白細(xì)胞分離技術(shù)匯總

白細(xì)胞分離技術(shù)匯總白細(xì)胞分離技術(shù)匯總白細(xì)胞分離技術(shù)匯總xxx公司白細(xì)胞分離技術(shù)匯總文件編號(hào)：文件日期：修訂次數(shù)：第1.0次更改批準(zhǔn)審核制定方案設(shè)計(jì)，管理制度外周血白細(xì)胞的分離：（細(xì)胞分離液有市售，有各種型號(hào)：白細(xì)胞、單核細(xì)胞淋巴細(xì)胞等分離液）1>取3ml正常人的外周血（枸櫞酸鈉抗凝）與等體積pbs混勻后小心的加于6ml白細(xì)胞分離液液面上，1500r/min離心20min。（或先將抗凝血離心，然后吸取中間白細(xì)胞層，再混以等體積pbs然后小心加于等體積細(xì)胞分離液液面上，離心同上）2>吸取中間云霧狀白細(xì)胞，加3－4mlPBS后3000r/min離心10min。3>棄上清，加1mlPBS洗滌沉淀后，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至管中。4>3000r/min離心20min，棄上清。即得白細(xì)胞可以試試紅細(xì)胞裂解液提供我的配方：氯化銨克；重碳酸鉀克；克；用三蒸水配成1升所有的細(xì)胞培養(yǎng)都應(yīng)該堅(jiān)守?zé)o菌操作原則2.分層后的確有3層，準(zhǔn)確說(shuō)來(lái)是4層，最下面是紅細(xì)胞，上面的一層不應(yīng)該是稍微混濁的白色，應(yīng)該也比較透明，這一層上面就是我們需要的薄細(xì)胞層，最上面是血清3.細(xì)節(jié)：a.淋巴細(xì)胞分離液要避光保存b.就您的試驗(yàn)看來(lái)，淋巴細(xì)胞分離液的問(wèn)題可能是最主要的c.首先再離心管中加入淋巴細(xì)胞分離液，然后把標(biāo)本緩慢加在淋巴細(xì)胞分離液表面上，一定要緩慢小心操作，切不可混勻d.所有操作都應(yīng)在無(wú)菌環(huán)境進(jìn)行e.把離心管放入離心機(jī)是也應(yīng)小心，不要太大幅度的搖幌離心管，當(dāng)然離心后拿出來(lái)也要小心就這么多了吧，這個(gè)操作是不是很難的，比較基本祝您好運(yùn)了！.參考方法：

人外周血,肝素抗凝(100U?ml),等量無(wú)血清培養(yǎng)液（或者PBS等緩沖液）稀釋。按1∶2的體積比緩置于比重1.077g/ml的淋巴細(xì)胞分離液,1000×g離心30min,收集培養(yǎng)液2分離液界面上的單個(gè)核細(xì)胞。于無(wú)血清培養(yǎng)液,400×g離心10min,洗滌2次。用培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞并計(jì)數(shù)我也是最近要做所以查了一下，僅供分享，呵呵！一外周血白細(xì)胞的分離1>取3ml正常人的外周血（枸櫞酸鈉抗凝）與等體積pbs混勻后小心的加于6ml白細(xì)胞分離液（（%泛影葡胺和9%Ficoll液按1：體積比混合））液面上，1500r/min離心20min。（或先將抗凝血離心，然后吸取中間白細(xì)胞層，再混以等體積pbs然后小心加于等體積細(xì)胞分離液液面上，離心同上）2>吸取中間云霧狀白細(xì)胞，加3－4mlPBS后3000r/min離心10min。3>棄上清，加1mlPBS洗滌沉淀后，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至管中。4>3000r/min離心20min，棄上清。即得白細(xì)胞二自然沉降法本法是利用血細(xì)胞自然沉降率的分離法，採(cǎi)集血液後應(yīng)及時(shí)抗凝，通常選用肝素抗凝法。肝素能阻止凝血酶原轉(zhuǎn)化為凝血酶，從而抑制纖維蛋白原形成纖維蛋白而防止血液凝固。操作原則是將含抗凝血的試管直立靜置室溫30～60min後，血液分成明顯三層，上層為淡黃色血漿，底層為紅細(xì)胞，緊貼紅細(xì)胞層上面的灰白層為白細(xì)胞，輕輕吸取即得