畢業(yè)論文-中藥厚樸中有效成分的提取工藝研究

1、中藥厚樸中有效成分的取工藝研究前 言 厚樸為木蘭科木蘭屬喬木(Magnolia officinalis Rehd.et Wils）和凹葉厚樸(Magnolia var. biloba Rehd.et Wils）的樹皮、根皮和枝皮，厚樸的樹皮、根皮、花、種子及芽皆可入藥，以樹皮為主，為著名中藥，有化濕導滯、行氣平喘、化食消痰、驅(qū)風鎮(zhèn)痛之效；種子有明目益氣功效，芽作婦科藥用。其主要活性成分為厚樸酚和和厚樸酚，具有多種藥理作用，包括抗炎、抗心律失常、抗癲癇、抗血小板、抗制肌肉收縮和抗菌作用，此外還可以抑制氮的氧化產(chǎn)物，抑制腫瘤壞死因子的表達活性等。 由于其具有天然無公害的優(yōu)勢，以及厚樸酚既能抑制紫外

2、線誘導的突變作用，又能抑制非直接作用的致突變源的突變作用，近來市場上一些口服藥物抑制劑、化妝用品、防曬霜中均含有厚樸酚。 通過高效液相色譜法（HPLC）對厚樸中的主要成分厚樸酚和和厚樸酚進行分析，可確定其中的主要成分并能測定其含量，因此本實驗通過應用HPLC法從更換實驗變量方面對厚樸中有效成分的提取進行探索，同時比較不同成分的提取的效率，從而得到最佳實驗方法的提取方案。實驗結果表明：提取方法、提取溶劑、提取溶劑濃度、料液比、提取時間均明顯地影響提取效率，通過對采取不同提取方法進行比較可得加熱回流提取效果最好；而通對使用不同提取溶劑進行比較可得乙醇作為溶劑提取效果最好； 通過對提取溶劑的不同提取

3、濃度進行比較可得無水乙醇的提取效果最好；通過對不同料液比進行比較可得料液比為1:15提取效果最好；通過對不同提取時間進行比較可得提取時間為2 h 提取效率較好，故采用2 h為最佳提取時間。1.中藥有效成分提取方法 中藥有著悠久的藥用作用歷史，我國傳統(tǒng)文化的寶貴財富，近幾年由于中藥行業(yè)的快速發(fā)展，相關中藥傳統(tǒng)的提取方法包括溶劑提取法、水蒸氣蒸餾法、升華法、壓榨法等提取方法,還有許多新型的提取技術包括超臨界提取技術、大孔吸附樹脂提取技術、超聲波提取技術、微波輔助萃取技術、膜分離技術、分子印跡技術、分子蒸餾技術、近紅外提取等技術1。由于中藥所含的化學成分通常比較復雜，一味中藥可能含有上百種的化學成分

4、，既有有效成分，又有無效成分和有毒成分2-4。結合中藥制劑的特性，推廣應用低耗高效、可操作性的提取方法是近幾年來中藥領域熱門講究的課題5。下面來介紹幾種常用的提取方法： 1.1溶劑提取方法1.1.1溶劑提取方法用溶劑提取中草藥的成分，常用的傳統(tǒng)提取方法主要包括回流法、浸漬法、煎煮法、滲漉法等，其中回流法是提取最常用的方法。 (1)回流提取法 回流提取法是一種用乙醇等易揮發(fā)的有機溶劑作為提取液熱浸藥材，將浸出液加熱蒸餾，其中易揮發(fā)性溶劑餾出后又被冷卻，重流回浸出的容器中重新浸提原料，這樣周而復始地循環(huán)，直至有效成分回流提取完全的方法。 回流法提取液在蒸發(fā)鍋中受熱時間比較長，因此不適用于受熱易遭破

5、壞的原料成分的浸出。因為其局限性，大量生產(chǎn)中很少被使用。(2)連續(xù)回流提取法 實驗室通常用索氏提取器作連續(xù)提取裝置，使用此法比回流提取法中所用溶劑少，提取成分比較完全,因此應用揮發(fā)性有機溶劑提取中草藥的有效成分。以連續(xù)回流提取法為佳，但所需提取時間長，所以有效成分遇熱不穩(wěn)定的中藥不用。(3)浸漬法一般命有熱浸、冷浸、溫浸等數(shù)種，將中草藥粉末或碎塊裝入適當?shù)娜萜髦屑尤脒m量的溶劑，攪拌，放置，浸漬藥材以溶出其成分，過濾，取濾液：為提高提取效率，濾渣可另加新溶劑進行同樣操作。本法簡單易行，但浸出率比較差，耗費時間較長。 (4)滲漉法滲漉法一般是指不斷向已經(jīng)裝有中藥的滲漉器中添加新有機溶劑，使有機溶劑

