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分子生物學(xué)復(fù)習(xí)題及其答案分子生物學(xué)復(fù)習(xí)題及其答案分子生物學(xué)復(fù)習(xí)題及其答案V:1.0精細(xì)整理,僅供參考分子生物學(xué)復(fù)習(xí)題及其答案日期:20xx年X月一、名詞解釋廣義分子生物學(xué):在分子水平上研究生命本質(zhì)的科學(xué),其研究對(duì)象是生物大分子的結(jié)構(gòu)和功能。2狹義分子生物學(xué):即核酸(基因)的分子生物學(xué),研究基因的結(jié)構(gòu)和功能、復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、翻譯、表達(dá)調(diào)控、重組、修復(fù)等過程,以及其中涉及到與過程相關(guān)的蛋白質(zhì)和酶的結(jié)構(gòu)與功能基因:遺傳信息的基本單位。編碼蛋白質(zhì)或RNA等具有特定功能產(chǎn)物的遺傳信息的基本單位,是染色體或基因組的一段DNA序列(對(duì)以RNA作為遺傳信息載體的RNA病毒而言則是RNA序列)。基因:基因是含有特定遺傳信息的一段核苷酸序列,包含產(chǎn)生一條多肽鏈或功能RNA所必需的全部核苷酸序列。功能基因組學(xué):是依附于對(duì)DNA序列的了解,應(yīng)用基因組學(xué)的知識(shí)和工具去了解影響發(fā)育和整個(gè)生物體的特定序列表達(dá)譜。蛋白質(zhì)組學(xué):是以蛋白質(zhì)組為研究對(duì)象,研究細(xì)胞內(nèi)所有蛋白質(zhì)及其動(dòng)態(tài)變化規(guī)律的科學(xué)。生物信息學(xué):對(duì)DNA和蛋白質(zhì)序列資料中各種類型信息進(jìn)行識(shí)別、存儲(chǔ)、分析、模擬和轉(zhuǎn)輸?shù)鞍踪|(zhì)組:指的是由一個(gè)基因組表達(dá)的全部蛋白質(zhì)功能蛋白質(zhì)組學(xué):是指研究在特定時(shí)間、特定環(huán)境和實(shí)驗(yàn)條件下細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的全部蛋白質(zhì)。單細(xì)胞蛋白:也叫微生物蛋白,它是用許多工農(nóng)業(yè)廢料及石油廢料人工培養(yǎng)的微生物菌體。因而,單細(xì)胞蛋白不是一種純蛋白質(zhì),而是由蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物、核酸及不是蛋白質(zhì)的含氮化合物、維生素和無機(jī)化合物等混合物組成的細(xì)胞質(zhì)團(tuán)。基因組:指生物體或細(xì)胞一套完整單倍體的遺傳物質(zhì)總和。C值:指生物單倍體基因組的全部DNA的含量,單位以pg或Mb表示。C值矛盾:C值和生物結(jié)構(gòu)或組成的復(fù)雜性不一致的現(xiàn)象。重疊基因:共有同一段DNA序列的兩個(gè)或多個(gè)基因?;蛑丿B:同一段核酸序列參與了不同基因編碼的現(xiàn)象。單拷貝序列:單拷貝順序在單倍體基因組中只出現(xiàn)一次,因而復(fù)性速度很慢。單拷貝順序中儲(chǔ)存了巨大的遺傳信息,編碼各種不同功能的蛋白質(zhì)。低度重復(fù)序列:低度重復(fù)序列是指在基因組中含有2~10個(gè)拷貝的序列中度重復(fù)序列:中度重復(fù)序列大致指在真核基因組中重復(fù)數(shù)十至數(shù)萬(<105)次的重復(fù)順序。其復(fù)性速度快于單拷貝順序,但慢于高度重復(fù)順序。高度重復(fù)序列:基因組中有數(shù)千個(gè)到幾百萬個(gè)拷貝的DNA序列。這些重復(fù)序列的長度為6~200堿基對(duì)?;蚣易澹赫婧松锘蚪M中來源相同、結(jié)構(gòu)相似、功能相關(guān)的一組基因,可能由某一共同祖先基因經(jīng)重復(fù)和突變產(chǎn)生。基因簇:基因家族的各成員緊密成簇排列成大段的串聯(lián)重復(fù)單位,定位于染色體的特殊區(qū)域。超基因家族:由基因家族和單基因組成的大基因家族,各成員序列同源性低,但編碼的產(chǎn)物功能相似。如免疫球蛋白家族。假基因:一種類似于基因序列,其核苷酸序列同其相應(yīng)的正常功能基因基本相同、但卻不能合成功能蛋白的失活基因。復(fù)制:是指以原來DNA(母鏈)為模板合成新DNA(子鏈)的過程?;蛏矬w以DNA/RNA為模板合成DNA/RNA的過程。