動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)(2012-8)課件

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的基本方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的抓取與固定方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的給藥方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的編號(hào)方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的麻醉方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的去毛方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的取血方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的處死方法一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的抓取與固定大小鼠的抓取與固定豚鼠的抓取與固定兔的抓取與固定犬的抓取與固定

1、大小鼠的抓取固定

抓取時(shí)先用右手將鼠尾抓住提起，放在較粗糙的臺(tái)面或鼠籠上，在其向前爬行時(shí)，右手向后拉尾，用左手拇指和食指抓住小鼠的兩耳和頭頸部皮膚，將其固定于左手手心中，拉直四肢并用左手無(wú)名指壓緊尾和后肢，右手即可作注射或其他實(shí)驗(yàn)操作。取尾血及尾靜脈注射時(shí)，可將小鼠固定在金屬或木制的固定器上。此法適用于肌注、腹腔注射、灌胃等

小鼠固定盒固定大鼠固定盒固定2、豚鼠的抓取保定

先用左手輕輕扣、按住豚鼠背部。

順勢(shì)抓緊其肩胛上方皮膚，拇指和食指環(huán)箍其頸部。

用右手輕輕托住其臀部，即可將豚鼠抓取保定。抓豚鼠時(shí)，一般不要抓腰腹部位，否則易造成肝破裂而引起死亡。3、兔的抓取保定：一手抓住兔頸部的被毛與皮膚，另一手托其臀部或腹部，使其軀干的重量大部分集中在手上。兔手術(shù)固定臺(tái)4、犬的抓取與固定

用特制的長(zhǎng)柄狗頭鉗夾住狗頸部，將其按在地，由助手用繩子將其四肢及嘴固定好。扎口時(shí)注意松緊，保證動(dòng)物正常呼吸。二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的給藥方法

在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，應(yīng)根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、?dòng)物種類(lèi)、藥物類(lèi)型來(lái)決定動(dòng)物的給藥途徑與方法。動(dòng)物的給藥方法主要分為注射法和投入法兩種，不同方法按給藥途徑又分為很多具體類(lèi)型。注射法分為：皮下注射、肌肉注射、腹腔注射、腦膜下注射、腦內(nèi)注射、胸腔內(nèi)注射、腰椎內(nèi)注射、靜脈注射、關(guān)節(jié)腔注射和心內(nèi)注射。投入法可分為：鼻腔內(nèi)投入、胃腔內(nèi)投入、腸管內(nèi)投入、氣管內(nèi)投入和經(jīng)口腔投入。以下將各種動(dòng)物的主要給藥途徑和方法做一介紹。(一)皮下注射注射時(shí)以左手拇指和食指提起皮膚，將連有5（1/2）號(hào)針頭的注射器刺入皮下。皮下注射部位一般狗、貓多在大腿外側(cè)，豚鼠在后大腿的內(nèi)側(cè)或小腹部；大白鼠可在側(cè)下腹部。兔在背部或耳根部注射。蛙可在脊背部淋巴腔注射。

(二)皮內(nèi)注射皮內(nèi)注射時(shí)需將注射的局部脫去被毛，消毒后，用左手拇指和食指按住皮膚并使之繃緊，在兩指之間，用結(jié)核菌素注射器連4(1/2)細(xì)針頭，緊貼皮膚表層刺入皮內(nèi)，然后再向上挑起并再稍刺入，即可注射藥液，此時(shí)可見(jiàn)皮膚表面鼓起一白色小皮丘。（三）腹腔注射用大、小白鼠做實(shí)驗(yàn)時(shí)，以左手抓住動(dòng)物，使腹部向上，右手將注射針頭于左（或右）下腹部刺入皮下，使針頭向前推

0.5～1.0cm，再以45度角穿過(guò)腹肌，固定針頭，緩緩注入藥液，為避免傷及內(nèi)臟，可使動(dòng)物處于頭低位，使內(nèi)臟移向上腹。若實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為家兔，進(jìn)針部位為下腹部的腹白線離開(kāi)1cm處。（四）靜脈注射

1．兔：兔耳部血管分布清晰。兔耳中央為動(dòng)脈，耳外緣為靜脈。內(nèi)緣靜脈深不易固定，故不用。外緣靜脈表淺易固定，常用。先拔去注射部位的被毛，用手指彈動(dòng)或輕揉兔耳，使靜脈充盈，左手食指和中指夾住靜脈的近端，拇指繃緊靜脈的遠(yuǎn)端，無(wú)名指及小指墊在下面，右手持注射器連6號(hào)針頭盡量從靜脈的遠(yuǎn)端刺入，移動(dòng)拇指于針頭上以固定針頭，放開(kāi)食指和中指，將藥液注入，然后拔出針頭，用手壓迫針眼片刻。家兔2．小白鼠和大白鼠

