臨床血液學檢驗2016講義

1、紅細胞膜缺陷性貧血及其實驗一、紅細胞膜的結(jié)構(gòu)與功能1.紅細胞膜的組成與結(jié)構(gòu)：紅細胞膜含脂類 40%，蛋白質(zhì) 50%，碳水化合物 10%。膜的主要蛋白有主體蛋白和外周蛋白。后者包括收縮蛋白、肌動蛋白、錨蛋白和區(qū)帶（4.14.5）等，即骨架系統(tǒng)，起支架作 用，對維持紅細胞的形狀、穩(wěn)定性和變形性有重要作用。膜的主要脂類為磷脂和膽固醇，起屏障和保持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定性作用。2.紅細胞膜的功能：屏障作用和可變性；半透性；免疫性；受體特類受體、遞質(zhì)類受體、丙 種球蛋白受體、受體、EP0 受體和鐵蛋白受體等。3.影響紅細胞膜穩(wěn)定的：紅細胞能量代謝紊亂；紅細胞膜有遺傳性缺陷；酶缺陷。二、紅細胞膜缺陷的檢驗及其應用1.

2、紅細胞滲透脆性試驗（1）原理：檢測紅細胞對不同濃度低滲鹽溶液的抵抗力。紅細胞在低滲鹽溶液中，當水滲透其達一定程度時，紅細胞發(fā)生膨裂。根據(jù)不同濃度的低滲鹽溶液中紅細胞溶血的情況，通過紅細胞表面積與容積的比值，反映其對低滲鹽溶液的抵抗性。比值愈小，紅細胞抵抗力愈小，滲透脆性增加。反之抵抗力增大。參考值：開始溶血 0.44%0.42%（NaCl 液），完全溶血 0.34%0.32%（NaCl 液）。（2）臨床意義：脆性增高見于遺傳性球形細胞增多癥、橢圓形細胞增多癥等；降低見于阻塞性黃疸、珠蛋白生成2.自身溶血試驗及其糾正試驗性貧血、缺鐵性貧血等。（1）原理：紅細胞在 37孵育 48 小時，其間由于膜

3、異常引起鈉內(nèi)流傾向明顯增加，ATP 消耗過多；或糖酵解途徑酶缺乏所引起 ATP 生成等原因可導致溶血，稱為自身溶血試驗。在孵育時，加入葡萄糖或 ATP 作為糾正物，觀察溶血可否有一定的糾正，稱為糾正試驗。參考值：48 小時內(nèi)不加糾正物的溶血度小于 3.5%，加葡萄糖溶血度小于 1.0%，加 ATP 的溶血度小于1.0%。（2）臨床意義：膜缺陷患者溶血度增加，加糾正物可被糾正；G6PD 缺陷癥者溶血度輕度增加，能被葡萄糖糾正；自身免疫性溶貧溶血度輕度增加，加葡萄糖無預示價值；PNH 本試驗常正常。 3.酸化甘油溶血試驗（1）原理：當甘油存在于低滲溶液氯化鈉磷酸緩沖液時，可其中的水快速進入紅細胞內(nèi)

4、，使溶血過程緩慢。但甘油與膜脂質(zhì)又有親和性，可使膜脂質(zhì)減少。當紅細胞膜蛋白及膜脂質(zhì)有缺陷時，它們在6.85甘油緩沖液中比正常紅細胞溶解速度快，導致紅細胞懸液的吸光度降至 50%的時間（AGLT50）明顯縮短。參考值： AGLT50 大于 1800s（30min）（2）臨床意義：減少見于遺傳性球形細胞增多癥（25150s）、腎功能衰竭、慢性白血病、自身免疫性溶貧和妊娠婦女。4.蔗糖溶血試驗 為 PNH 簡易重要的篩查試驗。（1）原理：是根據(jù) PNH 患者的紅細胞，在低離子強度的蔗糖溶液中對補體敏感性增強，經(jīng)孵育，補體 與紅細胞膜結(jié)合加強，蔗糖溶液進入紅細胞內(nèi)，導致滲透性溶血而設計的。參考值：定性

