太子參多糖含量分析及其動(dòng)態(tài)研究

1、太子參多糖含量分析及其動(dòng)態(tài)研究【摘要】目的分析不同采收期、貯藏期、生長條件及取材部位的太子參中多糖的含量，討論太子參多糖的動(dòng)態(tài)積累及其變化規(guī)律。方法用HPL-ELSD法測(cè)定多糖的含量。以葡萄糖為對(duì)照品，測(cè)定太子參多糖中葡萄糖含量，求出多糖換算因子，將樣品液中測(cè)得的葡萄糖量換算出多糖含量。結(jié)果不同生長期太子參中多糖的動(dòng)態(tài)積累具有一定規(guī)律;貯藏時(shí)間對(duì)太子參中多糖含量具有一定影響;太子參野生品與栽培品、主根與參尾中多糖含量具有一定差異。結(jié)論為太子參藥材的采收、加工與貯藏及其質(zhì)量評(píng)價(jià)提供了根據(jù)?！娟P(guān)鍵詞】太子參;多糖;含量分析;動(dòng)態(tài)變化Abstrat：bjetiveTanalyzethententfp

2、lysaharideinRadixPseudstellariaefrdifferentharvesttie,stragetie,grthnditinanddraedeterial,anddeterinethedynaihangefplysaharidententinRadixPseudstellariae.ethdsPlysaharideastestedbyHPL-ELSD.ithgluseasstandard,thepurifiedplysaharideashydrlyzedtgluse,andtheplysaharidenversinfatrasululated.Thrughthenver

3、satinfatr,thententfgluseasnvertedtthententfplysaharideindifferentsaples.ResultsTheauulatinfplysaharideshedaregularpatternindifferentgrthtie;StragetiehadeffetnntentfplysaharideinRadixPseudstellariae,andthententfplysaharideasdifferentinildingandultivatedsaple,inthebdiesandrtsfRadixPseudstellariae.nlus

4、inThisexperientprvidestheryfundatinfrsientifiharvest,pressing,strageandqualityassessentfPseudstellariaheterphylla.Keyrds：RadixPseudstellariae;Plysaharide;ntentanalysis;Dynaihange太子參為?中國藥典?收載的常用中藥，具益氣健脾、生津潤肺之成效，臨床用于脾虛體倦、食欲不振、病后虛弱、氣陰缺乏、自汗口渴、肺燥干咳等癥，尤其是治療小兒脾虛而食欲不佳的要藥。藥理試驗(yàn)說明，太子參多糖具有增強(qiáng)機(jī)體免疫功能的作用1，2。太子參多糖為中

5、性葡聚糖3，有關(guān)太子參多糖含量測(cè)定一般多采用硫酸-苯酚比色法46，還有采用SE-HPL法測(cè)定3，本文在建立多糖HPL-ELSD測(cè)定方法，分析不同產(chǎn)地太子參多糖含量7的根底上,對(duì)不同采收時(shí)間、不同貯藏時(shí)間、不同取材部位以及野生與栽培的太子參樣品進(jìn)展了分析，為太子參藥材的合理采收、科學(xué)加工與貯藏及其質(zhì)量評(píng)價(jià)提供根據(jù)。1儀器與試藥島津L-10AD高效液相色譜儀，Allfeh500型蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，H-2000色譜數(shù)據(jù)工作站;ShiadzuAY220電子天平;KQ-500B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器)。葡萄糖對(duì)照品(Siga公司)，甲醇(江蘇漢邦科技，色譜純，批號(hào)2022051802)，雙重蒸餾

