微生物細(xì)菌耐藥性檢測(cè)

第四細(xì)菌耐藥性檢中山大學(xué)附屬第一醫(yī) 陳冬 目的要 相關(guān)資 細(xì)菌：對(duì)多種抗生素出現(xiàn)抗藥性，已成為影響中國與世界重癥監(jiān)護(hù)患者預(yù)后及整體醫(yī)療資源的重大在人群層面、醫(yī)院層面 層面上 及抗生相關(guān)控制措施的不足，與抗生素抗藥性發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)上升存在極強(qiáng)的相關(guān)性醫(yī)學(xué)界開始呼吁醫(yī)師避免不當(dāng)使用抗生素,方法有二：一、抗生素療法僅用于確實(shí)罹患細(xì)菌 的患者身上二、針對(duì)需要使用抗生素的患者縮短治療時(shí)EmergInfectDisInfectionTheLancetinfectiousdiseases確 部確認(rèn) 怎樣正 抗菌譜、給藥方案、時(shí)間《抗菌藥物臨床應(yīng)用

檢測(cè)后結(jié)果分析、應(yīng)A目前可列為微生物標(biāo)本送檢率項(xiàng)A1.無菌體液細(xì)菌、真菌涂片 4.軍團(tuán)菌抗原/抗體檢驗(yàn) 真菌G實(shí)驗(yàn)或GM試驗(yàn) 降鈣素原檢驗(yàn)（PCT）細(xì)真生型病原生 Admin[WorldSepsisDay]治療膿毒癥|重癥監(jiān)護(hù)情境下-PCT0.25-0.25-0.5-若強(qiáng)烈懷疑為膿毒血癥，立即展開經(jīng)驗(yàn)性抗生素治療；若經(jīng)臨床評(píng)估后并未懷疑為膿毒血癥，則考慮其建議給予抗生強(qiáng)烈建議給予抗生若臨懷疑為，建議施行經(jīng)驗(yàn)性治建議反復(fù)進(jìn)行臨床評(píng)重復(fù)檢測(cè)PCT（6-24小時(shí)后建議反復(fù)進(jìn)行臨床評(píng)重復(fù)檢測(cè)PCT（1-2天一次<0.25PCT下降幅0.25<0.5PCT下降>0.5PCT下降幅>1.0PCT濃度上建議繼續(xù)給予抗生強(qiáng)烈建議繼續(xù)給予抗生若病患的臨床狀況不穩(wěn)定，應(yīng)繼續(xù)給予抗生建議反復(fù)進(jìn)行臨床評(píng)重復(fù)檢測(cè)PCT（1-2天一次建議反復(fù)進(jìn)行臨床評(píng)重復(fù)檢測(cè)PCT（2天一次），并考慮停用抗生素的可行性若PCT持續(xù)偏高，可能代表治療失 央視曝自來水檢出抗生素珠江廣州 嚴(yán) 內(nèi)如何檢結(jié)果解檢測(cè)意 一、青霉素類抗生素抗生素名稱抗菌活性一、青霉素類抗生素抗生素名稱抗菌活性1、天然：青霉素G，青霉素不產(chǎn)青霉素酶的革蘭陽性和球菌2、耐青霉素酶青霉素甲氧西林，奈夫西林、苯唑西林產(chǎn)青霉素酶革蘭陽性和球菌氯唑西林、氟氯西林3、廣譜青霉素氨基組青霉素：AMP、青霉素G敏感細(xì)菌，大部分ECO、PMI、HIN等G-B羧基組青霉素：替卡西林、羧芐西林等AMP無效的G-菌，產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶克雷伯菌、、脲基組青霉素：美洛西林、阿洛西林銅綠假單胞菌、腸桿菌、厭氧菌哌啦西林第一代對(duì)G+菌強(qiáng)：SAU、SPN、厭氧鏈球第一代對(duì)G+菌強(qiáng)：SAU、SPN、厭氧鏈球菌、化膿性鏈球菌頭孢塞啶、噻吩、氨芐、唑啉、G-菌中度敏感：ECO、KPN，耐藥：MRS、腸球菌啦啶、匹林、羥氨芐假單胞菌、變形菌、沙雷菌、腸桿菌屬第二代產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶G-菌有作用：ECO、KPN、變形菌、HIN、頭孢羥唑、呋辛、尼西、雷特、克洛、丙沙雷菌、奈瑟菌和厭氧菌第三代對(duì)產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶菌株抗菌活性強(qiáng)：腸桿菌科和注射用頭孢噻肟、曲松、唑肟、他啶、哌銅綠假單胞菌，口服頭孢克肟、布坦、迪尼、泊肟但口服對(duì)腸球菌、銅綠及不動(dòng)無作用第四代頭孢匹肟、匹美對(duì)腸桿菌科細(xì)菌和銅綠作用強(qiáng)

