生物堿類(lèi)成分分析市公開(kāi)課金獎(jiǎng)市賽課一等獎(jiǎng)?wù)n件

1、1.薄層板制備2.黃連藥材判別：2.1對(duì)照品溶液制備：小檗堿作為對(duì)照品，制備小檗堿甲醇對(duì)照品溶液；2.2黃連對(duì)照藥材溶液制備：甲醇回流提取2.3供試品溶液制備：甲醇浸漬提取2.4點(diǎn)樣及展開(kāi)：按照薄層色譜法試驗(yàn)，在同一薄層板上進(jìn)行2.5檢視：供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜及對(duì)照品色譜對(duì)應(yīng)位置上，顯相同斑點(diǎn)中藥制劑教研室第1頁(yè)1.藥味及活性成份選擇 黃連君藥 小檗堿主要活性成份2.供試品溶液制備：提取、純化（液液萃取法）制備供試品溶液3.對(duì)照品溶液制備：精密稱(chēng)取干燥至恒重小檗堿對(duì)照品溶液，溶于甲醇即得對(duì)照品溶液4.固定相即色譜柱選擇：采取ODS柱5.流動(dòng)相選擇：部分含水溶劑，水用超純水，有機(jī)溶劑采

2、取色譜純?nèi)軇?，并?.45um過(guò)濾膜過(guò)濾6.洗脫方式選擇1.怎樣建立一清顆粒定含量測(cè)定分析方法？敘述試驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)。中藥制劑教研室第2頁(yè)7.檢測(cè)器選擇：UVD8.定量分析8.1方法學(xué)考查：專(zhuān)屬性，線(xiàn)性關(guān)系和范圍，精密度試驗(yàn)，重現(xiàn)性試驗(yàn)，穩(wěn)定性試驗(yàn)8.2含量測(cè)定：中藥制劑教研室第3頁(yè)第五章 中藥制劑中各類(lèi)化學(xué)成份分析第一節(jié)生物堿類(lèi)成份分析中藥制劑教研室第4頁(yè)綱領(lǐng)要求熟悉生物堿類(lèi)成份結(jié)構(gòu)特征及理化性質(zhì)掌握生物堿類(lèi)制劑定性判別慣用方法掌握生物堿類(lèi)制劑定量分析慣用方法中藥制劑教研室第5頁(yè)問(wèn)題生物堿類(lèi)成份理化性質(zhì)？含生物堿類(lèi)成份中藥制劑制備供試品時(shí)需考慮問(wèn)題？含生物堿類(lèi)成份中藥制劑定性判別，以硅膠為

3、載體時(shí)，展開(kāi)系統(tǒng)需注意問(wèn)題？HPLC法分析制劑中單體生物堿含量時(shí)，改進(jìn)流動(dòng)相慣用方法？中藥制劑教研室第6頁(yè)概述定義 生物堿是生物界除生物體必須含氮化合物（如氨基酸、蛋白質(zhì)和B族微生素等）之外全部含氮有機(jī)化合物，因其結(jié)構(gòu)中氮原子上未共享電子對(duì)而大多含有堿性。 絕大多數(shù)含有顯著生理活性中藥材中生物堿多和植物酸性成份結(jié)合成鹽狀態(tài)存在中藥制劑教研室第7頁(yè)結(jié)構(gòu)特征及理化性質(zhì)結(jié)構(gòu)特征 C H O N理化性質(zhì)物理性狀：結(jié)晶性固體；液體、小分子固體（揮發(fā)性、升華性），多無(wú)色溶解性：多樣性沉淀反應(yīng)：生物堿沉淀試劑，定性（蛋白質(zhì)、多肽、鞣質(zhì)，防止假陽(yáng)性）顯色反應(yīng)：純品，少用于制劑中生物堿分析堿性：多呈堿性，堿性強(qiáng)

4、成鹽弱游離，供試品制備及分析方法建立及條件 選擇依據(jù)紫外光譜特征：共軛體系，紫外吸收 大多數(shù)生物堿在酸性水溶液中能夠與一些試劑生成不溶于水復(fù)鹽或分子復(fù)合物，這類(lèi)試劑中藥制劑教研室第8頁(yè)定性判別普通理化判別沉淀反應(yīng)多用：酸性條件，凈化處理（除蛋白質(zhì)、多肽、鞣質(zhì)），制劑中兩種以上含生物堿藥材（難說(shuō)明問(wèn)題）中藥制劑教研室第9頁(yè)馬錢(qián)子主含生物堿。以番木鱉堿(士寧) 與馬錢(qián)子堿(布魯生) 為主, 主效成份及毒性成份。生物堿以鹽形式存在，加濃氨水使生物堿鹽轉(zhuǎn)變成游離堿，易溶于氯仿有機(jī)溶劑。地龍含較多多肽、蛋白質(zhì)等，不溶于有機(jī)溶劑。中藥制劑教研室第10頁(yè)定性判別色譜判別1.TLC法：慣用載體：硅膠慣用展開(kāi)劑

