基因毒性雜質(zhì)

什么是基因毒性雜質(zhì)/r/n對于基因毒性雜質(zhì)的定義主要是指：在以/r/nDNA/r/n反應物質(zhì)為主要研究對象的體內(nèi)/r/n//r/n體外試驗中，如果發(fā)現(xiàn)它們對/r/nDNA/r/n有潛在的破壞性，那可稱之為基因毒性。/r/n對沒有進行體內(nèi)實驗的情況下，也可以根據(jù)關聯(lián)系做一些相關的體外實驗去評估該物質(zhì)在體內(nèi)的毒性。/r/n如果沒有關聯(lián)評估的，體外基因毒性物質(zhì)經(jīng)常被考慮為假定的體內(nèi)誘變劑和致癌劑。/r/nGUIDELINEONTHELIMITSOFGENOTOXICIMPURITIEMEA/CHMP/QWP/251344/2006/r/n基因毒性雜質(zhì)的風險/r/n按照目前的法規(guī)來說，（體內(nèi)）基因毒性物質(zhì)在任何攝入量水平上對/r/nDNA/r/n都有潛在的破壞性，這種破壞可能導致腫瘤的產(chǎn)生。因此，對于基因毒性致癌物，不能說“不存在明顯的閥值，或是任何的攝入水平都具有致癌的風險”。/r/n可接受風險的攝入量/r/n對于那些可以與/r/nDNA/r/n進行反應的化合物，由于在較低的劑量時機體保護機制可以有效的運行，按照攝入量由高到低所造成的影響進行線性推斷是很困難的。目前，對于一個給定誘變劑，我們很難從實驗方面證明它的基因毒性存在一個閥值。特別是對某些化合物，它們可以與非/r/nDNA/r/n靶點進行反應，或一些潛在的突變劑，在與關鍵靶位結(jié)合之前就迅速失去了毒性。由于缺乏支持基因毒性閥值存在的有力證據(jù)，而使得我們很難界定一個安全的服用量。/r/n所以有必要采取一個新觀點：確定一個可接受其風險的攝入量。/r/n可接受其風險的攝入量即毒理學閾值一般通用的被定義為/r/nThresholdofToxicologicalConcern（TTC）/r/n。具體含義為：一個/r/n"/r/n1.5ug/day/r/n”/r/n的/r/nTTC/r/n值，即相當于每天攝入/r/n1.5ug/r/n的基因毒性雜質(zhì)，被認為對于大多數(shù)藥品來說是可以接受的風險（一生中致癌的風險小于/r/n100000/r/n分之/r/n1/r/n）。按照這個閥值，可以根據(jù)預期的每日攝入量計算出活性藥物中可接受的雜質(zhì)水平。/r/n在特定的條件下一些基因毒性雜質(zhì)也可以有較高的閾值。如接觸時間比較短等，這個需要根據(jù)實際情況再進行推算。/r/n必須要強調(diào)的是/r/nTTC/r/n是一個風險管理工具，它使用的是概率方法，意思為：假如有一個基因毒性雜質(zhì)，并且我們對它的毒性大小不太了解，如果它的每日攝入量低于/r/nTTC/r/n值，那么它的致癌的風險將不會高于/r/n1/r/nX/r/n10/r/n的概率。/r/n所以/r/nTTC/r/n不能被理解為絕對無風險的保障。/r/n有實驗依據(jù)的/r/nTTC/r/n值的確認/r/n有足夠的（實驗性的）證據(jù)來支持閥值界定的基因毒性雜質(zhì)/r/n對于這類有足夠的證據(jù)來表明其基因毒性閥值的化合物，可以參考/r/n“/r/nQ3cNoteforGuidanceonImpurities:ResidualSolvents./r/n”/r/n中/r/n2/r/n級溶劑的規(guī)定，計算出了一個“允許的日攝入量”（/r/nPDE/r/n）/r/n。無實驗依據(jù)的/r/nTTC/r/n值的確認/r/n沒有足夠的（試驗性的）證據(jù)來支持閥值界定的基因毒性雜質(zhì)/r/n不能進行閥值鑒定的基因毒性雜質(zhì)的可接受劑量評價應該包括藥學的和毒理學的評價。一般來說，如果避免毒性是不可能的，那么藥學的評價措施應該以/r/nALARP/r/n的（/r/naslowasreasonablypracticable/r/n盡可能低的合理可行性/r/n）控制水平為指導原則。