抗菌活性 1、單環(huán)β-內(nèi)酰胺類G-強(qiáng)奈瑟菌、桿菌1、單環(huán)β-內(nèi)酰胺類G-強(qiáng)奈瑟菌、桿菌、PAE；對(duì)G+和厭氧幾乎無作用ATM、卡蘆莫南不動(dòng)桿菌、洋蔥、PMA不敏感2、頭霉素類和氧頭孢烯類抗生素頭霉烯類：頭孢西丁、替坦、美唑G+較好，PAE耐藥氧頭孢烯類：G-，具有第三代頭孢菌素的特點(diǎn)3、碳青霉烯類：IMP、美羅培南、等除：XAN和某些脆弱擬桿菌、少量不動(dòng)G-桿菌，MRS4、酶抑制劑復(fù)合抗生素克拉維酸、2020/2/3唑巴坦（青霉素或頭孢）

抗菌活性其氨基糖苷類:慶大、AMK、奈替、妥、鏈、卡那。對(duì)G-桿 喹諾酮類：奈啶酸，環(huán)丙、加替、吉米、格帕、左氧、氧氟、洛美、莫西、氧氟、司帕、曲發(fā) 四環(huán)素：衣原體、立克次體首選，布魯甘酰胺四環(huán)素類Tigecycline/Tygacil（替加環(huán)素MRSA、腸桿菌科、不動(dòng)桿菌氯霉素、糖肽類：萬古 拉寧脂肽類：多黏菌素B和 打破了MRSA(andMRCoNS)耐所有β-內(nèi)酰胺類藥物的規(guī)CeftarolineandCeftobiprole具有抑制MRSA的活 FDA認(rèn)可—January

CLSIM100-S20.pp CeftarolineBroad-spectrumcephalosporin(withanti-activity)廣譜頭孢菌素類藥物（抗MRSA活性IVFDAclinicalAcutebacterialskinandskinstructureCommunity-acquiredbacterial onia(CABP)–E.coli，Klebsiellap BactericidalagainstMRSAduetoitsaffinityforPBP2aandagainstpenicillin-nonsusceptibleStreptococcus oniaeduetoitsaffinityfor 2013 CeftarolineNotactiveagainstESBL,ampC(classC),orcarbapenemase(e.g.,KPC)producingSomeactivityagainstanaerobesBacteroidesfragilis脆弱擬桿菌 2013 第二節(jié)：抗菌藥物敏感性試1、可預(yù)測(cè)抗菌治療的2、指導(dǎo)臨床醫(yī)生選擇3、提供所選擇藥物的4、監(jiān)測(cè)耐 二、試驗(yàn)常規(guī)抗菌藥物選A：常規(guī)首選種微生物；多部位； 測(cè)試 菌 測(cè)其他藥物的敏感苯唑西林葡萄球 所有β-內(nèi)酰胺四環(huán)素所有（除 紅霉 G＋球 克林霉素所 青霉素萬古霉 所 拉 ﹡僅用于MIC A組A組U組補(bǔ)充試霉素或克拉霉素或﹡達(dá)托霉氯霉諾氟沙克林霉利奈唑環(huán)丙沙星或左氧沙星或莫西沙頭孢泰利霉素年青霉慶大霉呋喃妥萬古霉 磺胺甲惡利福甲氧芐腸球菌 CLSIM100- 2014﹡慶大霉素（β-溶血鏈球菌CLSIM100- B組首選試驗(yàn)選擇性報(bào)頭孢吡肟或頭孢噻肟或﹡青霉素或奎奴普丁/達(dá)福普頭孢克環(huán)丙沙四環(huán)﹡替卡西林/克拉維洛美沙星或頭孢西頭孢噻肟環(huán)丙沙 哌拉西甲氧芐啶/磺胺甲惡AA氨芐西林/舒巴阿米卡頭孢他哌拉西林/他唑巴替卡西林/克拉維環(huán)丙沙左氧氟沙頭孢吡多利培美羅培頭孢曲妥布霉多西環(huán)四環(huán)米諾哌拉西甲氧芐啶/磺胺甲惡洋蔥伯克霍爾德 嗜麥芽窄食單胞 AAB﹡﹡﹡替卡西林AB﹡﹡﹡替卡西林/第二方抑菌試殺菌試 抑菌試驗(yàn)用于測(cè)定抗菌藥物體外抑制細(xì)菌生長微量稀釋法E 紙片擴(kuò)散 藥敏檢測(cè)方法11、將分純的菌種調(diào)節(jié)成一定的濃度2、均勻涂抹在M平板或其它相應(yīng)的培養(yǎng)基，并貼上相應(yīng)的藥 片3、35。，24-48小時(shí)后測(cè)量抑菌圈直徑，用I標(biāo)準(zhǔn)判斷S、、I 瓊脂平板的選擇 MH培養(yǎng)基（溶血或非溶血性鏈球菌加5%血，葡萄球菌苯唑西林耐藥檢測(cè)要厚度4mm營養(yǎng)要求pH：在室溫（25。C）下，其PH值為 臨床分離株及質(zhì)控株的紙片擴(kuò)微生物培養(yǎng)基接種液孵育特點(diǎn)