6、從而自上而下地滲透過藥材，從滲漉器的下部流出浸出液的一種浸出方法，在有機溶劑滲進藥粉的過程中上層溶液或稀浸液便替換位置，溶出的有效成分比重就因而加大向下移動，造成良好濃度差異使擴散效果較好地進行，因此浸出效果比浸漬法優(yōu)越。但在控制流速時應在滲漉的過程當中隨時從藥面上補充新的溶劑，直到藥材中的有效成分充分浸出或滲涌液的體積相當原中藥重的10倍或當滲滴液顏色極淺時，便可以確定有效成分已經(jīng)基本提取完全了，不需要再加熱。缺點是：耗時很長、溶劑消耗大。 (5)煎煮法煎熬發(fā)簡單易行是我國最早使用的傳統(tǒng)浸出方法，可煎出大部分有效成分，但煎出液中雜質(zhì)多，且易發(fā)生霉變，一些不耐熱揮發(fā)性成分易損失。藥材一般宜煎2

7、次。所用容器一般為陶瓷、沙罐或銅制、搪瓷器皿，不宜用鐵鍋，以免藥液變色。加熱最好不斷攪拌，以免局部藥材受熱太高，導致焦糊6。1.1.2溶劑提取原理溶劑提取方法是根據(jù)中藥的各種主要化學成分在有機溶劑中的溶解性質(zhì)，來選用對活性成分溶解度較大，而對于不需要溶出的成分溶解度較小的有機溶劑，來將有效成分從中藥組織內(nèi)溶解出來的一種方法。當將溶劑加入到中藥的原料中時，溶劑由于滲透、擴散的作用從而逐步通過細胞壁透入到細胞內(nèi)部，進而溶解了可溶性的有效成分，造成細胞內(nèi)和細胞外的濃度差異，于是細胞內(nèi)的濃溶液不斷向細胞外擴散，溶劑又不斷從細胞外進入到中藥細胞內(nèi)部去，這樣多次地重復，至到細胞內(nèi)和細胞外溶液濃度達到了動態(tài)

8、的平衡時為止，再將這飽和的溶液濾出來，再次多次加入新的有機溶劑，就可把所需要的主要的成分近于完全溶出了。1.1.3溶劑的選擇運用溶劑提取法的關鍵是選擇恰當溶劑。只有溶劑選擇適當，才可以比較順利地將需要的成分順利提取出來。選擇溶劑要注意以下三點：（1）溶劑對有效成分溶解度大，對雜質(zhì)溶解度小；（2）溶劑不能與中藥成分起化學變化；（3）溶劑要經(jīng)濟、易得、使用安全等。1.2新型提取方法1.2.1超臨界流體萃取技術超臨界流體提取法（super critical fluid extraction,SFE）是近年來剛剛興起的提取中藥中有效成分的一種新型分離技術，其基本原理是利用超臨界流體具有密度大、黏度小、

9、擴散系數(shù)大等特性來提取中藥中有效成分的，后又通過改變壓力改變溫度，將流體變?yōu)闅怏w從而導致對物質(zhì)的溶解能力下降，從而析出提取的有效成分。超臨界提取法改變了傳統(tǒng)的提取法如水蒸氣蒸餾法、溶劑提取法等所具有的提取工藝比較復雜、產(chǎn)品純度低，且很容易殘留有害有毒的有機溶劑等缺點，而它流程較簡單、能量消耗低，而且無溶劑的殘留，有效成分提取產(chǎn)率高、純度好，因此SFE在中藥有效成分提取工藝中有廣闊的應用前景。1.2.2微波提取法微波提取法（Miacrowave-assistedextraction）是一種利用微波能將中藥細胞內(nèi)的有效成分提取出來的一種新型技術，其原理是微波加熱促使中藥植物細胞內(nèi)的極性物質(zhì)吸收電磁

10、能，產(chǎn)生的熱量促使細胞內(nèi)溫度上升，壓力增大，將細胞膜、細胞壁沖破，形成孔洞，細胞外的溶劑通過孔洞進入細胞內(nèi)，有效成分則溶解在溶劑中7的方法。微波提取法可對中草藥中不同成分進行選擇性加熱，易于目標成分的提取，因而具有選擇性。微波提取設備比較簡單，使用范圍較廣，可用于對中藥中揮發(fā)油、苷類、生物堿、多糖、黃酮、有機酸等有效成分進行提取，與傳統(tǒng)提取方法相比具有提取的時間短、效率高、污染小、重現(xiàn)性好等特點，但微波提取要求中藥要含有一定水分，對含水分少的細胞不易破壁，有效成分較難提取。微波對一些化合物有一定的降解作用，微波對人體，尤其是眼睛具有一定程度的危害，因此應用時應選擇合理的提取條件，并注意微波的泄

11、露和防護8。1.2.3超聲波提取法超聲提取法（Ultrasonic Extraction, UE）是利用超聲波空化效應、機械效應和熱效應等作用加速細胞內(nèi)有效物質(zhì)的釋放、擴散和溶解，來提高提取效率的提取方法。其主要理論依據(jù)是超聲的空化效應、熱效應和機械作用。超聲空化中微小氣泡的爆裂會產(chǎn)生極大壓力，使植物的細胞壁及整個生物體的破裂在瞬內(nèi)間完成，縮短了破碎的時間，同時超聲波產(chǎn)生的振動作用也加強了細胞內(nèi)物質(zhì)的釋放、擴散和溶解，從而顯著地提高了提取效率9。1.2.4水蒸氣蒸餾法 HYPERLINK /doc/6019439.html t /doc/_blank 水蒸氣蒸餾法一般是指將含易揮發(fā)性成分中藥的

