生物化學(xué)肝功能

關(guān)于生物化學(xué)肝功能第1頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五第十二章

肝功能檢驗(yàn)

第一節(jié)概述

第二節(jié)某些肝疾病的臨床生化第三節(jié)肝功能試驗(yàn)第四節(jié)肝功能試驗(yàn)選擇原則第2頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五掌握肝功能試驗(yàn)的意義及評價(jià)，賴氏法、速率法測定ALT，改良J-G法和膽紅素氧化酶法測定膽紅素的原理、注意事項(xiàng)及主要臨床意義。熟悉金氏法、速率法測定ALP，GGT測定方法、酶比色法測定血清膽汁酸的原理、注意事項(xiàng)及主要臨床意義。了解肝臟的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及生物化學(xué)功能，某些肝病的生物化學(xué)。本章教學(xué)要求：第3頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五

肝臟是人體最重要的器官之一，肝臟病變會引起多種功能的障礙，臨床上常通過一些試驗(yàn)來了解肝功能，幫助對肝膽疾病的診斷，預(yù)后判斷及療效觀察，這些試驗(yàn)統(tǒng)稱為肝功能試驗(yàn)。第一節(jié)概述

肝臟是人體最大的實(shí)質(zhì)性器官，成人肝臟占體重的2%，約1.2～1.5kg。它幾乎參與了體內(nèi)各種化學(xué)反應(yīng)，如分泌、排泄、解毒以及各種物質(zhì)代謝過程，故肝臟有“物質(zhì)代謝中樞”之稱。第4頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五一、肝結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)

（一）肝具有雙重的血流輸入系統(tǒng)

即門靜脈和肝動(dòng)脈。門靜脈是肝的功能性血管，它匯集了胃腸、脾及胰腺的靜脈血流入肝，給肝帶來腸道吸收的大量營養(yǎng)物質(zhì)和腐敗物。門靜脈血占肝總血量的75%。肝動(dòng)脈是肝的營養(yǎng)性血管，給肝帶來大量的氧氣，同時(shí)也帶來肝外組織代謝產(chǎn)生的大量廢物，其血流量占肝總血流量的25%。第5頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五

（二）肝具有雙重輸出系統(tǒng)

即血液輸出系統(tǒng)和膽道輸出系統(tǒng)。血液輸出系統(tǒng)是指肝靜脈，出肝后經(jīng)下腔靜脈與體循環(huán)相通，使經(jīng)肝處理后的代謝物通過腎臟隨尿排出。膽道輸出系統(tǒng)是指肝細(xì)胞分泌的膽汁通過膽道排入腸道，隨膽汁排出的有膽汁酸鹽和一些代謝產(chǎn)物。第6頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五（一）肝臟具有雙重的血流輸入系統(tǒng)門靜脈(功能性血管)肝動(dòng)脈(營養(yǎng)性血管)（二）肝臟具有雙重的輸出系統(tǒng)營養(yǎng)物質(zhì)和腐敗物氧氣和肝外組織代謝廢物肝靜脈膽道

肝臟下腔靜脈體循環(huán)腸道肝處理后的代謝物腎臟(尿)膽汁酸鹽和代謝產(chǎn)物第7頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五

（三）肝細(xì)胞的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)特點(diǎn)

肝細(xì)胞中亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)豐富。含有豐富的線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和核糖體。使肝臟能量供應(yīng)充分，并大量合成蛋白質(zhì)和脂類。含有大量的溶酶體和高爾基復(fù)合體。促進(jìn)對吞噬產(chǎn)物的分解和一些蛋白質(zhì)的加工與成熟。還有過氧化物酶體，能分解代謝中產(chǎn)生的過氧化氫，減輕活性氧的損傷。第8頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五

（四）肝細(xì)胞的再生

肝細(xì)胞是體內(nèi)唯一具有再生能力的實(shí)質(zhì)細(xì)胞，而且再生能力很強(qiáng)。新生肝細(xì)胞的來源有兩種：1.由已分化的肝細(xì)胞增殖而來。

2.由未分化的小葉內(nèi)膽管上皮細(xì)胞分裂而來。由于肝細(xì)胞有很強(qiáng)的再生能力，所以輕度的損傷，難以通過肝功能試驗(yàn)檢測出來。第9頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五（三）肝細(xì)胞的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)特點(diǎn)（四）肝細(xì)胞的再生新生肝細(xì)胞的來源①由已分化的肝細(xì)胞增殖而來②由未分化的小葉內(nèi)膽管上皮細(xì)胞分裂而來①細(xì)胞表面有大量的微絨毛②細(xì)胞膜具有較高的通透性③肝細(xì)胞中亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)豐富④肝細(xì)胞含有豐富的酶系第10頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五二、肝臟的生物化學(xué)功能

