《人工種子》課件

第八章人工種子人工種子概述繁殖體種類(lèi)及其培養(yǎng)技術(shù)人工種子制備人工種子研究及應(yīng)用前景1精選ppt第八章人工種子人工種子概述繁殖體種類(lèi)及其培養(yǎng)技術(shù)人工種第一節(jié)人工種子概述人工種子(artificialseeds)亦稱(chēng)體細(xì)胞種子。

早期的人工種子概念是：體細(xì)胞胚經(jīng)過(guò)人工種皮包被后而形成的體細(xì)胞種子。任何一種經(jīng)人工種皮包被或裸露的，具有形成完整植株能力的繁殖體均可稱(chēng)之為人工種子。2精選ppt第一節(jié)人工種子概述人工種子(artificialsee根據(jù)包被的程度可將人工種子分為三大類(lèi)：

裸露的或休眠的繁殖體如微鱗莖，微塊莖等。它們?cè)诓患影坏那闆r下也具有較高的成株率。人工種皮包被的繁殖體一些體細(xì)胞胚、原球莖等不能過(guò)度干燥，但只需要用人工種皮包被即可維持良好的發(fā)芽狀態(tài)，如胡蘿卜體細(xì)胞胚。水凝膠包埋再包被人工種皮的繁殖體大多數(shù)體細(xì)胞胚、不定芽、莖尖等均需要先包埋在半液態(tài)凝膠中，再經(jīng)人工種皮包裹才能避免失水，從而維持良好的發(fā)芽能力。根據(jù)繁殖體的類(lèi)型可分為兩類(lèi)：一類(lèi)是體細(xì)胞胚人工種子；另一類(lèi)是非體細(xì)胞胚人工種子據(jù)報(bào)道，目前已對(duì)26個(gè)科，36個(gè)屬的植物進(jìn)行了人工種子研究。其研究范圍顯示出兩大特點(diǎn)：一是重要經(jīng)濟(jì)作物和糧食作物的人工種子報(bào)道日益增多；二是以微器官為繁殖體的報(bào)道日益增多，其中包括微芽、微枝、原球莖、小鱗莖、小塊莖等。3精選ppt根據(jù)包被的程度可將人工種子分為三大類(lèi)：根據(jù)繁殖體的類(lèi)型可在無(wú)性繁殖植物中，有可能建立一種高效快速的繁殖方法，它既能保持原有品種的種性，又可以使之具有實(shí)生苗的復(fù)壯效應(yīng)；

可以對(duì)優(yōu)異雜種種子不通過(guò)有性制種而快速獲得大量種子，特別是對(duì)于那些制種困難的植物更具有主要的適用意義；

對(duì)于一些不能正常產(chǎn)生種子的特殊植物材料如三倍體、非整倍體、工程植物等，有可能通過(guò)人工種子在短期內(nèi)加大繁殖應(yīng)用；與田間制種相比，可以節(jié)省制種用地，且不受季節(jié)限制，可以實(shí)現(xiàn)工廠(chǎng)化生產(chǎn)，同時(shí)還避免了種子攜帶病原菌的危險(xiǎn)；與利用試管苗相比，可以避免移栽困難，且可以實(shí)現(xiàn)機(jī)械化操作，同時(shí)還便于儲(chǔ)藏和運(yùn)輸。4精選ppt在無(wú)性繁殖植物中，有可能建立一種高效快速的繁殖方法，它既能保馬鈴薯試管塊莖人工種子試管塊莖人工種子田間種植5精選ppt馬鈴薯試管塊莖人工種子試管塊莖人工種子田間種植5精選ppt第二節(jié)繁殖體的種類(lèi)及其培養(yǎng)技術(shù)

繁殖體是人工種子的主體，早期的研究認(rèn)為，體細(xì)胞胚是人工種子制備的最佳繁殖體。以體細(xì)胞胚作為繁殖體并不適用于所有的植物：遺傳變異更大；許多植物的體細(xì)胞胚誘導(dǎo)十分困難。微器官作為人工種子繁殖體的報(bào)道日益增多。1990年，有關(guān)人工種子的報(bào)道以體細(xì)胞胚為繁殖體的占63.6%，以芽為繁殖體的報(bào)道占36.4%；1994年，以體細(xì)胞胚為繁殖體的報(bào)道則只占48.8%，以芽為繁殖體的占38.1%，另有13.1%為其它類(lèi)型的繁殖體。