12、碎片、粗粉，通過浸泡濕潤再直火加熱蒸餾或通入水蒸汽 HYPERLINK /doc/654247.html t /doc/_blank 蒸餾，也可在多能式中藥提取罐中對藥材一邊煎煮一邊蒸餾，使藥材中易揮發(fā)性的成分隨水蒸氣的蒸餾而帶了出來，經(jīng)冷凝后再收集餾出液的方法。有時需再蒸餾一次，來提高餾出液的 HYPERLINK /doc/1407982.html t /doc/_blank 濃度以及純度，最后再收集定量的蒸餾液。但蒸餾次數(shù)不宜過多，避免揮發(fā)油中的有些化學成分氧化分解。1.2.5破碎提取法破碎提取法是使中草藥在破碎提取器中加入恰當?shù)娜軇┖笃扑?，而得以提取有效成?0的方法。有關研究表明，此方

13、法提取速度快且完全，不需要加熱，可節(jié)省時間、能源和溶劑，這種方法雖省時且不用高溫加熱，但由于其提取效率并非最高因而其只限于實驗的研究。1.2.6酶提取法酶法一般是指選用適當?shù)拿?，通過酶反應溫和地將組織分解，加速有效成分的釋放的一種方法。中草藥成分有有效成分和非有效成分，這些非有效成分不僅僅會影響中藥有效成分的浸出,而且還會影響中藥液體制劑澄清度，可通過選用適當?shù)拿?使非有效成分分解提高有效成分浸出率和液體制劑質(zhì)量。工業(yè)用酶在中藥的提取過程中已取得了較好的效果,回收率高,應用潛力大。 2.高效液相色譜法2.1高效液相色譜法的簡介 高效液相色譜法最早是由俄國植物學家茨維特(Tswett)在1906

14、年研究碳酸鈣分離植物色素時發(fā)現(xiàn)的色譜法(Chromatograpby)而得名。后來在此基礎上發(fā)展出紙色譜法、薄層色譜法、氣相色譜法、液相色譜法。 高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography HPLC）11又稱“高分離度液相色譜”、“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“近代柱色譜”等。其是20世紀60年代末70年代初發(fā)展起來的一種新型的分析分離技術，隨著技術的不斷發(fā)展與改進，高效液相色譜法現(xiàn)在已經(jīng)成為應用極為廣泛的化學分析分離技術12，在技術上采用高效固定相、高靈敏度、高壓泵的檢測器，在經(jīng)典的液相色譜的理論基礎之上，引入氣相色譜理論，而發(fā)展起來的

15、一種技術，因此有效率高、靈敏度高、操作自動化、速率快等等特點。而且該法已在醫(yī)學、化學、工業(yè)、商檢、農(nóng)學、法檢等學科領域被廣泛的應用。 2.1.1高效液相色譜法的分類(1)按固定相聚集狀態(tài)可以分為液液色譜法和液固色譜法兩大類。(2)按分離機制可分為液-液色譜法、液-固色譜法、離子交換色譜法、空間排阻色譜法、化學鍵合相色譜法、離子對色譜法、離子色譜法等類別。其中，化學鍵合相色譜中的反相鍵合相色譜應用最廣，使用最廣的反相鍵合相是十八烷基鍵合相，即碳十八烷基（C18H37）鍵合到硅膠表面。這種鍵合相又稱ODS(Octadecylsilyl)鍵合相，如國產(chǎn)的YWG-C18等，本實驗就是用的該鍵合相。(3

16、)按流動相的壓強可分為高效液相色譜法和超高效液相色譜法兩大類。2.1.2高效液相色譜法的分離原理高效液相色譜法是在經(jīng)典的液相色譜法基礎之上發(fā)展起來的。其也是在高壓的條件下溶質(zhì)在流動相和固定相之間進行的一種連續(xù)的多次交換過程，是借住溶質(zhì)在兩相之間分配系數(shù)的吸附力、親和力或分子大小不同而引起排阻作用的差異使不同溶質(zhì)得以分離13的方法。2.1.3 高效液相色譜法的特點高效液相色譜法具有“四高一廣”的特點14：(1)高壓：液體流動相流經(jīng)色譜柱所受阻力較大，為了使載液迅速通過色譜柱，必須對 HYPERLINK /view/679054.htm 其加高壓。(2)高速：分析速度快、載液流速快，較經(jīng)典液體色譜

17、法速度快得多，通常分析在1小時以內(nèi)均能完成。(3)高效：分離效能高。可選擇固定相和流動相以達到最佳分離效果，比工業(yè) HYPERLINK /view/1283270.htm 精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。 (4)具有很高的 HYPERLINK /view/495141.htm 靈敏度：紫外檢測器高達0.01 ng，進樣量也很少。(5)應用范圍十分廣泛：百分之七十以上的 HYPERLINK /view/163374.htm 有機化合物可用高效液相色譜分析，特別是強極性、高沸點、大分子、熱穩(wěn)定性差的化合物的分離分析更具有顯著優(yōu)勢。此外高效液相色譜還有色譜柱可反復使用、樣品不被破壞、易回收等優(yōu)