半保留復(fù)制:DNA復(fù)制過程中,新合成的子代DNA分子中,一條鏈?zhǔn)切潞铣傻模硗庖粭l鏈來自親代,這種復(fù)制方式稱為半保留復(fù)制。復(fù)制子:基因組上能夠獨(dú)立進(jìn)行復(fù)制的單位,包括復(fù)制起點(diǎn)和復(fù)制終點(diǎn)。所有的原核生物的染色體、噬菌體僅有一個(gè)復(fù)制子;真核生物的染色體有多個(gè)復(fù)制子復(fù)制起始點(diǎn):DNA分子上起始復(fù)制并控制復(fù)制起始頻率的特定位置復(fù)制終點(diǎn):終止復(fù)制的位點(diǎn)。復(fù)制叉:又稱生長點(diǎn),復(fù)制開始時(shí),起始點(diǎn)處的DNA雙螺旋要解鏈,松開的兩股鏈和未松開的雙螺旋形狀象一把叉子,稱為復(fù)制叉,是復(fù)制有關(guān)的酶和蛋白質(zhì)組裝成新的復(fù)合物和新鏈合成的部位。引物:是人工合成的與模板DNA互補(bǔ)的寡核苷酸序列簡并引物:是指代表編碼單個(gè)氨基酸所有不同堿基可能性的不同序列的混合物。相向復(fù)制:從兩個(gè)起點(diǎn)開始兩條鏈的復(fù)制,形成兩個(gè)復(fù)制叉,各以一條鏈為模板單一方向復(fù)制出一條新鏈。單向復(fù)制:復(fù)制從一個(gè)起始點(diǎn)開始,只有一個(gè)復(fù)制叉,以同一方向生長出兩條鏈。雙向復(fù)制:從一個(gè)起始點(diǎn)開始,沿著兩個(gè)相反的方向形成兩個(gè)復(fù)制叉,一方向移動(dòng),兩條DNA鏈都被作為模板,各生長出兩條新鏈,形成一個(gè)復(fù)制泡,用電子顯微鏡可以觀察到復(fù)制泡的存在。這是原核生物和真核生物DNA復(fù)制最主要的形式D環(huán)復(fù)制:又稱取代環(huán)復(fù)制,是線粒體DNA的復(fù)制形式。復(fù)制中呈字母D形狀而得名。DNA的半不連續(xù)復(fù)制:DNA在復(fù)制過程中,一條鏈合成是連續(xù)的,而另一條鏈合成是不連續(xù)的,這樣的復(fù)制過程稱為半不連續(xù)合成。岡崎片段:DNA復(fù)制時(shí),以5’→3’方向的母鏈作為模板,子鏈沿5’→前導(dǎo)鏈:以3’→5’方向DNA鏈為模板鏈,子代DNA以5’后隨鏈:以5’→3’方向DNA鏈為模板鏈,子代DNA以5’引物酶:又稱引發(fā)酶,合成起始引物,引物長度為10-60個(gè)核苷酸,E.coli中是DnaG蛋白。RNA聚合酶:以一條DNA鏈或RNA鏈為模板催化由核苷-5′-三磷酸合成RNA的酶。促進(jìn)DnaA活性,促進(jìn)復(fù)制起始。端粒:真核生物線性染色體DNA的兩端是一種特殊結(jié)構(gòu)稱為端粒功能:穩(wěn)定染色體末端結(jié)構(gòu),防止染色體末端融合、重組、降解;補(bǔ)償5’DNA的損傷:生物體生命過程中DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)發(fā)生的任何改變都稱之為DNA損傷。DNA修復(fù):是細(xì)胞對(duì)DNA受損傷后的一種反應(yīng)。主要包括:直接修復(fù)、切除修復(fù)、錯(cuò)配修復(fù)、重組修復(fù)、易錯(cuò)修復(fù)和SOS應(yīng)急反應(yīng)光修復(fù):光裂合酶能特異地和嘧啶二聚體結(jié)合,在可見光下催化光化合反應(yīng),使環(huán)丁烷環(huán)回復(fù)到兩個(gè)獨(dú)立的嘧啶,這一過程叫光復(fù)活作用。應(yīng)急反應(yīng)(SOS反應(yīng)):許多能造成DNA損傷或抑制DNA復(fù)制的過程能引起一系列復(fù)雜的誘導(dǎo)效應(yīng),這種效應(yīng)稱為應(yīng)急反應(yīng)(SOS反應(yīng))同義突變:指突變改變了密碼子的組成,但由于密碼子的簡并性沒有改變所編碼的氨基酸序列的突變錯(cuò)義突變:指基因突變改變了所編碼氨基酸的序列,不同程度地影響蛋白質(zhì)和酶的活性。無義突變:指基因改變使代表某種氨基酸的密碼子變?yōu)榻K止密碼子,導(dǎo)致肽鏈合成過早終止。致死突變:有些錯(cuò)義突變和無義突變嚴(yán)重影響到蛋白質(zhì)活性甚至完全無活性,從而影響了表現(xiàn)型。滲漏突變:有些錯(cuò)義的產(chǎn)物仍然有部分活性,使表現(xiàn)型介于完全的突變型和野生型之間的中間類型。中性突變:有些錯(cuò)義突變不影響或基本上不影響蛋白質(zhì)活性,不表現(xiàn)出明顯的性狀變化。電泳:帶電顆粒在電場的作用下,向著與其電性相反的電極移動(dòng),稱為電泳。