6精選ppt第二節(jié)繁殖體的種類(lèi)及其培養(yǎng)技術(shù)繁殖體是人工種子的主體，早不同類(lèi)型繁殖體比較繁殖體生產(chǎn)7精選ppt不同類(lèi)型繁殖體比較繁殖體生產(chǎn)7精選ppt一．不同繁殖體的比較體細(xì)胞胚形成需要經(jīng)過(guò)至少兩個(gè)階段：第一階段，在含高生長(zhǎng)素濃度的培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)培養(yǎng)胚性細(xì)胞；第二階段，在較低生長(zhǎng)素或無(wú)生長(zhǎng)素的培養(yǎng)基中形成體細(xì)胞胚。8精選ppt一．不同繁殖體的比較體細(xì)胞胚8精選ppt微芽發(fā)生一般只需一個(gè)培養(yǎng)程序，但有時(shí)為了增加繁殖體的數(shù)量，也需進(jìn)行一定次數(shù)的繼代。

微型變態(tài)器官塊莖、塊根以及鱗莖、球莖類(lèi)的繁殖體產(chǎn)生可能需要經(jīng)過(guò)不同的誘導(dǎo)程序。9精選ppt微芽9精選ppt植物種類(lèi)繁殖體類(lèi)型培養(yǎng)程序及培養(yǎng)天數(shù)培養(yǎng)基及蔗糖濃度激素濃度（mg./L）其它成分(mg/L)2,4-DNAAZeatinBAKin體細(xì)胞胚StepI,21MS,3%2.01.01.0

LH(100)StepII,21MS,3%0.1

1.00.5

LH(100),谷氨酰胺(500)微芽21MS,3%

0.05-0.2

5.0

桉樹(shù)體細(xì)胞胚StepI,20B5,4-5%2.0-4.0

1.0

StepII,28-56改良H,3%

0.2-0.5

0.5

ADE(40)微芽25改良H,3%

0.2-0.5

0.5-2.0

ADE(40)茶樹(shù)體細(xì)胞胚StepI,28MS,4%0.5-1.0

1.00.5

StepII,30MS,2-3%

1.00.5

GA(0.3),IAA(0.3-0.5)不定芽25MS,2-3%

1.01.0

IAA(0.3)華腺萼木體細(xì)胞胚StepI,25MS,3%1.00.2

1.0

StepII,20MS,0.2-0.3%

0.2

1.0

不定芽25MS,2-3%

0.01

0.2

IAA(0.3),GA(0.1)蘭花原球莖25MS,2%

0.1

椰子汁(10%)部分植物繁殖體誘導(dǎo)培養(yǎng)條件（引自陳正華等，1998）芥菜型油菜10精選ppt植物繁殖體類(lèi)型培養(yǎng)程序及培養(yǎng)天數(shù)培養(yǎng)基及蔗糖濃度激素濃度（

不同繁殖體成苗所需時(shí)間及成株率（引自陳正華等，1998）植物繁殖體類(lèi)型正常株數(shù)百分比非正常株數(shù)百分比成苗所需天數(shù)茶樹(shù)體細(xì)胞胚1717838310－60不定芽7777131320－25華腺萼木體細(xì)胞胚4753424740－60不定芽4669334720－2511精選ppt

植物繁殖體類(lèi)型正常株數(shù)百分比非正常株數(shù)百分比成苗所需天二.繁殖體培養(yǎng)技術(shù)體細(xì)胞胚培養(yǎng)微型變態(tài)器官培養(yǎng)微芽繁殖體培養(yǎng)12精選ppt二.繁殖體培養(yǎng)技術(shù)體細(xì)胞胚培養(yǎng)微型變態(tài)器官培養(yǎng)微芽繁殖體培體細(xì)胞胚規(guī)?；a(chǎn)作為人工種子繁殖體的體細(xì)胞胚，其基本要求是要具有發(fā)育上的同步性，還必需滿(mǎn)足如下標(biāo)準(zhǔn)特征：

其一，形態(tài)正常，具有完整的胚結(jié)構(gòu)；其二，與母體植物的基因型基本相同，特別是在重要經(jīng)濟(jì)性狀和農(nóng)藝性狀上沒(méi)有變異；其三，具有較好的成熟性，能耐一定程度的脫水。

13精選ppt體細(xì)胞胚規(guī)?；a(chǎn)作為人工種子繁殖體的體細(xì)胞胚，其基本要求是其次，作為實(shí)用化的體細(xì)胞胚種子還必需滿(mǎn)足一定的數(shù)量需求，規(guī)?；a(chǎn)是其基本前提。

