急性毒性作用及其試驗方法

關于急性毒性作用及其試驗方法第1頁，共22頁，2022年，5月20日，16點21分，星期三一、概念和試驗目的1急性毒性（acutetoxicity）概念

指機體（人或實驗動物）一次，或24小時內多次接觸外來化合物所引起的中毒效應（包括死亡）。2急性毒性試驗

是研究一次或24小時內多次給予實驗動物被檢化學物后，觀察在短期內（一般7天）引起動物毒性表現(xiàn)的實驗。第2頁，共22頁，2022年，5月20日，16點21分，星期三3急性毒性試驗的目的

(1)測定受試物對一種或幾種實驗動物的半數(shù)致死量（LD50），以初步估計其對人類毒害的危險性。(2)了解受試物的毒性強度、性質和可能的靶器官，闡明受試物急性毒性的劑量反應關系。(3)為進一步進行亞慢性和慢性試驗以及其它特殊毒性試驗的劑量設計和毒性判定指標的選擇提供依據(jù)第3頁，共22頁，2022年，5月20日，16點21分，星期三二、實驗動物的選擇動物種類

一般常用大鼠或小鼠；如果同時用兩種動物，其中一種為非嚙齒類如狗、猴等更為理想

2動物年齡

動物年齡不易過老過幼，一般應選用初成年者，

大、小鼠為出生后2～3個月左右，體重一般分別為200g（180～240g）和20g（18～25g）左右；

狗為生后一年左右。

所有動物進入實驗室后，至少飼養(yǎng)觀察一周，選取其健康動物，體重相差應在10％以內，動物性別除另有要求，雌雄分別試驗外，一般常雌雄各半。第4頁，共22頁，2022年，5月20日，16點21分，星期三三、給予被檢物的途徑和方法

原則上要求與人類攝入該物質的實際途徑相同，對食品中化學物質來說，主要是經(jīng)口給予，在急性毒性試驗中，多采用灌胃法。

四、觀察指標和時間

1.觀察指標

在測定LD50中，主要觀察指標：動物死亡數(shù)目,動物主要中毒癥狀和開始出現(xiàn)的時間死亡的時間也要記錄。

第5頁，共22頁，2022年，5月20日，16點21分，星期三

器官系統(tǒng)觀察項目中毒后一般表現(xiàn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)和軀體運動系統(tǒng)行為姿態(tài)改變、叫聲異常、不安、呆臥少動動作痙攣、震顫、運動失調、麻痹、驚厥、強制性動作對刺激反應性易興奮、知覺過敏或缺乏知覺肌肉張力強直、馳緩血液循環(huán)系統(tǒng)心區(qū)觸診震顫、心動過速或過緩、心律不齊、心搏過強或減弱腸胃系統(tǒng)腹形膨脹、凹陷、嘔吐、腹瀉、便秘糞便硬度顏色不成形、黑色或灰色嚙齒類動物中毒表現(xiàn)觀察項目第6頁，共22頁，2022年，5月20日，16點21分，星期三生殖泌尿系統(tǒng)陰戶、乳腺膨脹、分泌增多陰莖脫垂會陰部被糞便污穢皮膚和毛發(fā)顏色、張力發(fā)紅、褶皺、松弛、出現(xiàn)皮疹、豎毛粘膜結膜、口腔分泌物增多、充血、蒼白、紫紺、黃疸眼眼瞼上瞼下垂眼球眼球突出、眼球震顫透明度混濁其它直腸、腳爪部的皮膚溫度降低或升高一般情況姿勢正常、消瘦第7頁，共22頁，2022年，5月20日，16點21分，星期三2觀察時間

1）一般觀察一周即可。因急性毒性實驗中，動物的中毒癥狀以及死亡，一般多出現(xiàn)在給予被檢物后24～48h以內。2）如中毒反應出現(xiàn)較遲，主要在48h或3～4天后出現(xiàn)，則觀察期也必須相應延長至2周甚至4周，特別是48～70h內。第8頁，共22頁，2022年，5月20日，16點21分，星期三第二節(jié)急性毒性評價第9頁，共22頁，2022年，5月20日，16點21分，星期三一、半數(shù)致死量和急性毒作用帶半數(shù)致死量