遷移率:是指帶電顆粒在單位電場下泳動(dòng)的速度。影響遷移率的內(nèi)在因素:(1)樣品所帶靜電荷的多少(2)樣品顆粒大小(3)樣品分子空間構(gòu)象影響遷移率的外界因素:電場強(qiáng)度、電泳緩沖液的離子強(qiáng)度、電泳緩沖液的pH值、支持物及其濃度的影響、插入染料的影響、溫度的影響、電滲DNA重組:又稱遺傳重組,指DNA分子內(nèi)或分子間發(fā)生遺傳信息的重新組合,重組產(chǎn)物叫重組DNA同源重組:又稱一般性重組,指發(fā)生在兩條同源DNA分子之間,通過配對(duì)、鏈斷裂和再連接,而產(chǎn)生片段交換過程。重組產(chǎn)物稱為重組體Holliday中間體:同源重組中,兩條同源的DNA分子經(jīng)過配對(duì)、斷裂和再連接,形成的連接分子,稱為Holliday中間體Chi位點(diǎn):它是刺激重組的位點(diǎn)。這一位點(diǎn)是由8個(gè)堿基組成的非對(duì)稱序列特異位點(diǎn)重組:指發(fā)生在一個(gè)特定的短DNA序列內(nèi),由特異的酶和輔助因子識(shí)別和作用的重組。單鏈同化:單鏈DNA與同源雙鏈DNA分子發(fā)生鏈的交換,從而使重組過程中DNA配對(duì)、Holliday中間體的形成、分支移動(dòng)等步驟得以實(shí)現(xiàn)的過程。轉(zhuǎn)座子:基因組上中可以移動(dòng)的DNA片段。轉(zhuǎn)座子由基因組的一個(gè)位置轉(zhuǎn)移到另一個(gè)位置的過程叫轉(zhuǎn)座反轉(zhuǎn)座子:又稱反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子或反轉(zhuǎn)錄子,是一類在轉(zhuǎn)座過程中需要以RNA為中間體,經(jīng)過反轉(zhuǎn)錄過程再分散到基因組中的轉(zhuǎn)座子。生物學(xué)意義:對(duì)基因表達(dá)的影響;反轉(zhuǎn)座子介導(dǎo)基因的重排;反轉(zhuǎn)座子在進(jìn)化中的作用轉(zhuǎn)錄:生物體以DNA為模板合成RNA的過程。反轉(zhuǎn)錄:生物體以RNA為模板合成DNA的過程。剪接:真核生物RNA前體去除內(nèi)含子,連接外顯子的過程。剪接體:在mRNA前體內(nèi)含子的剪接過程中,由多個(gè)核內(nèi)小分子核糖核酸(snRNA)和蛋白質(zhì)組裝形成催化剪接反應(yīng)的復(fù)合體。模板鏈:“-鏈”、“反義鏈”,指用于轉(zhuǎn)錄的DNA單鏈,是合成RNA的模板編碼鏈:“+鏈”、“有義鏈”、“非模板鏈”,指模板鏈的對(duì)應(yīng)DNA鏈,堿基序列與mRNA一致(DNA:T,RNA:U)編碼序列:編碼序列從AUG開始以三核苷酸單位閱讀直到出現(xiàn)終止密碼UGA,UAA或UAG之一。RNA編輯:是指轉(zhuǎn)錄后的RNA在編碼區(qū)發(fā)生堿基的插入、丟失或替換等現(xiàn)象。編輯的生物學(xué)意義:(1)改變和補(bǔ)充遺傳信息;(2)增加基因產(chǎn)物的多樣性,是基因調(diào)控的一種方式,有利于進(jìn)化;(3)可能與學(xué)習(xí)和記憶有關(guān)反式作用因子:通過擴(kuò)散到與其編碼基因不在同一個(gè)DNA分子上的靶位置,識(shí)別、結(jié)合而調(diào)節(jié)基因表達(dá)的分子。如轉(zhuǎn)錄因子、RNA聚合酶順式作用元件:通常只在原位影響與其處于同一個(gè)DNA分子上的、物理上緊密相連、被表達(dá)的基因序列。通常不編碼蛋白,多位于基因旁側(cè)或內(nèi)含子中。如啟動(dòng)子、終止子、增強(qiáng)子、操縱基因、MAR啟動(dòng)子:位于轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)附近,且為轉(zhuǎn)錄起始所必需,可被RNA聚合酶特異性識(shí)別、結(jié)合,并起始轉(zhuǎn)錄的一段保守DNA序列,其本身不被轉(zhuǎn)錄。-10序列(Pribnow框):幾乎所有原核基因的啟動(dòng)子中,在轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游-10bp位點(diǎn)區(qū)域都有一個(gè)典型的6bp區(qū)域,共有序列為TATAAT(T80A95T45A60A-35序列(Sextama框):轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游約-35bp處有一段6bp區(qū)域,共同序列為TTGACA(T82T84G78A操縱子:是原核生物在分子水平上基因表達(dá)調(diào)控的單位,由調(diào)節(jié)基因、啟動(dòng)子、操縱基因和結(jié)構(gòu)基因等序列組成。