流感桿菌桿菌測(cè)試培養(yǎng)基（HTM）直接菌落懸液法16-18時(shí)；35℃

奈瑟菌GC基礎(chǔ)+1%特定生長補(bǔ)充品,紙片擴(kuò)散法不需要使用無半胱氨酸的補(bǔ)充品直接菌落懸液法5%CO2;20-小時(shí)；35℃；

鏈球菌Hinton瓊脂+5%脫纖維羊血直接菌落懸液5%CO2;20-24小時(shí)；35℃； 紙片擴(kuò)散注意事項(xiàng)培養(yǎng)基選抗生素紙片 及保存的質(zhì)量保適用范細(xì)菌濃度的調(diào) 紙片擴(kuò)散紙片直徑紙重量：吸水重量1：2.5～3.0，吸水量每片藥量：按CLSI標(biāo)準(zhǔn)不同的藥物含量不密封保存：2-8度或負(fù)20無霜冷凍保存，使 氨芐西啉16-氨芐西啉－舒巴坦10/10，19-頭孢呋辛 頭孢他啶 頭孢曲松 阿米卡星 紙片擴(kuò)散 藥敏檢測(cè)方法2、稀釋菌，孵育24小時(shí)后，抑制細(xì)菌生長的藥物稀釋度 512

4432121

84 藥敏檢測(cè)方法3、Etest 藥敏檢測(cè)方法微量稀釋法(儀器法BD 參照 臨床 標(biāo) （ClinicalLaboratoryStandardsInstitute，CLSI） 藥敏MIC藥代動(dòng)力學(xué)和藥效 定MIC的折抑菌圈直徑的分 ………定抑菌圈折統(tǒng)計(jì)學(xué)的線性回計(jì)算錯(cuò)誤率：盡可能減少極重要誤(假敏感率 MIC12 222耐 2小誤極重要誤小誤11中小誤81228411122重要誤小誤敏51125968 敏感(S)即表示測(cè)試菌可被測(cè)定藥物常規(guī)劑量給藥 中介“中介”類包括這些菌株，其抗微生物藥物MIC接近于血液和組織中通?？蛇_(dá)到的水平，而抗微生物藥治療的反應(yīng)率可能低于敏感株。“中介”分類意味著藥物在生理濃集的部位具有臨床效力(如尿液中的哇諾酮類和β-內(nèi)酰胺類)或者可用高于正常劑量的藥物進(jìn)行治療(如β-內(nèi)酰胺類)。此分類還包括一個(gè)緩沖區(qū)，它可以避免微小的、未能控制的技術(shù)因素造成重大的結(jié)果解釋錯(cuò)誤，特別是對(duì)那些藥物毒性范圍引進(jìn)劑量依賴性敏感(SDD)的概念2014 isbasedonadosageregimenof1gevery12 頭孢吡肟腸桿菌科細(xì)菌折 耐藥即表示測(cè)試菌不能被在體內(nèi)部位可 R不能用？，SR不能用？，SMIC MIC50MIC90MIC均值MIC范圍MIC50/MIC90：MIC從小到大排列，位于第50同時(shí)結(jié)合，I，S，(不同藥物血濃度不同，安全范圍不同)第三細(xì)菌的耐藥機(jī)制及耐藥性檢 三細(xì)菌耐藥的突變，誘 重 細(xì)菌耐藥機(jī)細(xì)菌耐藥機(jī)制主要有四種霉生霉生細(xì)菌主動(dòng)外排系統(tǒng)的過度表達(dá) β-內(nèi)酰胺類抗菌藥作用的要酶）和水解（通過自溶間有一個(gè)脆弱 