/r/n含有多個基因毒性雜質(zhì)的評估/r/nEMEACHMP/r/n結(jié)構(gòu)不同的——單個雜質(zhì)的限度應該小于/r/n1.5ug/day/r/n結(jié)構(gòu)相似的——雜質(zhì)總和的限度應該小于/r/n1.5ug/day/r/nFDA/r/n（和/r/nEMEA/r/n類似）/r/n單個雜質(zhì)造成的癌癥風險機率應該小于/r/n10/r/n有相同作用機制的結(jié)構(gòu)相似的雜質(zhì)，其含量總和應該參考/r/n1.5ug/day/r/n的限量進行評估。/r/n單個基因毒性雜質(zhì)可以參考文獻來確定。/r/n多個基因毒性雜質(zhì)（/r/n3/r/n個以下）積累的風險相對于單個雜質(zhì)的風險上升不大，可以忽略。/r/n藥物中含有/r/n3/r/n個基因毒性雜質(zhì)，不管結(jié)構(gòu)是否相似，在法規(guī)中是允許的（只要有充分的數(shù)據(jù)）。/r/n存在四個以及以上的基因毒性雜質(zhì)的時候，需要根據(jù)實際情況考慮。/r/n藥學評價/r/n應該根據(jù)現(xiàn)有的配方選擇和生產(chǎn)技術(shù)，提供生產(chǎn)方法的合理性。申請人應該指明涉及到的所有具有基因毒性或有致癌性的化學物質(zhì)，如所用試劑、中間體、副產(chǎn)品等。更進一步，在藥物活性物質(zhì)中沒有出現(xiàn)的基因毒性反應物和有基因毒性結(jié)構(gòu)（/r/nalertingstructure/r/n的物質(zhì)，都應該被考慮。實際生產(chǎn)中盡量避免使用該類物質(zhì)。/r/n如果在合成路線、起始物料方面沒有更好選擇，則需要提供一個正當?shù)睦碛?。就是物質(zhì)中能引起基因毒性和致癌性的結(jié)構(gòu)部分在化學合成是不可避免的。/r/n假如基因毒性雜質(zhì)被認為是不可避免的，那么應該采取技術(shù)手段盡可能的減少基因毒性雜質(zhì)在產(chǎn)品中的含量，使其符合安全的需要或使其降低到一個合理的水平。對于活性中間體、反應物、以及其它化合物的化學穩(wěn)定性都應該進行評估。/r/n應該有合理的分析方法去檢測和量化這些雜質(zhì)的殘留量。/r/n基因毒性雜質(zhì)磺酸鹽的風險評估/r/n臨床研究發(fā)現(xiàn)甲磺酸酯的/r/nDNA/r/n烷基化作用會導致誘變效應，其中甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯已有這方面報導，因此有理由懷疑其它低分子量磺酸（如對甲苯磺酸）的烷基酯可能也存在著類似的毒性影響。盡管無數(shù)據(jù)表明這些酯對人的毒性影響，然后依然有上述基因毒性物質(zhì)以雜質(zhì)的形式存在于含磺酸酯類藥物活性成分的藥品中的潛在風險。/r/nEMEA/44714/2008/r/n甲磺酸烷基酯，如甲磺酸甲酯/r/n（/r/nMMS/r/n）/r/n和甲磺酸乙酯/r/n（/r/nEMS/r/n），/r/n是甲磺酸與甲醇，乙醇，或其它低級醇形成的酯。特別是在以甲磺酸鹽或甲磺酸酯形式存在的藥物活性成分中或其合成過程中用到了甲磺酸的藥物活性成分中，甲磺酸烷基酯會被視為潛在雜質(zhì)。/r/n在以羥乙基磺酸鹽，苯磺酸鹽和對甲苯磺酸鹽形式存在的藥物活性成分中也會發(fā)現(xiàn)類似的磺酸烷基酯或芳基酯污染。需說明出現(xiàn)這些污染的風險。/r/n藥物活性成分的生產(chǎn)是否涉及到在甲磺酸（或羥乙基磺酸，苯磺酸，對甲苯磺酸）或相應的酰氯存在的情況下，使用了低級脂肪酯，如甲醇，乙醇，正丙醇或異丙醇的情況？如果是這種情況的話，甲磺酸烷基酯或類似苯磺酯烷基酯和對甲苯磺酸烷基酯的形成可能性是否已被降至最低？