一般采用尾靜脈注射，操作時(shí)先將動(dòng)物固定在鼠筒內(nèi)或扣在燒杯中，使尾巴露出，尾部用45～50℃的溫水浸潤(rùn)半分鐘或用酒精擦拭使血管擴(kuò)張，并可使表皮角質(zhì)軟化，以左手拇指和食指捏住鼠尾兩側(cè)，使靜脈充盈，用中指從下面托起尾巴，以無(wú)名指和小指夾住尾巴的末梢，右手持注射器連4(1/2)號(hào)細(xì)針頭，使針頭與靜脈平行（小于30℃），從尾下四分之一處（約距尾尖2～3厘米）處進(jìn)針，此處皮薄易于刺入，先緩注少量藥液，如無(wú)阻力，表示針頭已進(jìn)入靜脈，可繼續(xù)注入。注射完畢后把尾部向注射側(cè)彎曲以止血。如需反復(fù)注射，應(yīng)盡可能從末端開(kāi)始，以后向尾根部方向移動(dòng)注射。3．狗狗靜脈注射多選前肢內(nèi)側(cè)皮下頭靜脈或后肢小隱靜脈注射。注射前由助手將動(dòng)物側(cè)臥，剪去注射部位的被毛，用膠皮帶扎緊（或用手抓緊）靜脈近端，使血管充盈，從靜脈的遠(yuǎn)端將注射針頭平行刺入血管，待有回血后，松開(kāi)綁帶（或兩手），緩緩注入藥液。幾種動(dòng)物不同給藥途徑的常用注射量（毫升）注射途徑小鼠大鼠豚鼠兔狗腹腔0.2～1.01～32～55～105～15肌肉0.1～0.20.2～0.50.2～0.50.5～12～5靜脈0.2～0.51～21～53～105～15皮下0.1～0.50.5～10.5～21～33～10（引自第三軍醫(yī)大文獻(xiàn)）（五）經(jīng)口給藥

多用灌胃法，此法劑量準(zhǔn)確，適用于小白鼠、大白鼠、家兔等動(dòng)物。

1．小鼠、大鼠（或豚鼠）

一般當(dāng)灌胃針插入小鼠3～4cm，大鼠或豚鼠4～6cm后可將藥物注入。常用的灌胃量小鼠為0.2～

1ml，大鼠1～4ml，豚鼠為1～5ml。大、小鼠灌胃法按正確方法用左手抓取和固定動(dòng)物。使腹部朝上，頸部拉直。固定后，右手持持接灌胃針的注射器吸取藥液（或事先將藥液吸好），將針頭從口角插入口腔內(nèi)，然后用灌胃針頭壓其頭部，使口腔與食管成一直線，再將灌胃針頭沿上腭壁輕輕進(jìn)入，轉(zhuǎn)動(dòng)針頭刺激動(dòng)物吞咽，然后沿咽后壁慢慢插入食道。若動(dòng)物掙扎厲害，應(yīng)退出灌胃針，待動(dòng)物安靜后重新插入。切不可強(qiáng)行插入，以免損傷食道或誤入氣管導(dǎo)致動(dòng)物死亡。當(dāng)感覺(jué)有落空感時(shí)表明灌胃針可能進(jìn)入胃內(nèi)，向外抽動(dòng)注射器活塞，感覺(jué)有負(fù)壓說(shuō)明灌胃針未插入氣管，此時(shí)可將藥液灌入。器械：灌胃器由注射器和特殊的灌胃針構(gòu)成。小鼠灌胃針長(zhǎng)4～5cm直徑1mm大鼠灌胃針長(zhǎng)6～8cm直徑1.2mm2．狗、兔、貓、猴

灌胃時(shí)，先將動(dòng)物固定，再將特制的擴(kuò)口器放入動(dòng)物口中，擴(kuò)口器之寬度可視動(dòng)物口腔大小而定，如狗的擴(kuò)口器可用木料制成長(zhǎng)方形，長(zhǎng)約10～

15cm，粗細(xì)應(yīng)適合狗嘴，約2～3cm，中間粘一小孔，孔的直途為5～10cm。灌胃時(shí)將擴(kuò)口器放于上述動(dòng)物上下門(mén)牙之后，并用繩將它固定于嘴部，將帶有彈性的橡皮導(dǎo)管（如導(dǎo)尿管），經(jīng)擴(kuò)口器上的小圓孔插入，沿咽后壁而進(jìn)入食道，此時(shí)應(yīng)檢查導(dǎo)管是否正確插入食道，可將導(dǎo)管外口置于一盛水的燒杯中，如不發(fā)生氣泡，即認(rèn)為此導(dǎo)管是在食道中，未誤入氣管，即可將藥液灌入。兔灌胃法關(guān)鍵詞：固定，插入（沿上顎壁），檢查