（一）排泄功能肝臟能分泌膽汁，很多代謝物可隨膽汁通過膽道排入腸道而排泄。如膽汁酸、膽紅素、氨等物質(zhì)。

1.膽汁酸代謝

（1）膽汁：由肝細(xì)胞分泌的液體，正常人每天分泌量500～1000ml，稱為肝膽汁。進(jìn)入膽囊后水分被重吸收而濃縮，稱為膽囊膽汁。膽汁中含有膽汁酸鹽、膽色素、膽固醇、卵磷脂、粘蛋白、酶、尿素和無機(jī)鹽等物質(zhì)。其中膽汁酸鹽占固體成分50%以上。膽汁既是一種消化液，也是排泄液。第11頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五膽固醇

7α-羥膽固醇膽酸鵝脫氧膽酸甘氨膽酸牛磺膽酸甘氨鵝脫氧膽酸?；蛆Z脫氧膽酸腸道復(fù)雜反應(yīng)甘氨酸?；撬崮懼懙莱跫売坞x膽汁酸初級結(jié)合膽汁酸初級膽汁酸的生成第12頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五

HO

OH

COOH

HO

OHCONHCH2COOH

HOHO

OHCONHCH2CH2SO2H膽酸鵝脫氧膽酸牛磺鵝脫氧膽酸甘氨膽酸初級膽汁酸

HOHO

OHCOOH第13頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五脫氧膽酸石膽酸次級膽汁酸大部分通過主動(dòng)重吸收經(jīng)門靜脈入肝腸肝循環(huán)次級膽汁酸的生成與膽汁酸的腸肝循環(huán)甘氨膽酸腸?；悄懰岬栏拾冰Z脫氧膽酸牛磺鵝脫氧膽酸膽酸鵝脫氧膽酸腸菌水解腸菌還原一部分通過被動(dòng)重吸收經(jīng)門靜脈入肝隨糞便排出第14頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五

HOHO

OHCOOH

HO

HO

COOH脫氧膽酸

HO

OH

COOH

HOCOOH石膽酸膽酸鵝脫氧膽酸次級膽汁酸7－脫氧7－脫氧第15頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五第16頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五

2.膽紅素代謝膽色素是鐵卟啉化合物分解代謝的產(chǎn)物，主要包括膽紅素、膽綠素、膽素原和膽素，主要隨膽汁排泄。（1）膽紅素（bilirubin）的生成衰老RBC

單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)（肝、脾、骨髓）珠蛋白血紅素加氧酶膽綠素還原酶脂溶性，可進(jìn)入細(xì)胞產(chǎn)生毒害血紅素血紅蛋白

膽紅素COFe膽綠素

第17頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五（2）膽紅素在血中的運(yùn)輸膽紅素血液水溶性，不能進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，也不透過腎小球未結(jié)合膽紅素間接膽紅素

膽紅素-清蛋白復(fù)合物清蛋白

①限制了膽紅素自由通過細(xì)胞膜，免除了對細(xì)胞的毒害作用。②增加了水溶性，有利于在血液中的運(yùn)輸。第18頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五（3）肝臟在膽紅素代謝中的作用未結(jié)合膽紅素

Y-蛋白-膽紅素Z-蛋白-膽紅素Y-蛋白Z-蛋白葡萄糖醛酸-膽紅素UDPGA水溶性，不通過細(xì)胞膜，可通過腎小球肝細(xì)胞結(jié)合膽紅素直接膽紅素隨膽汁排入腸道攝取轉(zhuǎn)化排泄第19頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五（4）膽紅素在腸道的變化及腸肝循環(huán)結(jié)合膽紅素膽素原腸道細(xì)菌還原大部分隨糞便排出80%～90%少部分被重吸收10%～20%大部分又隨膽汁排入腸道形成腸肝循環(huán)少部分進(jìn)入體循環(huán)通過腎隨尿排出經(jīng)門靜脈入肝0.6～4mg膽素原膽素O2膽素原膽素O240～280mg第20頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五

血紅蛋白

珠蛋白

血紅素

COOFeNADPH

膽綠素

NADPH

膽紅素膽紅素胞液Y蛋白膽紅素-Y蛋白

Z蛋白膽紅素-Z蛋白

UDPGA內(nèi)質(zhì)網(wǎng)

UDP葡萄糖醛酸膽紅素腎小部分大部分膽素原膽紅素－清蛋白復(fù)合物膽素原膽素

尿少量腸道膽素膽素原葡萄糖醛酸膽紅素糞便膽紅素葡萄糖醛酸單核－吞噬細(xì)胞肝細(xì)胞血液清蛋白第21頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五

