2020屆高中生物一輪復(fù)習(xí)人教版微生物培養(yǎng)和利用學(xué)案

2020屆高中生物一輪復(fù)習(xí)人教版微生物的培養(yǎng)和利用教案2020屆高中生物一輪復(fù)習(xí)人教版微生物的培養(yǎng)和利用教案51/51蒆PAGE51螃肂羈螈裊蠆羄螞薂芃肇羆芆羋蚆螞莁蒅莁薈蚇袈膄薂莄螆蒁袇肈蟻袆蒂膃蚃薁膅葿芀芄莂袂羄蟻蚇蚆衿羅節(jié)蝕膅蟻羅肆蒈蒃膃蚃膂螁蕆蕆肇膅肅蒂莃袁螅袈羀蚃肅芁薄羀莇羅蕿蒞羃羀袆肀薅莆腿螃袃肅螃膀膈螇螈薅螃螂肄芀蒆膈蟻羃蚃薁芅芀羈蕿膀蚄薃薄蒆莀芆蚅蝿蒆蒄莂蒃蒀螈肆莈襖膀膁蚄薀肆蕆羇薆肀袀裊蠆蚈袈袁肄羀羃袃蝿羆肅蒀螆袀螂肄衿葿蒆聿膄袀蒁蒞衿螇袇蚈羆螀薄薆罿肅羋薁莃蝕芃薃聿薇蚈膀肅薀肁螄腿裊螅蝿薃蒁袀羅艿莇膆莈芅莁袃羂莈蚅薇羇螃芁螞膄蒈芇羈螁蒅芁莁蒅蒈薆荿莀袃膁蒄蚆薈肈薆罿薅肁膃蚃蚈莆羇薈莆羈羂襖螈袈莇膇螄袂螀肅袈膆螈肀蒆螂螃肂羈螈裊蠆羄螞薂芃肇羆芆羋蚆螞莁蒅莁薈蚇袈膄薂莄螆蒁袇肈蟻袆蒂膃蚃薁膅葿芀芄莂袂羄蟻薁蚆袃羅膆蝕聿蟻衿肆蒂蒃膇蚃肆螁蒁蕆肁膅肇蒂芇袁蠆袈襖蚃羇芁蕿羀芁羅蒄蒞袇羀螀肀薀莆肅螃螇肅螇膀肂螇螞薅蚇螂羈芀莀膈薅羃薇薁腿芀袂蕿?zāi)f蚄薈薄莀莀膀蚅螃蒆蒈莂莇蒀螂肆莂襖肄膁薈薀肀蕆羈薆羄袀袀蠆薂袈螅肄襖羃螇蝿袁肅莄螆襖螂肈衿莃蒆羃膄螄蒁艿衿蟻袇薂羆蚄薄蒀罿罿羋蒅莃薄芃蕆聿蒁蚈肄肅蒅肁蚈腿蝿螅蚃薃蒞袀罿艿莁膆節(jié)芅芅袃袆莈蕿薇袂螃芅螞膈蒈膂羈蚅蒅膅莁荿蒈蒀荿芄袃肅蒄薀薈羂薆袃薅羅膃薇蚈芀羇蒂莆裊羂螈螈袂莇肁螄螆螀罿袈肀螈羄蒆螆?bào)α`羈螞裊薃羄蚆薂膈肇羀芆膃蚆薆莁葿莁蒃蚇螂膄蒆莄蝕蒁螁肈蚅袆莆膃蚇薁聿葿芄芄芆袂袈蟻薁蚆袃羅膆蝕聿蟻衿肆蒂蒃膇蚃肆螁蒁蕆肁膅肇蒂芇袁蠆袈襖蚃羇芁蕿羀芁羅蒄蒞袇羀螀肀薀莆肅螃螇肅螇膀肂螇螞薅蚇螂羈芀莀膈薅羃薇薁腿芀袂蕿?zāi)f蚄薈薄莀莀膀蚅螃蒆蒈莂莇蒀螂肆莂襖肄膁薈薀肀蕆羈薆羄袀袀蠆薂袈螅肄襖羃螇蝿袁肅莄螆襖螂肈衿莃蒆羃膄螄蒁艿衿蟻袇薂羆蚄薄蒀罿罿羋蒅莃薄芃蕆聿蒁蚈肄肅蒅肁蚈腿蝿螅蚃薃蒞袀罿艿莁膆節(jié)芅芅罿袆蒞蕿蚃袂蝿芅蚈膈蒅膂肄蚅蒁膅蕆荿薄蒀蒅芄罿肅蒀薀蚄羂薂袃蟻羅艿薇螄芀羃蒂莃裊肈螈襖袂莄肁袁螆螇罿襖肀螅羄薂螆袀羆羄螞羈薃肀蚆薈膈肄羀莂膃螂薆莇葿蒈蒃螃螂膀蒆莀蝕薈螁膄蚅袂莆腿蚇薇聿薅芄莀芆羈袈蚇薁螞袃肂膆螇聿螇衿肅蒂薀膇螀肆袇蒁蒄肁芁肇蕿芇羇蠆襖2020屆高中生物一輪復(fù)習(xí)人教版微生物的培養(yǎng)和利用教案2020屆一輪復(fù)習(xí)人教版微生物的培養(yǎng)和利用教學(xué)設(shè)計(jì)