是否存在有效的精制步驟？/r/n設備（特別是接觸到磺酸試劑的設備）的清洗程序是否涉及到低級脂肪醇的使用？/r/n是否有適宜的質(zhì)量標準和已驗證的分析方法可以證實藥物活性成分中的磺酸烷酯或磺酸芳基/r/n酯雜質(zhì)處于/r/nTTC/r/n以下？/r/n是否檢查了起始物料，如甲磺酸鹽（苯磺酸鹽，對甲苯磺酸鹽，羥乙基磺酸），中的烷基磺酸酯或芳基磺酸酯雜質(zhì)（如甲磺酸中的/r/nEMS/r/n和/r/nMMS/r/n）/r/n及相應的酰氯？是否有這些雜質(zhì)的適宜標準和驗證過的方法？/r/n當被磺酸酯或相關物質(zhì)所污染了的磺酸作為起始物料用于藥物活性成分時，是否能保證藥物活性成分中潛在基因毒性雜質(zhì)不超過其/r/nTTC/r/n值？應當要考慮各種烷基或芳基取代磺酸酯雜質(zhì)的累加風險。如在藥物活性成分生產(chǎn)的最后一步合成步驟用到了磺酸衍生物，應將其納入風險分析。/r/n是否對回收溶劑中磺酸酯類雜質(zhì)（如，乙醇中的/r/nEMS/r/n，/r/n甲醇中的/r/nMMS/r/n，/r/n異丙醇中的/r/nIMS/r/n）/r/n的富集和殘留進行了控制？/r/n是否能排除以甲磺酸鹽，羥乙基磺酸鹽，對甲苯磺酸鹽或苯磺酸鹽形式存在的藥物的活性成分，或其相關制劑，在儲存過程中形成烷基或芳基磺酸酯？/r/n是否能排除以甲磺酸鹽，羥乙基磺酸鹽，對甲苯磺酸鹽或苯磺酸鹽形式存在的藥物活性成分在/r/n制成最終制劑的過程中形成烷基或芳基磺酸酯，如在制粒過程中使用了醇？是否有足夠靈敏的的方法可以檢測到制劑中的（處于/r/nTTC/r/n水平的）這些雜質(zhì)？/r/n——基因毒性雜質(zhì)鹵代烴的風險評估/r/n有數(shù)據(jù)表明氯乙烷、氯甲烷為基因毒性雜質(zhì)，因此有理由懷疑其他低分子鹵代烴類也有類似的作用。在生產(chǎn)中應該對其進行相應的控制/r/n在氨基物鹽酸鹽使用醇類溶劑精制的時候，基本都會產(chǎn)生鹵代烴。/r/n產(chǎn)生的條件和溫度、水分、濃度、時間等有關系。/r/n對于控制低級鹵代烴的方法可以參考控制甲磺酸酯的相關建議。/r/n毒理學評價/r/n為一個不存在閥值的基因毒性致癌物定義一個安全的攝入量水平（零風險觀點）是不可能的，并且從活性藥物成分中完全的除去基因毒性雜質(zhì)經(jīng)常是很難做到。這樣就要求我們建立一個可接受的風險水平，例如對一個低于可忽略風險的每日攝入量進行評價。/r/n但是這些方法都需要有足夠的長期致癌性研究數(shù)據(jù)。/r/n對于可接受風險水平的推導過程參見/r/nQ3cNoteforGuidanceonImpurities:ResidualSolventsforClass/r/n〔/r/nsolvents/r/n。附件三。/r/nTTC/r/n的應用/r/n有幾個結(jié)構(gòu)基團被認定為具有非常高的基因毒性，它們即使被攝入低于/r/nTTC/r/n值的量也會面臨非常高的基因毒性風險。/r/n這一類高基因毒性的致癌物由黃曲霉毒素類/r/n，/r/nN-/r/n亞硝基物類/r/n，/r/n偶氮苯類等化合物構(gòu)成，它們不能用/r/nTTC/r/n值的方法來進行評價。對這些種類的物質(zhì)需要進行特殊的風險評價。/r/n在某些特定情況下，/r/nTTC/r/n值高于/r/n1.5/r/n用/r/n//r/nday/r/n也是可以接受的，比如藥品的短期接觸，即治療某些生命預期在/r/n5/r/n年以下的某些嚴重疾病，或者這種雜質(zhì)是一種已知物質(zhì)，人類在其他方式上對它的攝入會更高（比如在食品上）。有些基因毒性雜質(zhì)同時也是一種體內(nèi)代謝產(chǎn)物，對它的評價也要以對代謝產(chǎn)物的接受性為基礎。/r/n基因雜質(zhì)的濃度限度以/r/nppm/r/n為單位，公式如下：/r/nConcentrationlimit（ppm）/r/n=/r/n1.5g/r/n//r/ndailydose/r/n原料藥質(zhì)量研究部/r/n2008/r/n?