無菌操作的注意事項-07.11課件

無菌操作的注意事項12/5/20221一.消毒與滅菌的概念消毒是指對病原微生物的致死作用，但不能殺死芽胞等全部微生物。所以消毒是不徹底的，不能代替滅菌。凡用于消毒的化學(xué)藥品稱為消毒劑。消毒劑有液體的、固體的和氣體的。消毒劑的種類很多，性質(zhì)不一，因此應(yīng)根據(jù)具體情況選擇既安全又有效的消毒劑。常用的消毒劑有70-75％的乙醇或異丙醇溶液、0.1-02％的新潔爾滅溶液、3-6％過氧化氫溶液等。微生物實驗室12/5/20222一.消毒與滅菌的概念滅菌是指用物理或化學(xué)手段完全殺滅或消除活的微生物的過程。從定義來看，滅菌是一絕對概念，一件物品要么有菌，要么無菌。兩個概念的異同點。滅菌和消毒是兩個不同的概念，有共性，也有區(qū)別。其共性是殺滅微生物以控制其污染。區(qū)別是（1）殺滅微生物的完全性的差異，滅菌要求完全殺滅微生物。滅菌后的物品不應(yīng)含有任何活的微生物。而消毒是不完全的，只能殺滅一部分微生物。（2）方法上的差異。滅菌的方法有多樣性，而消毒常常是借助化學(xué)物質(zhì)。（3）效果檢查的差異。滅菌效果是用無菌檢查法檢測，而消毒效果是以消毒劑的效價來評定。微生物實驗室12/5/20223三.我們常用的幾種消毒劑1.醇類因其具有抗菌作用，乙醇被用作消毒劑已有幾百年的歷史。乙醇類消毒劑的殺菌機(jī)制是使微生物的蛋白質(zhì)變性，在沒有水的情形下，蛋白質(zhì)不易變性，因此，在乙醇中加入一些水會使殺菌效力更好。對于干燥表面消毒時，乙醇的殺菌效果在體積比為70-75％時為最強(qiáng)。我們無菌室使用75％的乙醇和70％的異丙醇來消毒工作臺面、物料包裝表面、操作者手套。以醇類為基質(zhì)的化合物之所以被廣泛使用是因為它們蒸發(fā)后沒有任何殘留。然而，乙醇的殺菌效果是有限的，特別是它對人體表面散發(fā)到環(huán)境中的一些微生物消毒效果并不理想。要想使?jié)崈魠^(qū)內(nèi)的微生物得到有效控制，務(wù)必定期對潔凈室進(jìn)行甲醛熏蒸滅菌。微生物實驗室12/5/20225三.我們常用的幾種消毒劑2.季銨鹽類化合物新潔爾滅溶液（0.1-02％的苯扎溴銨溶液）即是一種常見的季銨鹽類消毒劑。此類消毒劑在酸性或堿性環(huán)境中均能殺死細(xì)菌或真菌，在中性或堿性溶液中效果最好。配制消毒劑時應(yīng)該使用滅菌水，因為水中的含菌量過高會影響其消毒效果。與肥皂或其他合成洗滌劑、有機(jī)物接觸時滅菌效力會大大降低。微生物實驗室12/5/20226三.我們常用的幾種消毒劑3.過氧化氫和過氧乙酸濃度為3-6％的過氧化氫溶液能殺死一般的細(xì)菌，當(dāng)濃度高于6％時，即能殺死細(xì)菌芽胞。過氧乙酸的殺菌能力高于過氧化氫，它在低溫下也有很強(qiáng)的殺菌能力且無任何有毒殘留物。與過氧化氫相比，氣態(tài)過氧乙酸的缺陷在于易揮發(fā)并且有刺激性氣味。過氧化合物的殺菌普非常廣，但是對某些金屬有腐蝕作用。微生物實驗室12/5/20227四.常用的幾種滅菌方法1.熱力滅菌利用高溫殺滅微生物，是一種應(yīng)用廣泛而又簡便有效的滅菌方法?？煞譃楦蔁釡缇蜐駸釡缇?。（1）干熱滅菌法利用強(qiáng)熱使蛋白質(zhì)凝固，而導(dǎo)致細(xì)胞死亡。