增強(qiáng)子:指能使基因轉(zhuǎn)錄頻率明顯增加的DNA遠(yuǎn)端調(diào)控序列強(qiáng)終止子:無需其他蛋白質(zhì)因子的幫助,而是依靠轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物形成特殊的二級(jí)結(jié)構(gòu)就可以終止轉(zhuǎn)錄,這種終止子被稱為內(nèi)部終止子。弱終止子:需要在一種蛋白質(zhì)因子ρ的幫助才能終止,所以又稱為ρ依賴性終止子。結(jié)構(gòu)基因:編碼參與細(xì)胞結(jié)構(gòu)或代謝活動(dòng)的結(jié)構(gòu)蛋白、酶的基因。操縱基因:指操縱子中常與啟動(dòng)子相鄰或重疊的序列,被有活性調(diào)節(jié)蛋白結(jié)合后,影響啟動(dòng)子啟動(dòng)下游結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄,是一類順式作用元件。調(diào)節(jié)基因:編碼控制其它基因表達(dá)的蛋白質(zhì)或RNA的基因。調(diào)節(jié)蛋白:是調(diào)節(jié)基因產(chǎn)物,有活性調(diào)節(jié)蛋白可與操作基因結(jié)合,控制下游結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄。效應(yīng)物:調(diào)節(jié)蛋白需要有一個(gè)小分子物質(zhì)結(jié)合并改變其活性,共同調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄,這個(gè)小分子物質(zhì)稱為效應(yīng)物(effector)CAP:(降解物活化蛋白)或CRP(環(huán)腺苷酸受體蛋白)是分子量為22.5kd的二聚體順反子:遺傳學(xué)將編碼一個(gè)蛋白質(zhì)或多肽的遺傳單位稱為順反子(cistron)。多順反子:原核細(xì)胞中數(shù)個(gè)結(jié)構(gòu)基因常串聯(lián)為一個(gè)轉(zhuǎn)錄單位,轉(zhuǎn)錄生成的mRNA可編碼幾種功能相關(guān)的蛋白質(zhì),為多順反子(polycistron)。單順反子:真核mRNA只編碼一種蛋白質(zhì),為單順反子(singlecistron)。遺傳密碼:DNA(或mRNA)中的核苷酸序列與蛋白質(zhì)中氨基酸序列之間的對(duì)應(yīng)關(guān)系稱為遺傳密碼。特點(diǎn):連續(xù)性、簡并性、通用性、變異性、方向性、變偶性密碼子:mRNA上每3個(gè)相鄰的核苷酸編碼蛋白質(zhì)多肽鏈中的一個(gè)氨基酸,這三個(gè)核苷酸就稱為一個(gè)密碼子或三聯(lián)體密碼。同義密碼子:同一種氨基酸具有兩個(gè)或更多密碼子的現(xiàn)象稱為密碼子的簡并性。對(duì)應(yīng)于同一種氨基酸的不同密碼子稱為同義密碼子。開放閱讀框架:從mRNA5端起始密碼子AUG到3端終止密碼子之間的核苷酸序列,按照三聯(lián)體密碼連續(xù)排列編碼一個(gè)蛋白質(zhì)多肽鏈,稱為開放閱讀框架(openreadingframe,ORF)。RNA的再編碼:mRNA以不同的方式翻譯,改變原來編碼信息,稱為RNA的再編碼氨基酸的活化:是指氨基酸與tRNA相連,形成氨酰-tRNA的過程。氨基酸的活化在細(xì)胞質(zhì)中進(jìn)行。反應(yīng)由氨酰-tRNA合成酶(又稱氨基酸活化酶)催化。意義:(1)使氨基酸本身被活化,利于下一步形成肽鍵反應(yīng)。(2)tRNA可攜帶氨基酸到mRNA的指定部位,使氨基酸進(jìn)入到肽鏈合適的位置安慰誘導(dǎo)物:又稱義務(wù)誘導(dǎo)物:能高效誘導(dǎo)酶的合成,但不是酶作用底物,與酶底物結(jié)構(gòu)類似的分子應(yīng)急反應(yīng):當(dāng)細(xì)菌能源十分缺乏時(shí),幾乎所有的生化反應(yīng)都停止,為生存,細(xì)菌體內(nèi)可立即產(chǎn)生一種應(yīng)急應(yīng)答反應(yīng),關(guān)閉許多基因表達(dá)。反式作用因子:通過擴(kuò)散到與其編碼基因不在同一個(gè)DNA分子上的靶位置,識(shí)別、結(jié)合而調(diào)節(jié)基因表達(dá)的分子。如轉(zhuǎn)錄因子、RNA聚合酶順式作用元件:通常只在原位影響與其處于同一個(gè)DNA分子上的、物理上緊密相連、被表達(dá)的基因序列。