱菌有不同的生活習(xí)性，生活在不同的環(huán)境中，故要根據(jù)目的菌株對生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找。(2)因為葡萄糖是纖維素水解產(chǎn)生的、能被微生物直接利用的有機小分子，所以如果將其中的纖維素粉換成葡萄糖，纖維素分解菌及其他細(xì)菌會生長繁殖得更快，故菌落數(shù)明顯多于選擇培養(yǎng)基。(3)因為稀釋涂布平板法要將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，故該法可根據(jù)稀釋體積計算每克樣品中的細(xì)菌數(shù)，而平板劃線法則不能這樣，所以本實驗宜采用稀釋涂布平板法接種?！窘馕觥?1)因為纖維素分解菌與耐熱菌有不同的生活習(xí)性71【答案】(1)不同的菌株生活在不同的環(huán)境中，根據(jù)目的菌株對生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找(2)葡萄糖明顯多于選擇培養(yǎng)基上的菌落數(shù)(3)稀釋涂布平板平板劃線法難以根據(jù)稀釋體積計算每克樣品中的細(xì)菌數(shù)【答案】(1)不同的菌株生活在不同的環(huán)境中，根據(jù)目的菌721．消毒和滅菌的區(qū)別1．消毒和滅菌的區(qū)別73用酒精消毒時，70%的酒精殺菌效果最好，原因是：濃度過高，使菌體表面蛋白質(zhì)凝固成一層保護(hù)膜，乙醇分子不能滲入其中；濃度過低，殺菌力減弱。2．操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)基；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到單菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。用酒精消毒時，70%的酒精殺菌效果最好，原因是：濃度過高，使74第2講微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用復(fù)習(xí)課件751.(2012·全國卷)下列關(guān)于細(xì)菌的敘述，正確的是()A．不同種類細(xì)菌的生長均需要相同碳源B．常用液體培養(yǎng)基分離獲得細(xì)菌單菌落C．細(xì)菌大量培養(yǎng)過程中，芽孢形成于細(xì)菌生長的調(diào)整期D．培養(yǎng)基中含有高濃度NaCl有利于金黃色葡萄球菌的篩選D1.(2012·全國卷)下列關(guān)于細(xì)菌的敘述，正確的是(76【解析】自養(yǎng)型微生物需要無機碳源，異養(yǎng)型微生物需要的是有機碳源，不同種類細(xì)菌的生長需要不同的碳源，A項錯誤；要獲得細(xì)菌單菌落只能用固體培養(yǎng)基，B項錯誤；細(xì)菌芽孢是幫助細(xì)菌度過不良環(huán)境的結(jié)構(gòu)，形成于穩(wěn)定期，C項錯誤；大部分細(xì)菌不能在含有高濃度NaCl的培養(yǎng)基中生存，而金黃色葡萄球菌可耐高濃度NaCl，所以培養(yǎng)基中含有高濃度NaCl有利于金黃色葡萄球菌的篩選，D項正確?！窘馕觥孔责B(yǎng)型微生物需要無機碳源，異養(yǎng)型微生物需要的是有機碳772.(2012·重慶卷)針對耐藥菌日益增多的情況，利用噬菌體作為一種新的抗菌治療手段的研究備受關(guān)注。下列有關(guān)噬菌體的敘述，正確的是()A．利用宿主菌的氨基酸合成子代噬菌體的蛋白質(zhì)B．以宿主菌DNA為模板合成子代噬菌體的核酸C．外殼抑制了宿主菌的蛋白質(zhì)合成，使該細(xì)菌死亡D．能在宿主菌內(nèi)以二分裂方式增殖，使該細(xì)菌裂解A2.