【考綱領(lǐng)求】1.微生物的分別與培養(yǎng)。2.某種微生物數(shù)量的測(cè)定。3.培養(yǎng)基對(duì)微生物的選擇作用。

【學(xué)科涵養(yǎng)】1.科學(xué)思想—解析與綜合：解析培養(yǎng)基的成分及

其作用；比較與分類(lèi)：平板劃線(xiàn)法和稀釋涂布平板法異同，選擇培

養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基差異。2.科學(xué)研究—設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)研究微生物培養(yǎng)的

條件。3.社會(huì)責(zé)任—關(guān)注有害微生物的控制及宣傳健康生活。

知識(shí)點(diǎn)1培養(yǎng)基及微生物的純化培養(yǎng)技術(shù)

基礎(chǔ)回顧

1.培養(yǎng)基

2．無(wú)菌技術(shù)

3．大腸桿菌的純化培養(yǎng)方法規(guī)律

1.比較消毒和滅菌

2.選擇無(wú)菌技術(shù)的原則

(1)考慮無(wú)菌技術(shù)的收效：滅菌的收效比消毒要好。

(2)考慮操作對(duì)象的承受能力：活體生物質(zhì)料、操作者的手等只能采用消毒，而不能夠用滅菌。

知識(shí)點(diǎn)2微生物的優(yōu)選與計(jì)數(shù)

基礎(chǔ)回顧

1.土壤中分解尿素細(xì)菌的分別

2．纖維素分解菌的優(yōu)選

3．纖維素酶

方法規(guī)律

比較統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)量的兩種方法

(1)顯微鏡直接計(jì)數(shù)法

利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算

原理

必然容積的樣品中微生物的數(shù)量

方法用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)

缺點(diǎn)不能夠區(qū)分死菌與活菌

(2)間接計(jì)數(shù)法(活菌計(jì)數(shù)法)

當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，本源

原理于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能

推測(cè)出樣品中大體含有多少活菌

每克樣品中的菌株數(shù)＝(C÷V)×M，其中，C代表某一稀釋度下

計(jì)算平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的

公式體積(mL)，M代表稀釋倍數(shù)

設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與正確性。同時(shí)為了保證結(jié)果

操作

正確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)

歸納總結(jié)

[網(wǎng)絡(luò)成立][要點(diǎn)增強(qiáng)]

1．純化大腸桿菌兩種方法的異同

(1)相同點(diǎn)：平板劃線(xiàn)法和稀釋涂布平板法都能獲得單細(xì)胞菌

落。

(2)不相同點(diǎn)：平板劃線(xiàn)法不能夠?qū)ξ⑸镉?jì)數(shù)，而稀釋涂布平板法

能對(duì)微生物計(jì)數(shù)。

2．纖維素分解菌的兩個(gè)易錯(cuò)點(diǎn)

(1)纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的其實(shí)不能是纖維素分解菌。

(2)纖維素分解菌菌落周?chē)耐该魅Φ拇笮∨c纖維素分解菌分解纖維素的能力呈正相關(guān)。

3．辨析平板劃線(xiàn)操作的三個(gè)易錯(cuò)點(diǎn)

(1)灼燒接種環(huán)此后，要冷卻后再進(jìn)行取種，省得溫度太高殺死

菌種。

(2)劃線(xiàn)時(shí)最后一地域不要與第一地域相連。

(3)劃線(xiàn)時(shí)用力要大小適合，防范用力過(guò)大將培養(yǎng)基劃破。

考點(diǎn)1培養(yǎng)基及微生物的純化培養(yǎng)技術(shù)

[典例精析]

(2018·全國(guó)卷Ⅲ)回答以下與酵母菌相關(guān)的問(wèn)

題：

(1)分別培養(yǎng)酵母菌平時(shí)使用________________(填“牛肉膏蛋白

胨”“MS”或“麥芽汁瓊脂”)培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基應(yīng)采用________滅

菌法滅菌。若將酵母菌劃線(xiàn)接種在平板上，培養(yǎng)一段時(shí)間后可觀(guān)察

到菌落，菌落的含義是。

(2)酵母菌液體培養(yǎng)時(shí)，若通入氧氣，可促進(jìn)______________(填

“菌體迅速增殖”“乙醇產(chǎn)生”或“乳酸產(chǎn)生”)；若進(jìn)行厭氧培養(yǎng)，可促進(jìn)______________(填“菌體迅速增殖”“乙醇產(chǎn)生”或

“乳酸產(chǎn)生”)。

(3)制作面包時(shí)，為使面包柔嫩平時(shí)要在面粉中增加必然量的酵

母菌，酵母菌引起面包柔嫩的原因是_______________________。

[解析](1)麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基的碳氮比較高，而且含糖量高，

更適合酵母菌；該培養(yǎng)基應(yīng)采用高壓蒸汽滅菌法滅菌；若將酵母菌

劃線(xiàn)接種在平板上，培養(yǎng)一段時(shí)間后可觀(guān)察到由一個(gè)細(xì)胞生殖而來(lái)