6、水，硫酸(批號(hào)061030558)等試劑均為化學(xué)純。2方法與結(jié)果2.1色譜條件色譜柱為漢邦Krasil18分析柱(2504.6，5);流動(dòng)相為H3H-H2(595);流速0.8l/in;柱溫30;檢測(cè)器漂移管溫度115;分析時(shí)間5in;進(jìn)樣量20l。2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精細(xì)稱取葡萄糖對(duì)照品20g，置10l容量瓶中，加雙蒸水溶解并稀釋至刻度，為標(biāo)準(zhǔn)貯備液。精細(xì)量取標(biāo)準(zhǔn)貯備液5l置10l容量瓶中，得到1000g/l的標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后依次稀釋一倍得到濃度為500，250，125g/l，62.5g/l的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。分別汲取標(biāo)準(zhǔn)系列溶液各20l,進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，以葡萄糖濃度的對(duì)數(shù)(X)為橫坐標(biāo)，葡萄糖

7、峰面積的對(duì)數(shù)(Y)為縱坐標(biāo)，線性回歸，得到線性方程是：Y=1.1883X+3.391，r=0.9995。結(jié)果見表1。表1葡萄糖線性關(guān)系2.3多糖的提取與精制稱取已枯燥的太子參(S8)粗粉(60目)200g,用工業(yè)乙醇回流提取6h，回收乙醇。殘?jiān)鼡]干后,用雙蒸水回流提取3次，提取液減壓濃縮后，加95%乙醇使含醇量達(dá)80%,靜置過夜，濾取白色沉淀，用雙蒸水溶解，用Sevag法去蛋白質(zhì)，上清液加90%乙醇使含醇量達(dá)80%，靜置過夜，濾取沉淀，用無水乙醇、丙酮、乙醚依次洗滌屢次，真空枯燥，得太子參多糖。2.4多糖換算因子的測(cè)定2.4.1多糖水解液的制備精細(xì)稱取多糖10g，于10l具塞刻度試管中，加1l

8、/lH2S42l，封管100恒溫水解4h，冷卻后用飽和Ba(H)2中和至中性，離心別離(5000r/in,10in)除去BaS4沉淀，取上清液至10l容量瓶中，定容，經(jīng)0.45微孔濾膜，備用。2.4.2多糖換算因子的測(cè)定取多糖水解液20l，進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，由線性方程求出多糖中葡萄糖含量，按下式f=/(D)為多糖的重量(g)，為多糖中葡萄糖含量(g)，D為多糖的稀釋因數(shù)計(jì)算換算因子，測(cè)得f=1.3025。2.5樣品溶液的制備精細(xì)稱取太子參樣品1.0g，置100l圓底燒瓶中,加80%乙醇80l，水浴90回流提取3h,趁熱過濾，殘?jiān)?0%熱乙醇洗滌(10l3)。殘?jiān)B同濾紙置圓底燒瓶中,加超純水

9、80l,水浴提取2h,趁熱過濾，殘?jiān)盁坑脽岢兯礈?5l4),洗液并入濾液，移入100l容量瓶中，定容。精細(xì)汲取樣品液5l，于10l具塞刻度試管中，加1l/lH2S41l，封管100恒溫水解2h，冷卻后用飽和的Ba(H)2中和至中性，離心別離(5000r/i,10in)除去BaS4沉淀，取上清液至10l容量瓶中，定容，經(jīng)0.45微孔濾膜，供測(cè)試。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.6方法學(xué)考察2.6.1精細(xì)度實(shí)驗(yàn)精細(xì)汲取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液(500g/l)，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定葡萄糖峰面積，其峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏向RSD為3.03%。2.6.2穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)精細(xì)稱取太子參樣品(S8)，制成樣品溶液，分別于制備后0

10、，1，2，3，4，5，6，7，8h進(jìn)展測(cè)定，葡萄糖峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏向RSD為1.87%，說明樣品液在8h內(nèi)根本穩(wěn)定。2.6.3重復(fù)性實(shí)驗(yàn)精細(xì)稱取太子參樣品(S8)，5份，制成樣品溶液，進(jìn)樣，測(cè)定樣品中葡萄糖含量，求出多糖含量，多糖含量相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏向RSD為2.65%，說明含測(cè)方法可行。2.6.4加樣回收率實(shí)驗(yàn)精細(xì)稱取6份太子參樣品(S8)1g，6份，參加太子參多糖100g，制備樣品液，進(jìn)樣，測(cè)定葡萄糖含量，求出多糖含量。根據(jù)樣品(S8)多糖含量為20.22%，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見表2。表2太子參多糖加樣回收率實(shí)驗(yàn)2.7樣品多糖含量測(cè)定精細(xì)汲取各樣品液20l，進(jìn)樣,測(cè)定葡萄糖峰面積，由線性方程求