常用的有火焰、灼燒和干烤等。一般180℃以上持續(xù)45分鐘即可滅菌。（2）濕熱滅菌法通過熱蒸汽或沸水使細(xì)菌蛋白質(zhì)變性而殺滅微生物。分為煮沸滅菌、流通蒸汽滅菌和高壓蒸汽滅菌法。前兩種方法只能殺死細(xì)菌繁殖體，不能完全殺滅芽胞。微生物實驗室12/5/20228四.常用的幾種滅菌方法2.氣體滅菌利用化學(xué)消毒劑形成的氣體來殺滅微生物的措施，稱為氣體滅菌法。多種化學(xué)消毒劑如甲醛、環(huán)氧乙烷等。常用的滅菌劑為環(huán)氧乙烷。3.輻射滅菌有兩種類型，一是引起電離的X射線、r射線，稱為電離輻射；一是非電離輻射的紫外線、紅外線、微波等屬于電磁波輻射。紫外線輻射的穿透能力很弱，不能穿透正常的包裝材料，即使是一層薄的普通玻璃、塑料薄膜、紙等也無法穿透。而且紫外燈的壽命都是有限的，最長的壽命為2000h,所以紫外燈應(yīng)定時更換，而不應(yīng)等到不亮?xí)r才換。微生物實驗室12/5/202210五.無菌室人員衛(wèi)生藥品在生產(chǎn)過程中始終有人的操作活動，所以說人是藥品生產(chǎn)中最大的污染源之一。自然活動時，人體散發(fā)出的熱量可形成一股熱流，這股熱流便于微小粒子（大于0.3um）的擴(kuò)散，每分鐘大約能產(chǎn)生千百萬粒。人體所散發(fā)的粒子數(shù)見表：體態(tài)散發(fā)粒子數(shù)（萬個/分鐘）站10坐50坐下站起100-250走500-1000爬樓梯1000運(yùn)動1500-300012/5/202212五.無菌室人員衛(wèi)生1.個體衛(wèi)生手的衛(wèi)生是影響藥品質(zhì)量的主要因素。GMP規(guī)定進(jìn)入潔凈室的人員不得化妝和佩戴首飾，目的就是防止積污和污染藥品。另外我們手上的汗毛、分泌的油脂、皮屑等都可能沾上污垢、細(xì)菌、化學(xué)藥品等、，因此在進(jìn)入無菌室以前要進(jìn)行手的清洗和消毒，并戴手套，在生產(chǎn)過程中一直要保持手套的清潔衛(wèi)生以及手套的完整性，一旦有破損應(yīng)立即更換。微生物實驗室12/5/202214五.無菌室人員衛(wèi)生口腔、鼻腔、頭發(fā)的衛(wèi)生除了手的衛(wèi)生之外，引起污染的因素很多，其中以口腔、鼻腔、頭發(fā)的衛(wèi)生關(guān)系較大。人的口腔粘膜和鼻腔粘膜存在大量的細(xì)菌。當(dāng)人們講話、咳嗽和打噴嚏時均能散發(fā)大量的細(xì)菌。咳嗽一次發(fā)菌量為70～700個，噴嚏一次為4000～60000個。為了防止藥品生產(chǎn)過程中，由于防止藥品生產(chǎn)過程中由于口腔和鼻腔散發(fā)出的污物對藥品造成的污染，生產(chǎn)過程中必須戴口罩。保持頭發(fā)的整潔也能夠減少對藥品的污染，留胡子也是一種很不衛(wèi)生的習(xí)慣，因為胡子有很強(qiáng)的吸附性，帶有灰塵和細(xì)菌，能增加污染的危險性。微生物實驗室12/5/202215五.無菌室人員衛(wèi)生2.人員在潔凈區(qū)內(nèi)的自我約束在潔凈區(qū)工作的人員必須嚴(yán)格遵守潔凈區(qū)的規(guī)則。從潔凈室的微粒和微生物的測試結(jié)果表明：人員的多少、人員操作動作的幅度對環(huán)境的質(zhì)量有明顯的影響。