的肉眼可見(jiàn)的子細(xì)胞集體，這就是菌落。(2)酵母菌液體培養(yǎng)時(shí)，若

通入氧氣，進(jìn)行有氧呼吸產(chǎn)生H2O和CO2，釋放能量多，細(xì)胞增殖

快；若進(jìn)行無(wú)氧培養(yǎng)，進(jìn)而無(wú)氧呼吸，產(chǎn)生酒精和CO2，釋放能量

少，增殖慢。(3)制作面包時(shí)，在面粉中增加必然量的酵母菌，因酵母菌能夠分解面粉中的葡萄糖，產(chǎn)生水和二氧化碳，二氧化碳是氣

體，遇熱膨脹而形成小孔，使得面包柔嫩多孔。

[答案](1)麥芽汁瓊脂高壓蒸汽由一個(gè)細(xì)胞生殖而來(lái)的肉

眼可見(jiàn)的子細(xì)胞集體

(2)菌體迅速增殖乙醇產(chǎn)生

(3)酵母菌分解葡萄糖會(huì)產(chǎn)生CO2，CO2使面包柔嫩

(2018·全國(guó)卷Ⅱ)在生產(chǎn)、生活和科研實(shí)踐中，經(jīng)常經(jīng)過(guò)消毒和滅菌來(lái)防范雜菌的污染?；卮鹨韵聠?wèn)題：

(1)在實(shí)驗(yàn)室中，玻璃和金屬材質(zhì)的實(shí)驗(yàn)用具_(dá)_______(填“可

以”或“不能夠夠”)放入干熱滅菌箱中進(jìn)行干熱滅菌。

(2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高溫瞬時(shí)消毒法，與煮沸消

毒法對(duì)照，這兩種方法的優(yōu)點(diǎn)是。

(3)密閉空間內(nèi)的空氣可采用紫外線(xiàn)照射消毒，其原因是紫外線(xiàn)

能________，在照射前，適合噴灑________，可增強(qiáng)消毒收效。

(4)水廠(chǎng)供應(yīng)的自來(lái)水平時(shí)是經(jīng)過(guò)________(填“氯氣”“乙醇”

或“高錳酸鉀”)消毒的。

(5)某同學(xué)在使用高壓蒸汽滅菌鍋時(shí)，若壓力達(dá)到設(shè)定要求，而

鍋內(nèi)并無(wú)達(dá)到相應(yīng)溫度，最可能的原因是

_______________________。

[解析](1)能耐高溫的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿(吸管、培養(yǎng)皿)和金屬用具等能夠放入干熱滅菌箱中進(jìn)行干熱滅菌。(2)煮沸消毒法即在100℃時(shí)煮沸5～6min能夠殺死微生物細(xì)胞和一部

分芽孢；巴氏消毒法即在70～75℃時(shí)煮30min或在80℃時(shí)煮15

min，能夠殺死微生物，而且保證營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)不被破壞。因此，與煮

沸消毒法對(duì)照，牛奶消毒常采用的巴氏消毒法或高溫瞬時(shí)消毒法的優(yōu)點(diǎn)是達(dá)到消毒目的的同時(shí)，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)損失較少。(3)因紫外線(xiàn)能破

壞DNA結(jié)構(gòu)，因此密閉空間內(nèi)的空氣可采用紫外線(xiàn)照射消毒。在照

射前，適合噴灑消毒液，可增強(qiáng)消毒收效。(4)平時(shí)乙醇消毒是75%

的酒精，有氣味，影響水質(zhì)，不適合消毒自來(lái)水；高錳酸鉀自己有顏色，消毒后溶液呈紫紅色，無(wú)法使用；因此水廠(chǎng)供應(yīng)的自來(lái)水通

常是經(jīng)過(guò)氯氣消毒的。(5)采用高壓蒸汽滅菌時(shí)，鍋內(nèi)的水加熱煮沸，將其中原有的冷空氣完整消除后才能將鍋密閉。若是未將鍋內(nèi)冷空氣排盡，則會(huì)出現(xiàn)壓力達(dá)到設(shè)定要求，而鍋內(nèi)并無(wú)達(dá)到相應(yīng)溫度的現(xiàn)象。

[答案](1)能夠

(2)在達(dá)到消毒目的的同時(shí)，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)損失較少

(3)破壞DNA結(jié)構(gòu)消毒液

(4)氯氣

(5)未將鍋內(nèi)冷空氣排盡

(1)觀(guān)察滅菌技術(shù)的原理與操作

(2)觀(guān)察培養(yǎng)基的種類(lèi)、制作和應(yīng)用

考什么(3)觀(guān)察微生物的培養(yǎng)

在理綜卷中均為非選擇題

(1)培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的確定和培養(yǎng)基的種類(lèi)

學(xué)什么(2)平板劃線(xiàn)法和稀釋涂布平板法

[知能拓展]

1．培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的確定方法

(1)自養(yǎng)型微生物所需的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)是無(wú)機(jī)物，碳源可來(lái)自傲

氣中的CO2，氮源可由含氮無(wú)機(jī)鹽供應(yīng)。

(2)異養(yǎng)型微生物所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)主若是有機(jī)物，即碳源必定由含碳有機(jī)物供應(yīng)，氮源主要由含氮有機(jī)物供應(yīng)，部分異養(yǎng)型微生物能夠利用無(wú)機(jī)氮源。