細(xì)菌耐藥機(jī)制：獲得 β菌菌體外，革蘭桿菌間質(zhì)中； β一內(nèi)酰胺酶頭孢硝噻吩紙片β-內(nèi)酰酶陽性結(jié)果可用于預(yù)告以下幾點(diǎn)β-內(nèi)酰胺酶陽性的桿菌屬、奈瑟、卡他布蘭漢菌預(yù)告對(duì)青霉素、氨芐西林和阿莫西β-內(nèi)酰胺酶陽性的葡萄球菌和腸球菌預(yù)告對(duì)青霉素和酰胺基青霉素、羧基青霉素和脲基青霉β-內(nèi)酰胺酶的試驗(yàn)結(jié)果并不能排除由其他機(jī)制引起的耐藥。不應(yīng)對(duì)腸桿菌科、假單胞菌屬及其他需氧革蘭桿菌進(jìn)行此試驗(yàn)，因?yàn)樵囼?yàn)結(jié)果不能用來預(yù)測(cè)它們對(duì)常用β-內(nèi)酰胺類202

敏感性 β-以頭孢硝噻吩為底物的試驗(yàn)是測(cè)試桿菌屬、淋β-內(nèi)酰胺酶酸度法在桿菌屬、奈瑟菌、萄碘試驗(yàn)可測(cè)試奈瑟菌。但是卡他布蘭漢菌只能成誘導(dǎo)過程。同時(shí)還要測(cè)已知陽性和的質(zhì)控菌 MRS發(fā)生率變遷20100199819MRSA的定 CLSIM100-MRSA就是金葡的某些菌株表達(dá)mecA或是其他耐甲氧西林機(jī)制，比如與青霉素結(jié)合蛋白親和力的改變 (methecillinresistantStαphylococcusaureus)生物學(xué)特性:MRSA是攜帶mecA，編碼低親和力青霉素結(jié)合蛋白PBP2a)導(dǎo)致、青霉素類+青霉素酶抑制劑抗藥物金黃色葡萄球該菌是醫(yī)院內(nèi)的重要病原菌，多燒傷后的患者，極易導(dǎo)致爆發(fā)流行。 MRSA：醫(yī)院獲得性MRSA(HAMRSA)和社區(qū)獲得性MRSA(CA-MRSA)CAMRSA與HMRSA比較主要表HAMRSA通常攜帶SCCmecⅠ、Ⅱ、Ⅲ，很少攜帶殺白細(xì)胞毒素而CA-MRSA通常攜帶Ⅳ和Ⅴ， 常陽性在藥敏譜上也有區(qū)別CAMRSA為對(duì)?-內(nèi)酰胺類耐藥，而對(duì)多種非?內(nèi)酰胺類抗生素，通常對(duì)復(fù)方磺膠、四環(huán)索和克林霉素敏感。甚至對(duì)頭孢類抗生素也表現(xiàn)為敏而HAMRSA通常呈現(xiàn)多重耐藥。較多的研究認(rèn)為CAMRSA并非于HMRSA，是近年來出現(xiàn)的一種薪的耐藥模式，在、 超級(jí)病菌蔓 致死人數(shù)選 數(shù)據(jù)，嚴(yán)重MRSA5287人。按此比例推算，當(dāng)年人數(shù)為9.4萬多人。發(fā)現(xiàn)所有MRSA，988人，率為10萬分之6.3，推算則為1.865萬人。 如果上述案例全部系MRSA所致，那么美國國內(nèi)由這種“超級(jí)病菌”造成的人數(shù)將超過致死人數(shù)，后者在2005年的數(shù)據(jù)為2007年10月1713:20新220/1