18、點，缺點也存在，就是“柱外效應”。從進樣開始到檢測器之間，除柱子以外任何的死空間（柱接頭、進樣器、檢測池和連接管等），要是流動相的流型有所變化，被分離的物質(zhì)的任何滯留和擴散都會有明顯地導致色譜峰加寬的現(xiàn)象， HYPERLINK /view/910700.htm 柱效率也會降低。高效液相色譜檢測器的靈敏度不如氣相色譜。 2.2高效液相色譜法的應用(1)藥物分析中藥質(zhì)量控制，抗生素質(zhì)控分析，生化藥質(zhì)量控制，化學藥物質(zhì)量控制，新型高效手性藥物中手性對映體含量的測定等。(2)環(huán)境污染物的分離與測定大氣、土壤水、食品中的多環(huán)芳烴、多環(huán)聯(lián)苯，有機磷農(nóng)藥、有機氯農(nóng)藥，陰離子表面活性劑，酚類胺、黃曲霉毒素類，

19、除草劑等污染物的分離與測定。(3)食品質(zhì)量分析獸藥殘留，農(nóng)藥殘留；防腐劑、人工合成色素、抗氧化劑等食品添加劑的分離與測定，保健食品中有效成分的檢測，真菌毒素分析等。(4)前沿生命科學分析生物技術的藥物純化及其鑒定，DNA電泳與色譜分析，生物標志物色譜分析，蛋白質(zhì)組學研究等。(5)精細化工在精細化工生產(chǎn)過程當中使用的具有較高沸點、較高分子量的有機化合物，如高碳數(shù)的脂肪族或芳香族的醇、醛、酮、酯、酸、醚等化工應用原料，以及用于各種表面的活性劑、農(nóng)業(yè)藥劑、醫(yī)用藥物、燃料、炸藥等工業(yè)產(chǎn)品的分離與測定。2.3高效液相色譜與氣相色譜的區(qū)別(1)液相色譜可完成難度較高的分離，是因為液相色譜固定相類型多，分析

20、時可選擇的余地大，氣相色譜則不可能；液相色譜室溫下便可操作，低溫利于色譜分離。(2)液相色譜不受試樣和熱穩(wěn)定性的限制，適合相對分子質(zhì)量大、難氣化、不易揮發(fā)或?qū)崦舾械奈镔|(zhì)的分離、分析，而氣相色譜僅可以分析在操作溫度下氣化而不分解的物質(zhì)，即氣體和沸點較低的化合物。(3)液相色譜試樣制備簡單，且回收試樣也容易，可用于大量制備。3.厚樸化學成分及藥理作用的研究 3.1厚樸的概述 木蘭科植物厚樸（Magnolia officinalis Rehdet Wils）或 HYPERLINK /s/?w=%E5%87%B9%E5%8F%B6%E5%8E%9A%E6%9C%B4&ch=link t /z/_bl

21、ank 凹葉厚樸（Magnolia biloba Rehdet Wils）的干燥干皮、根皮及枝皮。厚樸也是我國的重要的傳統(tǒng)的中藥，在 HYPERLINK /s/?w=%E4%B8%9C%E6%B1%89&ch=link t /z/_blank 東漢時期的著作 HYPERLINK /s/?w=%E3%80%8A%E7%A5%9E%E5%86%9C%E6%9C%AC%E8%8D%89%E7%BB%8F%E3%80%8B&ch=link t /z/_blank 神農(nóng)本草經(jīng)中將厚樸列為上等品，水香順氣丸、鱉甲煎膠囊、保濟丸、香砂養(yǎng)胃丸、等傳統(tǒng)中藥均以厚樸為主藥。厚樸性溫味苦辛，入脾、胃、肺、大腸經(jīng)，主

22、要治濕滯傷中、食積氣滯、脘痞吐瀉、腹脹便秘、痰飲喘咳15，為 HYPERLINK /s/?w=%E3%80%8A%E4%B8%AD%E5%8D%8E%E4%BA%BA%E6%B0%91%E5%85%B1%E5%92%8C%E5%9B%BD%E8%8D%AF%E5%85%B8%E3%80%8B&ch=link t /z/_blank 中華人民共和國藥典1990年版收載。 我國對厚樸的應用有著悠久歷史，其記載了：治 HYPERLINK /s/?w=%E4%B8%AD%E9%A3%8E&ch=link t /z/_blank 中風、 HYPERLINK /s/?w=%E4%BC%A4%E5%AF%9

23、2&ch=link t /z/_blank 傷寒、頭痛、寒熱、 HYPERLINK /s/?w=%E6%83%8A%E6%82%B8&ch=link t /z/_blank 驚悸、 HYPERLINK /s/?w=%E6%B0%94%E8%A1%80&ch=link t /z/_blank 氣血痹、 HYPERLINK /s/?w=%E6%AD%BB%E8%82%8C&ch=link t /z/_blank 死肌的藥用作用。明時的 HYPERLINK /s/?w=%E6%9D%8E%E6%97%B6%E7%8F%8D&ch=link t /z/_blank 李時珍也在 HYPERLINK /s