3.血氨代謝

（1）血氨的來源：①氨基酸的脫氨基作用及含氮化合物的分解，稱為內(nèi)源性氨。②腸道吸收，由未消化的蛋白質(zhì)和未吸收的氨基酸腐敗產(chǎn)生。

（2）血氨的去路：①合成尿素；②合成谷氨酰胺；③合成其他含氮化合物。

（3）尿素的合成與排泄：血氨進(jìn)入肝臟經(jīng)鳥氨酸循環(huán)合成尿素，經(jīng)腎臟隨尿排去。第22頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五

（1）在蛋白質(zhì)代謝中的作用：是機(jī)體合成蛋白質(zhì)的重要器官。除合成肝臟本身所需蛋白質(zhì)外，還合成近100種血漿蛋白。

（2）在氨基酸代謝中的作用：是體內(nèi)氨基酸分解代謝的主要場所。如脫氨基作用，調(diào)節(jié)血液中氨基酸的比例，合成尿素和一些含氮化合物。

（二）物質(zhì)代謝功能1.營養(yǎng)物質(zhì)代謝第23頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五維持血糖濃度恒定合成肝糖原肝糖異生血糖高（3）在糖代謝中的作用：維持血糖濃度的恒定。血糖低肝糖原分解第24頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五分泌膽汁酸鹽，促進(jìn)脂類的消化吸收。合成各種脂類，如TG，Ch，PL等。進(jìn)行脂肪酸的β-氧化，產(chǎn)生酮體。參與脂蛋白代謝，合成HDL、VLDL；

（4）在脂類代謝中的作用：對脂類的消化、吸收、分解、合成及運(yùn)輸?shù)冗^程均起有重要作用肝功能受損脂肪肝第25頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五

2.激素及維生素代謝

（1）在激素代謝中的作用：對多種激素進(jìn)行滅活和排泄，如類固醇激素、胰島素、腎上腺素、甲狀腺激素等。滅活后的產(chǎn)物大部分隨尿排出。肝功能嚴(yán)重?fù)p害激素調(diào)節(jié)功能紊亂

（2）在維生素代謝中的作用膽汁酸鹽有助于脂溶性Vit的吸收。儲存維生素(A,K,D,B12)。參與維生素的轉(zhuǎn)化。第26頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五二、肝臟的生物轉(zhuǎn)化定義：生物轉(zhuǎn)化:

機(jī)體對許多外源性或內(nèi)源性非營養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)行化學(xué)轉(zhuǎn)變，增加其水溶性(或極性)，使其易隨膽汁、尿排出，這種體內(nèi)變化過程稱生物轉(zhuǎn)化(biotransformation)。

轉(zhuǎn)化對象：轉(zhuǎn)化特點(diǎn)：生理意義：保護(hù)機(jī)體通過滅活對活性物質(zhì)的作用時(shí)間和強(qiáng)度進(jìn)行調(diào)節(jié)利于機(jī)體對代謝廢物和進(jìn)入體內(nèi)的異物的排泄內(nèi)源性非營養(yǎng)物:氨、胺、膽色素、激素外源性非營養(yǎng)物:藥物、毒物、食品防腐劑、色素①連續(xù)性，②多樣性，

③失活與活化雙重性第27頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五

1.溶血性黃疸（肝前性黃疸）由于各種原因使紅細(xì)胞大量破壞，以致未結(jié)合膽紅素明顯增加，超過肝臟的轉(zhuǎn)化能力，但結(jié)合膽紅素正常。新生兒血腦屏障發(fā)育不全，游離膽紅素易進(jìn)入腦組織，與腦部基底核的脂類結(jié)合，將神經(jīng)核染成黃色，稱為核黃疸（膽紅素腦病）。第28頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五

2.阻塞性黃疸（肝后性黃疸）由于膽道阻塞，膽汁不能排出而淤積在膽管內(nèi)，使上端膽管內(nèi)壓力不斷升高，最后使小膽管和毛細(xì)膽管擴(kuò)張，通透性增加，甚至破裂，使膽汁返流入血，血中結(jié)合膽紅素增加。第29頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五

3.肝細(xì)胞性黃疸（肝源性黃疸）由于肝細(xì)胞病變，肝功能減退，使肝臟對膽紅素的攝取、轉(zhuǎn)化和排泄作用發(fā)生障礙。一方面肝臟不能將未結(jié)合膽紅素轉(zhuǎn)化成結(jié)合膽紅素，使血中未結(jié)合膽紅素增加；另一方面，病變區(qū)壓迫毛細(xì)膽管，使結(jié)合膽紅素返流入血，血中結(jié)合膽紅素也增加。第30頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五2.黃疸的生化檢查（1）血清總膽紅素和結(jié)合膽紅素的測定（2）尿三膽的測定:尿膽紅素、尿膽素原、尿膽素（3）膽紅素葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶的誘導(dǎo)試驗(yàn)黃疸類型的鑒別肝細(xì)胞損害程度和預(yù)后判斷第31頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五