5、：氯仿、苯及對(duì)應(yīng)極性調(diào)整劑硅膠弱酸性，形成鹽至Rf值小、拖尾、復(fù)斑，堿性展開(kāi)系統(tǒng)or堿性條件下顯色劑：改良碘化鉍鉀（橘紅色）供試品制備：處方、劑型、存在狀態(tài)、溶解性、共存成份性質(zhì)中藥制劑教研室第11頁(yè)中藥制劑教研室第12頁(yè)中藥制劑教研室第13頁(yè)固體劑型回流提取中藥制劑教研室第14頁(yè)中藥制劑教研室第15頁(yè)液體劑型液液萃取中藥制劑教研室第16頁(yè)中藥制劑教研室第17頁(yè)固體劑型大蜜丸中藥制劑教研室第18頁(yè)中藥制劑教研室第19頁(yè)定性判別色譜判別2.紙色譜法：顯色：含硫酸試劑不可3.HPLC法：快速、靈敏、微量Rt值法，峰面積 or 峰高加大法（用內(nèi)標(biāo)）中藥制劑教研室第20頁(yè)含量測(cè)定反應(yīng)中藥制劑中含生物堿

6、真實(shí)情況提取、凈化、分析測(cè)定均要準(zhǔn)確方法學(xué)考查內(nèi)容1.提取凈化條件考查2.測(cè)定方法與條件選擇3. 定量分析方法驗(yàn)證3.1 專(zhuān)屬性 3.2 線(xiàn)性關(guān)系考查 3.3 精密度試驗(yàn)3.4 準(zhǔn)確度試驗(yàn) 3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 3.6 測(cè)靈敏度及檢測(cè)限測(cè)定中藥制劑教研室第21頁(yè)含量測(cè)定總生物堿含量測(cè)定化學(xué)分析法范圍：處方藥味少，內(nèi)含成份簡(jiǎn)單中藥制劑酸堿滴定法：生物堿堿性強(qiáng)弱，水/非溶液酸堿滴定法重量法：提取生物堿成沉淀 or 加生物堿沉淀試劑中藥制劑教研室第22頁(yè)中藥制劑教研室第23頁(yè)酸堿滴定法中藥制劑教研室第24頁(yè)中藥制劑教研室第25頁(yè)中藥制劑教研室第26頁(yè)中藥制劑教研室第27頁(yè)中藥制劑教研室第28頁(yè)重量法溶

7、液后標(biāo)示“（110）”等符號(hào)，系指固體溶質(zhì)1.0g或液體溶質(zhì)1.0ml加溶劑使成10ml溶液；未指明用何種溶劑時(shí)，均系指水溶液；中藥制劑教研室第29頁(yè)含量測(cè)定分光光度法樣品分離、凈化（化學(xué)法、柱色譜法、TLC法等）直接測(cè)定法：不經(jīng)過(guò)化學(xué)反應(yīng)用生物堿物質(zhì)本身吸收波長(zhǎng)范圍：藥品少，內(nèi)含成份簡(jiǎn)單中藥制劑離子對(duì)萃取比色法中藥制劑教研室第30頁(yè)中藥制劑教研室第31頁(yè)分光光度法：直接測(cè)定法藥典：HPLC 定量黃連、炒白芍中藥制劑教研室第32頁(yè)中藥制劑教研室第33頁(yè)分光光度法：直接測(cè)定法藥典：HPLC 定量黃連中藥制劑教研室第34頁(yè)分光光度法離子對(duì)萃取比色法范圍：中藥制劑中微量生物堿含量測(cè)定原理：一定PH介

8、質(zhì)中，有機(jī)堿與一些酸性染料或磺酸類(lèi)、酸類(lèi)陰離子，定量結(jié)合為有色離子對(duì)，離子對(duì)定量溶于一些有機(jī)溶劑，一定波長(zhǎng)下測(cè)定有機(jī)溶劑或堿化后釋放出染料吸收度，按分光光度法計(jì)算有機(jī)堿含量。慣用方法：酸性染料比色法和苦味酸鹽比色法中藥制劑教研室第35頁(yè)分光光度法酸性染料比色法 適當(dāng)PH介質(zhì)中，生物堿可與氫離子結(jié)合成生物堿鹽陽(yáng)離子，而酸性染料在此條件下解離為陰離子，生物堿鹽陽(yáng)離子與染料陰離子定量地結(jié)合成有色配合物（即離子對(duì)），此離子對(duì)可定量地溶于一些有機(jī)溶劑，測(cè)定有機(jī)溶劑吸收度 or 經(jīng)堿化后釋放出染料吸收度，即可計(jì)算生物堿含量。中藥制劑教研室第36頁(yè)分光光度法酸性染料比色法關(guān)鍵：介質(zhì)PH、酸性染料種類(lèi)、有機(jī)溶

