高中生物菊花組織培養(yǎng)課件

1、高中生物菊花組織培養(yǎng)課件高中生物菊花組織培養(yǎng)課件課題一 菊花的組織培養(yǎng)課題一 菊花的組織培養(yǎng)學(xué)習(xí)目標(biāo)：掌握植物細(xì)胞的全能性，明確植物細(xì)胞體現(xiàn)全能性的條件。了解植物組織培養(yǎng)技術(shù)在生產(chǎn)中的應(yīng)用。熟悉植物組織培養(yǎng)的基本過程。了解影響植物組織培養(yǎng)的各種因素。掌握植物組織培養(yǎng)的基本技術(shù)。學(xué)習(xí)目標(biāo)：掌握植物細(xì)胞的全能性，明確植物細(xì)胞體現(xiàn)全能性的條件有絲分裂受精卵細(xì)胞分化 在個(gè)體發(fā)育中，由一個(gè)或一種細(xì)胞增殖產(chǎn)生的后代，在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和生理功能上發(fā)生穩(wěn)定性差異的過程。1、細(xì)胞分化的概念一、知識回顧有絲分裂受精卵細(xì)胞分化 在個(gè)體發(fā)育中，由一個(gè)或一種細(xì)胞增殖 黑色素細(xì)胞在體外培養(yǎng)30多代后仍能合成黑色素；離體培養(yǎng)的

2、上皮細(xì)胞，始終保持為上皮細(xì)胞，而不會變成其他類型的細(xì)胞。 2、穩(wěn)定性3、不可逆性細(xì)胞分化發(fā)生在整個(gè)生命進(jìn)程中。1、持久性2、細(xì)胞分化的特點(diǎn) 造血干細(xì)胞 原紅細(xì)胞 早幼紅細(xì)胞 中幼紅細(xì)胞 晚幼紅細(xì)胞 成熟紅細(xì)胞 死亡4、普遍性 黑色素細(xì)胞在體外培養(yǎng)30多代后仍能合成黑色素；離體培 細(xì)胞分化是否意味著細(xì)胞中遺傳物質(zhì)的改變？ 遺傳物質(zhì)沒有改變，不同組織的細(xì)胞共同來源于受精卵，經(jīng)有絲分裂產(chǎn)生。 細(xì)胞分化是否意味著細(xì)胞中遺傳物質(zhì)的改變？ 3、細(xì)胞分化的實(shí)質(zhì)ABDCEEDCABEDCABEDCABEDCAB基因在個(gè)體發(fā)育過程中，不同細(xì)胞中遺傳信息的執(zhí)行情況不同即基因的選擇性表達(dá)的過程3、細(xì)胞分化的實(shí)質(zhì)AB

3、DCEEDCABEDCABEDCABE 紅細(xì)胞合成血紅蛋白 (不合成肌動蛋白)肌細(xì)胞肌動蛋白基因開啟合成肌動蛋白 (不合成血紅蛋白)肌動蛋白基因關(guān)閉血紅蛋白基因關(guān)閉血紅蛋白基因開啟試一試:現(xiàn)在你能解釋這些現(xiàn)象了嗎?4、細(xì)胞分化的結(jié)果 細(xì)胞產(chǎn)生了不同種類的蛋白質(zhì)即出現(xiàn)了不同的結(jié)構(gòu)和功能 紅細(xì)胞合成血紅蛋白 (不合成肌動蛋白)肌細(xì)胞肌動蛋白基愈傷組織胚狀體1958，美國，斯圖爾德 植物組織培養(yǎng)離體二、基礎(chǔ)知識愈傷組織胚狀體1958，美國，斯圖爾德離體二、基礎(chǔ)知識（一）植物組織培養(yǎng)概念關(guān)鍵詞： 外植體、脫分化、再分化、愈傷組織 在無菌和人工控制條件下，將離體的植物（ ） 培養(yǎng)在人工配置的培養(yǎng)基上，給

4、予適宜的培養(yǎng)條件，誘導(dǎo)其脫分化產(chǎn)生愈傷組織再分化形成叢芽，最終形成 。又稱：植物離體培養(yǎng)器官、組織、細(xì)胞完整的植株（一）植物組織培養(yǎng)概念關(guān)鍵詞： 在無菌和人工控制條件下，將 由高度分化的植物組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過程。 ：脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)，又可以重新分化成根或芽等器官的過程。 ：用于離體培養(yǎng)的植物器官或組織片段。 ：細(xì)胞排列疏松、無規(guī)則、高度液泡化的無定形的薄壁細(xì)胞。外植體脫分化（或去分化）：再分化愈傷組織 由高度分化的植物組織或細(xì)胞切取形成層無菌接種誘導(dǎo)愈傷組織的形成試管苗的形成培養(yǎng)室移栽脫分化再分化（二）植物組織培養(yǎng)的基本過程切取無菌接種誘導(dǎo)愈傷組織試管苗的形成培養(yǎng)室移栽