（二）黃疸的生化診斷

1.血清總膽紅素和結(jié)合膽紅素的測定用于黃疸類型的鑒別，肝細(xì)胞損害程度和預(yù)后判斷。

2.尿三膽的測定尿膽紅素、尿膽素原、尿膽素合稱為尿三膽。由于尿膽素是由尿膽素原遇空氣氧化而來，故臨床上一般只測定尿膽紅素和尿膽素原。第32頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五3.膽紅素葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶的誘導(dǎo)試驗(yàn)（1）糖皮質(zhì)激素的誘導(dǎo)試驗(yàn)：糖皮質(zhì)激素能誘導(dǎo)肝細(xì)胞內(nèi)尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶的合成，促進(jìn)未結(jié)合膽紅素的轉(zhuǎn)化與排泄，使血清膽紅素迅速下降。（2）苯巴比妥試驗(yàn)：苯巴比妥類藥物能誘導(dǎo)肝細(xì)胞內(nèi)Y蛋白和尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶的合成，苯巴比妥類藥物可用于核黃疸的治療。第33頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五二、肝硬化的生化是由于多種損傷因素長期或反復(fù)作用于肝，使肝細(xì)胞彌漫性變性、壞死，以及肝結(jié)締組織彌漫性增生，導(dǎo)致肝廣泛的纖維化和結(jié)節(jié)的形成稱為肝硬化。第34頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五

（一）肝硬化病因的分類

1.確定的病因：①乙型、丙型病毒性肝炎；②乙醇中毒；③代謝性疾病：血色病、Wilson病、半乳糖血癥等；④肝內(nèi)、外長期膽汁淤積；⑤門靜脈回流受阻；⑥免疫功能紊亂：狼瘡性肝炎；毒素及治療性藥物：氨甲蝶呤、異煙肼等。第35頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五

乙醇的飲用量與肝硬化的發(fā)病率有密切關(guān)系，飲酒量越高的國家其肝硬化死亡率也越高。如飲酒量年人均量在10升以下的瑞典、英國、丹麥等國家，肝硬化死亡率在10/10萬以下；而飲酒量年人均在27升左右的法國，肝硬化死亡率為30/10萬以上。由于長期飲酒易形成乙醇性脂肪肝、乙醇性肝炎、乙醇性肝硬化。第36頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五乙醇在胃和小腸上部迅速被吸收（胃30%、小腸上部70%），被吸收的乙醇90%～98%在肝內(nèi)被代謝，其余的隨尿和呼出氣排出。乙醇的代謝途徑有乙醇脫氫酶（alcoholdehydrogenase，ADH）乙醇氧化體系、微粒體乙醇氧化體系（microsomalethanoloxidizingsystem，MEOS）、NADPH氧化酶-過氧化氫酶體系、黃嘌呤氧化酶-過氧化氫酶體系。前二者最重要。

第37頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五

ADH乙醇氧化體系：CH3CH2OH＋NAD+CH3CHO＋NADH＋H+CH3CHOCH3COOH乙酰輔酶A

三羧酸循環(huán)

微粒體乙醇氧化體系（MEOS）：CH3CH2OH＋NADPH＋H+＋O2CH3CHO＋NADP+＋2H2O

NADPH氧化酶-過氧化氫酶體系：NADPH＋H+＋O2NADP+＋H2O2H2O2＋CH3CH2OH2H2O＋CH3CHOADH乙醛脫氫酶MEOSNADPH氧化酶過氧化氫酶第38頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五黃嘌呤氧化酶-過氧化氫酶體系：次黃嘌呤＋H2O＋O2

黃嘌呤＋H2O2H2O2＋CH3CH2OH2H2O＋CH3CHO

2.可能的原因：①營養(yǎng)不良；②感染：新生兒梅毒、血吸蟲病蟲卵所致門管區(qū)纖維組織增生；③隱原性肝硬化；④肉芽腫性肝硬化。黃嘌呤氧化酶過氧化氫酶第39頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五

（二）肝硬化的生物化學(xué)檢查肝硬化的早期診斷非常困難。近年來發(fā)展起來的幾項(xiàng)生化檢查為肝硬化的早期診斷提供了重要信息。1.單胺氧化酶（MAO）測定血清MAO與肝纖維化程度成正比。肝纖維化僅限于門脈區(qū)或中央靜脈周圍時(shí)，血清MAO幾乎全部正常。第40頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五