1）LD50值受多種因素影響：

包括：實驗動物的物種、品系、性別、年齡、受試化合物濃度及稀釋溶液的性質、喂飼條件以及試驗者的熟練程度等。2）存在一定的取樣誤差3）LD50是一個點的界限，所以是一個質反應，而不能代表受試物的急性特征。第10頁，共22頁，2022年，5月20日，16點21分，星期三2急性毒作用帶（acuteeffectzone,Zac）：

指化合物的毒性上限與毒性下限的比值，也就是引起試驗動物的死亡之劑量與最低劑量的劑量范圍的寬窄。通常以LD50代表毒性上限，急性閾劑量（閾濃度）代表毒性下限，其公式為：Zac=LD50LimacZac值的大小可反應急性閾劑量距離LD50的寬窄。Zac值越大，表明化合物引起急性死亡的危險越小，反之表明引起急性死亡的危險性越大。二、急性毒性分級

目前，我國食品安全性毒理學評價程序中，借用國際上的六級標準。第11頁，共22頁，2022年，5月20日，16點21分，星期三急性毒性分級大鼠經(jīng)口LD50(mg/Kg體重）大約相當于體重70Kg人的致死劑量幾種化學物質急性毒性舉例6級，極毒

＜1

稍嘗，＜7滴肉毒桿菌毒素（致死量30～50mg人）5級，劇毒1～507滴～1茶匙對硫磷（6～15）西力生（30）磷化鋅（47）4級，中等毒51～500

1茶匙～35g倍硫磷（250～395）氯丹（57）六六六（125）敵百蟲（450）3級，低毒

501～500035～350g二氯乙烷（770）苯甲酸鈉（2000）賽力散（2080）棉草枯（5000）2級，實際無毒5001～15000

350～1050g化森鋅（5200）驅蚊酯（8200）1級，無毒

＞15000

＞1050g福美鐵（＞17000）

第12頁，共22頁，2022年，5月20日，16點21分，星期三第三節(jié)LD50計算方法

第13頁，共22頁，2022年，5月20日，16點21分，星期三一、寇氏法（也叫平均劑量法）

1原理要求各組實驗動物數(shù)相等，相鄰組劑量成等比級數(shù)，若滿足此要求，則受試物劑量的對數(shù)與死亡率成比例關系要求各劑量大致有一半組所產(chǎn)生的反應率在10～50％之間，另一半在50～90％之間，最好還有反應率在0％及100％的組，故需預試。

2劑量分組小動物常設5～10個劑量組，每組6～10只。首先確定最高、最低量兩個組，分別可使動物90％和10％死亡。預試時按2倍或3倍遞增劑量，每次三個劑量水平（如200，400，800mg／Kg或100、300、900mg／Kg）測試動物死亡率。

第14頁，共22頁，2022年，5月20日，16點21分，星期三3計算公式：

當p1＝0，pk＝1，上式可簡化為

其中，xk:最高劑量的對數(shù)；

d：相鄰兩組劑量之比的對數(shù)；

pi：各組死亡率；i：組數(shù)；

SElgLD50：標準誤差對數(shù)；

ni：各組動物數(shù)。

LD50的95%可信限為：lg－1（lgLD50±1.96SELD50）

SElgLD50=d·[∑pi(1-pi

)/ni]1/2第15頁，共22頁，2022年，5月20日，16點21分，星期三三、霍恩法（也叫劑量遞增法或流動平均法）1特點動物數(shù)量固定，劑量也固定，因而簡單易行使用動物數(shù)量較少但可信限范圍較大，不夠精確2劑量分組

一般分四或五組，每組四或五只動物，各組中雌鼠與雄鼠數(shù)應分別相等，該方法對劑量系列要求嚴格，主要有兩種：第16頁，共22頁，2022年，5月20日，16點21分，星期三1）劑量遞增公比為：即，1.002.154.64×10t

t=0,±1,±2，±3……2）劑量遞增公比為：即，1.003.16×10t

t=0,±1,±2，±3……3預試（1）

以10，100，1000mg／Kg劑量，各用2～3只小鼠灌胃。根據(jù)24h內所產(chǎn)生的效應和反應來初步判斷毒性。（2）以215mg／Kg劑量用5只動物灌胃，以24h內產(chǎn)生的效應和反應來初步判斷毒性。第17頁，共22頁，2022年