免疫比濁分析

1、關(guān)于免疫比濁分析第一張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月 免疫比濁分析是將液相內(nèi)的沉淀反應(yīng)與現(xiàn)代光學(xué)儀器和自動(dòng)分析技術(shù)相結(jié)合的一項(xiàng)分析技術(shù)。第二張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月第二節(jié) 自動(dòng)化免疫比濁分析 第一節(jié) 免疫比濁的原理 一、透射免疫比濁法 二、散射免疫比濁法 三、免疫膠乳比濁法 四、免疫比濁分析的影響因素和臨床應(yīng)用第三張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月第一節(jié) 免疫濁度分析原理 抗原、抗體在特定的電解質(zhì)溶液中反應(yīng)，形成小分子免疫復(fù)合物（19S），使反應(yīng)液出現(xiàn)濁度。這種濁度可用儀器檢測(cè)，用吸光度表示。第四張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月第一節(jié) 免疫濁度分析

2、原理 在抗體稍微過量且固定的情況下，形成的免疫復(fù)合物量隨抗原量的增加而增加，反應(yīng)液的濁度亦隨之增大，即待測(cè)抗原量與反應(yīng)溶液的濁度呈正相關(guān)。 第五張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月免疫比濁技術(shù)分類：透射免疫比濁法（turbidimetric immunoassay）散射免疫比濁法（nephelometry immunoassay）速率散射比濁法終點(diǎn)散射比濁法第六張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月第七張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月 一定波長(zhǎng)的入射光線通過抗原抗體反應(yīng)后的溶液時(shí)，由于溶液中的免疫復(fù)合物微粒對(duì)光線的吸收、反射和折射而使透射光減少，可用吸光度表示。 在一定范圍

3、內(nèi)，吸光度與免疫復(fù)合物量呈正相關(guān)，而形成的免疫復(fù)合物量與參與反應(yīng)的抗原和抗體的量呈函數(shù)關(guān)系。一、免疫透射比濁法（一）原理：第八張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月抗原抗體反應(yīng)曲線第九張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月 1.將待檢標(biāo)本和抗原參考品作適當(dāng)稀釋。（二）操作方法 2.將待測(cè)標(biāo)本和標(biāo)準(zhǔn)抗原溶液（5個(gè)濃度抗原標(biāo)準(zhǔn)品）與適當(dāng)過量的抗血清混合，在一定條件下，抗原抗體反應(yīng)完成后，在340nm處測(cè)定各管吸光度。 3.按log-logit轉(zhuǎn)換或y=ax3+bx2+cx+d方程進(jìn)行曲線擬合，制備劑量-反應(yīng)曲線，由計(jì)算機(jī)處理，計(jì)算出抗原濃度。第十張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月待

4、測(cè)的抗原抗體復(fù)合物分子量足夠大。抗原抗體復(fù)合物數(shù)量足夠多。具有充分的反應(yīng)時(shí)間，只能測(cè)定抗原抗體反應(yīng)的第二階段。高親和力的抗體，并保證抗體過量。（三）技術(shù)要求 第十一張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月（四）方法評(píng)價(jià) 優(yōu)點(diǎn): 靈敏度高，穩(wěn)定性好，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確 不足: 抗體用量較大； 溶液中存在的抗原抗體復(fù)合物分子應(yīng)足夠大 透射比濁測(cè)定在抗原抗體反應(yīng)的第二階段，檢 測(cè)需在抗原抗體反應(yīng)達(dá)到平衡后進(jìn)行，耗時(shí)較長(zhǎng)。 第十二張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月 粒子對(duì)光線的散射作用是溶液中的微粒子受到光線照射后，微粒子對(duì)光線產(chǎn)生反射和折射而形成散射光。 懸浮微粒對(duì)光散射形成的散射光強(qiáng)度與

5、微粒的大小、數(shù)量、入射光的波長(zhǎng)和強(qiáng)度、測(cè)量角度等因素密切相關(guān)。二、免疫散射比濁法(一) 原理第十三張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月 不同大小的微粒形成的散射光分布不同。 當(dāng)微粒直徑小于入射光的波長(zhǎng)的十分之一時(shí)，散射光的強(qiáng)度在各個(gè)方向的分布均勻一致，稱Rayleighae散射。 當(dāng)微粒直徑大于或等于入射光的波長(zhǎng)時(shí)，前向散射光遠(yuǎn)遠(yuǎn)強(qiáng)于后向散射光，稱Mile散射。第十四張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月第十五張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月 其中光線偏轉(zhuǎn)的角度與發(fā)射光的波長(zhǎng)和抗原抗體復(fù)合物的大小和多少密切相關(guān)。 當(dāng)固定檢測(cè)角度與發(fā)射光的波長(zhǎng)時(shí)，散射光的強(qiáng)度與復(fù)合物的含量成