Choi等（2002）建立了人參體細(xì)胞胚大規(guī)模液體培養(yǎng)體系，每500ml容器可生產(chǎn)體細(xì)胞胚12,000個(gè)。在體細(xì)胞發(fā)育至子葉期早期，將其轉(zhuǎn)入二分之一MS無(wú)機(jī)鹽附加9%蔗糖濃度的培養(yǎng)基中誘導(dǎo)加入休眠，獲得了良好效果。其它一些植物如芹菜、苜宿等體細(xì)胞胚的批量化培養(yǎng)也取得類(lèi)似結(jié)果。14精選ppt其次，作為實(shí)用化的體細(xì)胞胚種子還必需滿(mǎn)足一定的數(shù)量需求，規(guī)模微型變態(tài)器官繁殖體的培養(yǎng)光照：能夠形成變態(tài)器官的植物常常具有光照周期上的雙重需要，光照強(qiáng)度亦是影響變態(tài)器官形成的重要因素之一。溫度：離體培養(yǎng)誘導(dǎo)變態(tài)器官形成時(shí)，必需充分考慮自然條件下該植物變態(tài)器官產(chǎn)生所需要的溫度條件。培養(yǎng)基蔗糖濃度：現(xiàn)有研究資料顯示，培養(yǎng)條件下的變態(tài)器官形成與培養(yǎng)基的蔗糖濃度有關(guān)，較高的蔗糖濃度對(duì)于一些植物的微型變態(tài)器官形成似乎是必要條件。激素：植物變態(tài)器官的形成常常發(fā)生在內(nèi)源激素發(fā)生某種變化以后，外源激素的調(diào)控主要通過(guò)內(nèi)源激素的變化而起作用，而不同培養(yǎng)條件下的內(nèi)源激素水平又具有很大差異。15精選ppt微型變態(tài)器官繁殖體的培養(yǎng)光照：能夠形成變態(tài)器官的植物常常具芽繁殖體的培養(yǎng)大多數(shù)情況下，微芽、不定芽的培養(yǎng)往往直接從外植體上直接誘導(dǎo)形成，培養(yǎng)方式簡(jiǎn)單，且勿需高濃度的激素處理，因此所產(chǎn)生的繁殖體基本保持了原有植物的品種特性。根據(jù)植物類(lèi)型不同，可選取不同的外植體類(lèi)型作為芽產(chǎn)生的來(lái)源，如非洲紫羅蘭一般選用葉片為外植體，誘導(dǎo)不定芽作為微繁殖體；榆樹(shù)類(lèi)植物則可選根作為外植體產(chǎn)生微芽；石竹類(lèi)花卉可以莖尖為外植體培養(yǎng)側(cè)芽作為繁殖體。16精選ppt芽繁殖體的培養(yǎng)大多數(shù)情況下，微芽、不定芽的培養(yǎng)往往直接從外植第三節(jié)人工種子包被繁殖體預(yù)處理繁殖體包埋人工種皮裝配17精選ppt第三節(jié)人工種子包被繁殖體預(yù)處理繁殖體包埋人工種皮裝配17一．繁殖體的處理體細(xì)胞胚形成后，需要在無(wú)激素培養(yǎng)基上經(jīng)過(guò)一定階段的后熟培養(yǎng)，然后進(jìn)行脫水干燥，再將畸形胚選出后才能進(jìn)行包埋。在脫水之前用ABA處理體細(xì)胞胚強(qiáng)迫其進(jìn)入休眠，更有利于長(zhǎng)期貯存。微型變態(tài)器官繁殖體不能過(guò)度脫水，但亦需要適當(dāng)干燥，除去表面及多余的水分，同時(shí)要進(jìn)行表面消毒處理以繁殖包被后的感染。為了延長(zhǎng)貯存時(shí)間，亦需根據(jù)使用季節(jié)進(jìn)行適當(dāng)?shù)男菝咛幚?。芽為繁殖體的類(lèi)型，則不能進(jìn)行脫水處理，但必需篩選生長(zhǎng)健壯、組織充實(shí)的芽進(jìn)行包埋。18精選ppt一．繁殖體的處理體細(xì)胞胚形成后，需要在無(wú)激素培養(yǎng)基上經(jīng)過(guò)一定二．繁殖體的包埋包埋介質(zhì)的要求：首先必需是對(duì)繁殖體及其它生物是無(wú)毒的，并具有一定的緩沖強(qiáng)度，以保證繁殖體在生產(chǎn)、運(yùn)輸和種植操作中的安全。同時(shí)，它最好能夠提供類(lèi)似于胚乳的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，以供繁殖體發(fā)芽的需要。此外由于繁殖體的含水量較高，貯存中極易受到微生物感染危害，因此介質(zhì)中還應(yīng)含有適當(dāng)?shù)臍⒕鷦?/p>

