飼用小肽產(chǎn)品應用與檢測

1、飼用小肽產(chǎn)品的應用與檢測技術(shù)總監(jiān):唐旭內(nèi) 容肽類產(chǎn)品的主要應用小肽的轉(zhuǎn)運吸收3. 肽的分離和分析技術(shù)肽類產(chǎn)品的應用現(xiàn)狀歐美肽類藥物和試劑營養(yǎng)性小肽和具有生理活性功能的肽中國尚無具有獨立知識產(chǎn)權(quán)的肽類藥物營養(yǎng)性小肽和具有生理活性功能的肽蛋白質(zhì)吸收機理的研究歷史1950以前 傳統(tǒng)理論: Dogma提出的蛋白質(zhì)必須水解成 FAA,才能被吸收的觀點居主導地位1953 Agar首次證實了完整的雙甘肽被大鼠腸道吸收 Smyth證實肽可完整進入腸粘膜細胞1980-現(xiàn)在 證實了肽有獨立的轉(zhuǎn)運通道, 其轉(zhuǎn)運效率 可能超過氨基酸的轉(zhuǎn)運通道肽和氨基酸的吸收兩種獨立的轉(zhuǎn)運機制 氨基酸的轉(zhuǎn)運吸收: 鈉離子泵: 逆濃度,

2、 消耗ATP 非鈉離子泵: 逆濃度, 消耗ATP 小肽的轉(zhuǎn)運吸收 Ca+ / H+ 轉(zhuǎn)運系統(tǒng): 逆濃度, 消耗ATP Na+ / H+ 轉(zhuǎn)運系統(tǒng): 依賴H+ 的電化學梯度, 不耗能 谷胱甘肽(GSH)轉(zhuǎn)運系統(tǒng): 具有特殊的生理意義 肽的轉(zhuǎn)運吸收兩種轉(zhuǎn)運吸收機制的比較腸道肽載體對底物具有廣泛適應,能接受幾乎所有的二,三肽作為底物2. 小肽吸收速度快,耗能低3. 小肽吸收可避免氨基酸之間的吸收競爭 ( Addison 1972, Ganapathy 1981, Guandalini等 1982, Hara 1984, Rarat 1992 1995.)兩種吸收機制的競爭腸道底物中肽所占比例肽鏈長度

3、SP和FAA兩種吸收機制轉(zhuǎn)運量和轉(zhuǎn)運效率的研究Matthews 1972 大鼠對酪蛋白，乳清蛋白酶解產(chǎn)物的吸收率高于相應的游離氨基酸Hara 1984 大鼠對白蛋白等的酶解產(chǎn)物的吸收強度 高于相應的游離氨基酸的7080%Rerat 1998 豬十二指腸灌注小肽混合物時，出現(xiàn)在 門靜脈的氨基酸比灌注相應的氨基酸混 合物時更早，且吸收峰更高小肽對動物組織蛋白質(zhì)代謝的影響B(tài)oza 1995, Hara 1984,Infamle 1992,Monchi 1993, Pullain 1989, Zaloga 1991 當以小肽形式作為氮源時，整體蛋白質(zhì)沉積率高于相應的氨 基酸日糧或完整蛋白日糧。Funa

4、biki 1990 肽日糧組小鼠組織蛋白合成率較相應的氨基酸日糧組 高Nielsen 1998 灌注小肽混合物的豬組織蛋白質(zhì)合成率顯著高于灌注相應 的混合物組兩種獨立的轉(zhuǎn)運吸收機制（小結(jié)）與氨基酸的轉(zhuǎn)運通道相比，肽轉(zhuǎn)運通道具有載體耐 受性強，不易飽和，吸收速度快，可避免氨基酸之 間的吸收競爭等特點。兩種轉(zhuǎn)運通道對蛋白質(zhì)吸收的貢獻取決于腸道廢物 中肽的比例和肽鏈的長度。 肽的分離與分析反相高效液相色譜（） 保留系數(shù)與肽的結(jié)構(gòu)：肽鏈長度，氨基酸極性等 反相載體：小肽的分離 Altex Ultrasphere C18和C8, Waters NovaPak C18 大分子量肽 Vydac C18 ,

5、Synchropak C18 300A肽圖分析 (Peptide Mapping)Peptide mapping and differential display of glycopeptides 疏水作用色譜（）利用多肽中的疏水基因達到分離分析的目的優(yōu)點：多肽變性較少，活性穩(wěn)定膜蛋白色譜(CMP) 分離強疏水性蛋白,多肽混合物的層析系統(tǒng),常用去垢劑(如SDS)溶解膜蛋白形成SDS-融膜蛋白,由羥基磷灰石柱分離純化CE在多肽分析中的應用 肽的鑒別分析,結(jié)構(gòu)分析微量制備純度檢測.非均一性檢測穩(wěn)定性和動力學研究CE肽圖CZE純度檢測CZEMECC SDS-CGE非均一性檢測CZE MECC CIE

6、F CE-MS穩(wěn)定性和動力學研究CZE SDSCIEF質(zhì)譜的應用電霧離子化質(zhì)譜(ESI-MS) 分子量較大多肽的在線分析 精度0.01%; 分辨率1000 ESIHPLC ESICZE 基質(zhì)輔助激光離子化飛行時間質(zhì)譜MALDITOFMS 高效, 快速, 高靈敏度, 特別適合于測定肽的混合物(如蛋白質(zhì)酶解產(chǎn)物)的分子質(zhì)量 可以測量的分子量范圍是無限制的 精度0.01%-0.1%蛋白質(zhì)組合酶解產(chǎn)物的MALDI質(zhì)譜圖富力肽的分子量分布分析方法：基質(zhì)輔助激光解吸附飛行時間質(zhì)譜 （MALDI-TOF-Mass Spectroscopy） 分子量 摩爾百分含量 0-160 3% 161-650 87% 651-1000 8% 1000 2%未知肽的序列測定 Ladder測序: Edman降解與MALDI結(jié)合翻譯后修飾的鑒定磷酸化: 比較堿性磷酶脫磷前后的MALDI質(zhì)譜,確定磷酸化的位點, 精度高, 耗時少糖基化: MALDI不易受緩沖液影響,是測定特定糖苷酶水解引起分子量變化的理想技術(shù)蛋白質(zhì)酶解效果的判定-常規(guī)方法酸溶性氮得率蛋白水解度(DH)氮溶指數(shù)(NSI): 小分子肽與大分子蛋白質(zhì)