纖維蛋白原測定

關(guān)于纖維蛋白原測定第1頁，共14頁，2022年，5月20日，18點34分，星期五纖維蛋白原（HumanFibrinogen）一種由肝臟合成的具有凝血功能的蛋白質(zhì)，是纖維蛋白的前體。分子量340，000，半衰期4～6日。血漿中參考值2～4克/升。纖維蛋白原由α、β、γ三對不同多肽鏈所組成，多肽鏈間以二硫鍵相連。第2頁，共14頁，2022年，5月20日，18點34分，星期五在凝血酶作用下，α鏈與β鏈分別釋放出A肽與B肽，生成纖維蛋白單體。在此過程中，由于釋放了酸性多肽，負電性降低，單體易于聚合成纖維蛋白多聚體。但此時單體之間借氫鍵與疏水鍵相連，尚可溶于稀酸和尿素溶液中。進一步在Ca+2與活化的ⅩⅢ因子作用下，單體之間以共價鍵相連，則變成穩(wěn)定的不溶性纖維蛋白凝塊，完成凝血過程。肝功能嚴重障礙或先天性缺乏，均可使血漿纖維蛋白原濃度下降，嚴重時可有出血傾向。第3頁，共14頁，2022年，5月20日，18點34分，星期五血漿纖維蛋白原水平的變化與凝血障礙、出血、DIC、應激（因為它也是一種急性期蛋白）有關(guān)，而且由于不斷有文獻報道它與冠心病，心肌梗塞也有關(guān)系，因此臨床上越發(fā)受到重視。不僅工作量增大而且對方法準確性的要求也越來越高。但至今WHO（世界衛(wèi)生組織）、ICSH（國際血液學標準委員會）仍未明確提出一個纖維蛋白原的標準化或推薦方法，供臨床常規(guī)使用。第4頁，共14頁，2022年，5月20日，18點34分，星期五現(xiàn)有的方法大體上分三大類：（1）物理化學測定法；（2）免疫學測定法；（3）基于凝血酶的作用，形成纖維蛋白的方法。第5頁，共14頁，2022年，5月20日，18點34分，星期五（1）物理化學測定法：這類方法又可分為鹽析法（包括用亞硫酸鈉、硫酸銨或氯化鈉鹽析，用蛋白質(zhì)顯色或比濁法測定），熱變性沉淀法和電泳法等幾種。這類方法都比較簡單、快速，尤其適于急診檢驗，但缺點是本法的特異性不強。所測的不是有凝固功能的纖維蛋白原，可能包括部分的降解產(chǎn)物和/或其它蛋白。而電泳法又太繁瑣，不適于常規(guī)工作。

第6頁，共14頁，2022年，5月20日，18點34分，星期五（2）免疫學測定法：將純纖維蛋白原作為抗原免疫動物，制成多克隆或單克隆抗體。然后用免疫膠乳、被動血凝或反向血凝、單向免疫擴散、火箭電泳以及ELISA等方法測定。優(yōu)點是大部分方法簡便，但缺點是所測的不僅是可凝固的纖維蛋白原，可能包括了它的降解產(chǎn)物（因為它們有共同抗原），也可能包括了障礙性纖維蛋白原（dysfibrinogens即N端谷氨酸γ位未羧化的無功能的纖維蛋白原,又稱缺維生素K引起的蛋白質(zhì)，PIVKA）。但免疫法也有一個好處，就是可用來測定PIVKA。如果一個患者總纖維蛋白原（用免疫學測定結(jié)果）不低，甚至增高，而功能性（即可凝固性）纖維蛋白原卻明顯減少，即可判斷為存在PIVKA。肝病、維生素K缺乏等均可導致PIVKA升高，有臨床診斷價值?？偟恼f來，免疫學方法用于臨床常規(guī)實驗室仍存在一定問題。第7頁，共14頁，2022年，5月20日，18點34分，星期五（3）基于凝血酶的作用，形成纖維蛋白的方法：凝血酶凝固法（Clauss法），將凝血酶加到血漿中，使纖維蛋白原變成纖維蛋白，使出現(xiàn)凝固。在有足量的凝血酶時，與不同含量的纖維蛋白原作用，其出現(xiàn)凝固的時間與纖維蛋白原含量呈負相關(guān)。

本法的干擾因素主要是肝素。在高濃度時可造成假的低值（可通過加入硫酸魚精蛋白而消除）?？藙谒狗ǎ–lauss法）是美國國家臨床檢驗標準委員會（NCCLS）推薦的纖維蛋白原常規(guī)測定方法。第8頁，共14頁，2022年，5月20日，18點34分，星期五現(xiàn)在的全自動凝血分析儀大部分在測PT時往往能夠同時報告纖維蛋白原。其原理和理論根據(jù)是：當PT測定完成時，全部纖維蛋白原均變成纖維蛋白（相當于Clauss法血漿中加入了凝血酶），其形成的濁度與纖維蛋白的含量成正比。因此，不需另加任何試劑，即可由濁度直接推算出纖維蛋白原的含量。故本法又稱為PT導出（或衍生）纖維蛋白原測定法，簡稱PT-Der法。由于此法使用的是比濁法，因此受到測定杯透光性能與血漿狀態(tài)的影響比較大，對于溶血，黃疸，乳糜的標本，此方法會出現(xiàn)較大的結(jié)果偏差。第9頁，共14頁，2022年，5月20日，18點34分，星期五我們科室現(xiàn)在使用的SYSMEX-CA1500全自動凝血儀與貝克曼

ALC-ELITE-PRO全自動凝血儀都可以同時用Clauss法與PT-Der法對FIB進行測定。其中貝克曼的儀器可以在定標PT的同時自動得到PT-Der法測定FIB的比濁曲線，而SYSMEX的儀器則必須定標PT后使用儀器測出標準品各種濃度下的OD值與Clauss法測出的FIB值，然后自行設定曲線對應關(guān)系。第10頁，共14頁，2022年，5月20日，18點34分，星期五PT-Der法與Clauss法結(jié)果對比第11頁，共14頁，2022年，5月20日，18點34分，星期五比較這兩種方法，PT衍生法其結(jié)果是在檢測PT過程中演算而來的，更快速、簡便，但其結(jié)果高于Clauss法的檢測結(jié)果，有時失去可靠性，特別是在疾病狀態(tài)下和溶栓治療中。因為溶栓過程中，早、中期FDPs產(chǎn)物X、Y片段可產(chǎn)生一定的濁度影響比濁，而晚期產(chǎn)生的D、E片段雖不產(chǎn)生濁度變化，但影響凝血酶時間(TT)的結(jié)果。當血漿FIB含量正常時，兩方法無顯著差異或略高于Clauss法，但當FIB減低或增高時，PT-der法往往略高。相比之下，Clauss法在準確度與精密度以及檢測速度方面都是很理想的選擇。第12頁，共14頁，2022年，5月20日，18點34分，星期五因此結(jié)合實際因素，我們在工作中為了方便節(jié)約時間與節(jié)約試劑成本可以使用PT-der法來進行FIB