常用的兩種人工胚乳液配方：

MS（或SH、White）培養(yǎng)基加入1.5%的馬鈴薯淀粉水解物；SH（0.5×）培養(yǎng)基加入1.5%的麥芽糖。

19精選ppt二．繁殖體的包埋包埋介質(zhì)的要求：常用的兩種人工胚乳液配方：

幾種植物人工種子的附加成分及成苗率（引自陳正華等，1998）植物及繁殖體海藻酸鈉濃度(％)培養(yǎng)基及蔗糖濃度激素及其濃度（mg/L）成苗率（％）四會(huì)貢柑體細(xì)胞胚3MT，4%GA(1),IBA(0.25)30-70（無(wú)菌）唐菖蒲小球莖4-5MS，1.5%IBA(0.5),GA(0.1)93（無(wú)菌）熱帶蘭花球莖4改良MSNAA(1.0),BA(0.2)95（無(wú)菌）赤桉微芽4改良HNAA(0.2-0.5)80-90（無(wú)菌）小麥體細(xì)胞胚61/4MSGA(1),防腐劑(200),IAA(0.2),活性炭45（有菌）

20精選ppt

植物及繁殖體海藻酸鈉培養(yǎng)基及蔗糖濃度激素及其濃度（mg/以海藻酸鈉作包埋劑的操作程序是：在配制好的海藻酸鈉溶液中，按一定比例加入繁殖體并混勻。將其逐滴滴入2.0%-2.5%的CaCl2溶液中，經(jīng)20－30min.的離子交換作用即形成含有繁殖體具有一定剛性的人工種子，用無(wú)菌水漂洗20min.以終止反應(yīng)。

圖5.5多頭自動(dòng)人工種子包被系統(tǒng)示意圖。1.雙活塞泵；2.滅菌器；3.加濕器；4.振動(dòng)器；5.脈動(dòng)腔膜；6.同軸溝；7.脈動(dòng)腔；8.噴碟；9.旁路系統(tǒng)；10.反應(yīng)池；11.攪拌子；12.硬化溶液及其輸入。（引自Brandenberger和Widmer，1998）。

21精選ppt以海藻酸鈉作包埋劑的操作程序是：圖5.5多頭自動(dòng)人工種子bac番木瓜體細(xì)胞胚人工種子（Castillo等，1998）；b.馬鈴薯微芽人工種子（Patel等，2000）；c.人參體細(xì)胞種子（Choi和Jeong，2002）。

22精選pptbac番木瓜體細(xì)胞胚人工種子（Castillo等，1998）三．人工種皮的裝配理想的人工種皮應(yīng)該是：具有一定的封閉性以保證人工胚乳的各種成分不易流失，同時(shí)又具有良好的透氣性。具有一定的堅(jiān)硬度，以加強(qiáng)人工種子的耐儲(chǔ)運(yùn)性和適于機(jī)械化操作。無(wú)毒無(wú)害，能保證繁殖體順利穿透發(fā)芽。配制簡(jiǎn)單易行，成本低。

23精選ppt三．人工種皮的裝配理想的人工種皮應(yīng)該是：23精選ppt常用的人工種皮材料

早期使用Elvax4260涂膜，價(jià)格昂貴，操作復(fù)雜、包裹效果不盡人意。新近試驗(yàn)使用的二氧化硅化合物材料包括疏水的Tullanox和微親水的Cab-O-Sil，二者均可以粉末狀包裹在人工種子膠囊外層，操作時(shí)只需將膠囊在上述材料中滾動(dòng)即可完成包被過(guò)程，操作簡(jiǎn)單易行，大量生產(chǎn)還可以機(jī)械化操作。

最近還報(bào)道一種硅酮種衣，它不僅可以抗真菌，而且可滲入水蒸氣和氧氣，這些材料均還處于試驗(yàn)之中。

24精選ppt常用的人工種皮材料24精選ppt第四節(jié)人工種子實(shí)用化的策略陳正華等（1998）對(duì)人工種子的應(yīng)用提出了如下策略：微器官人工種子可能最先用于無(wú)性繁殖植物微器官人工種子可用于天然種子繁殖后代群體變異大的植物以體細(xì)胞胚為繁殖體應(yīng)用的可能性及需要注意的問(wèn)題

25精選ppt第四節(jié)人工種子實(shí)用化的策略陳正華等（1998）對(duì)人工種子一．微器官人工種子可能首先

用于無(wú)性繁殖植物微器官如微芽，試管塊莖、試管鱗莖等作為繁殖體時(shí)，成苗率高且出苗整齊一致，具有田間應(yīng)用的可行性，同時(shí),離體培養(yǎng)的繁殖體可完全去除病原物，因而已越來(lái)越多地用于無(wú)性繁殖種苗生產(chǎn)中。傳統(tǒng)上的試管苗由于體積大、對(duì)攜帶儲(chǔ)運(yùn)條件要求苛刻因而限制了使用規(guī)模。如果利用人工種子將有可能首先實(shí)現(xiàn)無(wú)性繁殖植物種子生產(chǎn)的徹底革命。以微芽為繁殖體的人工種子技術(shù)，有可能首先在無(wú)性繁殖的果樹(shù)、花卉、林木等植物中得以應(yīng)用。26精選ppt一．微器官人工種子可能首先