5、脫分化再分化（植物組織培養(yǎng)過程離體組織或細(xì)胞植物體脫分化細(xì)胞分裂素生長素愈傷組織芽根細(xì)胞分裂素生長素細(xì)胞分裂素生長素細(xì)胞分裂素生長素細(xì)胞分裂素生長素再分化植物細(xì)胞培養(yǎng)不需要光需要光需光否abABC補(bǔ)充下圖（注：a、b過程，A、B、C為激素使用比例）a過程分裂方式（ ）b過程分裂方式（ ）有絲分裂有絲分裂植物組織培養(yǎng)過程離體組織或細(xì)胞植物體脫分化細(xì)胞分裂素生長素思考：以下培養(yǎng)基出現(xiàn)的現(xiàn)象反應(yīng)了什么問題？生長素/細(xì)胞分裂素高 利于根的形成適中 利于愈傷組織的形成思考：以下培養(yǎng)基出現(xiàn)的現(xiàn)象反應(yīng)了什么問題？生長素/細(xì)胞分供參考的配方1、誘導(dǎo)菊花愈傷組織：在MS培養(yǎng)基中加入BA和NAA，質(zhì)量濃度均為0.

6、5mg、誘導(dǎo)菊花從芽：在MS培養(yǎng)基中加入BA和NAA，質(zhì)量濃度分別為2-3mg和0.020.03mg3、誘導(dǎo)菊花生根：在MS培養(yǎng)基各成分用量減半，并添加入NAA或IAA，質(zhì)量濃度均為0.1mg供參考的配方1、誘導(dǎo)菊花愈傷組織：4溫度、光照、pH的影響光照：菊花每日用日光燈照射12h。溫度： 大多數(shù)植物組織培養(yǎng)控制在2327，低于15時(shí)植物組織會表現(xiàn)生長停止；高于35時(shí)對植物生長不利。菊花的組織培養(yǎng)控制在1822。pH： 不同植物對培養(yǎng)基最適pH的要求不 同，大多數(shù)控制在56.5。 菊花的組織培養(yǎng)控制在5.8左右。4溫度、光照、pH的影響光照：菊花每日用日光燈照射12h。制備MS固體培養(yǎng)基外植體

7、消毒 接種 培 養(yǎng)栽 培四、實(shí)驗(yàn)操作 移 栽沖洗酒精無菌水沖洗氯化汞無菌水沖洗至少三次之上配制各種母液配制培養(yǎng)基滅菌制備MS固體培養(yǎng)基外植體消毒 接種 培 養(yǎng)栽（一）制備MS固體培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基包括20多種營養(yǎng)成分，實(shí)驗(yàn)室一般使用4保存配制好的培養(yǎng)基母液來制備1、配制各種母液無機(jī)物中大量元素濃縮10倍，微量元素濃縮100倍，常溫保存激素類、維生素類以及用量較小的有機(jī)物一般可按1mg/ml的質(zhì)量濃度單獨(dú)配制成母液用母液配制培養(yǎng)基時(shí)，需要根據(jù)各種母液的濃縮倍數(shù)，計(jì)算用量（一）制備MS固體培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基包括20多種營養(yǎng)成分，實(shí)驗(yàn)2、配制培養(yǎng)基分裝到錐形瓶中，每瓶分裝50ml或100ml（ ）（ ）

8、（ ） 由于菊花的莖段的組織培養(yǎng)比較容易，因此不必添加植物激素3、滅菌分裝好的培養(yǎng)基連同其他器械一起進(jìn)行高壓蒸汽滅菌配制培養(yǎng)液調(diào)PH培養(yǎng)基的分裝2、配制培養(yǎng)基分裝到錐形瓶中，每瓶分裝50ml或100ml在植物組織培養(yǎng)的過程中，為什么要進(jìn)行一系列的消毒、滅菌，并且要求無菌操作？在植物組織培養(yǎng)的過程中，1、植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料體積小、抗性差，對培養(yǎng)條件的要求較高：2、用于植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基同樣適合于某些微生物的生長,微生物產(chǎn)生的代謝廢物會毒害培養(yǎng) 的對象；培養(yǎng)物一旦受到微生物的污染，就會導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)前功盡棄；因此要進(jìn)行嚴(yán)格的無菌操作。無菌操作的原因？1、植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料體積小、無