9、劑pH值選擇：染料性質(zhì)及生物堿堿性，生物堿一元堿與溴百里酚藍(lán)形成1：1離子對(duì)，pH(5.26.4)，二元堿形成1：2離子對(duì)， pH(3.05.8)慣用染料：溴百里酚藍(lán)、溴甲酚綠、溴酚藍(lán)、溴甲酚紫中藥制劑教研室第37頁(yè)分光光度法酸性染料比色法有機(jī)溶劑選擇：依據(jù)離子對(duì)與有機(jī)相能否形成氫鍵以及形成氫堿能力強(qiáng)弱，氯仿、二氯甲烷與離子對(duì)形成氫鍵，有中等程度萃取率，選擇性好，是慣用提取溶劑有機(jī)相中水份影響：微量水分使氯仿發(fā)生渾濁，且水相中過(guò)量染料影響測(cè)定結(jié)果。有機(jī)溶劑提取液可加脫水劑或經(jīng)干燥濾紙濾過(guò)除去水分。中藥制劑教研室第38頁(yè) 烏頭總生物堿+麻黃HPLC定量中藥制劑教研室第39頁(yè)中藥制劑教研室第40頁(yè)

10、酸性染料分光光度法水相pH選擇是分別取烏頭堿標(biāo)準(zhǔn)液，以不一樣pH緩沖液進(jìn)行試驗(yàn)，pH3.0很好。該條件下，吸收度較大，指示液空白對(duì)照吸收度較小，呈色穩(wěn)定性好中藥制劑教研室第41頁(yè)分光光度法雷氏鹽比色法雷氏鹽（雷氏銨or硫氰酸鉻銨）：微溶于冷水，易溶熱水，可溶于乙醇雷氏鹽酸性介質(zhì)中可與生物堿類(lèi)成份定量地生成難溶于水有色配合物，生物堿雷氏鹽沉淀易溶于丙酮，其丙酮溶液展現(xiàn)吸收特征是因?yàn)榉肿咏Y(jié)構(gòu)中硫氰酸鉻銨部分，而非生物堿部分。中藥制劑教研室第42頁(yè)分光光度法雷氏鹽比色法I 將此沉淀過(guò)濾洗凈后溶于丙酮/甲醇直接比色測(cè)定，換算生物堿含量；II 精密加入過(guò)量雷氏鹽試劑，濾除生產(chǎn)生物堿雷氏鹽沉淀，用濾液進(jìn)行

11、比色測(cè)定殘余過(guò)量雷氏鹽含量，間接計(jì)算生物堿含量（雷氏鹽剩下比色法）。中藥制劑教研室第43頁(yè)分光光度法雷氏鹽比色法注意事項(xiàng)：1.雷氏鹽水溶液室溫可分解，應(yīng)新鮮配制，沉淀需在低溫進(jìn)行2.中藥制劑應(yīng)先純化處理3.雷氏鹽丙酮or丙酮水溶液吸收值，隨時(shí)間有改變，應(yīng)盡快測(cè)定中藥制劑教研室第44頁(yè)中藥制劑教研室第45頁(yè)超聲處理：不一樣功率、頻率超聲提取儀對(duì)含量測(cè)定結(jié)果不一樣在同一提取器內(nèi)因?yàn)閿[放部位不一樣提取效果也不一致。中藥制劑教研室第46頁(yè)含量測(cè)定單體生物堿含量測(cè)定TLCHPLCGC中藥制劑教研室第47頁(yè)含量測(cè)定單體生物堿含量測(cè)定TLC法：樣品需純化，吸附劑、展開(kāi)劑及顯色與判別相同，要求更嚴(yán)格中藥制劑教