用于無(wú)性繁殖植物微器官如微芽，試馬鈴薯人工種子應(yīng)用27精選ppt馬鈴薯人工種子應(yīng)用27精選ppt二．微器官人工種子可用于天然種子

繁殖后代群體變異大的植物

有些植物如桉樹(shù)，雖然能夠用天然種子繁殖，但種子繁殖的植株群體變異大，樹(shù)體不整齊。不定芽試管苗繁殖技術(shù)已在生產(chǎn)上顯示了樹(shù)體整齊的優(yōu)越性，目前以微芽為繁殖體的人工種子技術(shù)已經(jīng)建立。桉樹(shù)人工種子在土壤中的成苗率已可達(dá)80%以上，且樹(shù)體十分整齊。28精選ppt二．微器官人工種子可用于天然種子

繁殖后代群體變異大的植物三．以體細(xì)胞胚為繁殖體應(yīng)用的

可能性及局限性花或果實(shí)為經(jīng)濟(jì)產(chǎn)品的多年生植物如果樹(shù)等，有可能出現(xiàn)較長(zhǎng)的幼年期，使開(kāi)花結(jié)果推遲，且還可能出現(xiàn)果實(shí)不整齊的現(xiàn)象。以營(yíng)養(yǎng)器官或木材為產(chǎn)品的植物中，以及在以改善生態(tài)環(huán)境、保護(hù)瀕危樹(shù)種或?qū)π誀钜恢滦砸蟛粐?yán)格的植物中，體細(xì)胞胚繁殖體則具有其它繁殖體不可替代的優(yōu)越性。

29精選ppt三．以體細(xì)胞胚為繁殖體應(yīng)用的

可能性及局限性花或果實(shí)為經(jīng)濟(jì)第八章人工種子人工種子概述繁殖體種類(lèi)及其培養(yǎng)技術(shù)人工種子制備人工種子研究及應(yīng)用前景30精選ppt第八章人工種子人工種子概述繁殖體種類(lèi)及其培養(yǎng)技術(shù)人工種第一節(jié)人工種子概述人工種子(artificialseeds)亦稱(chēng)體細(xì)胞種子。

早期的人工種子概念是：體細(xì)胞胚經(jīng)過(guò)人工種皮包被后而形成的體細(xì)胞種子。任何一種經(jīng)人工種皮包被或裸露的，具有形成完整植株能力的繁殖體均可稱(chēng)之為人工種子。31精選ppt第一節(jié)人工種子概述人工種子(artificialsee根據(jù)包被的程度可將人工種子分為三大類(lèi)：

裸露的或休眠的繁殖體如微鱗莖，微塊莖等。它們?cè)诓患影坏那闆r下也具有較高的成株率。人工種皮包被的繁殖體一些體細(xì)胞胚、原球莖等不能過(guò)度干燥，但只需要用人工種皮包被即可維持良好的發(fā)芽狀態(tài)，如胡蘿卜體細(xì)胞胚。水凝膠包埋再包被人工種皮的繁殖體大多數(shù)體細(xì)胞胚、不定芽、莖尖等均需要先包埋在半液態(tài)凝膠中，再經(jīng)人工種皮包裹才能避免失水，從而維持良好的發(fā)芽能力。根據(jù)繁殖體的類(lèi)型可分為兩類(lèi)：一類(lèi)是體細(xì)胞胚人工種子；另一類(lèi)是非體細(xì)胞胚人工種子據(jù)報(bào)道，目前已對(duì)26個(gè)科，36個(gè)屬的植物進(jìn)行了人工種子研究。其研究范圍顯示出兩大特點(diǎn)：一是重要經(jīng)濟(jì)作物和糧食作物的人工種子報(bào)道日益增多；二是以微器官為繁殖體的報(bào)道日益增多，其中包括微芽、微枝、原球莖、小鱗莖、小塊莖等。32精選ppt根據(jù)包被的程度可將人工種子分為三大類(lèi)：根據(jù)繁殖體的類(lèi)型可在無(wú)性繁殖植物中，有可能建立一種高效快速的繁殖方法，它既能保持原有品種的種性，又可以使之具有實(shí)生苗的復(fù)壯效應(yīng)；