2.常用選擇培養(yǎng)基與鑒別培養(yǎng)基實(shí)例歸納

3.平板劃線(xiàn)法和稀釋涂布平板法的比較比較項(xiàng)目平板劃線(xiàn)法稀釋涂布平板法接種環(huán)在固體平板培養(yǎng)基表①一系列的梯度稀釋要點(diǎn)操作②涂布平板法操作面連續(xù)劃線(xiàn)稀釋度要足夠高，為保證明每次劃線(xiàn)前后均需灼燒接種注意事項(xiàng)驗(yàn)成功能夠增加稀釋度的范環(huán)圍菌體獲得在擁有顯然的菌落特點(diǎn)的區(qū)從適合稀釋度的平板上的菌

適用范圍

優(yōu)點(diǎn)

域菌落中挑取菌體

適用于好氧菌

能夠依照菌落的特點(diǎn)獲得某

種微生物的單細(xì)胞菌落

落中挑取菌體

適用于厭氧菌和兼性厭氧菌

既能夠獲得單細(xì)胞菌落，

又能對(duì)微生物計(jì)數(shù)

操作復(fù)雜，需要涂布多個(gè)平缺點(diǎn)

不能夠?qū)ξ⑸镉?jì)數(shù)

板

[角度訓(xùn)練

]

角度

1

培養(yǎng)基的成分、功能和制備

1．(2016·國(guó)卷Ⅰ全)空氣中的微生物在重力等作用下，能夠必然

程度地沉降。某研究小組欲用平板收集教室空氣中的微生物，以認(rèn)識(shí)教室內(nèi)不相同高度空氣中微生物的分布情況。實(shí)驗(yàn)步驟以下：

①配制培養(yǎng)基(成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O)；

②制作無(wú)菌平板；

③設(shè)置空白比較組和若干實(shí)驗(yàn)組，進(jìn)行相關(guān)操作；

④將各組平板置于37℃恒溫箱中培養(yǎng)一段時(shí)間，統(tǒng)計(jì)各組平板

上菌落的平均數(shù)。

回答以下問(wèn)題：(1)該培養(yǎng)基中微生物所需的氮本源于

______________。若要完

成步驟②，該培養(yǎng)基中的成分

X平時(shí)是

________。

(2)步驟

③中，

實(shí)驗(yàn)組的

操作是

。(3)若在某次檢查中，某一實(shí)驗(yàn)組平板上菌落平均數(shù)為

36個(gè)/平

板，而空白比較組的一個(gè)平板上出現(xiàn)了6個(gè)菌落，這種結(jié)果說(shuō)明在此次檢查中出現(xiàn)了______________現(xiàn)象。若將30(即36－6)個(gè)/平板

作為本組菌落數(shù)的平均值，該做法____________(填“正確”或“不

正確”)。

[解析](1)牛肉膏和蛋白胨中均含有氮元素，因此微生物所需的氮本源于牛肉膏和蛋白胨。若要完成步驟②，需要進(jìn)行倒平板操

作，用到的是固體培養(yǎng)基，因此培養(yǎng)基中要有瓊脂。(2)該實(shí)驗(yàn)的空

白比較組為不進(jìn)行辦理的無(wú)菌平板，實(shí)驗(yàn)組的操作為將各無(wú)菌平板

分別放置在教室不相同高度的地址上，開(kāi)蓋裸露相同時(shí)間。(3)若空白

比較組的平板上出現(xiàn)了菌落，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)過(guò)程中出現(xiàn)了污染現(xiàn)象?？?/p>

白比較組的一個(gè)平板上出現(xiàn)了6個(gè)菌落，以致實(shí)驗(yàn)變量不唯一，不

能確定實(shí)驗(yàn)組平板上的菌落可否僅由教室內(nèi)不相同高度空氣中的微生

物形成，因此不能夠求出實(shí)驗(yàn)組的菌落平均值。

[答案](1)牛肉膏、蛋白胨瓊脂

(2)將各實(shí)驗(yàn)組平板分別放置在教室不相同高度的地址上，開(kāi)蓋暴

露一段時(shí)間

(3)污染不正確

2．(2016全·國(guó)卷Ⅲ)某同學(xué)用新鮮的泡菜濾液為實(shí)驗(yàn)資料分別純化乳酸菌。分別純化所用固體培養(yǎng)基中因含有碳酸鈣而不透明，乳酸菌產(chǎn)生的乳酸能溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣?；卮鹨韵聠?wèn)題：

(1)分別純化乳酸菌時(shí)，第一需要用____________對(duì)泡菜濾液進(jìn)

行梯度稀釋?zhuān)M(jìn)行梯度稀釋的原因是

____________________________

__________________。

推測(cè)在分別純化所用的培養(yǎng)基中加入碳酸鈣的作用有

__________________和__________________。分別純化時(shí)應(yīng)優(yōu)選出

________________的菌落作為候選菌。

(3)乳酸菌在－20℃長(zhǎng)遠(yuǎn)保存時(shí)，菌液中常需要加入必然量的

__________(填“蒸餾水”“甘油”或“碳酸鈣”)。

[解析](1)分別純化乳酸菌時(shí)，第一需要用無(wú)菌水對(duì)泡菜濾液進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)@樣既可防范雜菌污染，又可將乳酸菌分別成單個(gè)