24、/?w=%E3%80%8A%E6%9C%AC%E8%8D%89%E7%BA%B2%E7%9B%AE%E3%80%8B&ch=link t /z/_blank 本草綱目中記載了有關厚樸 HYPERLINK /s/?w=%E6%9C%B4%E6%A0%91&ch=link t /z/_blank 樸樹膚 HYPERLINK /s/?w=%E7%99%BD%E8%82%89&ch=link t /z/_blank 白肉紫，結之果實如 HYPERLINK /s/?w=%E5%86%AC%E9%9D%92&ch=link t /z/_blank 冬青，子生青熟赤，有核，味甘美的內(nèi)容。 HYPERLINK

25、 /s/?w=%E3%80%8A%E6%97%A5%E5%8D%8E%E5%AD%90%E6%9C%AC%E8%8D%89%E3%80%8B&ch=link t /z/_blank 日華子本草在 HYPERLINK /s/?w=%E7%82%AE%E5%88%B6&ch=link t /z/_blank 炮制方面也記載有沿用至今的去粗皮， HYPERLINK /s/?w=%E5%A7%9C%E6%B1%81&ch=link t /z/_blank 姜汁炙或浸炒用等方法。 3.2厚樸主要化學成分厚樸中主要的有效化學成分含有酚類、揮發(fā)油類、生物堿類及其它類化合物。3.2.1酚類厚樸中酚類成分有:厚

26、樸酚（magnolol）、和厚樸酚（honokiol)16、去三羥基厚樸酚、三羥基厚樸酚，其中以厚樸酚、和厚樸酚為主要成分，約占材料的512。其中厚樸酚、和厚樸酚的化學式分別為： 3.2.2揮發(fā)油化合物目前報道的厚樸揮發(fā)油中已分離到的成分如下：桉葉醇、聚傘花素、石竹烯、反丁香烯等17-19。最主要成分為桉葉醇，占揮發(fā)油總量的4050。桉葉醇是-桉葉醇和-桉葉醇的混合物，化學式分別是： 3.2.3生物堿厚樸中含有木蘭箭毒堿16、氧化黃心樹寧堿。3.2.4其它厚樸中還含有少量皂苷、鞣質(zhì)。3.3藥理作用3.3.1厚樸酚的藥理作用 厚樸酚具有持久的、明顯的中樞神經(jīng)抑制，中樞性 HYPERLINK /l

27、emma/ShowInnerLink.htm?lemmaId=175653 t /_blank 肌肉松弛 HYPERLINK /lemma/ShowInnerLink.htm?lemmaId=778096 t /_blank 抑制的作用，抗菌，抗炎，抗?jié)?，?HYPERLINK /lemma/ShowInnerLink.htm?lemmaId=88371&ss_c=ssc.citiao.link t /_blank 病原微生物，抗腫瘤， HYPERLINK /lemma/ShowInnerLink.htm?lemmaId=261901 t /_blank 抗氧化，抑制嗎啡 HYPERLINK

28、 /lemma/ShowInnerLink.htm?lemmaId=8194287&ss_c=ssc.citiao.link t /_blank 戒斷反應，也有抑制 HYPERLINK /lemma/ShowInnerLink.htm?lemmaId=116362&ss_c=ssc.citiao.link t /_blank 血小板聚集等藥理作用，還可用于治療細菌性或 HYPERLINK /lemma/ShowInnerLink.htm?lemmaId=804392&ss_c=ssc.citiao.link t /_blank 阿米巴痢疾， HYPERLINK /lemma/ShowInner

29、Link.htm?lemmaId=2739693&ss_c=ssc.citiao.link t /_blank 急性腸炎， HYPERLINK /lemma/ShowInnerLink.htm?lemmaId=49619 t /_blank 慢性胃炎等20-24。其中在抗菌作用的方面，厚樸酚對 HYPERLINK /lemma/ShowInnerLink.htm?lemmaId=353729 t /_blank 絲狀真菌、格蘭氏陽性菌、耐酸性菌有明顯的 HYPERLINK /lemma/ShowInnerLink.htm?lemmaId=778734 t /_blank 抗菌活性作用，還對 H

30、YPERLINK /lemma/ShowInnerLink.htm?lemmaId=69250155&ss_c=ssc.citiao.link t /_blank 變形鏈球菌有明顯抗菌的作用，然而對 HYPERLINK /lemma/ShowInnerLink.htm?lemmaId=228210&ss_c=ssc.citiao.link t /_blank 葡萄球菌的抑制作用卻是最強的。臨床上主要用作鎮(zhèn)靜中樞神經(jīng)、消除胸腹?jié)M悶、運動員肌肉松弛、抗?jié)?、抗真菌等藥，其中有些藥理作用和和厚樸酚相同?3.3.2和厚樸酚的藥理作用和 HYPERLINK /lemma/ShowInnerLink.h