可以對(duì)優(yōu)異雜種種子不通過(guò)有性制種而快速獲得大量種子，特別是對(duì)于那些制種困難的植物更具有主要的適用意義；

對(duì)于一些不能正常產(chǎn)生種子的特殊植物材料如三倍體、非整倍體、工程植物等，有可能通過(guò)人工種子在短期內(nèi)加大繁殖應(yīng)用；與田間制種相比，可以節(jié)省制種用地，且不受季節(jié)限制，可以實(shí)現(xiàn)工廠(chǎng)化生產(chǎn)，同時(shí)還避免了種子攜帶病原菌的危險(xiǎn)；與利用試管苗相比，可以避免移栽困難，且可以實(shí)現(xiàn)機(jī)械化操作，同時(shí)還便于儲(chǔ)藏和運(yùn)輸。33精選ppt在無(wú)性繁殖植物中，有可能建立一種高效快速的繁殖方法，它既能保馬鈴薯試管塊莖人工種子試管塊莖人工種子田間種植34精選ppt馬鈴薯試管塊莖人工種子試管塊莖人工種子田間種植5精選ppt第二節(jié)繁殖體的種類(lèi)及其培養(yǎng)技術(shù)

繁殖體是人工種子的主體，早期的研究認(rèn)為，體細(xì)胞胚是人工種子制備的最佳繁殖體。以體細(xì)胞胚作為繁殖體并不適用于所有的植物：遺傳變異更大；許多植物的體細(xì)胞胚誘導(dǎo)十分困難。微器官作為人工種子繁殖體的報(bào)道日益增多。1990年，有關(guān)人工種子的報(bào)道以體細(xì)胞胚為繁殖體的占63.6%，以芽為繁殖體的報(bào)道占36.4%；1994年，以體細(xì)胞胚為繁殖體的報(bào)道則只占48.8%，以芽為繁殖體的占38.1%，另有13.1%為其它類(lèi)型的繁殖體。

35精選ppt第二節(jié)繁殖體的種類(lèi)及其培養(yǎng)技術(shù)繁殖體是人工種子的主體，早不同類(lèi)型繁殖體比較繁殖體生產(chǎn)36精選ppt不同類(lèi)型繁殖體比較繁殖體生產(chǎn)7精選ppt一．不同繁殖體的比較體細(xì)胞胚形成需要經(jīng)過(guò)至少兩個(gè)階段：第一階段，在含高生長(zhǎng)素濃度的培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)培養(yǎng)胚性細(xì)胞；第二階段，在較低生長(zhǎng)素或無(wú)生長(zhǎng)素的培養(yǎng)基中形成體細(xì)胞胚。37精選ppt一．不同繁殖體的比較體細(xì)胞胚8精選ppt微芽發(fā)生一般只需一個(gè)培養(yǎng)程序，但有時(shí)為了增加繁殖體的數(shù)量，也需進(jìn)行一定次數(shù)的繼代。

微型變態(tài)器官塊莖、塊根以及鱗莖、球莖類(lèi)的繁殖體產(chǎn)生可能需要經(jīng)過(guò)不同的誘導(dǎo)程序。38精選ppt微芽9精選ppt植物種類(lèi)繁殖體類(lèi)型培養(yǎng)程序及培養(yǎng)天數(shù)培養(yǎng)基及蔗糖濃度激素濃度（mg./L）其它成分(mg/L)2,4-DNAAZeatinBAKin體細(xì)胞胚StepI,21MS,3%2.01.01.0

LH(100)StepII,21MS,3%0.1

1.00.5

LH(100),谷氨酰胺(500)微芽21MS,3%

0.05-0.2

5.0

桉樹(shù)體細(xì)胞胚StepI,20B5,4-5%2.0-4.0

1.0

StepII,28-56改良H,3%

0.2-0.5

0.5

ADE(40)微芽25改良H,3%

0.2-0.5

0.5-2.0

ADE(40)茶樹(shù)體細(xì)胞胚StepI,28MS,4%0.5-1.0

1.00.5

StepII,30MS,2-3%

1.00.5

GA(0.3),IAA(0.3-0.5)不定芽25MS,2-3%

1.01.0

IAA(0.3)華腺萼木體細(xì)胞胚StepI,25MS,3%1.00.2

1.0

StepII,20MS,0.2-0.3%

0.2

1.0

不定芽25MS,2-3%

0.01

0.2

IAA(0.3),GA(0.1)蘭花原球莖25MS,2%

0.1

椰子汁(10%)部分植物繁殖體誘導(dǎo)培養(yǎng)條件（引自陳正華等，1998）芥菜型油菜39精選ppt植物繁殖體類(lèi)型培養(yǎng)程序及培養(yǎng)天數(shù)培養(yǎng)基及蔗糖濃度激素濃度（