9、菌操作的原因？1、選材： （二）外植體消毒2、消毒流水沖洗菊花莖段用流水沖洗后可少許洗衣粉，用軟刷輕輕刷洗，刷洗后在 下沖洗20min左右 酒精處理用無菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入 中搖動23次，持續(xù)67s，立即將外植體取出，在無菌水中清洗 消毒液處理取出后用 吸干外植體表面的水分，放入 中12min，取出后在無菌水中至少清洗3次，漂凈消毒液流水菊花莖段，取生長旺盛的嫩枝體積分?jǐn)?shù)為70的酒精質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1的氯化汞溶液無菌吸水紙1、選材： （二）外植體消毒2、消毒流水沖洗菊花莖段（三）接種1、接種前用體積分?jǐn)?shù)70%酒精擦拭工作臺，點(diǎn)燃酒精燈，所有操作在酒精燈旁邊進(jìn)行，每次使用器械后都要灼

10、燒滅菌2、將裝有培養(yǎng)基的錐形瓶整齊的排列在酒精燈左側(cè)，將消過毒的菊花莖段在無菌培養(yǎng)皿中切成小段（0.5-1cm）3、左手持錐形瓶，右手拉開捆扎錐形瓶的繩子，并將封口膜攥于右手手心，以避免封口膜接觸瓶口的一面被污染。左手持瓶，使瓶口旋轉(zhuǎn)通過火焰。4、右手用鑷子夾取菊花莖段，插入培養(yǎng)基中，不要倒插，每瓶6-8塊外植體，接種后，將封口膜重新扎好。（三）接種1、接種前用體積分?jǐn)?shù)70%酒精擦拭工作臺，點(diǎn)燃酒精高中生物菊花組織培養(yǎng)課件5、接種注意事項(xiàng)每接種一塊外植體前，鑷子需放入體積分?jǐn)?shù)為70的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精燈火焰上燒一遍，冷卻后再接種外植體在培養(yǎng)基中要分布均勻，放置外植體數(shù)量根據(jù)錐形瓶的

11、大小確定，一般胡蘿卜34塊，菊的莖或葉68塊，也不要太少，以充分利用培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分和光照條件插入時(shí)應(yīng)注意方向：（ ）不要倒插。莖段、莖尖基部插入培養(yǎng)基利于吸收水分和養(yǎng)分形態(tài)學(xué)上端朝上，形態(tài)學(xué)下端朝下5、接種注意事項(xiàng)每接種一塊外植體前，鑷子需放入體積分?jǐn)?shù)為7思考：你打算做幾組重復(fù)？你打算設(shè)置對照實(shí)驗(yàn)嗎？答：每種材料或配方至少要做一組以上的重復(fù)。設(shè)置對照實(shí)驗(yàn)可以取用一個(gè)經(jīng)過滅菌的裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，與接種操作后的錐形瓶一同培養(yǎng)，用以說明培養(yǎng)基制作合格，沒有被雜菌污染。思考：你打算做幾組重復(fù)？你打算設(shè)置對照實(shí)驗(yàn)嗎？答：每種材料或（四）培養(yǎng)接種后的錐形瓶最好放在無菌箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)期間應(yīng)定期消毒培養(yǎng)

12、溫度控制在18-22每日用日光燈光照12h（四）培養(yǎng)接種后的錐形瓶最好放在無菌箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)期間應(yīng)定期正常苗污染苗正常苗污染苗1、外植體帶菌2、培養(yǎng)基及接種器具滅菌不徹底3、接種操作時(shí)帶入4、環(huán)境不清潔污染途徑1、外植體帶菌2、培養(yǎng)基及接種器具滅菌不徹底3、接種操作時(shí)帶（五）移栽 移栽生根的菊花試管苗之前，應(yīng)先打開培養(yǎng)瓶的封口膜，讓試管苗在培養(yǎng)間生長幾日。一般放置在2025的遮蔭環(huán)境中，適應(yīng)57d。試管苗不萎蔫，有新生長的趨勢，便可移栽。1、打開封口膜2、清洗轉(zhuǎn)移 用流水清洗根部的培養(yǎng)基，將幼苗移植到消過毒的蛭石或珍珠巖等環(huán)境下生活一段時(shí)間3、移栽幼苗長壯后，移栽到土壤中（五）移栽 移栽生根的

13、菊花試管苗之前，應(yīng)先打開培養(yǎng)瓶的固體基質(zhì)型，含水量高、蓄水性強(qiáng)、透性好，適合栽培珍珠巖 ,珍珠巖是一種火山噴發(fā)的酸性熔巖，經(jīng)急劇冷卻而成的玻璃質(zhì)巖石，有弧形或圓形裂隙，如珍珠的結(jié)構(gòu)，所以被命名為珍珠巖 。蛭石是一種天然、無毒的礦物質(zhì)，在高溫作用下會膨脹的礦物。它是一種比較少見的礦物，屬于硅酸鹽。 固體基質(zhì)型，含水量高、珍珠巖 ,珍珠巖是一種火山噴發(fā)的酸性熔（六）栽培 幼苗移栽后，每天觀察并記錄幼苗的生長情況，適時(shí)澆水、施肥，直至開花（六）栽培 幼苗移栽后，每天觀察并記錄幼苗的生長情況1、培養(yǎng)基的滅菌（高壓蒸汽滅菌）2、外植體的消毒（酒精、氯化汞）3、接種的無菌操作（酒精、酒精燈灼燒）4、無菌箱