31、tm?lemmaId=390222&ss_c=ssc.citiao.link t /_blank 厚樸酚具有持久的、明顯的中樞神經(jīng)抑制，中樞性 HYPERLINK /lemma/ShowInnerLink.htm?lemmaId=175653&ss_c=ssc.citiao.link t /_blank 肌肉松弛的作用，抗炎，抗菌，抗?jié)?，?HYPERLINK /lemma/ShowInnerLink.htm?lemmaId=88371&ss_c=ssc.citiao.link t /_blank 病原微生物，抗氧化，抗腫瘤，抗衰老，降低膽固醇等藥理作用，用于治療 HYPERLINK /le

32、mma/ShowInnerLink.htm?lemmaId=2739693&ss_c=ssc.citiao.link t /_blank 急性腸炎， HYPERLINK /lemma/ShowInnerLink.htm?lemmaId=49619&ss_c=ssc.citiao.link t /_blank 慢性胃炎，細菌性或 HYPERLINK /lemma/ShowInnerLink.htm?lemmaId=804392&ss_c=ssc.citiao.link t /_blank 阿米巴痢疾等25-27。其中，在抗菌作用的方面，厚樸酚對格蘭氏陽性菌、 HYPERLINK /lemma/S

33、howInnerLink.htm?lemmaId=353729&ss_c=ssc.citiao.link t /_blank 絲狀真菌、耐酸性菌有明顯的 HYPERLINK /lemma/ShowInnerLink.htm?lemmaId=778734&ss_c=ssc.citiao.link t /_blank 抗菌活性，對 HYPERLINK /lemma/ShowInnerLink.htm?lemmaId=69250155&ss_c=ssc.citiao.link t /_blank 變形鏈球菌有更加明顯的抗菌作用，然而對 HYPERLINK /lemma/ShowInnerLink.h

34、tm?lemmaId=228210&ss_c=ssc.citiao.link t /_blank 葡萄球菌的抑制作用才是最強的。臨床上主要用作消除鎮(zhèn)靜中樞神經(jīng)、胸腹?jié)M悶、運動員肌肉松弛、抗?jié)?、抗真菌等藥。如今和厚樸酚新的用途可以拓展到精神類的疾病?.3.3揮發(fā)油的藥理作用厚樸揮發(fā)油成分具有發(fā)干、鎮(zhèn)痙、平喘、去談等作用28以及對腎上腺髓質(zhì)細胞分泌的兒苯酚胺具有抑制作用29。 3.3.4厚樸中生物堿的藥理作用 具有劇烈的箭毒樣骨骼肌松弛作用與降壓作用30。4.實驗部分 4.1實驗儀器UltiMate300型HPLC色譜儀。包括U-300輸液泵，DAD-300紫外檢測器；Chromeleon 7

35、.1色譜工作站；KQ3200型超聲清洗器(Ultrasonic Cleaning Machine，濟寧科技源超聲波設備有限公司)；HH-6型數(shù)顯恒溫水浴鍋(常州國華電器有限公司)；WK-1000A型高速藥物粉碎機(中國山東青州市精誠機械有限公司)，抽濾瓶，25 ml容量瓶（天津BEI FANG）；抽慮瓶；50 mL圓底燒瓶；AR1140電子天平(MaxCap:110 g,Readability:0.0001 g)。4.2試劑與藥材用于樣品提取的試劑有無水甲醇、無水乙醇、乙酸乙酯；HPLC檢測的試劑（甲醇）為色譜純試劑；實驗用水為二次蒸餾水、娃哈哈純凈水；厚樸藥材購于聊城利民大藥店。 4.3色譜

36、條件色譜柱:C18柱(250 mm 4.6 mm I.D,5 m)；流動相：甲醇：水=73:27（V/V）；等度洗脫20 min，進樣量10 L，流速1 mL/min；檢測波長：254 nm；柱溫：室溫。4.4提取方法將厚樸藥材粉碎，分別按照以下方法進行提取：4.4.1不同提取方法的比較(1)精確稱取厚樸藥材粉末1.0067 g，于100 ml錐形瓶中，加入10.0 ml無水乙醇，室溫下冷浸0.5 h；(2)精確稱取厚樸藥材粉末1.0152 g，于100 ml錐形瓶中，加入10.0 ml無水乙醇，超聲波提取0.5 h； (3)精確稱取厚樸藥材粉末1.0076 g，于50 ml圓底燒瓶中，加入1

37、0.0 ml無水乙醇，設定溫度為75 加熱回流0.5 h。4.4.2不同提取溶劑的比較(1)精確稱取厚樸藥材粉末1.0032 g，于50 ml圓底燒瓶中，加入10.0 ml無水甲醇，設定溫度為75 加熱回流0.5 h；(2)精確稱取厚樸藥材粉末1.0076 g，于50 ml圓底燒瓶中，加入10.0 ml無水乙醇，設定溫度為75 加熱回流0.5 h；(3)精確稱取厚樸藥材粉末1.0048 g，于50 ml圓底燒瓶中，加入10.0 ml無水乙酸乙酯，設定溫度為75 加熱回流0.5 h。4.4.3不同溶劑濃度的比較(1)精確稱取厚樸藥材粉末1.0014 g，于50 ml圓底燒瓶中，加入10.0 ml