不同繁殖體成苗所需時(shí)間及成株率（引自陳正華等，1998）植物繁殖體類(lèi)型正常株數(shù)百分比非正常株數(shù)百分比成苗所需天數(shù)茶樹(shù)體細(xì)胞胚1717838310－60不定芽7777131320－25華腺萼木體細(xì)胞胚4753424740－60不定芽4669334720－2540精選ppt

植物繁殖體類(lèi)型正常株數(shù)百分比非正常株數(shù)百分比成苗所需天二.繁殖體培養(yǎng)技術(shù)體細(xì)胞胚培養(yǎng)微型變態(tài)器官培養(yǎng)微芽繁殖體培養(yǎng)41精選ppt二.繁殖體培養(yǎng)技術(shù)體細(xì)胞胚培養(yǎng)微型變態(tài)器官培養(yǎng)微芽繁殖體培體細(xì)胞胚規(guī)?；a(chǎn)作為人工種子繁殖體的體細(xì)胞胚，其基本要求是要具有發(fā)育上的同步性，還必需滿(mǎn)足如下標(biāo)準(zhǔn)特征：

其一，形態(tài)正常，具有完整的胚結(jié)構(gòu)；其二，與母體植物的基因型基本相同，特別是在重要經(jīng)濟(jì)性狀和農(nóng)藝性狀上沒(méi)有變異；其三，具有較好的成熟性，能耐一定程度的脫水。

42精選ppt體細(xì)胞胚規(guī)?；a(chǎn)作為人工種子繁殖體的體細(xì)胞胚，其基本要求是其次，作為實(shí)用化的體細(xì)胞胚種子還必需滿(mǎn)足一定的數(shù)量需求，規(guī)?；a(chǎn)是其基本前提。

Choi等（2002）建立了人參體細(xì)胞胚大規(guī)模液體培養(yǎng)體系，每500ml容器可生產(chǎn)體細(xì)胞胚12,000個(gè)。在體細(xì)胞發(fā)育至子葉期早期，將其轉(zhuǎn)入二分之一MS無(wú)機(jī)鹽附加9%蔗糖濃度的培養(yǎng)基中誘導(dǎo)加入休眠，獲得了良好效果。其它一些植物如芹菜、苜宿等體細(xì)胞胚的批量化培養(yǎng)也取得類(lèi)似結(jié)果。43精選ppt其次，作為實(shí)用化的體細(xì)胞胚種子還必需滿(mǎn)足一定的數(shù)量需求，規(guī)模微型變態(tài)器官繁殖體的培養(yǎng)光照：能夠形成變態(tài)器官的植物常常具有光照周期上的雙重需要，光照強(qiáng)度亦是影響變態(tài)器官形成的重要因素之一。溫度：離體培養(yǎng)誘導(dǎo)變態(tài)器官形成時(shí)，必需充分考慮自然條件下該植物變態(tài)器官產(chǎn)生所需要的溫度條件。培養(yǎng)基蔗糖濃度：現(xiàn)有研究資料顯示，培養(yǎng)條件下的變態(tài)器官形成與培養(yǎng)基的蔗糖濃度有關(guān)，較高的蔗糖濃度對(duì)于一些植物的微型變態(tài)器官形成似乎是必要條件。激素：植物變態(tài)器官的形成常常發(fā)生在內(nèi)源激素發(fā)生某種變化以后，外源激素的調(diào)控主要通過(guò)內(nèi)源激素的變化而起作用，而不同培養(yǎng)條件下的內(nèi)源激素水平又具有很大差異。44精選ppt微型變態(tài)器官繁殖體的培養(yǎng)光照：能夠形成變態(tài)器官的植物常常具芽繁殖體的培養(yǎng)大多數(shù)情況下，微芽、不定芽的培養(yǎng)往往直接從外植體上直接誘導(dǎo)形成，培養(yǎng)方式簡(jiǎn)單，且勿需高濃度的激素處理，因此所產(chǎn)生的繁殖體基本保持了原有植物的品種特性。根據(jù)植物類(lèi)型不同，可選取不同的外植體類(lèi)型作為芽產(chǎn)生的來(lái)源，如非洲紫羅蘭一般選用葉片為外植體，誘導(dǎo)不定芽作為微繁殖體；榆樹(shù)類(lèi)植物則可選根作為外植體產(chǎn)生微芽；石竹類(lèi)花卉可以莖尖為外植體培養(yǎng)側(cè)芽作為繁殖體。45精選ppt芽繁殖體的培養(yǎng)大多數(shù)情況下，微芽、不定芽的培養(yǎng)往往直接從外植第三節(jié)人工種子包被繁殖體預(yù)處理繁殖體包埋人工種皮裝配46精選ppt第三節(jié)人工種子包被繁殖體預(yù)處理繁殖體包埋人工種皮裝配17一．繁殖體的處理體細(xì)胞胚形成后，需要在無(wú)激素培養(yǎng)基上經(jīng)過(guò)一定階段的后熟培養(yǎng)，然后進(jìn)行脫水干燥，再將畸形胚選出后才能進(jìn)行包埋。在脫水之前用ABA處理體細(xì)胞胚強(qiáng)迫其進(jìn)入休眠，更有利于長(zhǎng)期貯存。微型變態(tài)器官繁殖體不能過(guò)度脫水，但亦需要適當(dāng)干燥，除去表面及多余的水分，同時(shí)要進(jìn)行表面消毒處理以繁殖包被后的感染。為了延長(zhǎng)貯存時(shí)間，亦需根據(jù)使用季節(jié)進(jìn)行適當(dāng)?shù)男菝咛幚?。芽為繁殖體的類(lèi)型，則不能進(jìn)行脫水處理，但必需篩選生長(zhǎng)健壯、組織充實(shí)的芽進(jìn)行包埋。47精選ppt一．繁殖體的處理體細(xì)胞胚形成后，需要在無(wú)激素培養(yǎng)基上經(jīng)過(guò)一定二．繁殖體的包埋包埋介質(zhì)的要求：首先必需是對(duì)繁殖體及其它生物是無(wú)毒的，并具有一定的緩沖強(qiáng)度，以保證繁殖體在生產(chǎn)、運(yùn)輸和種植操作中的安全。同時(shí)，它最好能夠提供類(lèi)似于胚乳的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，以供繁殖體發(fā)芽的需要。此外由于繁殖體的含水量較高，貯存中極易受到微生物感染危害，因此介質(zhì)中還應(yīng)含有適當(dāng)?shù)臍⒕鷦?/p>