醫(yī)學(xué)會(huì)雜志 CA- CDC標(biāo)準(zhǔn)CA-MRSA者不具有醫(yī)院獲得性MRSA者的因素常身體健康的青壯 生就因MRSA而，21所學(xué)校停課。 中國對(duì)CA-MRSA的研2003-2006年1366株MRSA研究PVL(殺白細(xì)胞毒素)陽性5株 ，2株肺1株 S.aureusorS.苯唑西林（OX)和頭孢西丁(FOX)耐藥機(jī)流行SS無普SRR普RRSmecA(低水平表達(dá)不常SRPBP改變或是大量內(nèi)酰胺酶（罕﹡大多市場上的鑒定系 是苯唑西林是苯唑西林MIC≥4μg/ml或頭孢西丁MIC≥4μg/ml（抑菌≤21mm）任青霉素?zé)o需檢頭孢硝噻吩β內(nèi)酰胺否：否：非報(bào)告除ceftaroline外所β內(nèi)酰胺類抗生素“耐報(bào)告除ceftaroline外所β內(nèi)酰胺類抗生素“耐藥耐酶青霉素：苯唑西金黃色葡萄球(MIC≤0.12μg/ml)青霉青霉素MIC≤0.12注釋若常規(guī)進(jìn)行紙片進(jìn)行青霉素抑菌圈邊緣進(jìn)行青霉素抑菌圈邊緣試模糊邊報(bào)告青霉素“敏感

銳利邊報(bào)告青霉素“耐藥M100-S23.Table2CSupplementalTable1.Page誘導(dǎo)β-內(nèi)酰胺酶的檢需要做誘導(dǎo)β-內(nèi)酰胺酶的檢測(cè)：MIC≤0.12Zonediameter≥29 或抑菌環(huán)直徑29mm，在報(bào)告青霉素結(jié)果為敏感前，應(yīng)執(zhí)行誘導(dǎo)β-酶試驗(yàn)。嚴(yán)重 ：必須做MI和誘導(dǎo)β-內(nèi)酰胺酶試驗(yàn)，連續(xù)監(jiān)測(cè)，也可考慮R檢測(cè)bla-β-內(nèi)酰胺酶誘導(dǎo)生長（例如，取在MHA或血瓊脂平板孵育16-18h后 β-內(nèi)酰胺酶(BL)研348MSSA低的青霉素MICs由blaZ-PCR檢測(cè)30345PCR頭孢硝噻吩頭孢硝噻吩Cloverleaf試青霉素抑菌圈邊緣試*StatensSerumInstitut(Denmark),CDC(Atlanta),MGH-血或MH-誘導(dǎo):貼紙片以誘導(dǎo)β-內(nèi)酰胺酶產(chǎn)假如β-內(nèi)酰胺酶陽性，報(bào)告青霉素 金黃色葡萄球模糊/“沙灘樣模糊/“沙灘樣”= S.aureus陽性ATCC(補(bǔ)充銳利懸崖樣銳利懸崖樣Cloverleaf試驗(yàn)檢5%羊血平 DS.aureusATCC25923為指示菌 C1(青霉素敏感菌株A-D菌株A-DBLReference:CLSIAgendaBookJanuary金黃色葡萄球 β-內(nèi)酰胺酶研究結(jié)果試敏感特異Penicillin抑菌圈邊緣試Reference:CLSIAgendaBookJanuary, 全球出現(xiàn)9株VRSA的特-都有萬古正在治療或治療史都同時(shí)伴有 或定植分離菌株VRSA和VRE含有同樣的萬 臨床治療均無萬古 CLSIM100-萬古霉素抑菌環(huán)<=7mm，必須檢測(cè)其MIC紙片檢測(cè)到萬古霉素MIC>=8ug/ml的任何金黃色葡萄球菌，應(yīng)送到參 萬古霉素MIC=μg/ml時(shí)應(yīng)被送往參 進(jìn)一步證S.aureus金黃色葡萄球MIC≥4μg/mlMIC≥8μg/ml(2010-凝固 葡萄球MIC≥8μg/mlMIC≥32μg/ml(2010-請(qǐng)與公 門協(xié)商 ISA的概解釋：其母代細(xì)菌對(duì)萬古霉素敏感（（4mg/L） 原因：h-VISAVISA的的前體，是接受萬古在的選擇性壓力，h-VISA逐漸演變?yōu)閂ISA 主要是VISA，VRSA較少見，而h-VISA可能更常見，尤其在治療失敗的MRSA血流 劉正印.球 ,20091(總4):8- MRSA(noth-VISA發(fā)生發(fā)生機(jī)與萬古霉素 有細(xì)胞壁增 高水平莫匹羅星耐藥200μg莫匹羅星紙單孔256μg/ml莫匹羅用透射光仔細(xì)檢查抑菌環(huán)內(nèi)有否輕微生長無抑菌環(huán)＝有抑菌環(huán)＝256μg/ml單孔：生長不生長 Linezolid不敏的S.aureus罕見0.05%(715,280CLSIagendabookJune–rRNA突變、介導(dǎo)耐藥（能被質(zhì)粒編碼Mendesetal.2008.AntimicrobAgentsChemother. 刪除所有β-葡萄球菌β-青霉 代表不穩(wěn)定的青霉素苯唑西 代表青霉素酶穩(wěn)定的青霉頭孢西 替代苯唑西ceftaroline（增加 頭孢烯具有抗MRSA活MRS的治治 舊藥：萬古霉素或去甲萬古霉素±利福平或慶大霉素、喹諾酮類耐藥性增加不推薦常規(guī)使用。新藥：利奈唑胺、達(dá)托霉素、替加環(huán) MSSA治奈呋西林，苯唑西林或雙氯西頭孢氨芐，頭孢唑加β-內(nèi)酰胺酶抑制劑 β-溶血鏈球菌青霉素敏對(duì)于β溶血群鏈球菌（A、B、C、G群）：氨芐僅僅用于A群鏈球菌的有：頭孢克羅、頭孢狄 “DTestβ-溶血性鏈球菌、肺 紙片邊緣距