細(xì)胞，以便在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落。(2)乳酸的積累影響乳酸菌

的增殖，加入碳酸鈣能夠中和乳酸菌代謝(無(wú)氧呼吸)過(guò)程中產(chǎn)生的

乳酸，別的，乳酸和碳酸鈣反應(yīng)，進(jìn)而以致碳酸鈣分解形成透明

圈，有利于乳酸菌的鑒別和分別。(3)對(duì)于需要長(zhǎng)遠(yuǎn)保存的菌種，可

以采用甘油管藏的方法。在3mL的甘油瓶中，裝入1mL甘油后滅

菌。將1mL培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，與甘油充分混勻后，放在

－20℃的冷凍箱中保存。

[答案](1)無(wú)菌水泡菜濾液中菌的濃度高，直接培養(yǎng)很難分

離獲得單菌落

(2)鑒別乳酸菌中和產(chǎn)生的乳酸(或酸)擁有透明圈

(3)甘油

角度2無(wú)菌技術(shù)的操作

3．(2014·江蘇卷節(jié)選)為了獲得β－胡蘿卜素產(chǎn)品，某小組睜開(kāi)了產(chǎn)β－胡蘿卜素酵母的優(yōu)選與色素提取實(shí)驗(yàn)。請(qǐng)回答以下問(wèn)

題：

實(shí)驗(yàn)用的培養(yǎng)皿常用的兩種滅菌方法是

_________________；為了減少滅菌后器皿被污染，滅菌前應(yīng)該

_______________________。

為了優(yōu)選出酵母菌，培養(yǎng)基中增加了青霉素，其目的是

。(3)右圖是滅菌鍋及其局部剖面表示圖，圖中甲、乙、丙指示的

依次是________。(填序號(hào))

①安全閥、放氣閥、壓力表

②放氣閥、安全閥、壓力表

③安全閥、放氣閥、溫度表

④放氣閥、安全閥、溫度表

(4)為了將分別到的菌株純化，挑取了菌落在3塊相同平板上劃

線(xiàn)，結(jié)果其中一塊平板的各劃線(xiàn)區(qū)均未見(jiàn)菌生長(zhǎng)，最可能的原因是

。

[解析](1)實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法是干熱滅菌和濕熱滅菌(高壓蒸汽滅菌)，在實(shí)驗(yàn)前應(yīng)用牛皮紙或干凈的報(bào)紙包扎器皿。(2)酵母菌

是真菌，對(duì)青霉素?fù)碛械挚鼓芰?，青霉素主要控制?xì)菌、放線(xiàn)菌的

生長(zhǎng)。(3)圖中甲為安全閥，乙為放氣閥，丙為壓力表。(4)接種的平

板上未見(jiàn)菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明接種不能功，原因可能是接種環(huán)灼燒后未

冷卻，使菌株因溫度過(guò)高而被殺死。

[答案](1)干熱滅菌和濕熱滅菌(高壓蒸汽滅菌)用牛皮紙(報(bào)

紙)包扎器皿

(2)控制細(xì)菌(放線(xiàn)菌)的生長(zhǎng)

(3)①

(4)接種環(huán)溫度過(guò)高，菌種被殺死

角度3微生物的培養(yǎng)與純化

4．(2017·蘇卷江)苯酚及其衍生物廣泛存在于工業(yè)廢水中，對(duì)環(huán)

境有嚴(yán)重危害。小明同學(xué)準(zhǔn)備依照如圖操作步驟，從辦理廢水的活性污泥中分別優(yōu)選酚降解高效菌株。請(qǐng)回答以下問(wèn)題：

(1)酚降解菌富集培養(yǎng)基含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚

和水，其中可作為碳源的有______________。

(2)將收集到的樣品接種培養(yǎng)，苯酚用量應(yīng)隨轉(zhuǎn)接次數(shù)增加而逐

漸________，以達(dá)到富集酚降解菌的目的。若上圖平板中菌落過(guò)于密集，應(yīng)進(jìn)一步________，以便于菌落計(jì)數(shù)與分別。制備平板培養(yǎng)基時(shí)除了需要水、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外，還必定增加________。

(3)如圖為連續(xù)劃線(xiàn)法表示圖，在圖中________(填圖中序號(hào))區(qū)

域更易獲得單菌落。

(4)采用比色測(cè)定法(使用苯酚顯色劑)檢測(cè)降解后的廢水中苯酚

殘留量。先制作系列濃度梯度并進(jìn)行顯色反應(yīng)，下表中1～5號(hào)比色管的

苯酚

濃度應(yīng)分別

為

。

管號(hào)

123

45

6

苯酚濃度

(mg/L)1

若是廢水為50mg/L苯酚溶液，降解后約有21%的苯酚殘留，則需將殘留液稀釋________(填序號(hào)：①5②10③20)倍后，再進(jìn)行比色。

[解析](1)富集培養(yǎng)基中蛋白胨、苯酚都是含碳的有機(jī)物，可

作為碳源。(2)欲富集酚降解菌，隨轉(zhuǎn)接次數(shù)的增加，應(yīng)逐漸增加培

養(yǎng)基中苯酚的含量；若接種培養(yǎng)后平板上菌落過(guò)于密集，則應(yīng)進(jìn)一

步稀釋后再進(jìn)行涂布，以降低平板上菌落密度，便于菌落計(jì)數(shù)與分

離；平板培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基，除含有水、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)(碳源、氮源、

