抗原抗體及其結(jié)合反應(yīng)

教學(xué)目的掌握：抗原抗體結(jié)合力、抗原抗體結(jié)合反應(yīng)特點(diǎn)熟悉：影響抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的因素第一頁，共三十六頁。第一節(jié)抗原一、抗原的特性免疫原性、免疫反應(yīng)性特異性二、用于免疫測定的抗原分類天然、合成多肽、基因重組第二頁，共三十六頁。第二節(jié)抗體一、抗體的特性特異性、多樣性、免疫原性二、用于免疫測定的抗體分類多克隆、單克隆、基因工程三、抗體產(chǎn)生的規(guī)律初次應(yīng)答、再次應(yīng)答第三頁，共三十六頁。第三節(jié)抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的原理抗原抗體反應(yīng):指抗原與相應(yīng)抗體之間所發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)。抗原表位與抗體高變區(qū)間的結(jié)構(gòu)互補(bǔ)抗原表位與抗體高變區(qū)的緊密接觸抗原抗體之間的結(jié)合力親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體物質(zhì)基礎(chǔ)第四頁，共三十六頁。一、抗原抗體結(jié)合力靜電引力范德華引力氫鍵疏水作用力抗原抗體結(jié)合力示意圖第五頁，共三十六頁。１.靜電引力（electrostaticforces）抗原和抗體分子帶有相反電荷的氨基和羧基基團(tuán)之間相互吸引的力。又稱為庫倫引力第六頁，共三十六頁。2.范德華引力（VonderWaalsforces）

抗原和抗體相互接近時(shí)，由于分子的極化作用而出現(xiàn)的引力。

范德華引力<靜電引力第七頁，共三十六頁。3.氫鍵結(jié)合力供氫體上的氫原子與受氫體原子間的引力供氫體：羧基、氨基和羥基受氫體：羧基氧、羧基碳和肽鍵氫鍵具有高度的方向性第八頁，共三十六頁。4.疏水作用力（疏水鍵）

兩個(gè)疏水基團(tuán)在水溶液中相接觸時(shí)，由于對(duì)水分子排斥而趨向聚集力。第九頁，共三十六頁。二、抗原抗體的親和力和親合力抗原抗體親和力示意圖第十頁，共三十六頁?？乖贵w親合力示意圖第十一頁，共三十六頁。三、液相中抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)抗原抗體復(fù)合物

(疏水膠體)可見反應(yīng)電解質(zhì)

抗原

(親水膠體)抗體﹢第十二頁，共三十六頁。四、固相表面抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)1.抗原抗體結(jié)合反應(yīng)時(shí)間2.反應(yīng)體積3.解離速度4.固相化抗原或抗體的構(gòu)象第十三頁，共三十六頁。第四節(jié)抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的特點(diǎn)特異性可逆性比例性階段性第十四頁，共三十六頁。

親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體示意圖親水膠體疏水膠體可見反應(yīng)第十五頁，共三十六頁。一、特異性抗原抗體反應(yīng)特異性示意圖第十六頁，共三十六頁。特異性示意圖第十七頁，共三十六頁。交叉反應(yīng)（crossreactions）抗原抗體交叉反應(yīng)示意圖第十八頁，共三十六頁。二、可逆性可逆性：抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合成復(fù)合物后，在一定條件下又可解離為游離抗原與抗體的特性影響因素：抗體對(duì)相應(yīng)抗原的親合力環(huán)境因素對(duì)復(fù)合物的影響第十九頁，共三十六頁。

【Ag】+【Ab】【Ag-Ab】

解離后抗原抗體仍保持原有特性。一定條件：低pH、高濃度鹽等。Ab1第二十頁，共三十六頁。比例性：抗原與抗體發(fā)生可見反應(yīng)需遵循一定的量比關(guān)系最適比：沉淀物最多時(shí)的抗原抗體的濃度比或量比等價(jià)帶:

抗原與抗體分子比例合適范圍前帶：

抗體過量后帶：

抗原過量三、比例性第二十一頁，共三十六頁。

抗原抗體反應(yīng)比例性示意圖第二十二頁，共三十六頁。四、階段性第一階段：特異性結(jié)合階段第二階段：反應(yīng)可見階段第二十三頁，共三十六頁。第五節(jié)影響抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的因素抗原抗體本身因素反應(yīng)基質(zhì)因素實(shí)驗(yàn)環(huán)境因素第二十四頁，共三十六頁。一、抗原抗體本身因素抗原:理化性狀、表位種類和數(shù)目抗體:來源、特異性、親和性、效價(jià)第二十五頁，共三十六頁。來源R型Ab：等價(jià)帶寬，易出現(xiàn)可見反應(yīng)。H型Ab：等價(jià)帶窄，易出現(xiàn)前帶或后帶McAb:不宜用于凝集和沉淀反應(yīng)。濃度：是相對(duì)Ag而言，比例要合適，故實(shí)驗(yàn)前

需滴定，以求最適Ag與Ab比例。

特異性與親和力：關(guān)鍵因素，選擇特異性與親和力高的Ab。第二十六頁，共三十六頁。二、反應(yīng)基質(zhì)因素非特異性因素，如蛋白、鹽、藥物等第二十七頁，共三十六頁。三、實(shí)驗(yàn)環(huán)境因素電解質(zhì):0.85%生理鹽水或緩沖液酸堿度:pH6~8溫度:37℃最適第二十八頁，共三十六頁。(一）電解質(zhì)作用：中和膠體表面電荷，破壞水化層，使Ag-Ab聚集。常用：0.85%NaCl溶液，緩沖液、Ca2+、Mg2+等。第二十九頁，共三十六頁。（二）酸堿度

抗原抗體反應(yīng)中一般以pH6-8為宜，有補(bǔ)體參與的反應(yīng)最適pH為7.2-7.4酸凝集：當(dāng)pH為3左右時(shí)，接近細(xì)菌Ag的等電點(diǎn)，可出現(xiàn)非特異性凝集。第三十頁，共三十六頁。（三）溫度

最適溫度為37℃或室溫18-25℃為宜。若溫度高于56℃，可導(dǎo)致已結(jié)合了的抗原抗體復(fù)合物解離，甚至分子變性。第三十一頁，共三十六頁?？乖贵w反應(yīng)類型第三十二頁，共三十六頁。第三十三頁，共三十六頁。標(biāo)記免疫技術(shù)用熒光物質(zhì)、放射性核素、酶或化學(xué)發(fā)光物質(zhì)等標(biāo)記抗原或抗體，進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)后，通過檢測標(biāo)記物對(duì)抗原或抗體進(jìn)行定性、定位或定量分析第三十四頁，共三十六頁。思考題1．抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的原理？2．抗原抗體的結(jié)合力有哪些？3．抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的特點(diǎn)？第三十五頁，共三十六頁。