門靜脈纖維增生侵入肝小葉實(shí)質(zhì)內(nèi)時(shí)，半數(shù)患者血清MAO活性增高。門靜脈區(qū)間或門靜脈區(qū)間與中央靜脈之間結(jié)締組織相連時(shí)，80%患者血清MAO活性增高。當(dāng)有假小葉形成時(shí)，則100%患者血清MAO活性增高。

第41頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五

2.β-脯氨酸羥化酶（β-PH）測定

β-PH在膠原合成中起關(guān)鍵作用。當(dāng)肝纖維化時(shí)其含量和活性明顯增高。正常人為29.2±5.9ng/ml，肝硬化患者為654.9±90.2ng/ml。

3.血清透明質(zhì)酸（HA）測定肝纖維化時(shí)，門-腔靜脈分流增大，進(jìn)入肝內(nèi)清除的HA減少，使血清HA明顯增高。第42頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五4.血清Ⅲ型前膠原肽（PⅢP）

是由Ⅲ型前膠原經(jīng)內(nèi)切酶作用而產(chǎn)生的多肽。正常人為7.91±0.86μg/L，肝硬化患者明顯增高，診斷肝硬化的敏感性為95%，特異性為93%。第43頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五三、肝性腦病的生化機(jī)制

肝性腦病又稱肝昏迷，是由嚴(yán)重的肝病所致的中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂，是嚴(yán)重肝病的重危合并癥。目前認(rèn)為氨基酸的代謝障礙可能是肝性腦病發(fā)生的生化基礎(chǔ)。第44頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五

（一）氨中毒學(xué)說由于肝功能不全，肝臟合成尿素的功能障礙，血氨升高，血氨易通過血腦屏障，進(jìn)入腦組織，氨對腦組織有嚴(yán)重的毒害作用。如抑制丙氨酸脫氫酶的活性，影響乙酰輔酶A的生成；與三羧酸循環(huán)中α-酮戊二酸結(jié)合生成谷氨酸，耗竭三羧酸循環(huán)中α-酮戊二酸，減少ATP的生成；與谷氨酸結(jié)合生成谷氨酰胺，增加ATP的消耗。影響腦組織的能量代謝。第45頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五

（二）假神經(jīng)遞質(zhì)學(xué)說在腸道，芳香族氨基酸，如酪氨酸和苯丙氨酸經(jīng)腸菌的氨基酸脫羧酶作用，生成苯乙胺和酪胺，在正常情況下可被肝內(nèi)單胺氧化酶分解而清除，肝功能不全時(shí)，單胺氧化酶活性低下，苯乙胺和酪胺進(jìn)入腦組織，經(jīng)腦組織的非特異性羥化酶作用，生成苯乙醇胺和β-羥酪胺，它們與兒茶酚胺遞質(zhì)結(jié)構(gòu)相似，但不能傳遞神經(jīng)沖動(dòng)，故稱為假神經(jīng)遞質(zhì)。第46頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五

假神經(jīng)遞質(zhì)釋放后引起神經(jīng)系統(tǒng)某些部位（如腦干網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)上行激動(dòng)系統(tǒng)）功能發(fā)生障礙，使大腦發(fā)生深度抑制而昏迷。

（三）氨基酸不平衡學(xué)說嚴(yán)重肝功能損傷和門腔靜脈短路時(shí)，血漿支/芳比明顯降低（正常健康人為4.0，慢性肝功能不全為0.9，急性肝功能不全0.8）。第47頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五由于芳香族氨基酸主要在肝內(nèi)分解，肝功能不全，芳香族氨基酸在肝內(nèi)代謝發(fā)生障礙，在血中濃度增高；支鏈氨基酸主要在肌肉組織中代謝，肝功能不全時(shí)對胰島素的滅活障礙，高水平的胰島素促進(jìn)支鏈氨基酸大量進(jìn)入肌肉組織被分解，血中濃度降低。芳香族氨基酸進(jìn)入腦組織，引起假神經(jīng)遞質(zhì)生成增多，5-羥色胺（抑制性神經(jīng)遞質(zhì)）增多，使中樞進(jìn)入抑制狀態(tài)。第48頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五第三節(jié)肝功能試驗(yàn)一、血清（漿）蛋白測定清蛋白（Alb)是血漿中主要的蛋白質(zhì),合成清蛋白是肝的重要功能之一。同時(shí)測定血清中的總蛋白（TP）和清蛋白含量，計(jì)算球蛋白（G）量和A/G比值是判定肝功能的重要指標(biāo)。第49頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五血清總蛋白測定方法有化學(xué)法、物理法、染料結(jié)合法、電泳法等臨床上常用的是雙縮脲法。清蛋白測定常用方法為染料結(jié)合法，常用的染料有溴甲酚綠和溴甲酚紫。血中蛋白質(zhì)主要由清蛋白和球蛋白組成而其他組分的蛋白含量低所以對同份血清測定的總蛋白、清蛋白結(jié)果可以求出可以求出球蛋白的含量，通過計(jì)算求出A/G。第50頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五血清氨基轉(zhuǎn)移酶測定一、氨基轉(zhuǎn)移酶測定方法簡介丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（alanineaminotransferase，ALT)天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（aspartateaminotransferase，AST)酶聯(lián)-紫外連續(xù)監(jiān)測法二硝基苯肼比色法方法:酶：第51頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五（一）酶聯(lián)-紫外連續(xù)監(jiān)測法ALT和AST測定的參考方法