38、40%乙醇，設定溫度為75 加熱回流0.5 h；(2)精確稱取厚樸藥材粉末0.9996 g，于50 ml圓底燒瓶中，加入10.0 ml60%乙醇，設定溫度為75 加熱回流0.5 h；(3)精確稱取厚樸藥材粉末1.0051 g，于50 ml圓底燒瓶中，加入10.0 ml80%乙醇，設定溫度為75 加熱回流0.5 h。(4)精確稱取厚樸藥材粉末1.0076 g，于50 ml圓底燒瓶中，加入10.0 ml無水乙醇，設定溫度為75 加熱回流0.5 h；4.4.4不同料液比的比較(1)精確稱取厚樸藥材粉末1.0030 g，于50 ml圓底燒瓶中，加入5.0 ml無水乙醇，設定溫度為75 加熱回流0.5

39、h；(2)精確稱取厚樸藥材粉末1.0042 g，于50 ml圓底燒瓶中，加入10.0 ml無水乙醇，設定溫度為75 加熱回流0.5 h；(3)精確稱取厚樸藥材粉末1.0056 g，于50 ml圓底燒瓶中，加入15.0 ml無水乙醇，設定溫度為75 加熱回流0.5 h；(4)精確稱取厚樸藥材粉末1.0033 g，于50 ml圓底燒瓶中，加入20.0 ml無水乙醇，設定溫度為75 加熱回流0.5 h。4.4.5不同提取時間的比較(1)精確稱取厚樸藥材粉末1.0056 g，于50 ml圓底燒瓶中，加入15.0 ml無水乙醇，設定溫度為75 加熱回流0.5 h；(2)精確稱取厚樸藥材粉末1.0033

40、g，于50 ml圓底燒瓶中，加入15.0 ml無水乙醇，設定溫度為75 加熱回流1 h；(3)精確稱取厚樸藥材粉末1.0039 g，于50 ml圓底燒瓶中，加入15.0 ml無水乙醇，設定溫度為75 加熱回流1.5 h；(4)精確稱取厚樸藥材粉末1.0046 g，于50 ml圓底燒瓶中，加入15.0 ml無水乙醇，設定溫度為75 加熱回流2 h；(5)精確稱取厚樸藥材粉末1.0032 g，于50 ml圓底燒瓶中，加入15.0 ml無水乙醇，設定溫度為75 加熱回流2.5 h。上述提取液定容于25 ml容量瓶中，再用0.45 m濾膜過濾，待測（注意：不同溶劑的比較中乙酸乙酯需要旋蒸后用甲醇溶解后

41、定容）。5.實驗結果與討論 5.1 HPLC分離條件的優(yōu)化色譜柱:C18柱(250 mm 4.6 mm I.D,5 m)；流動相：甲醇：水=73:27（V/V）；等度洗脫20 min，進樣量10 L，流速1 mL/min；檢測波長：254 nm；柱溫：室溫。 下面的每一個圖中峰1：和厚樸酚；峰2：厚樸酚。圖1 厚樸粗提物的HPLC圖 5.2不同提取方法的比較為了選擇合適的提取方法，考察不同提取方法對厚樸中兩種化學成分的提取效率的影響。使用無水乙醇為提取溶劑，分別采用冷浸、超聲、回流0.5 h提取，提取液經(jīng)0.45 m濾膜過濾后，用HPLC進行檢驗，結果見表1。表1 不同提取方法對應各色譜峰面積

42、 提取方法冷浸超聲回流峰1/mAu*min8.392812.636421.7305峰2/mAu*min74.0782103.0541162.5040圖2 不同提取方法對應峰面積從上圖可以看出：相同的提取溶劑和時間，不同的提取方法對提取效率有顯著的影響。由峰面積的大小可以確定加熱回流的提取效率最高，超聲的提取效率次之，冷浸的提取效率最低，所以最佳方法是加熱回流。5.3不同提取溶劑的比較 為了選擇合適的提取溶劑，考察不同溶劑對厚樸中兩種化學成分提取效率的影響，分別采用無水甲醇、無水乙醇、乙酸乙酯為提取溶劑加熱回流提取0.5 h，提取液經(jīng)0.45 m濾膜過濾后，用HPLC進行分析，結果見表2。表2

43、不同提取溶劑對應各色譜峰面積 提取試劑無水甲醇無水乙醇乙酸乙酯峰1/mAu*min17.467221.730512.4713峰2/mAu*smin143.4038162.504096.4713圖3 不同提取溶劑對應峰面積從上圖可以看出：相同的提取時間和方法，不同的提取溶劑對提取效率有影響。由峰面積的大小可以確定提取厚樸中化學成分的最佳溶劑為乙醇，所以采用乙醇作為溶劑效果最好。 5.4不同溶劑濃度的比較為了選擇合適的乙醇提取濃度，考察不同濃度的乙醇對厚樸中兩種化學成分的提取效率的影響。分別采取40%乙醇、60%乙醇、80%乙醇、無水乙醇為溶劑加熱回流提取0.5 h，提取液經(jīng)0.45 m濾膜過濾后