11、出樣品液中葡萄糖的濃度，再按下式：多糖含量%=(D/)f為樣品重量(g)，為多糖中葡萄糖濃度(g/l),D為樣品溶液稀釋因數(shù),f為多糖換算因子,計(jì)算樣品中多糖含量。結(jié)果見表3及圖1。3討論3.1多糖水解條件的選擇對(duì)多糖水解時(shí)間和水解時(shí)硫酸用量進(jìn)展了考察。取多糖10g，6份，分別加1l/lH2S41，2l，分別水解2，4，6h，制備多糖水解液，進(jìn)樣，測(cè)定葡萄糖峰面積，結(jié)果說明，加1l/lH2S42l，水解4h，葡萄糖峰面積不再增加，即水解完全，故確定1l/lH2S42l水解4h作為多糖水解條件(表4)。表3太子參中多糖含量測(cè)定結(jié)果表4不同水解條件下的多糖中葡萄糖峰面積3.2樣品水解時(shí)間選擇取樣品

12、(S8)提取液5l，3份，加1l/lH2S41l，分別水解1，2，4h，制備樣品液，進(jìn)樣，測(cè)定葡萄糖峰面積，結(jié)果葡萄糖峰面積分別為6560342，6797850，6797231，說明2h水解完全，故確定2h作為水解時(shí)間。見圖2。圖2樣品水解時(shí)間(1，2，4h)3.3多糖組分分析太子參多糖水解液和樣品液進(jìn)樣檢測(cè)，均為一單峰，且與葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品峰保存時(shí)間一致，進(jìn)一步證明太子參多糖為葡聚糖。結(jié)果見圖3。1.葡萄糖對(duì)照品(t/in3.047)2.多糖水解液(t/in3.037)3.樣品液(t/in3.044)圖3葡萄糖對(duì)照品、多糖水解液及樣品液的HPL-ELSD色譜圖太子參中多糖類成分具免疫活性，能增強(qiáng)

13、人體抵抗力，故可作為藥材質(zhì)量分析的一項(xiàng)指標(biāo)。分析結(jié)果初步說明，不同采收時(shí)間太子參中多糖的動(dòng)態(tài)積累呈現(xiàn)規(guī)律性變化，以79月份含量較高，其積累曲線最大峰值與傳統(tǒng)采收期根本一致;貯藏時(shí)間對(duì)太子參中多糖的含量具有一定影響，隨貯藏時(shí)間延長，多糖含量下降;太子參主根多糖含量高于參尾，說明藥材加工過程中，修剪去除參尾，可進(jìn)步太子參多糖含量，進(jìn)步藥材質(zhì)量;野生太子參多糖含量明顯低于栽培太子參，野生太子參多生于樹蔭下，采光量相對(duì)較少，是否對(duì)多糖的積累有影響有待進(jìn)一步討論?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1劉訓(xùn)紅，闞毓銘.太子參研究概述J.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2000，11(12):1131.2劉訓(xùn)紅，陳彬，王玉璽.太子參多糖抗應(yīng)激和免疫增強(qiáng)作用的實(shí)驗(yàn)研究J.江蘇中醫(yī)，2000，21(10):51.3陳蕓蕓，王偉，丁怡，等.SE-HPL測(cè)定太子神悅膠囊中多糖相對(duì)分子質(zhì)量分布及含量J.中國藥學(xué)雜志，2022，40(7)：540.4劉訓(xùn)紅，談獻(xiàn)和，曾艷萍，等.不同產(chǎn)地太子參的質(zhì)量比擬研究J