NADH在340nm處有特征吸收峰，連續(xù)監(jiān)測NADH消耗引起的340nm吸光度變化,根據(jù)340nm處吸光度下降速率（－△A/min）計(jì)算ALT活性原理：計(jì)算：第52頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五注意事項(xiàng)：1.該ALT測定法中存在兩個(gè)消耗NADH的副反應(yīng)2.輔酶P-5′-P能使血清中的ALT顯示最大活性3.試劑空白測定值的處理4.樣本選擇和處理方法評價(jià)1.特異性高2.準(zhǔn)確性高3.精密度高參考范圍：5～40U/L或參考試劑盒提供的參考范圍第53頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五（二）二硝基苯肼比色法原理：第54頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五操作與計(jì)算1.ALT校準(zhǔn)曲線的繪制第55頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五2.樣本的測定測定管吸光度減去對照管吸光度的差值為樣本的吸光度，用該值在校準(zhǔn)曲線上查得的卡門單位3.計(jì)算4.參考范圍：5～25卡門單位第56頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五注意事項(xiàng)：1.賴氏法單位定義：卡門單位定義：血清1ml，反應(yīng)液總體積3ml，25℃，波長340nm，比色杯光徑1.0cm，每分鐘吸光度下降0.001A為一個(gè)單位（相當(dāng)于每升反應(yīng)體系中0.1608μmolNADH被氧化）。2.底物α-酮戊二酸和2，4-二硝基苯肼濃度不足，以及產(chǎn)物丙酮酸的抑制作用：

賴氏法的校準(zhǔn)曲線不能延長到200卡門單位。當(dāng)酶活性超過150卡門單位時(shí)，應(yīng)用生理鹽水作5～10倍稀釋樣本，測定結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)第57頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五3.樣本存放時(shí)間在室溫（25℃）可維持2d，在4℃冰箱可維持1周。在－25℃可維持1個(gè)月試劑空白自身血清的對照管樣本對照管4.血清對照5.丙酮酸鈉的純度對曲線的影響6.加入2，4-二硝基苯肼溶液后，應(yīng)充分混勻，使反應(yīng)完全。加入氫氧化鈉溶液的速度要一致，減少吸光度管間的差異。7.稱量必須準(zhǔn)確第58頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五方法評價(jià)重復(fù)性差底物α-酮戊二酸用量不足2，4-二硝基苯肼在堿性條件下也能顯色產(chǎn)物旁路效應(yīng)2.準(zhǔn)確性差3.試劑穩(wěn)定性差4.操作簡便第59頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五二、氨基轉(zhuǎn)移酶測定的意義肝細(xì)胞中含量最多，其次是腎臟和心臟，通常只有極少量釋放入血液，所以血清中此酶的活力很低，當(dāng)這些組織病變時(shí)，細(xì)胞壞死或通透性增加，細(xì)胞內(nèi)酶大量釋放入血，使血清中該酶活力顯著增高1.血清ALT活性增高肝膽疾病骨骼肌疾病一些藥物和毒物可引起ALT活性升高2．血清AST活性增高心血管疾病各種肝病均可引起血清AST的升高第60頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五第三節(jié)血清堿性磷酸酶測定一、測定方法簡介一組非特異性的在堿性條件下水解磷酸酯的酶類底物:β-甘油磷酸鈉磷酸苯二鈉對硝基酚磷酸鹽酸酚酞α-萘酚磷酸鹽4-甲基傘形花內(nèi)酯酰磷酸鹽堿性磷酸酶:第61頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五測定方法:（一）測定水解釋放的無機(jī)磷鮑氏（Bodansky）法（二）測定底物水解后的羥基化合物1.羥基化合物需與顯色劑作用后比色測定金氏（King）法2.羥基化合物在堿性條件下直接顯色測定對硝基酚磷酸鹽（p-nitrophenylphosphate,4-NPP）法第62頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五金氏法測定血清堿性磷酸酶

ALP在堿性條件催化磷酸苯二鈉水解，釋放出酚和磷酸，酚在堿性溶液中與4-氨基安替比林作用，經(jīng)鐵氰化鉀氧化形成紅色的醌類化合物，根據(jù)紅色的深淺與校準(zhǔn)酚比較，確定ALP的活性。原理:第63頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五參考范圍：單位定義：