5、試驗：正常為；定量試驗：正常溶血率5%。（2）臨床意義：PNH 患者為陽性或溶血率增加，可作為 PNH 的篩選試驗。自身免疫性溶貧有的可為陽性，白血病、骨髓硬化時可出現(xiàn)假陽性。5.酸化溶血試驗（1）原理：陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥（PNH）患者體內(nèi)存在對補體敏感的紅細胞。酸化溶血試驗，也稱 Ham test，即紅細胞在酸性（ 6.46.5）的正常中孵育，補體被激活，PNH 紅細胞破壞而產(chǎn)生溶血。而正常紅細胞不被溶解，無溶血現(xiàn)象。結(jié)果：。（2）臨床意義：是 PNH 的確診試驗。陽性主要見于 PNH，某些自身免疫性溶血性貧血發(fā)作嚴重時可呈陽性。 6.紅細胞膜蛋白電泳分析（1）原理：將的紅細胞膜樣品進

6、行 SDS電泳，根據(jù)樣品中各蛋白相對分子質(zhì)量的不同，分離得到紅細胞膜蛋白的電泳圖譜，從而可見各膜蛋白組分百分率。參考值：各種膜蛋白組分百分率變化較大，多以正常紅細胞膜蛋白電泳圖譜作比較?；蛞詭?3 蛋白為基準，各膜蛋白含量以與帶 3 蛋白的比例表示。（2）臨床意義：許多溶血性疾病常見紅細胞膜蛋白異常。各種膜缺陷疾病如遺傳性球形紅細胞增多癥有收縮蛋白等含量減低或結(jié)構(gòu)異常。某些血紅蛋白病骨架蛋白等可明顯異常。三、遺傳性紅細胞膜缺陷性貧血的實驗1.遺傳性球形紅細胞增多癥（1）血象：紅細胞呈球形，直徑小于 6m，大小一致，數(shù)量占 10%70%，硬度增加，中心淡染區(qū)消失，簡易紅細胞滾動試驗呈陽性。骨髓象

7、：骨髓紅細胞系統(tǒng)增生活躍。特殊試驗脆性試驗：紅細胞0.68%NaCl 液中開始溶解，0.4%NaCl 液中完全溶解，鹽水滲透脆性增加，孵育后脆性更高，ATP 或葡萄糖能夠糾正篩選試驗，紅細胞期縮短；自溶試驗：溶血大于 5%，加 ATP 可減輕溶血；SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳分析：紅細胞骨架蛋白、收縮蛋白缺陷。2.遺傳性橢圓形紅細胞增多癥血象：紅細胞呈橢圓形、球形，大小一致，數(shù)量占 10%70%，硬度增加，中心淡染區(qū)骨髓象：骨髓紅細胞系統(tǒng)增生活躍。特殊試驗脆性試驗、孵育后和自身溶血試驗陽性。四、獲得性紅細胞膜缺陷性貧血的實驗陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥（PNH）（1）血象：貧血為大細胞素性或低色素性

8、，網(wǎng)織紅細胞增高，少數(shù)病例減少。紅細胞按對補體敏感性分為接近正常紅細胞（型）、中等敏感（）、高度敏感（型）。溶血程度取決于型紅細胞多少。白細胞計數(shù)半數(shù)病例減少，中性粒細胞減少，淋巴細胞增多，血小板多數(shù)低于正常。（2）骨髓象：骨髓象隨病情變化不一，除按有核細胞分四級外，注意粒紅比例，增生低下者應注明部位，疑難者需同時作病理活檢。（3）溶血試驗：酸化溶血試驗（Ham test）、蔗糖溶血試驗、蛇毒溶血試驗、尿潛血（尿含）試驗等，其中兩項陽性或一項陽性，但對照，結(jié)果才可靠；排除其他需鑒別的溶血性疾病；作為研究可采用補體溶血敏感試驗，并用分子生物學方法檢查 GPI 錨蛋白及 PIG-A。練習題對紅細胞膜起屏障和保持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定作用的是A.主體蛋白 B.錨蛋白C.磷脂和膽固醇 D.骨架蛋白E.肌動蛋白答疑700811090101正確：C遺傳性球形紅細胞增多癥確診試驗是A.紅細胞滲透脆性試驗 B.酸化溶血試驗C.高紅蛋