因此潔凈室的人員進(jìn)出次數(shù)應(yīng)盡可能少，同時在操作過程中應(yīng)減小動作幅度，盡量避免不必要的走動和移動，以保持潔凈區(qū)的氣流、風(fēng)量和風(fēng)壓等，保持潔凈區(qū)的凈化級別。也就是說在潔凈區(qū)工作的人員，操作和行動都要有自我約束的概念。微生物實驗室12/5/202216六.無菌室環(huán)境和人員的微生物監(jiān)測為了使?jié)崈魠^(qū)的環(huán)境質(zhì)量能得到有效控制并被客觀評價，應(yīng)對其實行全面監(jiān)控。監(jiān)控項目包括懸浮粒子監(jiān)測、空氣浮游菌監(jiān)測、設(shè)施和設(shè)備表面的微生物監(jiān)測以及人員的微生物監(jiān)測等?；诒O(jiān)測環(huán)境中的總懸浮粒子數(shù)和浮游菌數(shù)，可以分析和評價環(huán)境凈化設(shè)施的總體運(yùn)行狀況?？諝庵械母∮挝⑸锊⒉灰宰杂善』騿渭?xì)胞狀態(tài)存在，他們通常與粒徑為10-20um的粒子附著在一起。為了及時監(jiān)控潔凈區(qū)的環(huán)境質(zhì)量，需要對控制區(qū)中的非活性懸浮粒子和微生物均進(jìn)行監(jiān)測。微生物實驗室12/5/202217六.無菌室環(huán)境和人員的微生物監(jiān)測1.潔凈區(qū)的沉降菌監(jiān)測根據(jù)QCJ709規(guī)定，無菌室每班次都要進(jìn)行沉降菌的監(jiān)測,其他潔凈區(qū)的取樣頻率為每周2次。白班由車間質(zhì)檢人員負(fù)責(zé)取樣，夜班由班長負(fù)責(zé)。取樣平皿由我們微生物實驗室準(zhǔn)備，由車間質(zhì)檢人員負(fù)責(zé)取送。取樣平皿進(jìn)入無菌室之前，必須經(jīng)過必要的消毒和除菌措施，包括噴灑酒精和紫外燈照射（紫外燈照射的時間不得少于30分鐘）。放置平皿時動作要輕，盡量避免污染，如果有條件最好將平皿置于離地面0.8-1.5米的地方，這樣可以減少人為的干擾。取樣前，按照取樣圖上的說明對取樣平皿做好標(biāo)記，然后按照取樣圖進(jìn)行取樣。平皿的暴露時間為4小時，這個時間不可隨便更改微生物實驗室12/5/202218六.無菌室環(huán)境和人員的微生物監(jiān)測3.潔凈區(qū)的表面微生物監(jiān)測根據(jù)QCJ702的規(guī)定，無菌室每周進(jìn)行2次表面菌監(jiān)測，其他潔凈室每周進(jìn)行1次表面菌監(jiān)測。表面菌監(jiān)測主要包括以下部位：門、地板、墻壁（不易被清潔、消毒的部位）、生產(chǎn)設(shè)備的關(guān)鍵部位等。我們采用的是棉簽擦拭取樣法，即用無菌棉簽蘸取0.1％的蛋白胨水擦拭取樣部位24-30cm2，然后拿棉簽在培養(yǎng)基的表面進(jìn)行劃線。取樣完畢后，應(yīng)該用無抹布將取樣表面擦拭干凈，以防微生物滋生。微生物實驗室12/5/202220六.無菌室環(huán)境和人員的微生物監(jiān)測4.人員的微生物監(jiān)測根據(jù)QCJ702的規(guī)定，無菌室操作人員每班都要進(jìn)行微生物監(jiān)測，取樣部位包括手套、頭套、軀干和