蔬菜中維生素c的測(cè)定

1、蔬菜中維生素的測(cè)定制作人：薛欽時(shí)間：年月日一、實(shí)驗(yàn)背景維生素又叫抗壞血酸，是一種水溶性維生素。食物中的維生素被人體小腸上段吸收。一旦吸收，就分布到體內(nèi)所有的水溶性結(jié)構(gòu)中，正常成人體內(nèi)的維生素代謝活性池中約有維生素，最高儲(chǔ)存峰值為維生素C正常情況下，維生素絕大部分在體內(nèi)經(jīng)代謝分解成草酸或與硫酸結(jié)合生成抗壞血酸硫酸由尿排出；另一部分可直接由尿排出體外。維生素的作用：1促進(jìn)骨膠原的生物合成。利于組織創(chuàng)傷口的更快愈合。2促進(jìn)氨基酸中酪氨酸和色氨酸的代謝，延長(zhǎng)肌體壽命。3改善鐵、鈣和葉酸的利用。4改善脂肪和類(lèi)脂特別是膽固醇的代謝，預(yù)防心血管病。、促進(jìn)牙齒和骨骼的生長(zhǎng)，防止牙床出血，防止關(guān)節(jié)痛、腰腿痛。、

2、增強(qiáng)肌體對(duì)外界環(huán)境的抗應(yīng)激能力和免疫力。7水溶性強(qiáng)抗氧化劑，主要作用在體內(nèi)水溶液中。二、實(shí)驗(yàn)?zāi)康娜祟?lèi)營(yíng)養(yǎng)中最重要的維生素之一。缺乏時(shí)引起壞血病。維生素含量可作為植物抗衰老和抗逆境的重要生理指標(biāo)，也可作為果品質(zhì)量、選育良種的鑒別指標(biāo)。水果、蔬菜保鮮貯藏必須測(cè)定維生素含量，了解果蔬品質(zhì)量的高低。了解和掌握二氯酚靛酚測(cè)定維生素含量的原理和方法。三、實(shí)驗(yàn)原理2-二氯靛酚是一種染料，其顏色反應(yīng)表現(xiàn)為兩種特性。一是取決于氧化還原狀態(tài)，氧化態(tài)為深藍(lán)色，還原態(tài)為無(wú)色；二是受其介質(zhì)酸度的影響，在堿性介質(zhì)中呈深藍(lán)色，在酸性溶液介質(zhì)中呈淺紅色。用藍(lán)色的堿性染料標(biāo)準(zhǔn)液，滴定含的酸性浸出液，染料被還原為無(wú)色，到達(dá)終點(diǎn)時(shí)

3、，微過(guò)量的、一二氯靛酚染料在酸性溶液中呈淺紅色即為終點(diǎn)。從染料消耗量即可計(jì)算出試樣中還原型抗壞血酸量。二氯酚靛酚滴定法維生素強(qiáng)的還原性將染料還原成無(wú)色的二氯酚靛酚二氯酚靛酚強(qiáng)的氧化性中性堿性藍(lán)色酸性紅色維生素CHOHOClO=NO-ICl氧化型二氯酚靛酚（紅色）ClO=NOICl氧化型二氯酚靛酚（藍(lán)色）ClTOC o 1-5 h zHNOIIClH還原型二氯酚靛酚（無(wú)色）四、不同的測(cè)定方法、目前研究維生素測(cè)定方法的報(bào)道較多有關(guān)維生素的測(cè)定方法。熒光法。2二氯靛酚滴定法。2二硝基苯肼法。分光光度分析法。碘量法。熒光法原理樣品中還原型抗壞血酸經(jīng)活性炭氧化成脫氫型抗壞血酸后，與鄰苯二胺反應(yīng)生成具有熒

4、光的喹喔啉其熒光強(qiáng)度與脫氫抗壞血酸的濃度在一定條件下成正比，以此測(cè)定食物中抗壞血酸和脫氫抗壞血酸的總量。脫氫抗壞血酸與硼酸可形成復(fù)合物而不與鄰苯二胺反應(yīng)，以此排除樣品中熒光雜質(zhì)所產(chǎn)生的干擾。本方法的最小檢出限為。本方法適用于蔬菜、水果及其制品中總抗壞血酸的測(cè)定。2二硝基苯肼法原理總抗壞血酸包括還原型、脫氫型和二酮古樂(lè)糖酸。樣品中還原型抗壞血酸經(jīng)活性炭氧化為脫氫抗壞血酸，再與2二硝基苯肼作用生成紅色脎，脎的含量與總抗壞血酸含量成正比，進(jìn)行比色測(cè)定。本方法適用于蔬菜、水果及其制品中總抗壞血酸的測(cè)定。碘量法原理維生素包括氧化型、還原型和二酮古樂(lè)糖酸三種。當(dāng)用碘滴定維生素時(shí)，所滴定的碘被維生素還原為碘