14、中的培養(yǎng)；5、移栽到消過毒的環(huán)境中生存一段時(shí)間。小組討論：在整個(gè)操作過程中，是如何來實(shí)現(xiàn)無菌環(huán)境的？1、培養(yǎng)基的滅菌（高壓蒸汽滅菌）小組討論：在整個(gè)操作過程中，結(jié)果分析與評價(jià)（一）對接種操作中污染情況的分析（二）是否完成了對植物組織的脫分化和再分化（三）是否進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)、對照與記錄（四）生根苗的移栽是否合格結(jié)果分析與評價(jià)（一）對接種操作中污染情況的分析五、課題延伸1、一般來說，容易進(jìn)行無性繁殖的植物，也容易進(jìn)行組織培養(yǎng)2、實(shí)例：蘆薈、豆瓣綠、秋海棠、月季營養(yǎng)繁殖扦插嫁接壓條 五、課題延伸1、一般來說，容易進(jìn)行無性繁殖的植物，也容易進(jìn)行扦插嫁接壓條 扦插嫁接壓條 探究植物激素的使用比例（A=生長素

15、/細(xì)胞分裂素）對植物組織培養(yǎng)的影響 例如：設(shè)計(jì)對照實(shí)驗(yàn) （1）不加植物激素 （2）A1 （3）A1 （4）A1探究植物激素的使用比例菊花的組織培養(yǎng)再分化材料性質(zhì)、營養(yǎng)物質(zhì)、調(diào)節(jié)物質(zhì)、環(huán)境條件外植體的消毒接種基本原理:細(xì)胞的全能性基本過程:脫分化愈傷組織影響因素：操作流程：配制MS固體培養(yǎng)基培養(yǎng)移栽栽培菊花的組織培養(yǎng)再分化材料性質(zhì)、營養(yǎng)物質(zhì)、外植體的消毒接種基本練習(xí)1.答：植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料體積小、抗性差，對培養(yǎng)條件的要求較高。用于植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基同樣適合于某些微生物的生長，如一些細(xì)菌、真菌等的生長。而培養(yǎng)物一旦受到微生物的污染，就會導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)前功盡棄，因此要進(jìn)行嚴(yán)格的無菌操作。2.

16、答：外植體的生理狀態(tài)是成功進(jìn)行組織培養(yǎng)的重要條件之一。生長旺盛的嫩枝生理狀況好，容易誘導(dǎo)脫分化和再分化。練習(xí)達(dá)標(biāo)檢測1下列四個(gè)選項(xiàng)中， 肯定沒有采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)的一項(xiàng)是（ ） A花藥離體培養(yǎng)得到單倍體植株 B秋水仙素處理萌發(fā)的種子 或幼苗得到多倍體植株 C基因工程培育的抗棉鈴蟲的棉花植株 D細(xì)胞工程培育“番茄馬鈴薯”雜種植株基礎(chǔ)鞏固達(dá)標(biāo)檢測1下列四個(gè)選項(xiàng)中，基礎(chǔ)鞏固2菊花的花粉經(jīng)組織培養(yǎng)可發(fā)育成一株幼苗， 這一過程不涉及下列哪一項(xiàng)（ ） A有絲分裂、細(xì)胞分化、組織器官的形成 B呼吸作用、光合作用、相關(guān)激素的調(diào)控 CDNA的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、蛋白質(zhì)的生物合成 D等位基因的分離、非等位基因的自由組合2菊花的花粉經(jīng)組織培養(yǎng)可發(fā)育成一株幼苗，3某花卉感染了植物病毒，葉子呈現(xiàn)皰狀，欲培養(yǎng)出無病毒的后代，應(yīng)采取的方法是（ ）A用種子培養(yǎng)后代 B用無明顯癥狀部分的枝扦插C用莖尖進(jìn)行組織培養(yǎng)誘導(dǎo)出植株D用葉表皮細(xì)胞進(jìn)行組織培養(yǎng)，誘導(dǎo)出植株3某花卉感染了植物病毒，葉子呈現(xiàn)皰狀，欲培養(yǎng)出無病毒的后代4下列關(guān)于影響植物組織培養(yǎng)的因素的敘述 不正確的是（ ）A幼嫩組織較成熟組織易培養(yǎng)成功B給外植體消毒用70%的酒精C接種花藥后一段時(shí)間內(nèi)不需要光照， 但幼小植株形成后需要光照D生長素與細(xì)胞分裂素含量之比較高時(shí) 有利于芽