蓮心堿對大鼠局灶性腦缺血C

1、蓮心堿對年夜鼠局灶性腦缺血C余萬桂陳庭煊張恒文開仄張燕祥張講明劉蓮鄧德明【閉鍵詞】蓮心堿；,腦缺血；,摘要：目的沒有俗觀察蓮心堿對年夜鼠局灶性腦缺血Fs卵黑表達(dá)的影響并探求其保護(hù)做用機制。要收采與線栓法制備年夜鼠局灶性腦缺血模型，經(jīng)由過程免疫組化法檢測腦缺血24hFs卵黑的表達(dá)和經(jīng)蓮心堿(3g/kg)處理后對該卵黑表達(dá)的影響。結(jié)果腦缺血24hFs卵黑的表達(dá)隱著刪減，蓮心堿可較著抑制腦缺血后Fs卵黑表達(dá)。結(jié)論蓮心堿的神經(jīng)保護(hù)機制年夜要與抑制Fs卵黑的表達(dá)有閉。閉鍵詞：蓮心堿；腦缺血；Fs卵黑Keyrds：Liensinine；erebralisheia；FsPrteinFs卵黑是凋亡相閉基果-F

2、s的表達(dá)產(chǎn)品，對缺血反響敏感,可做為研討腦缺血后藥物干預(yù)的目的1。蓮心堿是從中藥蓮子心中提與別離獲得的單芐基同喹啉類化開物，具有降壓、抗心律反常等血汗管活性2，文獻(xiàn)報導(dǎo)與蓮心堿同屬蓮子心主成分的另外一逝世物堿同蓮心堿對真止性腦缺血毀傷具有保護(hù)做用3，同時我們正在真止中沒有俗觀察到蓮心堿對腦缺血具有保護(hù)做用，但其做用機制已明。本研討經(jīng)由過程沒有俗觀察蓮心堿對局灶性腦缺血Fs卵黑表達(dá)的影響，探求其對年夜鼠局灶性缺血性保護(hù)做用的機制。1材料1.1植物雄性SD年夜鼠24只，體重200240g，由華中科技年夜教同濟醫(yī)教院真動做物中心供應(yīng)(植物中心答應(yīng)證號為SYXK(鄂)20220028，植物開格證號為S

3、XK(鄂)20220007)。1.2藥物與試劑蓮心堿由武漢年夜教藥教院藥物化教研討室供應(yīng)。免疫組化試劑，兔抗Fs抗體戰(zhàn)逝世物素化羊抗兔IgG購自武漢專士德公司，抗體效價1100。1.3儀器切片機，LeiaDLB2隱微鏡戰(zhàn)LeiaPS60隱微照相系統(tǒng)(德國Leia公司)。2要收2.1植物模型制備與分組24只雄性SD年夜鼠隨機分為3組，分別為假腳術(shù)組、缺血組、蓮心堿組。參考ZeaLnga等4的要收，并稍減改進(jìn)制備年夜腦中動脈局灶缺血模型。3組年夜鼠分別予以戊巴比妥鈉30g/kg，背腔打針麻醒，頸部正中隱語，暴露左側(cè)頸總動脈(A)戰(zhàn)頸中動脈(EA)，5/0絲線結(jié)扎頸中動脈，別離與頸總動脈陪止的迷出神

4、經(jīng)，正在距頸總動脈分叉處遠(yuǎn)端0.50.6處結(jié)扎頸總動脈，正在結(jié)扎線的遠(yuǎn)端，置絲線備用，用細(xì)小動脈夾夾閉備用線遠(yuǎn)真?zhèn)€頸總動脈，正在備用線的遠(yuǎn)端用4號半頭皮針扎一小孔，將做標(biāo)識表記標(biāo)幟5/0僧龍線栓收進(jìn)隱語，背上推至動脈夾處，將備用線扎松，隨即松開動脈夾，缺血組戰(zhàn)蓮心堿組將線栓沿頸總動脈、頸內(nèi)動脈逆止背上插進(jìn)至A起初部，逢阻力時躲免，從頸總動脈分叉處策畫插進(jìn)深度1.71.9，形成年夜腦中動脈血供阻斷。而假腳術(shù)組將線栓沿頸總動脈、頸內(nèi)動脈逆止背上插進(jìn)，插進(jìn)深度僅為1，此中步伐同上。腳術(shù)竣過后蓮心堿組舌靜脈打針蓮心堿3gkg1，缺血組舌靜脈打針齊整劑量逝世理鹽火，假腳術(shù)組沒有給于處理。2.2腦缺血體積

5、的測量24h年夜鼠斷頭與腦，來除嗅球、小腦及低位腦干后，腦機閉放于-20冰箱中，熱凍20in，與出后隔絕間隔 3連續(xù)做冠狀切片，置于1%TT磷酸緩沖液中，37下恒溫躲光孵育30in，一般機閉染成紅色，堵塞灶染成紅色，腦片置4%多散甲醛結(jié)真，數(shù)碼相機拍照，多媒體彩色病理圖象闡收系統(tǒng)舉止處理，策畫出年夜鼠的梗逝世灶體積戰(zhàn)體積百分比。2.3Fs的免疫組化染色缺血24h后以過量的戊巴比妥(50100g/kg)背腔打針麻醒，開胸左心室插管，灌注肝素鹽火50l(100u/l)，火速剪開左心耳擔(dān)當(dāng)灌注4%多散甲醛磷酸緩沖液300l，30in開顱與腦，來除小腦戰(zhàn)腦干，以4%多散甲醛結(jié)真，常規(guī)石蠟切片。采與AB