常用的兩種人工胚乳液配方：

MS（或SH、White）培養(yǎng)基加入1.5%的馬鈴薯淀粉水解物；SH（0.5×）培養(yǎng)基加入1.5%的麥芽糖。

48精選ppt二．繁殖體的包埋包埋介質(zhì)的要求：常用的兩種人工胚乳液配方：

幾種植物人工種子的附加成分及成苗率（引自陳正華等，1998）植物及繁殖體海藻酸鈉濃度(％)培養(yǎng)基及蔗糖濃度激素及其濃度（mg/L）成苗率（％）四會(huì)貢柑體細(xì)胞胚3MT，4%GA(1),IBA(0.25)30-70（無(wú)菌）唐菖蒲小球莖4-5MS，1.5%IBA(0.5),GA(0.1)93（無(wú)菌）熱帶蘭花球莖4改良MSNAA(1.0),BA(0.2)95（無(wú)菌）赤桉微芽4改良HNAA(0.2-0.5)80-90（無(wú)菌）小麥體細(xì)胞胚61/4MSGA(1),防腐劑(200),IAA(0.2),活性炭45（有菌）

49精選ppt

植物及繁殖體海藻酸鈉培養(yǎng)基及蔗糖濃度激素及其濃度（mg/以海藻酸鈉作包埋劑的操作程序是：在配制好的海藻酸鈉溶液中，按一定比例加入繁殖體并混勻。將其逐滴滴入2.0%-2.5%的CaCl2溶液中，經(jīng)20－30min.的離子交換作用即形成含有繁殖體具有一定剛性的人工種子，用無(wú)菌水漂洗20min.以終止反應(yīng)。

圖5.5多頭自動(dòng)人工種子包被系統(tǒng)示意圖。1.雙活塞泵；2.滅菌器；3.加濕器；4.振動(dòng)器；5.脈動(dòng)腔膜；6.同軸溝；7.脈動(dòng)腔；8.噴碟；9.旁路系統(tǒng)；10.反應(yīng)池；11.攪拌子；12.硬化溶液及其輸入。（引自Brandenberger和Widmer，1998）。

50精選ppt以海藻酸鈉作包埋劑的操作程序是：圖5.5多頭自動(dòng)人工種子bac番木瓜體細(xì)胞胚人工種子（Castillo等，1998）；b.馬鈴薯微芽人工種子（Patel等，2000）；c.人參體細(xì)胞種子（Choi和Jeong，2002）。

51精選pptbac番木瓜體細(xì)胞胚人工種子（Castillo等，1998）三．人