通常不編碼蛋白,多位于基因旁側(cè)或內(nèi)含子中。如啟動(dòng)子、終止子、增強(qiáng)子、操縱基因、MAR轉(zhuǎn)錄后的加工:是指將各種前體RNA分子加工成成熟RNA的過程。信號(hào)序列:所有靶向輸送的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)中存在分選信號(hào),主要為N末端特異氨基酸序列,可引導(dǎo)蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞的適當(dāng)靶部位,這一序列稱為信號(hào)序列。分子伴侶:分子伴侶是細(xì)胞一類保守蛋白質(zhì),可識(shí)別肽鏈的非天然構(gòu)象,促進(jìn)各功能域和整體蛋白質(zhì)的正確折疊。應(yīng)急反應(yīng)(strigentresponse):當(dāng)細(xì)菌能源十分缺乏時(shí),幾乎所有的生化反應(yīng)都停止,為生存,細(xì)菌體內(nèi)可立即產(chǎn)生一種應(yīng)急應(yīng)答反應(yīng),關(guān)閉許多基因表達(dá)。管家基因:在生物體幾乎所有的細(xì)胞中始終表達(dá)的基因,表達(dá)產(chǎn)物大致以恒定水平始終存在于細(xì)胞內(nèi),是維持細(xì)胞最低限度功能所不可缺少的基因,是細(xì)胞生存所必須的。這類基因的表達(dá)稱為組成型表達(dá)奢侈基因:只在特定的細(xì)胞類型或細(xì)胞生長發(fā)育特定時(shí)間表達(dá)的基因。這類基因的表達(dá)稱為可調(diào)節(jié)表達(dá)核基質(zhì)結(jié)合區(qū):30nm染色質(zhì)纖維以特定的DNA序列結(jié)合在核基質(zhì)上,這些特定DNA序列稱為MAR,它使纖維狀的染色質(zhì)DNA形成數(shù)以萬計(jì)的環(huán)狀結(jié)構(gòu)域。絕緣子:是一類特殊的順式作用元件,阻止激活或阻遏作用在染色質(zhì)上的傳遞,使染色質(zhì)活性限定于結(jié)構(gòu)域內(nèi)座位控制區(qū)(LCR):是一種遠(yuǎn)距離順式元件,為相連接的基因提供了一個(gè)可以活化的染色體環(huán)境,可能是DNaseI的超敏感位點(diǎn)和許多轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn),可促進(jìn)基因轉(zhuǎn)錄CpG島:真核生物基因組中,常見富含的CpG的區(qū)域,稱為CpG島,常位于轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)及其附近,其甲基化程度直接影響轉(zhuǎn)錄活性。DNA甲基化:真核生物DNA雙螺旋中,胞嘧啶核苷的嘧啶環(huán)5位甲基化,并與其上的鳥嘌呤形成mCpG,是DNA甲基化的唯一形式高速泳動(dòng)蛋白(HMG):活性染色質(zhì)中含有兩種高度豐富的小分子非組蛋白,這些蛋白具有異常高的電荷,在凝膠電泳中移動(dòng)快,所以稱為高速泳動(dòng)蛋白(HMG)小衛(wèi)星DNA序列:又稱可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù),重復(fù)單位6-40bp,每個(gè)拷貝長度0.1-20Kb(6-100次),分為位于鄰近染色體端粒的區(qū)域(端粒家族),以及分散在基因組的多個(gè)位置上(高變家族),一般沒有轉(zhuǎn)錄活性。增強(qiáng)子:指能使基因轉(zhuǎn)錄頻率明顯增加的DNA遠(yuǎn)端調(diào)控序列。二、填空題1、原核生物復(fù)制方式:θ型復(fù)制、滾環(huán)復(fù)制、D環(huán)復(fù)制2、真核生物復(fù)制方式:多起點(diǎn)雙向復(fù)制3、真核生物基因組組分包括:核內(nèi)染色體DNA、核外細(xì)胞器DNA(線粒體DNA、葉綠體DNA)、質(zhì)粒真核生物DNA序列類型:單拷貝序列、低度重復(fù)序列、中度重復(fù)序列、高度重復(fù)序PCR體系:引物、DNA聚合酶模板dNTPMg2+濃度6、反式作用因子結(jié)構(gòu)包括:DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域、轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域、二聚體結(jié)構(gòu)域,其中,DNA結(jié)構(gòu)域包括:螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋(HTH)結(jié)構(gòu)基序、鋅指(ZF)結(jié)構(gòu)基序、螺旋-突環(huán)-螺旋(HLH)結(jié)構(gòu)基序、亮氨酸拉鏈(LZ)結(jié)構(gòu)基序7、DNA的提取的一般步驟準(zhǔn)備生物材料2、裂解細(xì)胞3、去除雜質(zhì)4、沉淀DNA5、檢測6、保存三、簡答論述題1、增強(qiáng)子為什么具有遠(yuǎn)距離作用呢?