給狗、兔灌胃時(shí)，可不用擴(kuò)口器：狗灌胃時(shí)，用12號(hào)灌胃管，左手抓住狗嘴，右手中指由右嘴角插入，摸到最后一對(duì)臼齒后的天然空隙，胃管由此空隙順食管方向不斷插入約20cm，可達(dá)胃內(nèi)，將胃管另一端插入水中，如不出氣泡，表示確已進(jìn)入胃，而沒(méi)誤入氣管內(nèi)，即可灌入。兔灌胃時(shí)，將兔固定在木制固定盒內(nèi)左手虎口卡住并固定好兔嘴，右手取14號(hào)細(xì)導(dǎo)管，由右側(cè)唇裂避開(kāi)門(mén)齒，將導(dǎo)管慢慢插入，如插管順利，動(dòng)物不掙扎，插入約15cm時(shí)，即表示插入胃內(nèi)，將藥液注入。各種動(dòng)物一次灌胃能耐受的最大容積小鼠為0.5～1.0ml，大鼠4～7ml，豚鼠為4～7ml，家兔為80～150ml，狗為200～500ml。（六）其它途徑給藥

1．呼吸道給藥呈粉塵、氣體及蒸氣或霧等癥狀存在藥物或毒氣，均需要通過(guò)動(dòng)物呼吸道給藥。如一般實(shí)驗(yàn)時(shí)給動(dòng)物乙醚作吸入麻醉，給動(dòng)物吸一定量的氨氣、二氧化碳等觀察呼吸、循環(huán)等變化；給動(dòng)物定期吸入一定量的SO2。鋸末煙霧等可造成慢性氣管炎動(dòng)物模型等；特別在毒物學(xué)實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用更為廣泛。

2．皮膚給藥為了鑒定藥物或毒物經(jīng)皮膚的吸收作用、局部作用、致敏作用和光感作用等，均需采用經(jīng)皮膚給藥方法。如家兔和豚鼠常采用背部一定面積的皮膚脫毛后，將一定藥液涂在皮膚上，藥液經(jīng)皮膚吸收。3．脊髓腔內(nèi)給藥此法主要用于椎管麻醉或抽取腦脊液。家兔椎管內(nèi)注射方法：將家兔作自然俯臥式，盡量使其尾向腹側(cè)屈曲，用粗剪將第七腰椎周?chē)趁羧?，?%碘酊消毒，干后再用75%酒精將碘酒擦去。在兔背部髕骨脊連線之中點(diǎn)稍下方摸動(dòng)第七腰椎間隙（第七腰椎與第一骶骨椎之間），插入腰椎穿刺針頭。當(dāng)針到達(dá)椎管內(nèi)時(shí)（珠網(wǎng)膜下腔），可見(jiàn)到兔的后肢跳動(dòng)，即證明穿刺針頭已進(jìn)入椎管。這時(shí)不要再向下刺，以免損傷脊髓。固定好針頭，即可將藥物注入。4．小腦延髓池給藥此種給藥都是在動(dòng)物麻醉情況下進(jìn)行的。而且常采用大動(dòng)物如狗等，小動(dòng)物很少采用。將狗麻醉后，使狗頭盡量向胸部屈曲，用左手摸到其第一頸椎上方的凹陷（枕骨大孔），固定位置，右手取7號(hào)鈍針頭（將針頭尖端麻鈍），由此凹陷的正中線上，順平行狗的方向，小心地刺入小腦延髓池。當(dāng)針頭正確刺入小腦延髓池時(shí)，注射者會(huì)感到針頭再向前穿時(shí)無(wú)阻力，同時(shí)可以聽(tīng)到很輕的“咔嚓”一聲，即表示針頭已穿過(guò)硬腦膜進(jìn)入小腦延髓池，而且可抽出清亮的腦脊液，注射藥物前，先抽出一些腦脊液，抽取量根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要注入多少藥液決定，即注入多少抽取多少，以保持原來(lái)腦脊髓腔里的壓力。5．腦內(nèi)給藥此法常用于微生物學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，將病原體等接種于被檢動(dòng)物腦內(nèi)，然后觀察接種后的各種變化。小鼠腦內(nèi)給藥時(shí)，選套有塑料管、針尖露出2mm深的5(1/2)針頭，由鼠正中額部刺入腦內(nèi)，注入藥物或接種物。給豚鼠、兔、狗等進(jìn)行腦內(nèi)注射時(shí)，須先用穿顱鋼針穿透顱骨，再用注射器針頭刺入腦部，再徐徐注入被檢物。注射速度一定要慢，避免引起顱內(nèi)壓急驟升高。6．直腸