44、，用HPLC進行分析，結果見表3。 提取試劑40%乙醇60%乙醇80%乙醇無水乙醇峰1/mAu*min11.975116.987618.683821.7305 峰2/mAu*min92.1764126.7011128.2209162.5040表3 不同濃度提取溶劑對應各色譜峰面積圖4 不同濃度提取溶劑對應峰面積從上圖可以看出：相同的提取方法、提取時間和提取溶劑、不同濃度的提取溶劑對提取效率也有影響。由峰面積的大小可以確定無水乙醇提取厚樸中化學成分的效果最佳。5.5不同料液比的比較為了選擇合適的料液比，考察不同料液比對厚樸中兩種化學成分的提取效率的影響。用無水乙醇為溶劑，分別采取1:5、1:10

45、、1:15、1:20的料液比加熱回流提取0.5 h，提取液經(jīng)0.45 m濾膜過濾后，用HPLC進行分析，結果見表4。表4 不同料液比對應各色譜峰面積料液比mL/g1:51:101:151:20峰1/mAu*min11.665013.932315.200414.9489峰2/mAu*min115.8181123.7015150.8921128.7396圖5 不同料液比對應峰面積從上圖可看出：用相同的提取方法、提取時間和提取溶劑加熱回流，隨料液比的不同，提取的效率有很大差異。通過峰面積的大小可知料液比為1:15時提取效率最佳。5.6不同提取時間的比較為了選擇合適的提取時間，考察不同的提取時間對厚樸

46、中兩種化學成分的提取效率影響。使用無水乙醇為溶劑，料液比為1:15，分別加熱回流0.5 h、1.0 h、1.5 h、2 h、2.5 h，提取液經(jīng)0.45 m濾膜過濾后，用HPLC分析，結果見表5。提取時間0.5h1h1.5h2h2.5h峰1/mAu*min15.200417.132820.004522.043422.1323峰2/mAu*min150.8921160.6722166.3349177.2266178.2654表5 不同提取時間對應色譜峰面積圖6 不同提取時間對應峰面積從上圖可看出：相同的提取方法法、料液比、提取溶劑加熱回流不同的時間對提取效率也有影響，當提取時間為2 h時，厚樸中

47、有效成分提取效率最大，此后隨著時間的延長，有效成分提取率雖然有增長的趨勢，但增長不多，從節(jié)約時間的角度考慮，選擇每次提取時間為2 h作為最佳提取時間。結論本實驗使用HPLC分析中藥化學成分的方法，研究厚樸中有效成分的提取方法(1)用冷浸、超聲、回流三中提取方法，用無水乙醇為提取溶劑，考察不同提取方法對厚樸有效成分提取效率的影響，綜合考慮兩種成分的提取效率得出加熱回流為最佳提取方法。(2)分別以無水甲醇、無水乙醇、乙酸乙酯為提取溶劑加熱回流提取，考察不同提取溶劑對厚樸有效成分提取效率的影響，綜合考慮兩種成分的提取效率得出無水乙醇為最佳提取溶劑。(3)分別以40%乙醇、60%乙醇、80%乙醇、無水

48、乙醇為提取溶劑加熱回流提取，考察不同乙醇濃度對厚樸有效成分提取效率的影響，綜合考慮兩種成分的提取效率得出無水乙醇為最佳提取濃度。(4)以無水乙醇為提取溶劑，分別采取1:5、1:10、1:15、1:20的料液比加熱回流提取，考察不同料液比對厚樸有效成分提取速率的影響，綜合考慮兩種成分的提取效率得出1:15為最佳提取料液比。(5)分別以無水乙醇為提取溶劑提取不同的時間，考察不同提取時間對厚樸有效成分提取效率的影響，綜合考慮兩種成分的提取效率得出加熱回流2 h為最佳提取時間。綜上，建立了厚樸有效成分的最佳提取方法：無水乙醇為提取溶劑，料液比為1:15，加熱回流2 h。參考文獻張焱，邢細紅，謝蕊繁，白

49、花蛇舌草對人膠質(zhì)瘤細胞增殖及凋亡的影響及其機制，中華實驗外科雜志，2010, 27(11) : 16931695黎明，傅若農(nóng)等，高效逆流色譜在植物有效成分分離中的應用J. 藥物分析雜質(zhì)，1998, (1) : 60-65.蔡艷華，趙紅衛(wèi)等，中草藥中生物堿的提取與分離J. 四川化工，2005, 8(1) : 39-42.龔曉武，毛雁生等，從橘皮中提取果膠的實驗條件研究，伊犁教育學院學報，2005, 18(3) : 79-80.殷霞等，氣象色譜法測定復方中藥制劑中的魚腥草素中草藥，1993, 24(2) : 73-74.肖培根，新編中藥志第一卷M. 化學工業(yè)出版社，2002, 823-831.杜延冰，裘愛泳，綠原酸生物活性資源及其提取純J. 現(xiàn)代食品科技，2006, 22（2）：250（24）：2918-2921.王芳，趙浩如，大