5、離子。隨著滴定過(guò)程中維生素全被氧化，所滴入的碘將以碘分子形式出現(xiàn)。碘分子可以使含指示劑（淀粉）的溶液產(chǎn)生藍(lán)色，即為滴定終點(diǎn)。由于維生素分子中的烯二醇基有極強(qiáng)的還原性，能被碘氧化，用碘滴定C分光光度分析法原理：維生素在空氣中尤其在堿性介質(zhì)中極易被氧化成脫氫抗壞血酸。通過(guò)吸收光譜曲線法確定維生素的水溶液的最大吸收波長(zhǎng)為7進(jìn)而通過(guò)工作曲線法快速測(cè)定蔬菜水果中維生素的含量。本方法與常規(guī)方法比較，具有準(zhǔn)確、快速、穩(wěn)定、試劑易得等優(yōu)點(diǎn)。五、儀器試劑與樣品新鮮生菜滴定管、三角瓶、研缽、量筒、移液管離心機(jī)草酸溶液：稱(chēng)取草酸，加水至0碘化鉀溶液。標(biāo)準(zhǔn)溶液。2二氯酚靛酚溶液。抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。六、實(shí)驗(yàn)步驟2二氯酚

6、靛酚標(biāo)準(zhǔn)液的標(biāo)定吸取抗壞血酸溶液置于錐形瓶中，加草酸，搖勻，用2二氯酚靛酚滴定至溶液呈淡紅色。在不消失為終點(diǎn)。計(jì)算出染料相當(dāng)于多少毫克抗壞血酸（取草酸作空白對(duì)照）計(jì)算滴定度T1=匕/T每mL2,6二氯靛酚溶液相當(dāng)于維生素C的毫克數(shù)；C建生素C標(biāo)準(zhǔn)使用液的濃度，mg/niL：V標(biāo)定時(shí)吸取維生素C標(biāo)準(zhǔn)性用液的體積，mL；Vi一滴定抗壞血酸溶液消耗2,6二氯靛酚的溶液的體積，niLo近一滴定空白所用2,6二氯靛酚溶液的體積，mL口維生素的提取和測(cè)定1稱(chēng)取新鮮生菜樣品，置研缽中，分次加草酸，研成勻漿，用的草酸定容。通過(guò)紗布過(guò)濾后取放于離心機(jī)中離心吸取上清使用。、吸取濾液，放入三角瓶中，立即用已標(biāo)定的2

7、二氯酚靛酚溶液滴定至出現(xiàn)明顯的粉紅色在內(nèi)不消失為止。記錄所用滴定液體積。另取草酸作空白對(duì)照實(shí)驗(yàn)。七、結(jié)果計(jì)算維生素C含量（V）XTCmg/100g）=viX100滴定空白所用染料溶液的體積，滴定樣品所用染料溶液的體積，二氯酚靛染料溶液的滴定度樣品的質(zhì)量，一二氯靛酚溶液的標(biāo)定IIIIII平均值滴定樣液時(shí)消耗染料溶液的體積，mL滴定空白時(shí)消耗染料溶液的體積，mL稱(chēng)我勻漿相當(dāng)二原樣品的質(zhì)量，g樣品中維生素含量的測(cè)定I11III平均值滴定標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸使用溶液消耗26二氯靛酚的溶液的體積，mL清定空白所月2、6二氯靛酚溶液的體積，吼標(biāo)定酎吸取維生素C標(biāo)準(zhǔn)使用液的體積，ml維生素C標(biāo)準(zhǔn)使用液的濃度，tug

8、/mL每此2,6二氯靛酚溶液相當(dāng)于維生素C的毫T_cxV_克數(shù)一可7r滴定空白所用染料溶液的體積，滴定樣品所用染料溶液的體積，吸取維生素標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，八、注意事項(xiàng)、本法測(cè)定的結(jié)果為食品中的還原型抗壞血酸含量，而非維生素總量。此法是測(cè)定還原型抗壞血酸最簡(jiǎn)便的方法，適合于大批果蔬，但對(duì)紅色果蔬不太適宜。、維生素在酸性條件下較穩(wěn)定，故樣品處理或浸提都應(yīng)在弱酸性環(huán)境中進(jìn)行。浸提劑以偏磷酸穩(wěn)定維生素效果最好，但價(jià)格較貴。一般可采用草酸代替偏磷酸，價(jià)廉且效果也較好。、不穩(wěn)定，在空氣中易被氧化，研磨時(shí)，盡可能要快，以減少的氧化。4樣品處理過(guò)程中加入等量的草酸，目的是抑制抗壞血酸氧化酶，避免維生素氧化損失，

9、也可用偏磷酸代替。5某些水果、蔬菜（如橘子、西紅柿等）漿狀物在容量瓶中泡沫太多，可加入戊醇滴消除之。6同法作空白實(shí)驗(yàn)，消除系統(tǒng)誤差。操作要迅速，防止還原型維生素被空氣中的氧化。滴定過(guò)程一般不超過(guò)。滴定所用的染料不應(yīng)小于或多于，如果樣品含維生素太高或太低時(shí)，可酌情增減樣液用量或改變提取液稀釋度。干擾滴定因素有:1色素若提取液中色素很多時(shí)，滴定不易看出顏色變化，可用白陶土脫色，或加氯仿，到達(dá)終點(diǎn)時(shí)，氯仿層呈現(xiàn)淡紅色。2可還原二氯酚靛酚。對(duì)含有大量的樣品可用乙酸溶液代替草酸溶液提取，此時(shí)不會(huì)很快與染料起作用。3維生素提取時(shí)要避光、避免與銅鐵接觸，以免氧化。九、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論1為什么在測(cè)定維生素的同時(shí)要進(jìn)行溶液的標(biāo)定？2為了保