無(wú)機(jī)鹽等)外，還需增加瓊脂作為凝固劑。(3)利用連續(xù)劃線(xiàn)法接種時(shí)，最后的劃線(xiàn)地域(③)中，菌體的密度較小，簡(jiǎn)單獲得單菌落。(4)因系列濃度梯度中6號(hào)比色管中苯酚濃度為1mg/L，故1～5號(hào)比色管中的苯酚濃度應(yīng)分別為0mg/L、、、、

；依照題意，廢水為50mg/L苯酚溶液，降解后約有21%

的苯酚殘留，要使稀釋后的苯酚殘留液濃度介于0～1mg/L，需將

殘留液稀釋20倍左右。

[答案](1)蛋白胨、苯酚

(2)增加稀釋涂布凝固劑

(3)③

(4)0、、、、③

5．(2014·國(guó)卷Ⅱ全)為了檢查某河流的水質(zhì)情況，某研究小組測(cè)

定了該河流水樣中的細(xì)菌含量，并進(jìn)行了細(xì)菌分別等工作?；卮鹨韵聠?wèn)題：

(1)該小組采用稀釋涂布平板法檢測(cè)水樣中的細(xì)菌含量。在涂布接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時(shí)間，這樣

做的目的是

；爾后，將

1mL

水樣稀

釋100倍，在

3個(gè)平板上用涂布法分別接入

稀釋液；經(jīng)適合

培養(yǎng)后，3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為39、38和37。據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為_(kāi)_______個(gè)。

(2)該小組采用平板劃線(xiàn)法分別水樣中的細(xì)菌。操作時(shí)，接種環(huán)經(jīng)過(guò)________滅菌，在第二次及今后的劃線(xiàn)時(shí)，總是以前一次劃線(xiàn)

的尾端開(kāi)始劃線(xiàn)。這樣做的目的是

__________________________________

__________________________________________________________

。

(3)表示圖A和B中，________表示的是用稀釋涂布平板法接種

培養(yǎng)后獲得的結(jié)果。

(4)該小組將獲得的菌株接種到液體培養(yǎng)基中并混勻，一部分進(jìn)

行靜置培養(yǎng)，另一部分進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：振蕩培養(yǎng)的細(xì)菌

比靜置培養(yǎng)的細(xì)菌生長(zhǎng)速度快。解析其原因是：振蕩培養(yǎng)能提高培

養(yǎng)液中________的含量，同時(shí)可使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高

________________________的利用率。

[解析](1)為了檢測(cè)培養(yǎng)基平板滅菌可否合格，可在涂布接種

前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)一段時(shí)間。稀釋

液中平均有38個(gè)活菌，可推測(cè)每升水樣中的活菌數(shù)＝

38×10×100×1000＝×107(個(gè))。(2)接種環(huán)、接種針或其他金屬

用具直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，能夠迅速完整地滅菌。

在第二次及今后的劃線(xiàn)時(shí)，總是以前一次劃線(xiàn)的尾端開(kāi)始劃線(xiàn)，其目的是將齊聚的菌體逐漸稀釋以便獲得單個(gè)菌落。(3)比較兩圖能夠

看出，A是用平板劃線(xiàn)法接種培養(yǎng)后獲得的結(jié)果，B是用稀釋涂布平

板法接種培養(yǎng)后獲得的結(jié)果。(4)由于振蕩培養(yǎng)能夠提高培養(yǎng)液中溶

解氧的含量，還可以夠使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利

用率，因此振蕩培養(yǎng)的細(xì)菌比靜置培養(yǎng)的細(xì)菌生長(zhǎng)速度快。

[答案](1)檢測(cè)培養(yǎng)基平板滅菌可否合格×107

(2)灼燒將齊聚的菌體逐漸稀釋以便獲得單個(gè)菌落

(3)B

(4)溶解氧營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)

考點(diǎn)2微生物的優(yōu)選與計(jì)數(shù)

[典例精析]

(2018·全國(guó)卷Ⅰ)將馬鈴薯去皮切塊，加水煮沸一準(zhǔn)時(shí)間，過(guò)濾獲得馬鈴薯浸出液。在馬鈴薯浸出液中加入必然量蔗糖和瓊脂，用水定容后滅菌，獲得M培養(yǎng)基?；卮鹨韵聠?wèn)題：

(1)M培養(yǎng)基若用于真菌的優(yōu)選，則培養(yǎng)基中應(yīng)加入鏈霉素以抑

制________的生長(zhǎng)，加入了鏈霉素的培養(yǎng)基屬于______________培

養(yǎng)基。

(2)M培養(yǎng)基中的馬鈴薯浸出液為微生物生長(zhǎng)供應(yīng)了多種營(yíng)養(yǎng)物

質(zhì)，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)種類(lèi)除氮源外還有____________________答(出兩點(diǎn)即

可)。氮源進(jìn)入細(xì)胞后，可參加合成的生物大分子有

______________(答出兩點(diǎn)即可)。

(3)若在M培養(yǎng)基中用淀粉取代蔗糖，接種土壤濾液并培養(yǎng)，平板上長(zhǎng)出菌落后可經(jīng)過(guò)加入顯色劑優(yōu)選出能產(chǎn)淀粉酶的微生物。加