(2012·重慶卷)針對耐藥菌日益增多的情況，利用噬菌體78【解析】噬菌體侵入宿主后，利用宿主菌的原料(氨基酸和核苷酸)，合成噬菌體的蛋白質(zhì)，所以A正確；子代噬菌體的核酸是以噬菌體的DNA為模板來復(fù)制的，B錯誤；噬菌體消耗細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)，導(dǎo)致細(xì)菌死亡，C錯誤；噬菌體沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu)，不能以二分裂方式增殖，而是在寄主菌體內(nèi)合成各個部件后，再組裝、釋放，使細(xì)菌裂解，D錯誤。【解析】噬菌體侵入宿主后，利用宿主菌的原料(氨基酸和核苷酸)793.(2011·重慶卷)下列有關(guān)細(xì)菌培養(yǎng)的敘述，正確的是()A．在瓊脂固體培養(yǎng)基上長出的單個菌落含有多種細(xì)菌B．在培養(yǎng)基中加入青霉素可抑制真菌而促進(jìn)細(xì)菌生長C．向液體培養(yǎng)基中通入氧氣能促進(jìn)破傷風(fēng)桿菌的生長D．在半固體培養(yǎng)基中接種細(xì)菌培養(yǎng)后可以觀察其運動D3.(2011·重慶卷)下列有關(guān)細(xì)菌培養(yǎng)的敘述，正確的是(80【解析】本題考查微生物的培養(yǎng)、生長、代謝等知識點。固體培養(yǎng)基上長出的單個菌落屬于一個種群；青霉素能抑制細(xì)菌的生長，但不能抑制真菌的生長；破傷風(fēng)桿菌為厭氧型細(xì)菌，在有氧條件下，其生長及代謝活動受到抑制；在半固體培養(yǎng)基中接種細(xì)菌經(jīng)培養(yǎng)后可對菌體運動進(jìn)行觀察。【解析】本題考查微生物的培養(yǎng)、生長、代謝等知識點。固體培養(yǎng)基814.下列關(guān)于培養(yǎng)基的敘述，錯誤的是()A．硝化細(xì)菌能以NH3作為氮源和能源物質(zhì)B．各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源和無機鹽四種營養(yǎng)要素C．特殊營養(yǎng)物質(zhì)是某些微生物生長過程中需要額外補充的營養(yǎng)物質(zhì)D．培養(yǎng)乳酸桿菌時培養(yǎng)基中不需要添加維生素D4.下列關(guān)于培養(yǎng)基的敘述，錯誤的是()D82【解析】微生物的培養(yǎng)基除了含碳源、氮源、無機鹽、水四種營養(yǎng)要素外，有的還要補充特殊營養(yǎng)物質(zhì)，如培養(yǎng)乳酸桿菌時需要在培養(yǎng)基中添加維生素。【解析】微生物的培養(yǎng)基除了含碳源、氮源、無機鹽、水四種營養(yǎng)要835.某同學(xué)在做細(xì)菌培養(yǎng)實驗過程中發(fā)現(xiàn)：某種細(xì)菌(記作S)的周圍其他細(xì)菌的生長繁殖受到抑制。他認(rèn)為，最可能的原因是S細(xì)菌產(chǎn)生了一種不利于其他細(xì)菌生存的物質(zhì)。為驗證這一假設(shè)，實驗組和對照組均使用相同的培養(yǎng)基，正確的接種方法應(yīng)是()A．實驗組接種S細(xì)菌，對照組接種其他細(xì)菌B．實驗組接種其他細(xì)菌，對照組接種S細(xì)菌5.某同學(xué)在做細(xì)菌培養(yǎng)實驗過程中發(fā)現(xiàn)：某種細(xì)菌(記作S)的周845.某同學(xué)在做細(xì)菌培養(yǎng)實驗過程中發(fā)現(xiàn)：某種細(xì)菌(記作S)的周圍其他細(xì)菌的生長繁殖受到抑制。他認(rèn)為，最可能的原因是S細(xì)菌產(chǎn)生了一種不利于其他細(xì)菌生存的物質(zhì)。為驗證這一假設(shè)，實驗組和對照組均使用相同的培養(yǎng)基，正確的接種方法應(yīng)是()