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實(shí)習(xí)內(nèi)容二滅菌一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^(guò)實(shí)際操作,了解消毒和滅菌的常用方法和適用范圍,掌握干熱滅菌和高壓濕熱滅菌的操作方法。二、材料和用具
高壓滅菌鍋、烘箱、培養(yǎng)基、吸管、滅菌水、培養(yǎng)基等。1.器具的消毒:2.工作場(chǎng)所的消毒:3.分離材料的表面消毒:
2.滅菌:應(yīng)用物理的或化學(xué)的方法把材料中或物體上的所有微生物全部殺死。經(jīng)滅菌的物體處于無(wú)菌狀態(tài),如滅菌水、滅菌培養(yǎng)器皿。2.1高溫滅菌2.2過(guò)濾滅菌2.3紫外線滅菌2.4電離輻射滅菌2.5化學(xué)滅菌(二)培養(yǎng)基的滅菌滅菌:是指用物理或化學(xué)的方法完全殺死器物表面及其內(nèi)部的所有微生物。消毒:是指消滅器物表面或植物組織表面的某些微生物,而不是消滅所有的微生物。
1.干熱滅菌:(1)將培養(yǎng)皿、吸管等玻璃器皿洗凈干燥后,用舊報(bào)紙包好,或裝入特制的鐵筒中(每個(gè)吸管用紙包好后裝入鐵筒),包紙時(shí)應(yīng)將吸取的一端放在取時(shí)先拆開的一端,以便取用時(shí)手勿觸及要求滅菌的一端。
2.濕熱滅菌:使用高壓滅菌鍋,利用高壓來(lái)提高蒸汽的溫度,達(dá)到完全滅菌的目的。其操作步驟如下:
(1)關(guān)好排水閥門放入清水至標(biāo)度為止,注意水量一定要加足,否則容易造成事故。
(3)通電加溫,同時(shí)打開排氣閥門,排盡鍋內(nèi)的空氣,即閥門沖出的全部是蒸氣時(shí)則表示徹底,此時(shí)可關(guān)閉排氣閥門,如果過(guò)早關(guān)閉閥門,排氣不徹底,也達(dá)不到徹底滅菌的目的。通常先關(guān)閉閥門,當(dāng)壓力表指針升至0.5磅時(shí),打開排氣閥門放氣,降至零點(diǎn),再關(guān)閉閥門。
(4)壓力表的指針上升時(shí),鍋內(nèi)溫度也逐漸升高,當(dāng)壓力表指針升至0.15磅時(shí),蒸氣溫度相當(dāng)于120℃~121℃(等于一個(gè)大氣壓),此時(shí)開始計(jì)算滅菌時(shí)間,控制熱源,使處于0.1~15磅壓力保持30分鐘,即能達(dá)到完全滅菌的目的,然后停止加溫。
(5)稍微打開一點(diǎn)排氣活門,使鍋內(nèi)蒸汽緩慢排除,然后逐漸開大活門,氣壓徐徐下降,注意勿使排氣過(guò)快,否則會(huì)使鍋內(nèi)的培養(yǎng)基沸騰而沖脫或沾濕棉花塞,但排氣太慢又使培養(yǎng)基在鍋內(nèi),受高溫處理時(shí)間過(guò)長(zhǎng),這樣對(duì)培養(yǎng)基也是不利的。一般從排氣到打開鍋蓋以10分鐘左右為好。
(6)當(dāng)壓力表指針降到零、鍋內(nèi)蒸氣完全排盡時(shí),打開鍋蓋取出培養(yǎng)基,如需制備固體斜面培養(yǎng)基時(shí),則應(yīng)趁熱將試管斜放在桌上,上面蓋上
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