12、研室第48頁(yè)3中藥制劑教研室第49頁(yè)3中藥制劑教研室第50頁(yè)藥典：HPLC法定量黃連中藥制劑教研室第51頁(yè)中藥制劑教研室第52頁(yè)含量測(cè)定HPLC法：反相HPLC法應(yīng)用多（ODS or C18)硅醇基酸性大，生物堿可與其牢靠鍵合，保留時(shí)間延長(zhǎng)，峰形變寬，拖尾，克服辦法：改進(jìn)流動(dòng)相改進(jìn)固定相中藥制劑教研室第53頁(yè)含量測(cè)定HPLC法：改進(jìn)流動(dòng)相：流動(dòng)相中加入硅醇基抑制劑，競(jìng)爭(zhēng)或部分阻斷硅醇劑影響，最慣用硅醇基抑制劑是二乙胺、三乙胺（TEA)等。采取離子對(duì)色譜系統(tǒng)：適當(dāng)pH下，流動(dòng)相中加入低濃度離子對(duì)試劑，經(jīng)過(guò)與生物堿類(lèi)成份生成離子對(duì)而掩蔽其堿性基團(tuán)。慣用離子對(duì)試劑：辛烷磺酸鈉或十二烷基磺酸鈉。注意：

13、清洗柱子，防止過(guò)夜，確保色譜柱壽命。中藥制劑教研室第54頁(yè)含量測(cè)定HPLC法：改進(jìn)流動(dòng)相： 流動(dòng)相中加入季銨鹽試劑，掩蔽固定相表面硅醇基，如在水甲醇中加入0.01mol/L溴化四甲基胺。流動(dòng)相中加入電解質(zhì)緩沖鹽，經(jīng)過(guò)改變流動(dòng)相離子強(qiáng)度，穩(wěn)定pH值及促進(jìn)離子對(duì)相互作用，起到改進(jìn)峰形及分離效果作用。中藥制劑教研室第55頁(yè)中藥制劑教研室第56頁(yè)流動(dòng)相+電介質(zhì)緩沖鹽中藥制劑教研室第57頁(yè)中藥制劑教研室第58頁(yè)流動(dòng)相+電介質(zhì)緩沖鹽中藥制劑教研室第59頁(yè)中藥制劑教研室第60頁(yè)中藥制劑教研室第61頁(yè)流動(dòng)相+離子對(duì)試劑中藥制劑教研室第62頁(yè)中藥制劑教研室第63頁(yè)中藥制劑教研室第64頁(yè)中藥制劑教研室第65頁(yè)中藥

14、制劑教研室第66頁(yè)中藥制劑教研室第67頁(yè)中藥制劑教研室第68頁(yè)中藥制劑教研室第69頁(yè)中藥制劑教研室第70頁(yè)中藥制劑教研室第71頁(yè)中藥制劑教研室第72頁(yè)中藥制劑教研室第73頁(yè)中藥制劑教研室第74頁(yè)含量測(cè)定GC法范圍：有揮發(fā)性，遇熱不分解生物堿類(lèi)（藥典未收載），如麻黃堿、檳榔堿、苦參堿、顛茄類(lèi)生物堿等。中藥制劑教研室第75頁(yè)中藥制劑教研室第76頁(yè)中藥制劑教研室第77頁(yè)中藥制劑教研室第78頁(yè)中藥制劑教研室第79頁(yè)常見(jiàn)生物堿類(lèi)成份中英文對(duì)照小檗堿：berberine士寧：strychnine烏頭堿：aconitine苦參堿：matrine甜菜堿：betaine麻黃堿：ephrine水蘇堿：stachy

15、drine吳茱萸堿：evodiamine中藥制劑教研室第80頁(yè)思索題小兒清熱片質(zhì)量分析方案設(shè)計(jì)，請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)本品定性判別、檢驗(yàn)及含量測(cè)定分析方案。定性判別：對(duì)照品、對(duì)照藥材、判別方法（要不少于5味藥材）檢驗(yàn)：片劑檢驗(yàn)內(nèi)容含量測(cè)定：所測(cè)成份、提取凈化方法、測(cè)定方法、含量測(cè)定方法學(xué)考查內(nèi)容中藥制劑教研室第81頁(yè)中藥制劑教研室第82頁(yè)名稱(chēng)處方制法性狀判別檢驗(yàn)浸出物測(cè)定含量測(cè)定功效與主治使用方法與用量注意規(guī)格貯藏中藥制劑教研室第83頁(yè)進(jìn)展High performance capillary electrophoresis, HPCE高靈敏度 高分離效率（比HPLC 高得多:理論板數(shù)在百萬(wàn)以上，最高可達(dá) 10,000,000/m ）高速度 （普通一次分離僅需幾十秒鐘至數(shù)分鐘）所需樣品量少:進(jìn)樣量 1-10 Nl,樣品量 5ul -5 mL檢測(cè) :在線(xiàn)檢測(cè)自動(dòng)化: 自動(dòng)進(jìn)樣，緩沖液交換，數(shù)據(jù)處理重現(xiàn)性: 遷移時(shí)間 0.5% 運(yùn)行成本較低應(yīng)用范圍極廣有各種模式可免于接觸HPLC流動(dòng)相毒性和污染中藥制劑教研室第84頁(yè)苦