答:成環(huán)模型:認(rèn)為增強(qiáng)子通過一些蛋白質(zhì)因子的介導(dǎo)可與遠(yuǎn)距離的啟動(dòng)子結(jié)合,使DNA形成了一個(gè)環(huán),從而促使遠(yuǎn)距離的啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄。成環(huán)模型也符合染色體的側(cè)環(huán)模型和核基質(zhì)的調(diào)控理論,也就是說DNA的特殊序列可以和核基質(zhì)結(jié)合形成側(cè)環(huán),在某些細(xì)胞中有些基因通過環(huán)的形成讓增強(qiáng)子區(qū)和啟動(dòng)子區(qū)相互靠近,使這些基因能得以表達(dá)??磥憝h(huán)的形成主要是兩種因素:①某些蛋白質(zhì)因子的介導(dǎo);②和核基質(zhì)特異的結(jié)合病毒基因組的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)答:a與細(xì)菌相比,病毒基因組很小,大小相差較大。b病毒基因組由DNA組成,也可以由RNA組成,每種病毒顆粒中只含有一種核酸,核酸結(jié)構(gòu)可以是單鏈或雙鏈、環(huán)狀或線狀。c有重疊基因。d大部分是用來編碼蛋白質(zhì)的,基因間的間隔序列較短。e功能上相關(guān)的基因集中成簇,在基因組的特定的部位,形成一個(gè)功能單位或轉(zhuǎn)錄單元,轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為多順反子,之后經(jīng)過簡單加工。f噬菌體的基因是連續(xù)的;而真核細(xì)胞病毒的基因是不連續(xù)的,具有內(nèi)含子。細(xì)菌染色體基因組結(jié)構(gòu)的一般特點(diǎn)答:☆細(xì)菌的染色體基因組通常僅由一條環(huán)狀雙鏈DNA分子組成,染色體相對(duì)聚集在一起,形成一個(gè)較為致密的區(qū)域,稱為類核?!钪挥幸粋€(gè)復(fù)制起點(diǎn),數(shù)個(gè)相關(guān)的結(jié)構(gòu)基因串聯(lián)在一起,受同一調(diào)控區(qū)調(diào)節(jié),合成多順反子mRNA?!罹哂胁倏v子結(jié)構(gòu)。☆編碼蛋白質(zhì)的基因都是單拷貝,但rRNA基因是多拷貝?!詈筒《镜幕蚪M相似,非編碼的DNA部份所占比例比真核細(xì)胞基因組少得多?!罨蚪MDNA中具有多種調(diào)控區(qū)如復(fù)制起始區(qū)、復(fù)制終止區(qū)、轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)區(qū)和終止區(qū)等,還有重復(fù)序列,比病毒基因組復(fù)雜?!罹呖梢苿?dòng)的DNA序列真核生物基因組的特點(diǎn)答:☆真核生物的基因組比較龐大,具有多個(gè)復(fù)制起始點(diǎn)?!钜粋€(gè)基因組包括多條線狀染色體,每條染色體DNA上有多個(gè)復(fù)制起始點(diǎn)?!钫婧松锏幕蚪MDNA與蛋白質(zhì)結(jié)合形成染色質(zhì)的復(fù)雜高級(jí)結(jié)構(gòu),儲(chǔ)存于細(xì)胞核內(nèi)?!钫婧思?xì)胞被核膜分隔成細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì),在基因表達(dá)中,轉(zhuǎn)錄和翻譯在時(shí)間和空間上被分隔,不偶聯(lián)?!钫婧松锘蚪M存在著許多重復(fù)序列,重復(fù)序列單位長度不一,重復(fù)程度各異?!钫婧松锏牡鞍踪|(zhì)基因一般以少拷貝形式存在,轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為單順反子?!畲嬖谥梢苿?dòng)的DNA序列?!畲蠖鄶?shù)真核生物基因含內(nèi)含子,為斷裂基因。