6、正比，即待測(cè)的抗原越多，形成的復(fù)合物越多，散射光就越強(qiáng)。第十六張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月 應(yīng)選擇適當(dāng)?shù)墓庠磸?qiáng)度、反應(yīng)時(shí)間、測(cè)量角度及光源的波長(zhǎng)。 另外，要注意保證抗原濃度合適。 此外，還要選擇適宜的離子強(qiáng)度、pH值等。(二) 技術(shù)要求第十七張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月 速率散射比濁法是抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的一種動(dòng)態(tài)測(cè)定方法。 所謂速率是指抗原抗體反應(yīng)在單位時(shí)間內(nèi)形成免疫復(fù)合物的量（不是免疫復(fù)合物累積的量），連續(xù)測(cè)定各時(shí)間復(fù)合物形成的速率與其產(chǎn)生的散射光信號(hào)聯(lián)系在一起，形成動(dòng)態(tài)的速率散射比濁法，每項(xiàng)檢測(cè)僅12min即可完成。 (三)速率散射比濁法（rate nephel

7、ometry）第十八張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月累計(jì)時(shí)間復(fù)合物產(chǎn)生總量產(chǎn)生速率510152025303540455055608132560150230300360415450480500512359080706055453020 抗原抗體復(fù)合物形成時(shí)間與速率的關(guān)系第十九張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月 當(dāng)抗體的濃度固定于一定范圍時(shí)，復(fù)合物形成的速率峰值的高低與抗原的含量成正比，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，免疫復(fù)合物的量逐漸增多，抗原抗體結(jié)合速度的峰值在一定的時(shí)間出現(xiàn)。通過微機(jī)處理即可得到待測(cè)蛋白成份的含量。第二十張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月第二十一張，PPT共四十六頁

8、，創(chuàng)作于2022年6月 速率散射比濁法峰值出現(xiàn)的時(shí)間與抗體濃度及純度直接相關(guān)，需選用抗體純度及親和力交高的試劑。 此外，要保證待測(cè)樣本血清的性狀符合要求，如嚴(yán)重脂血等即為不合格樣本。技術(shù)要求第二十二張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月(三)方法評(píng)價(jià) 散射比濁法是目前臨床應(yīng)用較多的一種方法，本法自動(dòng)化程度高，具有快速、靈敏、準(zhǔn)確、精密等優(yōu)點(diǎn)。采用抗原過量檢測(cè)方法，保證了結(jié)果的準(zhǔn)確性。但儀器和試劑價(jià)格比較貴, 對(duì)抗體的質(zhì)量要求很高。第二十三張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月 用抗體致敏的大小適中、均勻一致的膠乳顆粒（一般為0.2 m），在遇到相應(yīng)抗原時(shí)，膠乳顆粒上的抗體與抗原特異結(jié)合

9、，引起膠乳顆粒凝聚 ，使透射光和散射光即出現(xiàn)顯著變化。三、免疫膠乳比濁法（一）原理：第二十四張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月三、免疫膠乳比濁法（一）原理：第二十五張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月第二節(jié) 自動(dòng)化免疫比濁分析第二十六張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月（一）BN特種蛋白分析測(cè)定系統(tǒng) 該系統(tǒng)的測(cè)定方法是透射免疫比濁法的一種改良。以發(fā)光二極管作為光源，檢測(cè)前向角1324度的散射光，然后利用硅化光電二極管接收散射光信號(hào)，經(jīng)過微電腦處理，與標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較，最后轉(zhuǎn)換成待檢物質(zhì)的濃度。一、主流免疫比濁設(shè)備概況1.測(cè)定原理第二十七張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年

10、6月 系統(tǒng)由分析儀、計(jì)算機(jī)、條碼讀取器、打印機(jī)四部分組成，其中分析儀是主要組成部分，包括散射測(cè)濁儀、自動(dòng)加樣系統(tǒng)、運(yùn)輸裝置和比色杯裝置。 2.儀器基本組成第二十八張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月BN、BN100特種蛋白分析分析系統(tǒng)第二十九張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月本系統(tǒng)屬于速率散射比濁分析法，在抗體過量的前提下，光束通過抗原抗體復(fù)合物時(shí)所產(chǎn)生的散射光速率變化大小與抗原濃度成正比。 速率的峰值通過電腦處理系統(tǒng)轉(zhuǎn)換成待測(cè)抗原的濃度。1.測(cè)定原理（二）ARRAY分析系統(tǒng)第三十張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月 ARRAY系統(tǒng)由分析儀、電腦處理系統(tǒng)、打印機(jī)構(gòu)成，其主要

11、構(gòu)成部分為分析儀，由加液系統(tǒng)、散射測(cè)濁儀、40孔樣本轉(zhuǎn)盤、20孔試劑轉(zhuǎn)盤、軟盤驅(qū)動(dòng)器等組成。2.儀器基本組成第三十一張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月Array360、IMMAGE特種蛋白分析分析系統(tǒng)第三十二張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月二、免疫比濁分析的主要影響因素1抗原抗體比例 抗原抗體比例要適當(dāng)。2抗體的純度與效價(jià) 診斷試劑應(yīng)盡可能選擇高純度與高效價(jià)的抗體。3免疫復(fù)合物的大小及穩(wěn)定性 溶液中免疫復(fù)合物顆粒的分散度盡可能相同，顆粒應(yīng)該不容易相互聚集。第三十三張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月4增聚劑 利用增聚劑破壞抗原抗體的水化層，促進(jìn)反應(yīng)的進(jìn)行。5. 離子強(qiáng)度