入的顯色劑是________，該方法能優(yōu)選出產(chǎn)淀粉酶微生物的原理是

。

(4)甲、乙兩位同學(xué)用稀釋涂布平板法測(cè)定某一土壤樣品中微生物的數(shù)量，在同一稀釋倍數(shù)下獲得以下結(jié)果：

甲同學(xué)涂布了3個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的偏落數(shù)分別是110、140和

149，取平均值133；乙同學(xué)涂布了3個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是

27、169和176，取平均值124。有人認(rèn)為這兩位同學(xué)的結(jié)果中，乙同學(xué)的結(jié)果可信度低，其原因是

。

[解析](1)M培養(yǎng)基若用于真菌的優(yōu)選，說(shuō)明M培養(yǎng)基能滿(mǎn)足真菌的生長(zhǎng)，而能控制其他微生物的生長(zhǎng)，鏈霉素是一種抗生素，

能夠控制細(xì)菌的生長(zhǎng)。加入了鏈霉素的培養(yǎng)基能優(yōu)選出真菌，該培

養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。(2)微生物生長(zhǎng)需要多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，除氮源

外，還需要碳源、無(wú)機(jī)鹽、水以及特別營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)等。氮元素是蛋白

質(zhì)和核酸等生物大分子的組成元素，因此氮源進(jìn)入細(xì)胞后，可參加

合成的生物大分子有蛋白質(zhì)和核酸。(3)淀粉與碘液會(huì)變成藍(lán)色，篩

選產(chǎn)淀粉酶的微生物，依照淀粉遇碘液顯藍(lán)色，產(chǎn)淀粉酶的菌落周

圍淀粉被水解，形成透明圈，再依照透明圈，來(lái)優(yōu)選產(chǎn)淀粉酶的微

生物。(4)乙同學(xué)結(jié)果不合理，由于1個(gè)平板的計(jì)數(shù)結(jié)果與另2個(gè)相差懸殊，結(jié)果的重復(fù)性差，不能夠簡(jiǎn)單的用其平均數(shù)作為最后結(jié)果。

[答案](1)細(xì)菌選擇

(2)碳源、無(wú)機(jī)鹽蛋白質(zhì)、核酸

碘液淀粉遇碘液顯藍(lán)色，產(chǎn)淀粉酶的菌落周?chē)矸郾凰?，形成透明?/p>

(4)乙同學(xué)的結(jié)果中，1個(gè)平板的計(jì)數(shù)結(jié)果與另2個(gè)相差懸殊，結(jié)

果的重復(fù)性差

(2018·江蘇卷)酵母的蛋白質(zhì)含量可達(dá)自己干重

的一半，可作為飼料蛋白的本源。有些酵母能夠利用工業(yè)廢甲醇作為碳源進(jìn)行培養(yǎng)，這樣既可減少污染又可降低生產(chǎn)成本。研究人員擬從土壤樣品中分別該類(lèi)酵母，并進(jìn)行大量培養(yǎng)。以下列圖為操作流程，請(qǐng)回答以下問(wèn)題：

(1)配制培養(yǎng)基時(shí)，依照培養(yǎng)基配方正確稱(chēng)量各組分，將其溶

解、定容后，調(diào)治培養(yǎng)基的________，及時(shí)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行分裝，并

進(jìn)行______________滅菌。

(2)取步驟②中不相同梯度的稀釋液加入標(biāo)記好的無(wú)菌培養(yǎng)皿中，

在步驟③中將溫度約________(在25℃、50℃或80℃中選擇)的培

養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿混勻，冷凝后倒置培養(yǎng)。

(3)挑取分別平板中長(zhǎng)出的單菌落，按步驟④所示進(jìn)行劃線(xiàn)。下

列表達(dá)合理的有________(多項(xiàng)選擇)。

a．為保證無(wú)菌操作，接種針、接種環(huán)使用前都必定滅菌

b．劃線(xiàn)時(shí)應(yīng)防范劃破培養(yǎng)基表面，省得不能夠形成正常菌落

c．挑取菌落時(shí)，應(yīng)挑取多個(gè)菌落，分別測(cè)定酵母細(xì)胞中甲醇的

含量

d．能夠經(jīng)過(guò)逐漸提高培養(yǎng)基中甲醇的濃度，獲得甲醇高耐受

株

(4)步驟⑤中，為使酵母數(shù)量迅速增加，培養(yǎng)過(guò)程中需保證充分的營(yíng)養(yǎng)和__________供應(yīng)。為監(jiān)測(cè)酵母的活細(xì)胞密度，將發(fā)酵液稀

釋1000倍后，經(jīng)等體積臺(tái)盼藍(lán)染液染色，用25×16型血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)5其中格中的細(xì)胞數(shù)，理論上________色細(xì)胞的個(gè)數(shù)應(yīng)很多于

________，才能達(dá)到每毫升3×109個(gè)活細(xì)胞的預(yù)期密度。[解析](1)配制培養(yǎng)基的操作步驟為稱(chēng)量→溶化→定容→調(diào)

pH→培養(yǎng)基的分裝→包扎→滅菌，因此微生物的培養(yǎng)基配制好后應(yīng)