5、滾環(huán)復(fù)制特點(diǎn):(1)共價(jià)延伸;(2)模板鏈和新合成的鏈分開;(3)不需RNA引物,在正鏈3‘-OH上延(4)只有一個(gè)復(fù)制叉;(5)形成多聯(lián)體;6、D環(huán)復(fù)制的特點(diǎn):D環(huán)復(fù)制的特點(diǎn)是:復(fù)制起始點(diǎn)不在雙鏈DNA同一位點(diǎn),內(nèi)、外環(huán)復(fù)制有時(shí)序差別。7、DNA聚合酶反應(yīng)特點(diǎn)☆以4種dNTP作為底物☆反應(yīng)需要接受模板指導(dǎo)☆鏈延伸需要引物3’☆新鏈延伸方向5’→☆產(chǎn)物DNA極性與模板相對(duì)8、DNA聚合酶I的結(jié)構(gòu)DNA聚合酶I有5個(gè)結(jié)合位點(diǎn):(1)模板結(jié)合位點(diǎn)(2)引物結(jié)合位點(diǎn)(3)底物dNTP結(jié)合位點(diǎn)(4)5‘→3’(5)3'→5'校正位點(diǎn)9、DNA聚合酶I的主要活性和生理功能5’→3’聚合活性:催化條件:43’→55’→3內(nèi)切酶活性生理功能:滯后鏈合成中除去RNA引物并添補(bǔ)其留下的缺口;參與DNA損傷修復(fù)10、DNA聚合酶II的主要活性5’→33’→5生理功能:修復(fù)中起作用11、DNA聚合酶III的主要活性多亞基酶5’→33’→5生理功能:是體內(nèi)DNA復(fù)制的主要承擔(dān)者12、DNA的復(fù)制過程1、復(fù)制的起始DNA解旋、解鏈,形成復(fù)制叉:拓?fù)洚悩?gòu)酶、解旋酶及單鏈DNA結(jié)合蛋白R(shí)NA引物合成:依賴于單鏈模版,由引物酶催化合成一小段RNA引物特點(diǎn):原核環(huán)形DNA通常只有一個(gè)起點(diǎn),雙向復(fù)制;真核線性DNA通常多個(gè)起始點(diǎn),形成多個(gè)復(fù)制叉復(fù)制的延長子鏈延長:引物合成后,由polII催化,在引物3’半不連續(xù)合成:領(lǐng)頭鏈:鍵的延長方向與解鏈方向相同,為連續(xù)合成.隨從鏈:鍵的延長方向與解鏈方向相反,為不連續(xù)合成,產(chǎn)生岡崎片段3、復(fù)制的終止水解引物及填補(bǔ)空隙:岡崎片段合成后,由PolI水解去除RNA引物,并填補(bǔ)留下的空隙連接酶連接岡崎片段形成完整雙鏈DNA分子:空隙填補(bǔ)后,DNA片段與片段之間的一個(gè)缺口由DNA連接酶催化連接,從而產(chǎn)生完整的雙鏈DNA分子13、端粒酶的生物學(xué)意義(1)細(xì)胞水平的老化,可能與端粒酶的活性下降有關(guān)。(2)基因突變、腫瘤形成,端粒也可表現(xiàn)缺失,融合或序列縮短等現(xiàn)象。(3)研究端粒的變化是目前腫瘤研究中的一個(gè)新領(lǐng)域。14、DNA重組的意義1、迅速增加遺傳群體的多樣性2、與DNA修復(fù)有關(guān)3、可調(diào)節(jié)某些基因的表達(dá)15、轉(zhuǎn)座子轉(zhuǎn)座的特征☆轉(zhuǎn)座不依賴靶序列的同源性☆轉(zhuǎn)座后靶序列重復(fù)☆轉(zhuǎn)座子的插入具有專一性☆轉(zhuǎn)座具有排他性☆轉(zhuǎn)座具有極性效應(yīng)☆活化臨近的沉默基因☆區(qū)域性優(yōu)化16、轉(zhuǎn)座子的應(yīng)用1、用于難以篩選的基因的轉(zhuǎn)移2、作為基因定位的標(biāo)記3、篩選插入突變4、構(gòu)建特殊菌株5、克隆難以進(jìn)行表型鑒定的基因17、RNA轉(zhuǎn)錄的一般特點(diǎn)☆具有選擇性,即只對(duì)基因組或DNA分子中的編碼區(qū)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄☆開始于特定位點(diǎn),并在特定的終點(diǎn)處終止☆催化轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的是RNA聚合酶☆被轉(zhuǎn)錄的DNA雙鏈中只有其中一股模板鏈(反義鏈)作為RNA合成的模板,進(jìn)行“不對(duì)稱”轉(zhuǎn)錄☆啟動(dòng)子控制起始☆底物為4種5’☆合成方向5′→3′18、原核生物啟動(dòng)子的特征結(jié)構(gòu)典型:都含保守的識(shí)別序列(R)、結(jié)合序列(B)、起始位點(diǎn)(I)以及間隔長度;直接和聚合酶相結(jié)合;常和操縱子相鄰;常位于基因的上游;19、真核RNA聚合酶的一般特點(diǎn)結(jié)構(gòu)非常復(fù)雜結(jié)構(gòu)具有相似性3類RNA聚合酶都有幾種共同的亞基:根據(jù)其結(jié)構(gòu)與功能,可以分為核心亞基、共同亞基和非必須亞基。