/r/n2010/r/n年度基因毒性雜質(zhì)限度驗證列表:/r/n序號/r/n基因毒性雜質(zhì)名稱/r/n雜質(zhì)限度/r/n產(chǎn)品名稱/r/n1/r/n保護基溴化物/r/n1/r/n5Ppm/r/n氯沙坦鉀/r/n2/r/n鄰氨基甲苯/r/n7.5ppm/r/n托拉塞米/r/n3/r/n間氨基甲苯/r/n7.5ppm/r/n托拉塞米/r/n4/r/n對氨基甲苯/r/n7.5ppm/r/n托拉塞米/r/n5/r/n鄰硝基甲苯/r/n7.5ppm/r/n托拉塞米/r/n6/r/n疊氮酸/r/n10ppm/r/n坎地沙坦酯/r/n7/r/n疊氮酸/r/n10ppm/r/n纈沙坦/r/n8/r/n溴代異丙烷/r/n15ppm/r/n氯吡格雷氫溴酸鹽/r/n9/r/n聯(lián)苯溴化物/r/n3.4ppm/r/n纈沙坦/r/n10/r/n聯(lián)苯溴化物四氮唑/r/n4ppm/r/n纈沙坦/r/n11/r/n5-/r/n氟基苯酞/r/n25ppm/r/n西酞普蘭氫溴酸鹽/r/n

/r/n12/r/n5-/r/n氨基苯酞/r/n25Ppm/r/n西酞普蘭氫溴酸鹽/r/n13/r/n硝基化合物/r/n25Ppm/r/n西酞普蘭氫溴酸鹽/r/n14/r/n氨基化合物/r/n25ppm/r/n西酞普蘭氫溴酸鹽/r/n15/r/n硫脲/r/n30ppm/r/n鹽酸吡格列酮/r/n16/r/n對氟硝基苯/r/n30ppm/r/n鹽酸吡格列酮/r/n17/r/n硝基吡格/r/n30ppm/r/n鹽酸吡格列酮/r/n18/r/n酞嗪二酮/r/n0.04%/r/nRP-/r/n氯沙坦鉀/r/n19/r/n聯(lián)苯溴化物/r/n10ppm/r/nRP-/r/n氯沙坦鉀/r/n20/r/n二甲海因/r/n0.05%/r/nRP-/r/n氯沙坦鉀/r/n21/r/n保護基二溴物/r/n15ppm/r/nRP-/r/n氯沙坦鉀/r/n22/r/n氯沙坦鉀二氯物/r/n15ppm/r/nRP-/r/n氯沙坦鉀/r/n23/r/n二溴二甲海因/r/n15ppm/r/n氯沙坦鉀保護基溴/r/n化物/r/n24/r/n聯(lián)苯溴化物/r/n10ppm/r/n氯沙坦鉀/r/n25/r/n聯(lián)苯溴化物四氮唑/r/n12ppm/r/n氯沙坦鉀/r/n26/r/n游離肼/r/n10ppm/r/nRP-/r/n氯沙坦鉀/r/n27/r/n疊氮酸/r/n15ppm/r/n氯沙坦鉀/r/n28/r/n四丁基溴化銨/r/n25ppm/r/n鹽酸帕羅西汀/r/n29/r/n疊氮酸/r/n10ppm/r/n厄貝沙坦/r/n30/r/n對甲苯磺酸異丙酯/r/n8ppm/r/n氯沙坦鉀/r/n31/r/n溴離子/r/n229ppm/r/n艾他培南/r/n32/r/n對甲苯磺酸乙酯/r/n25ppm/r/n西酞普蘭/r/n33/r/n氟苯/r/n15ppm/r/n西酞普蘭/r/n34/r/n氯丙胺鹽酸鹽/r/n120ppm/r/n西酞普蘭/r/n35/r/n對氟溴苯/r/n50ppm/r/n西酞普蘭/r/n36/r/n甲磺酸乙酯/r/n75ppm/r/nS-/r/n西酞普蘭/r/n37/r/nN-/r/n甲基吡咯烷酮/r/n53ppm/r/n厄貝沙坦/r/n38/r/nN/r/n，/r/nN-/r/n二甲基苯胺/r/n2ppm/r/n奎硫平/r/n39/r/n對甲苯磺酸乙酯/r/n37.5ppm/r/n奎那普利/r/n40/r/n對甲苯磺酸乙酯/r/n150ppm/r/n雷米普利/r/n41/r/n對甲苯磺酸乙酯/r/n37.5ppm/r/n依那普利/r/n