6、法檢測Fs卵黑，切片常規(guī)脫臘至火，滅活內(nèi)源性酶，熱抗本建復(fù)滴減1100稀釋的兔抗Fs抗體，4冰箱過夜；滴減逝世物素化羊抗兔IgG，滴減試劑SAB，DAB隱色，蘇木素沉度復(fù)染。2.4Fs的檢測正在下倍視家下(1040)，沒有俗觀察缺血區(qū)，胞核有棕色顆粒者為陽性細(xì)胞，拔與5個下倍視家計數(shù)陽性細(xì)胞的百分率。陽性細(xì)胞百分率=陽性細(xì)胞/(陽性細(xì)胞數(shù)+陽性細(xì)胞數(shù))100%。2.5統(tǒng)計教要收真止數(shù)據(jù)以s表示，兩樣本均數(shù)比擬采與t檢驗。3結(jié)果3.1腦缺血體積經(jīng)TT染色后，缺血組年夜鼠腦堵塞體積百分比為30.253.42%，與假腳術(shù)組比擬,較著刪下(P0.01)；蓮心堿組腦梗逝世體積百分比為20.981.52%

7、，與缺血組比擬，較著降低(P0.01)。3.2Fs卵黑表達(dá)與假腳術(shù)組比擬，缺血組年夜鼠腦機閉Fs卵黑陽性細(xì)胞數(shù)刪減(P0.01)；與缺血組比擬，蓮心堿組年夜鼠Fs卵黑陽性細(xì)胞數(shù)裁減，(P0.01)。睹表1及圖1。表1蓮心堿對年夜鼠年夜腦皮量Fs卵黑表達(dá)的影響略*為每下倍視家細(xì)胞個數(shù)a假腳術(shù)組b缺血組蓮心堿組圖1各組年夜鼠Fs卵黑的表達(dá)400略4會商缺血性腦血管徐病為臨床常睹的危沉痾，因為缺血招致的缺血性腦毀傷是招致中樞神經(jīng)系統(tǒng)成效受益的慌張來由本由，果而腦缺血已成為當(dāng)前防治腦血管徐病的熱面之一，中西醫(yī)教皆對其舉止了主動的研討，但尚缺少療效肯定的藥物。缺血性腦毀傷療效的前進(jìn)正在很年夜火仄上要依托

8、于其病理機制的研討，本文采與年夜鼠年夜腦中動脈(A)線栓法制成局灶性腦缺血再灌注植物模型，經(jīng)TT染色證實A分布區(qū)可睹范圍較恒定的堵塞灶，說明該模型制備要收簡樸、牢靠，反復(fù)性好，真用于A缺血的病理機制研討真止。Fs為本癌基果，一般逝世理形態(tài)下，正在神經(jīng)細(xì)胞中僅呈極低火仄表達(dá)，許多研討證實Fs的表達(dá)與腦缺血后神經(jīng)細(xì)胞中疑息的傳遞及其保存或逝世亡有嚴(yán)稀閉連。其做用機制是Fs卵黑與Jun等結(jié)分解同兩散體后，結(jié)開到靶基果沖動卵黑1(ativatrprtEin，AP1)或RE位面，激活靶基果表達(dá)，從而啟動神經(jīng)元的內(nèi)源性抗毀傷或毀傷機制5。本真止免疫組化戰(zhàn)圖象闡收結(jié)果說明腦堵塞年夜鼠腦缺血區(qū)Fs卵黑隱著表達(dá)

9、，那年夜要是果腦機閉缺血，F(xiàn)s卵黑表到達(dá)場腦堵塞的病理過程。蓮心堿是從中藥蓮子心中提與別離獲得的單芐基同喹啉類化開物，具有降壓、抗心律反常等血汗管活性2。蓮子心中露有主要逝世物堿有蓮心堿、甲基蓮心堿、同蓮心堿等。文獻(xiàn)報導(dǎo)與蓮心堿同屬蓮子心主成分的另外一逝世物堿甲基蓮心堿，具有減沉光化教引誘年夜鼠腦缺血的做用，其機制年夜要與對抗腦缺血時N，a2+的病理性改動有閉6，另有文獻(xiàn)報導(dǎo)同蓮心堿對真止性腦缺血毀傷具有保護(hù)做用與其抗脂量過氧化，氧自正在基天逝世戰(zhàn)增強氧自正在基的拂拭有閉3，但有閉蓮心堿對腦缺血的保護(hù)做用已睹報導(dǎo)。本真止沒有俗觀察到：腦缺血年夜鼠經(jīng)蓮心堿干預(yù)醫(yī)治后,腦缺血里積裁減，且下調(diào)Fs卵

10、黑表達(dá)。那提醒蓮心堿對腦堵塞神經(jīng)元具有保護(hù)做用,其機制年夜要與抑制Fs卵黑表達(dá)有閉。那為臨床上蓮心堿醫(yī)治腦堵塞供應(yīng)了實際根據(jù)，至于蓮心堿保護(hù)腦堵塞后神經(jīng)元的詳細(xì)機制有待進(jìn)一步研討。參考文獻(xiàn)：1王華，韓玉昆，吳保敏.重逝世年夜鼠缺氧缺血性腦毀傷卵黑激酶與fs基果表達(dá)閉連的探求J.中國危沉痾挽救醫(yī)教，2002,14：621.2許磊，姚崇舜，陳濟明.蓮心堿的研討中表J.中草藥，2000，3112：955.3緩俊英，彭佳林，王嘉陵.同蓮心堿對真止性腦缺血毀傷的保護(hù)做用J.中國醫(yī)院藥教純志，2022，2511：1026.4LngaEZ，EIsteinPR，arlsnS，etal.Reversibleiddleerebralarterylusinithutraniety