靈敏度較高，顯色穩(wěn)定，不需去蛋白，操作簡單、快速準(zhǔn)確度和精密度都較低,受膽紅素和溶血的干擾方法評價(jià)：100ml血清在37℃與底物作用15min，產(chǎn)生1mg酚為1個(gè)金氏單位成人3～13金氏單位，兒童5～28金氏單位第64頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五速率法測定血清堿性磷酸酶原理:以對-硝基苯酚磷酸鈉（4-NPP）為底物，AMP或二乙醇胺（DEA）為磷酸酰基的受體。在堿性條件下，ALP催化4-NPP水解釋放出磷酸基團(tuán)，生成游離對-硝基酚（p-nitrophenol,4-NP），4-NP在堿性溶液中轉(zhuǎn)變成醌式結(jié)構(gòu)，呈現(xiàn)較深的黃色。根據(jù)405nm處吸光度增加的速率（△A/min）推算出清ALP活性單位。第65頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五計(jì)算：參考范圍：40～160U/L（37℃）靈敏度高、線性范圍寬（500U/L以上）和精密度高方法評價(jià)：第66頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五二、堿性磷酸酶測定的意義分布：廣泛存在于各器官組織中，尤以肝臟、骨骼、小腸和腎臟含量較高，血清中ALP主要來自肝臟和骨骼病理性增高：

肝膽疾病：阻塞性黃疸、急性或慢性黃疸型肝炎、肝癌

骨骼疾?。贺E病、骨軟化病、骨轉(zhuǎn)移癌和骨折修復(fù)愈合期生理性增高：妊娠期與兒童生長發(fā)育期第67頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五第四節(jié)血清γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶測定一、測定方法簡介γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶（γ-glutamyltransferase，GGT)（一）重氮比色法（二）速率法測定方法:第68頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五速率法測定血清γ-谷氨?；D(zhuǎn)移酶

GGT催化γ-谷氨?；茡Q反應(yīng)。以L-γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺為底物，雙甘肽為谷氨?；氖荏w，在GGT的催化下，谷氨酰基轉(zhuǎn)移到雙甘肽分子上，同時(shí)釋放出黃色的2-硝基-5-氨基苯甲酸，根據(jù)405nm處吸光度增加的速率（△A/min）推算出GGT活性單位原理：第69頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五計(jì)算：參考范圍：男性11～50U/L（37℃），女性7～32U/L（37℃）`方法評價(jià):本法準(zhǔn)確度好；精密度好線性范圍寬（460U/L）；操作簡便；但對試劑純度要求高第70頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五重氮比色法測定血清γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶以γ-谷氨酰α-萘胺作為γ-谷氨?；墓w，雙甘肽作為受體，在GGT作用下，產(chǎn)生α-萘胺，后者與重氮試劑反應(yīng)，產(chǎn)生紅色α-萘胺-對-偶氮苯磺酸，其色澤的深淺與GGT活力成正比。原理：第71頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五參考范圍：方法評價(jià)：

不需去除蛋白質(zhì)，操作簡便，顏色穩(wěn)定，線性關(guān)系好，但底物水溶性較差成年男性3～17U/L，成年女性2～13U/L第72頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五二、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶測定的意義分布：腎最高，其次是前列腺、胰、肝等器官尿中GGT活性：

可能有助于診斷腎疾病

血清GGT用于診斷肝膽疾病1.原發(fā)性或轉(zhuǎn)移性肝癌2.阻塞性黃疸3.病毒性肝炎和肝硬化4.乙醇性肝炎第73頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五血清膽紅素測定

未結(jié)合膽紅素間接膽紅素血清膽紅素結(jié)合膽紅素直接膽紅素加速劑常用的有甲醇、乙醇、苯甲酸鈉、尿素。最近在血清中還發(fā)現(xiàn)了第三種膽紅素，稱為δ-膽紅素，性質(zhì)與結(jié)合膽紅素相似，含量很低。第74頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五（一）重氮法

對氨基苯磺酸＋亞硝酸鈉氯化重氮苯磺酸＋NaCl＋2H2O

膽紅素＋氯化重氮苯磺酸紫紅色的偶氮化合物λ=560nm

加速劑為甲醇。靈敏度較低，溶血標(biāo)本干擾大。重氮試劑在室溫中不穩(wěn)定，易分解，故一般在臨用前新鮮配制。HClpH1-2第75頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五