該先調(diào)治pH，再分裝。常有的滅菌方法有：干熱滅菌、高壓蒸汽滅

菌、灼燒滅菌。培養(yǎng)基適適用高壓蒸汽滅菌法進(jìn)行滅菌。(2)在步驟

③中，待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時(shí)進(jìn)行倒平板。(3)在劃線(xiàn)過(guò)程中，接種針、接種環(huán)使用前都必定滅菌，以防范雜菌污染，a正確；劃線(xiàn)時(shí)應(yīng)防范劃破培養(yǎng)基表面，否則將不能夠形成正常菌落，b正確；該

實(shí)驗(yàn)的目的是獲得利用工業(yè)廢甲醇作為碳源的酵母菌，不需要測(cè)定酵母菌中的甲醇含量，c錯(cuò)誤；培養(yǎng)基中的甲醇濃度越高，此種培養(yǎng)基中得以生計(jì)的酵母菌利用甲醇的能力越強(qiáng)，因此能夠經(jīng)過(guò)逐漸提

高培養(yǎng)基中甲醇的濃度，獲得甲醇高耐受株，d正確。(4)酵母菌通

過(guò)有氧呼吸大量生殖，因此為使酵母數(shù)量迅速增加，培養(yǎng)過(guò)程中需

保證充分的營(yíng)養(yǎng)和氧氣供應(yīng)；臺(tái)盼藍(lán)是大分子物質(zhì)，不能夠?qū)⒒罴?xì)胞

染色，再依照25×16型的血球計(jì)數(shù)板：1毫升懸液中待測(cè)標(biāo)本(菌體)總數(shù)＝80小方格內(nèi)菌體數(shù)/80×400×104×稀釋倍數(shù)。而臺(tái)盼藍(lán)與菌

液等體積加入，因此要達(dá)到每毫升3×109個(gè)活細(xì)胞的預(yù)期密度，理論上無(wú)色細(xì)胞數(shù)應(yīng)該很多于×9÷××4×400÷80)＝30(310)(1000210個(gè)。[答案](1)pH高壓蒸汽(濕熱)(2)50℃(3)abd(4)氧氣無(wú)30(1)觀(guān)察微生物的優(yōu)選與鑒別

考什么(2)觀(guān)察微生物的計(jì)數(shù)

在理綜卷中均為非選擇題

(1)微生物的優(yōu)選與鑒別方法

學(xué)什么(2)微生物計(jì)數(shù)的方法及應(yīng)用

[知能拓展]

微生物的優(yōu)選與鑒別方法

(1)微生物的優(yōu)選方法

利用平板劃線(xiàn)法或稀釋涂布平板法接種到固體平板培養(yǎng)基表單菌落挑取法面，直接依照微生物菌落的特點(diǎn)利用單菌落挑取的方法獲得目的微生物選擇培養(yǎng)利用選擇培養(yǎng)基對(duì)微生物進(jìn)行選擇培養(yǎng)，直接獲得目的微生法物判斷培養(yǎng)利用鑒別培養(yǎng)基使目的微生物菌落表現(xiàn)特有的特點(diǎn)，爾后篩法選目的微生物(2)微生物的鑒別方法

菌落特

依照微生物在固體平板培養(yǎng)基表面形成的菌落的形狀、大

征鑒別

小、隆出發(fā)度和顏色等特點(diǎn)進(jìn)行鑒別

法

指示劑如培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，培養(yǎng)某種微生物后，培養(yǎng)基變鑒別法紅，說(shuō)明該種微生物能夠分解尿素

染色鑒如利用剛果紅染色法，依照培養(yǎng)基中出現(xiàn)以纖維素分解菌為別法中心的透明圈來(lái)優(yōu)選分解纖維素的微生物

[角度訓(xùn)練]

角度1土壤中分解尿素細(xì)菌的分別與計(jì)數(shù)．·全國(guó)卷Ⅰ某些土壤細(xì)菌可將尿素分解成CO2和NH3，1(2017)供植物吸取和利用。回答以下問(wèn)題：

(1)有些細(xì)菌能分解尿素，有些細(xì)菌則不能夠，原因是前者能產(chǎn)生________。能分解尿素的細(xì)菌不能夠以尿素的分解產(chǎn)物

CO2

作為碳

源，原因是

，但

可用葡萄糖作為碳源，進(jìn)入細(xì)菌體內(nèi)的葡萄糖的主要作用是

___________(答出兩點(diǎn)即可)。

為了優(yōu)選可分解尿素的細(xì)菌，在配制培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)選擇填“尿素”“43”或“尿素＋4NO3”)作為氮源，________(NHNONH不選擇其他兩組的原因是______________________________________

___________________________________________________________

_

。(3)用來(lái)優(yōu)選分解尿素細(xì)菌的培養(yǎng)基含有

KH2PO4和

Na2HPO4，

其作用有____________________________答(出兩點(diǎn)即可)。

[解析](1)土壤中的某些細(xì)菌之因此能夠分解尿素，是由于它

們能產(chǎn)生脲酶。尿素分解菌是異養(yǎng)生物，不能夠利用CO2來(lái)合成有機(jī)

物，必定利用現(xiàn)成的有機(jī)物(如葡萄糖)作為碳