/r/n42/r/n異亞丙基丙酮/r/n100Ppm/r/n羅匹尼羅/r/n43/r/n間氯苯胺/r/n1/r/n5ppm/r/n氫氯噻嗪/r/n44/r/n甲磺酸甲酯/r/n2ppm/r/n依普洛沙坦甲磺酸鹽/r/n45/r/n甲磺酸乙酯/r/n2ppm/r/n依普洛沙坦甲磺酸鹽/r/n46/r/n3-/r/n硝基/r/n-2/r/n-/r/n叔丁氧甲酰氨基苯甲酸乙酯/r/n47ppm/r/n坎地沙坦酯/r/n47/r/n2-/r/n氟基/r/n-4/r/n-/r/n溴甲基聯(lián)苯/r/n47ppm/r/n坎地沙坦酯/r/n48/r/n2-/r/n［［（2/r/n-/r/n氰基聯(lián)苯基/r/n）-4/r/n-/r/n基/r/n］/r/n甲基/r/n］/r/n氧基/r/n-3/r/n-/r/n硝/r/n基苯甲酸乙酯/r/n47ppm/r/n坎地沙坦酯/r/n49/r/n3-/r/n硝基鄰苯二甲酸/r/n47ppm/r/n坎地沙坦酯/r/n50/r/n鄰苯二胺鹽酸鹽/r/n5ppm/r/n替米沙坦/r/n51/r/n鄰氨硝基苯/r/n5ppm/r/n替米沙坦/r/n52/r/n鄰氟苯胺/r/n5ppm/r/n替米沙坦/r/n53/r/n氯沙坦鉀二氯代物/r/n15ppm/r/nRP-/r/n氯沙坦鉀/r/n54/r/n保護基溴化物/r/n15ppm/r/nRP-/r/n氯沙坦鉀/r/n基因毒性雜質(zhì)列表/r/nGoldcarcinogenicitydatabase（/r/n）/r/n./r/n里面有/r/n1574/r/n種致癌物質(zhì)的列表，結(jié)構(gòu)式，/r/nCAS/r/n號，作用部位，/r/nTTC/r/n值等等一系列信息。/r/n近/r/n30/r/n年的關于基因毒性方面研究的出版物（/r/nPDF/r/n版）/r/n用不同分類方法統(tǒng)計的致癌物質(zhì)列表。/r/nEMEA/r/n指南/r/n2006/r/n年，歐洲藥品管理局（/r/nEMA/r/n）/r/n頒布了《遺傳性雜質(zhì)限度指導原則》和《/r/nCHMP/r/n遺傳毒性雜質(zhì)限度指導原則問答》。指南要求新藥必須進行基因毒性雜質(zhì)分析；對于現(xiàn)有藥品，不強制進行遺傳毒性雜質(zhì)分析評估，但對已上市品進行化學合成變更或者仿制藥品上市前，需對其合成路線、過程控制、雜質(zhì)概況評價并與現(xiàn)有產(chǎn)品對比，以確定未引入新的或更高水平的基因毒性雜質(zhì)。/r/n該指南還引入了可接受風險的攝入量，即毒理學閾值（/r/nTTC/r/n，/r/nThresholdofToxicologicalConcern/r/n）這個概念。根據(jù)該方法，若患者每日攝入濃度低于/r/n1.5pg/r/n，/r/n那么患者因服藥導致癌癥發(fā)生的額外風險可以忽略不計。但/r/nTTC/r/n不能被理解為絕對無風險的保障，如對類黃曲霉素等一些高度危險的物質(zhì)，其致癌性明確，毒理學閾值/r/nTTC/r/n）/r/n1.5pg/d/r/n的限度并不適用，需進行特殊的風險評價。但在短期暴露、治療病危預期僅存活/r/n5/r/n年且沒有更安全/r/n的治療選擇時/r/nTTC/r/n的/r/n1.5pg/d/r/n這個限度可以適當放寬。/r/nFDA/r/n指南/r/n2008/r/n年，美國食品藥品管理局（/r/nFDA/r/n）/r/n頒布了《工業(yè)指南：原料藥及制劑中的遺傳毒性及致癌性雜質(zhì)研究方法推薦》。/r/nFDA/r/n針對已知或可疑的潛在基因毒性和致癌雜質(zhì)的安全認證提出具體的建議。指南描述了許多用以表征及減少患者暴露于基因毒性和致癌性雜質(zhì)導致的潛在癌癥風險的方法，這些方法與/r/nEMA/r/n指南相似。/r/nFDA/r/n規(guī)/r/n定當雜質(zhì)含量超出/r/nICH/r/n質(zhì)控限度時，若無充分的文獻或研究數(shù)據(jù)支持，則需按/r/nICH/r/n的試驗方案進行基因毒性評價；當