孔內(nèi)同平平板：MHA+綿羊血 “D 溶血 “DTest 反無誘

真的克林霉素敏感-報(bào)告克

“DTest陽性反(erm-介導(dǎo))

15-26

PhotoscourtesyofJ.JorgensenandK. 耐藥低親和力青霉素結(jié)合蛋白PBPs)的產(chǎn)生，βPB改變的菌株 高水平氨基糖苷類耐藥 類與一種氨基糖苷類抗生素聯(lián)合用藥時(shí)對(duì)該腸 高水平氨基糖苷類耐藥特殊的高含量慶大霉素(120微克)或鏈霉素對(duì)抑菌圈直徑在7—9mm的菌株應(yīng)使用稀釋篩對(duì)其他氨基糖苷類抗生素不必進(jìn) 試，因?yàn)?慶大慶大霉素 或鏈霉素(300片)抑菌直徑≤6mm，7-9測(cè) ESBL發(fā)生率變遷7060 50.3

62.260.658.158.4550 42.240

41.135.38

50ecokpnecokpn

48.1

47.1

40.7

38.1

42.5430 38.733.32010

31.3

34.4

%01999200020012002200320042006-2009

2010201120122013耐藥現(xiàn) 抗藥性。這種脫氧核糖核酸間“輕松”。 研究現(xiàn)階段多在大腸桿菌和克雷伯氏菌等細(xì)菌內(nèi)發(fā)現(xiàn)ＮＤＭ—１。來源“羊城晚 含這種的細(xì)菌對(duì)幾乎所有抗生素具有免疫力。就連“性較強(qiáng)的”碳青霉烯類抗生素 歐洲臨床微生物和疾病學(xué)會(huì)說，預(yù)計(jì)Ｍ—１的細(xì)菌。來源“羊城晚報(bào) 耐藥現(xiàn) 大多數(shù)NDM-1超級(jí)細(xì)菌出現(xiàn)在大腸桿菌 和移動(dòng)，從而 懷疑產(chǎn)碳青霉烯酶腸桿菌科細(xì)菌篩選和確證試 10μg(1)用大腸埃希菌ATCC25922（指示菌）在肉湯或生理鹽水和1:10稀釋鹽水或肉湯中 0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)按常規(guī)紙片擴(kuò)散法程序接種MHA(2)使用10μl接種環(huán)或拭子挑取在血瓊脂平板過夜生長的3-5試驗(yàn)菌落或QC菌株，從紙片邊緣向外劃直線接種。劃線至少有20-25mm長。 改良Hodge試大腸埃希菌圖1在小的MHA平板上