12、 PBS是較好的反應(yīng)液 。 返回章目錄第三十四張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月抗原過量檢測(cè) (1) 抗體適當(dāng)過量 (2) 對(duì)抗原過量進(jìn)行閾值限定 第三十五張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月第三十六張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月 免疫比濁分析法主要用于特定蛋白系列檢測(cè)。如免疫球蛋白IgG、IgA、IgM、鏈、鏈、免疫球蛋白亞類；補(bǔ)體C3、C4；血漿蛋白如前白蛋白(PAB)、白蛋白(ALB)、1-抗胰蛋白酶(1-AT)、2-微球蛋白(2-MG)、轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRF)、銅藍(lán)蛋白(CER)、結(jié)合珠蛋白(HP)、，C-反應(yīng)蛋白(CRP)、載脂蛋白ApoAI、ApoB、脂蛋白(

13、a)、類風(fēng)濕因子(RF)、尿微量蛋白系列和某些治療性藥物濃度等。 三、臨床應(yīng)用第三十七張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月小 結(jié) 經(jīng)典的免疫沉淀反應(yīng)通常是在抗原抗體反應(yīng)的終點(diǎn)進(jìn)行結(jié)果判斷，存在操作繁瑣、費(fèi)時(shí)、敏感度低及難以自動(dòng)化等缺陷。自動(dòng)化免疫比濁分析儀器的問世解決了以上的諸多問題。第三十八張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月 目前，透射免疫比濁法和散射免疫比濁等方法已常規(guī)運(yùn)用于臨床特定體液蛋白質(zhì)的檢測(cè)，相關(guān)儀器已廣泛應(yīng)用于國內(nèi)各級(jí)醫(yī)院，成為臨床免疫檢測(cè)的重要手段之一。返回章目錄第三十九張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月思考題 1.名詞解釋：透射免疫比濁法、散射免疫比濁法

14、2.免疫比濁分析的基本原理是什么？有哪些類型？3.簡(jiǎn)述免疫比濁分析的主要影響因素。第四十張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月一、選擇題1.速率散射比濁法之所以能比傳統(tǒng)的沉淀反應(yīng)試驗(yàn)大大地縮短時(shí)間，主要是因?yàn)锳.在抗原抗體反應(yīng)的第一階段判定結(jié)果 B.不需復(fù)雜的儀器設(shè)備C.使用低濃度的瓊脂或瓊脂糖 D.反應(yīng)的敏感度高第四十一張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月2.透射免疫比濁法A.測(cè)定光線通過反應(yīng)混合液時(shí)，被其中IC反射的光的強(qiáng)度B.測(cè)定光線通過反應(yīng)混合液時(shí)，被其中IC折射的光的強(qiáng)度C.測(cè)定光線通過反應(yīng)混合液時(shí)，被其中IC吸收的光的強(qiáng)度 D.測(cè)定光線通過反應(yīng)混合液時(shí)，透過的光的強(qiáng)度3.

15、散射免疫比濁法檢測(cè)的原理A.測(cè)定光線通過反應(yīng)混合液時(shí)，被其中IC反射的光的強(qiáng)度B.測(cè)定光線通過反應(yīng)混合液時(shí)，被其中IC折射的光的強(qiáng)度 C.測(cè)定光線通過反應(yīng)混合液時(shí)，被其中IC吸收的光的強(qiáng)度D.測(cè)定光線通過反應(yīng)混合液時(shí)，透過的光的強(qiáng)度第四十二張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月4.單向瓊脂擴(kuò)散法可用于A.抗體定性 B.抗體定量 C.抗原定性 D.抗原定量 5.雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)，兩種受檢抗原的性質(zhì)完全相同時(shí)，沉淀線出現(xiàn)A.二條直線相交叉 B.二條弧線完全融合 C.二條弧線部分融合 D.二條直線不連接 6.火箭免疫電泳達(dá)到終點(diǎn)時(shí)應(yīng)A.火箭峰呈云霧狀 B.火箭峰呈圓形 C.火箭峰尖而清晰 D.E.火箭峰呈紡錘狀第四十三張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月7.對(duì)于血清中數(shù)種蛋白質(zhì)抗原成分的分析，?？刹捎?A.免疫電泳法 B.單向擴(kuò)散試驗(yàn) C. 向擴(kuò)散試驗(yàn) D.火箭免疫電泳 8.速率散射比濁法測(cè)定的散射信號(hào)值產(chǎn)生于 A.單位時(shí)間內(nèi)最大量的免疫復(fù)合物 B.單