Lab-8細(xì)菌的快速測定

1、實(shí)驗(yàn)八細(xì)菌的鑒定（BBL半自動(dòng)鑒定系統(tǒng)）一、教學(xué)要求了解不同的微生物快速鑒定方法及應(yīng)用初步掌握細(xì)菌自動(dòng)鑒定系統(tǒng) （BBL CRYSTAL）的操作技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)原理1、 Miniaturized Biochemical Assays Bacteria can be identified by specific biochemical products they produce during growth. Biochemical and enzymatic reactions Miniaturized biochemical assays test for these specific produ

2、cts1API- Identification KitsGram-negative bacteriaStaphylococci22、Immunoassays血清學(xué)反應(yīng)（Serological reactions）Agglutination reactions、Precipitation reactions 免疫標(biāo)記（immunolabel) Radioimmunoassays (RIA) Fluorescent immunoassays (FIA) Enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA) Chemiluminesent Immunoassay(CL

3、IA)、 Time-resolved fluorescent immunoassays（TRFIA） Immunogold labelling 3ELISA（enzyme linked immunosorbent assay） The ELISA can be used to detect the presence of antigens that are recognized by an antibody, or it can be used to test for antibodies that recognize an antigen. Sandwich ELISA 4Immunogol

4、d labelling techiques斑點(diǎn)免疫金滲濾法膠體金標(biāo)記免疫層析法 563、Nucleic acid based assayDNA hybridizationfollowed by detection with Dot blot assay Fluorescence or ChemiluminesencePolymerase Chain Reaction (PCR)followed by detection with Gel electrophoresisFluorescence or ChemiluminesenceNew assay formats under developm

5、ent7Automated Identification SystemsVITEK系列全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)（biosMerieumx）BBL CrystalTM半自動(dòng)/自動(dòng)細(xì)菌鑒定系統(tǒng)（BD）鑒定板，比濁儀，微生物鑒定專家數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)，自動(dòng)判讀儀(Autoreader)81、 鑒定版（6類）NH 奈瑟氏/嗜血桿菌 3.0麥?zhǔn)蠞岫?3537 孵育4小時(shí)GP 革蘭氏陽性菌 0.5麥?zhǔn)蠞岫?3537 孵育1824小時(shí)RGP 快速革蘭氏陽性菌 2.0麥?zhǔn)蠞岫?3537 孵育4小時(shí)ANR 厭氧菌 4.0-5.0麥?zhǔn)蠞岫?3537 孵育4小時(shí)ENF 腸/非發(fā)酵菌 0.5麥?zhǔn)蠞岫?3537 孵育1820小時(shí)

6、RSE 快速糞/腸菌 0.5-1.0麥?zhǔn)蠞岫?3537 孵育3小時(shí) 9三 材料與器材菌種：待測的分純菌株試劑：無菌水，液體石臘，滅菌滴管等API 20 E 系統(tǒng)10四 操作步驟 (BBL CRYSTAL細(xì)菌自動(dòng)鑒定系統(tǒng) )1、配制菌液 挑取單個(gè)菌落，在肉湯管（廠商已提供）中混勻，調(diào)節(jié)好菌液濃度（ 0.5-1.0麥?zhǔn)蠞岫?）。2、接種 取出盛液盒,配制好的菌懸液直接倒入頭部，輕輕地來回顛倒盛液盒，使菌液均勻充滿每一孔，并讓多余的菌液回到頭部。撕開鑒定板的密封包裝，鑒定板，其泡沫部位對(duì)應(yīng)盛液盒的頭部，均勻下壓，使鑒定板和盛液盒合緊。3、培養(yǎng) 翻轉(zhuǎn)鑒定板（標(biāo)簽向下）放鑒定板入配套托盤內(nèi)，放入非CO2 35-37OC，濕度40-60%的孵育箱孵育3.0h。 114、讀板按時(shí)取出鑒定板，立刻判讀結(jié)果。如果暫時(shí)無法判讀結(jié)果。放鑒定板于28冰箱。盡早判讀。注意事項(xiàng)：應(yīng)使用新鮮菌落（菌齡小于24小時(shí)）使用單個(gè)菌落配制菌懸液。90%以上的鑒定錯(cuò)誤或無鑒定結(jié)果是由細(xì)菌不純引起。不同的鑒定板需配置特定的菌液濃度。鑒定板起封后，1小時(shí)內(nèi)使用。已裝有標(biāo)本的檢測板5分鐘內(nèi)放入孵育箱。檢測板孵育時(shí)，重疊不超過兩層。孵育完成需盡快將鑒定板從溫箱中取出，不能超過規(guī)定孵育時(shí)間。（可提前不能延后）。及時(shí)讀板，否則放入冰箱。每種鑒定板只能鑒定其菌種庫中