（二）改良J-G法1938年由Jendrossik和Grof建立，幾經(jīng)改進(jìn)成為今天廣泛應(yīng)用的J-G法。加速劑為苯甲酸鈉-咖啡因。紫紅色的偶氮膽紅素在強(qiáng)堿性酒石酸鈉和咖啡因存在下，生成藍(lán)色的偶氮膽紅素。pH13，λ=660nm靈敏度高，ε7.4×104；線性范圍寬，0～2736μmol/L；顯色穩(wěn)定；精確度較好；干擾少。是我國醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)會推薦的方法。第76頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五（三）膽紅素氧化酶法總膽紅素＋1/2O2

膽綠素＋H2O膽綠素＋O2

淡紫色化合物

膽紅素在460nm波長處，吸光度的下降與濃度成正比。在pH8.2時(shí)，膽紅素氧化酶可催化結(jié)合膽紅素和未結(jié)合膽紅素氧化；在pH4.5時(shí)，膽紅素氧化酶僅催化結(jié)合膽紅素氧化。因此，調(diào)節(jié)溶液pH可分別測定總膽紅素和結(jié)合膽紅素。靈敏度高，干擾少，精確度好，線性范圍寬。膽紅素氧化酶第77頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五

【參考范圍】血清總膽紅素5.1～17.1μmol/L血清結(jié)合膽紅素0～6μmol/L結(jié)合膽紅素/總膽紅素20%～35%

第78頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五【臨床意義】

診斷黃疸和鑒別黃疸類型，血清總膽紅素17.1～34.2μmol/L為隱性黃疸，＞34.2μmol/L為臨床黃疸，根據(jù)結(jié)合膽紅素占總膽紅素的百分比可鑒別黃疸類型。

溶血性黃疸結(jié)合膽紅素占總膽紅素的20%以下。肝細(xì)胞性黃疸結(jié)合膽紅素占總膽紅素的35%以上。阻塞性黃疸結(jié)合膽紅素占總膽紅素的50%以上。

第79頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五二、血氨測定

血氨主要來自腸道的吸收及組織中氨基酸的脫氨基作用。主要的去路是在肝臟經(jīng)鳥氨酸循環(huán)合成尿素。血液中的游離氨以兩種形式存在，NH4+和NH3，在生理pH條件下，NH4+占98%以上。血氨測定的方法主要有三類：化學(xué)法（堿性酚次氯酸鹽直接顯色法）；酶法（谷氨酸脫氫酶速率法）；離子選擇電極法。第80頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五

（一）堿性酚次氯酸鹽直接顯色法血清經(jīng)鎢酸沉淀蛋白質(zhì)后，濾液中的與堿性酚次氯酸鹽試劑反應(yīng)生成藍(lán)色化合物（靛藍(lán)），λ=625nm，此反應(yīng)又稱Berthlot反應(yīng)。顯色穩(wěn)定，但血液離體后，血液中的含氮化合物可分解產(chǎn)生氨，時(shí)血氨緩慢升高，此時(shí)應(yīng)迅速將血液標(biāo)本制成無蛋白濾液。第81頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五

（二）谷氨酸脫氫酶速率法

血漿中的在NH4+足量的α-酮戊二酸和NADPH存在下，經(jīng)GLDH催化生成谷氨酸NADP+，對340nm紫外光吸光度下降。NH4+＋α-酮戊二酸＋NADPH谷氨酸＋NADP+＋H2O

【參考范圍】13～57μmol/L（酶法）GLDH第82頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五

【方法評價(jià)】特異性強(qiáng)、分析時(shí)間短，在200μmol/L范圍內(nèi)線性良好，精密度好，批內(nèi)CV＝3.9%；批間CV＝4.5%?；厥章蕿?7.9%～102.7%。是較為理想的氨分析方法。

【臨床意義】肝性腦病，重癥肝炎，尿毒癥血氨增高。第83頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五三、血清膽汁酸測定

膽酸肝臟游離型鵝脫氧膽酸初級膽汁酸

結(jié)合型膽汁酸

腸道脫氧膽酸次級膽汁酸石膽酸甘氨膽酸甘氨鵝脫氧膽酸?；悄懰崤；蛆Z脫氧膽酸第84頁，共93頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)53分，星期五

肝臟在膽汁酸的生成、分泌、排泄和攝取等代謝過程中有極其重要的作用。血液流經(jīng)肝臟一次約90%的膽汁酸被攝取，故正常人血清TBA含量很低，一般在10μmol/L以下。任何引起肝細(xì)胞病理性損傷的過程都可使肝臟攝取膽汁酸能力降低，而導(dǎo)致血清TBA↑，故血清TBA測定是目前認(rèn)為最敏感的肝功能試驗(yàn)項(xiàng)目之一。膽汁酸測定的方法有，氣相色譜法、氣相質(zhì)譜法、HPLC、放免法、酶法。第85頁，共93頁，2022