反相高效液相色譜法測定白頭翁藥材中白頭翁皂苷B4的含量

1、反相高效液相色譜法測定白頭翁藥材中白頭翁皂苷B4的含量【摘要】目的建立白頭翁藥材中白頭翁皂苷B4的含量測定方法。方法采用反相高效液相色譜RP-HPL法，色譜柱：Krasil18(2504.6，5)，以乙腈-0.1%磷酸2872為流動(dòng)相，流速：1.0lin-1，檢測波長：205n，柱溫：30。結(jié)果白頭翁皂苷B4在29.4147gL-1內(nèi)呈良好線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.9999，平均回收率為99.7%，RSD為1.14%。結(jié)論該方法簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于白頭翁藥材的質(zhì)量控制?！娟P(guān)鍵詞】反相高效液相色譜法；白頭翁；白頭翁皂苷B4白頭翁為毛茛科植物白頭翁PulsatillahinensisBge.

2、Regel的枯燥根，味苦，性寒，歸胃、大腸經(jīng)。白頭翁始載于?本經(jīng)?，具有清熱解毒，涼血止痢之成效，可用于治療熱毒血痢，陰癢帶下，瘰疬，癰腫，禿瘡等1。其主要有效成分為皂苷類成分，白頭翁皂苷B4為其主要有效成分之一，其含量也較高。故本實(shí)驗(yàn)采用反相高效液相色譜法對(duì)其含量進(jìn)展測定，對(duì)白頭翁藥材或制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究具有重要意義。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明，該方法簡便可靠，重現(xiàn)性好，為白頭翁藥材或制劑的質(zhì)量控制提供了參考根據(jù)。1儀器與試劑美國aters高效液相色譜儀515泵，2487紫外檢測器，hrStatin色譜工作站，KQ3200型超聲儀昆山市超聲儀器。白頭翁皂苷B4對(duì)照品中國藥品生物制品檢定所，白頭翁藥材由三九

3、藥業(yè)提供，甲醇為色譜純天津市康科德科技，水為自制重蒸水。2方法與結(jié)果2.1色譜條件色譜柱為Krasil18(2504.6，5)，以乙腈-0.1%磷酸2872為流動(dòng)相，流速為1.0lin-1，檢測波長為205n，柱溫為30，進(jìn)樣量：10l。2.2溶液的制備2.2.1對(duì)照品儲(chǔ)藏液的制備精細(xì)稱取白頭翁皂苷B4對(duì)照品1.47g，加甲醇定容至10l，制成每1l含白頭翁皂苷B4147g的溶液，作為對(duì)照品溶液。2.2.2供試品溶液的制備白頭翁藥材粉碎后，精細(xì)稱取藥材粉末過3號(hào)篩0.12g，置具塞錐形瓶中，精細(xì)參加甲醇10l，超聲30in，放冷，過濾，濾液置50l量瓶中，用少量流動(dòng)相洗滌容器及殘?jiān)?，洗液并入?/p>

4、一量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，過0.2濾膜即得。2.3系統(tǒng)適用性試驗(yàn)取供試品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)樣分析，白頭翁皂苷B4與相鄰色譜峰的別離度大于1.5，理論塔板數(shù)不低于3000圖12。2.4線性關(guān)系考察取對(duì)照品儲(chǔ)藏液，按照不同比例稀釋，使白頭翁皂苷B4質(zhì)量濃度分別為29.4，58.8，88.2，117.6，147gL-1。分別取上述溶液各10l進(jìn)樣測定，記錄色譜圖。以對(duì)照品質(zhì)量濃度X為橫坐標(biāo)，峰面積Y為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并進(jìn)展回歸計(jì)算，回歸方程為：Y=2.8844X-2.04(r=0.9999，n=5)。結(jié)果說明，白頭翁皂苷B4質(zhì)量濃度在29.4147gL-1內(nèi)呈良好線性關(guān)系。結(jié)果見

5、表1。表1標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果略轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.5儀器精細(xì)度實(shí)驗(yàn)取同一對(duì)照品溶液，按上述色譜條件，重復(fù)進(jìn)樣5次，計(jì)算白頭翁皂苷B4色譜峰面積的RSD為0.32%n=5。結(jié)果見表2。表2精細(xì)度結(jié)果略2.6方法重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一批號(hào)的樣品，按“2.2.2條方法平行制備5份樣品按上述色譜條件進(jìn)樣分析，計(jì)算白頭翁皂苷B4含量的RSD為1.37%n=5。見表3。表3重復(fù)性結(jié)果略2.7穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取同一供試品溶液，分別于0，2，4，6，8，12h注入液相色譜儀，依法測定。計(jì)算白頭翁皂苷B4色譜峰面積的RSD為1.47%n=6。結(jié)果見表4。結(jié)果說明，樣品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。表4穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果略2.8回收率實(shí)驗(yàn)

6、精細(xì)稱取含量的白頭翁藥材粉末過3號(hào)篩6份，分別精細(xì)參加高、中、低質(zhì)量濃度的對(duì)照品相當(dāng)于藥材含量的80%，100%，120%，每一質(zhì)量濃度2份，按上述方法測定分析，白頭翁皂苷B4平均回收率分別為99.7%n=6結(jié)果見表5。表5回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果略2.9含量測定取3批供試品，按“2.2.2條操作，在上述條件下進(jìn)樣分析，記錄色譜峰面積，采用外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算白頭翁皂苷B4的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4.9%。3討論3.1色譜條件的選擇檢測波長的選擇參照?中華人民共和國藥典?2022版增訂2局部的白頭翁項(xiàng)下，藥典選擇測定波長為201n，流動(dòng)相選用甲醇和水，我們進(jìn)展了樣品的全波長掃描，發(fā)如今200205n波長范圍內(nèi)，樣品均呈現(xiàn)

7、較強(qiáng)吸收，以甲醇和水為流動(dòng)相基線極不平穩(wěn)，參考相關(guān)文獻(xiàn)3，4，HPL法測定白頭翁含量所用的流動(dòng)相是比例不同的甲醇-0.1%磷酸系統(tǒng)和乙腈-0.1%磷酸等系統(tǒng)。本文經(jīng)過屢次實(shí)驗(yàn)探索，發(fā)現(xiàn)由乙腈-0.1%磷酸系統(tǒng)在205n波長下基線平穩(wěn)，分別選用不同比例的該流動(dòng)相系統(tǒng)：乙腈-0.1%磷酸3070；乙腈-0.1%磷酸2971；乙腈-0.1%磷酸2575，發(fā)現(xiàn)乙腈-0.1%磷酸比例為2872可以使白頭翁皂苷B4得到較好別離，且重復(fù)性好。3.2樣品提取條件的選擇實(shí)驗(yàn)過程中，我們分別采用回流和超聲兩種方法進(jìn)展提取，超聲提取效果明顯好于回流提取法；分別采用甲醇，70%乙醇，95%乙醇作溶劑進(jìn)展提取，結(jié)果顯示甲醇提取效果更好。該實(shí)驗(yàn)為白頭翁藥材中白頭翁皂苷B4的檢測及含量測定提供了參考方法，為白頭翁藥材的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)化和標(biāo)準(zhǔn)化提供了根據(jù)?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1唐德才.中藥學(xué).上海：上海中醫(yī)藥大學(xué)出版社，2022:111.2國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典增訂S.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2022:68.3