20、原核生物和真核生物的rRNA基因差異原核生物無5.8SrRNA5SrRNA編碼基因與其它rRNA編碼基因關(guān)系不同重復(fù)次數(shù)不同21、帽子結(jié)構(gòu)的功能(1)對(duì)翻譯起識(shí)別作用------為核糖體識(shí)別RNA提供信號(hào),Cap0的全部都是識(shí)別的重要信號(hào),Cap1,2的甲基化能增進(jìn)識(shí)別(2)增加mRNA的穩(wěn)定性,使5’(3)有助于mRNA越過核膜,進(jìn)入胞質(zhì)22、poly(A)的功能(1)可能與核質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)有關(guān)(2)增強(qiáng)mRNA穩(wěn)定性(3)增強(qiáng)可翻譯能力23、剪接機(jī)制——剪接體套索模型●第一次轉(zhuǎn)酯,內(nèi)含子形成套索●第二次轉(zhuǎn)酯,外顯子1、2連接、套索狀內(nèi)含子釋放●拼接體解體與套索降解24、翻譯(蛋白質(zhì)的生物合成):以氨基酸為原料以mRNA為模板以tRNA為運(yùn)載工具以核糖體為合成場所起始、延長、終止各階段蛋白因子參與合成后加工成為有活性蛋白質(zhì)25、簡并性的生物學(xué)意義?
可以降低由于遺傳密碼突變造成的災(zāi)難性后果。可以使DNA上的堿基組成有較大的變化余地,而仍然保持多肽上氨基酸序列不變。26、tRNA的結(jié)構(gòu)與功能1、tRNA的一級(jí)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)含10~20%稀有堿基,如DHU3′末端為—CCA-OH5′末端大多數(shù)為G具有TψC2、tRNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)——三葉草形氨基酸臂DHU環(huán)反密碼環(huán)額外環(huán)TΨC環(huán)3、tRNA的三級(jí)結(jié)構(gòu)——倒L型27、肽鏈合成延長包括以下三步:進(jìn)位:新氨酰tRNA識(shí)別核糖體內(nèi)的mRNA,進(jìn)入A位轉(zhuǎn)肽:P位的氨基酸轉(zhuǎn)到A位新氨基酸末端,形成肽鍵移位:核糖體向3’肽鏈延長是以上3步在核糖體上連續(xù)性循環(huán)式進(jìn)行,每次循環(huán)增加一個(gè)氨基酸,又稱為核糖體循環(huán)(ribosomalcycle)。28、原核生物基因表達(dá)調(diào)控的特點(diǎn)主要是短期調(diào)節(jié)主要是轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)節(jié)以操作子為單位,存在正、負(fù)調(diào)控,但以負(fù)調(diào)控為主,調(diào)節(jié)因子的活性主要受變構(gòu)效應(yīng)調(diào)節(jié)還存在其它調(diào)控機(jī)制29、Lac操縱子調(diào)控機(jī)制總結(jié)當(dāng)?shù)推咸烟嵌呷樘菚r(shí),部分乳糖在β-半乳糖苷酶作用下轉(zhuǎn)變?yōu)楫惾樘?,異乳糖可作為誘導(dǎo)物和有活性阻遏蛋白結(jié)合,使阻遏蛋白失活,不能結(jié)合O,RNA聚合酶順利結(jié)合啟動(dòng)子,起始轉(zhuǎn)錄利用乳糖的酶;同時(shí),由于沒有葡萄糖存在,胞內(nèi)cAMP濃度高,大量的cAMP-CAP復(fù)合物結(jié)合在CAP位點(diǎn),極大的促進(jìn)下游結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄效率,β-半乳糖苷酶、通透酶和轉(zhuǎn)乙酰酶的含量高,這時(shí)候,細(xì)菌就分解乳糖為葡萄糖和半乳糖,葡萄糖直接作為碳源,半乳糖利用gal操縱子調(diào)控的酶轉(zhuǎn)變?yōu)槠咸烟?,由于阻遏物不斷合成,?dāng)乳糖被消耗完畢后,有活性的阻遏蛋白可重新建立阻遏狀態(tài),酶合成被抑制,經(jīng)過一段延遲期后,逐漸被稀釋。當(dāng)高葡萄糖和高乳糖時(shí),乳糖可作為誘導(dǎo)物和有活性阻遏蛋白結(jié)合,使阻遏蛋白失活,不能結(jié)合O,RNA聚合酶可順利結(jié)合P起始轉(zhuǎn)錄分解利
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