病原微生物試驗室備案-艾滋病毒生物危害評價

1、艾滋病毒的生物危害評估一、危害程度分類（一）分類等級人類免疫缺陷病毒（HIV）屬第二類病原微生物，是高致病性病原 微生物。（二）不同實驗操作生物安全實驗室級別要求1、HIV抗體檢測（包括篩查和確證實驗）、抗原檢測和相關的免疫 學檢測應在符合II級生物安全實驗室（BSL-2 ）要求的艾滋病檢測實驗 室中進行。2、HIV分離培養(yǎng)、濃縮、中和試驗、細胞培養(yǎng)及研究工作及其它需 要應用活病毒的研究工作，應在田級生物安全實驗室（BSL-3 ）中進行。3、HIV核酸提取和檢測均應在符合II級生物安全實驗室（BSL-2 ） 要求的艾滋病檢測實驗室中進行。4、HIV病毒株應保存在符合m級生物安全實驗室（BSL-

2、3 ）要求的 艾滋病實驗室；HIV陽性樣品，包括全血、血清、血槳和其他組織（液）、 核酸提取物應保存在符合BSL-2要求的艾滋病實驗室。二、HIV背景資料（一）、形態(tài)結(jié)構人類免疫缺陷病毒直徑約120納米，大致呈球形。病毒外膜是磷脂 雙分子層，來自宿主細胞，并嵌有病毒的蛋白gp120與gp41。向內(nèi)是由 蛋白p17形成的球形基質(zhì)（Matrix ）,以及蛋白p24形成的半錐形衣殼 （Capsid ）,衣殼在電鏡下呈高電子密度。衣殼內(nèi)含有病毒的RNA基因 組、酶以及其他來自宿主細胞的成分。（二）、培養(yǎng)特性將病人自身外周或骨髓中淋巴細胞經(jīng)PHA刺激4872小時作體外 培養(yǎng)（培養(yǎng)液中加IL2 ） 12周

3、后，病毒增殖可釋放至細胞外，并使細 胞融合成多核巨細胞，最后細胞破潰死亡。亦可用傳代淋巴細胞系如HT-H9、Molt-4 細胞作分離及傳代。對黑猩猩或長臂猿予以HIV感染后，連續(xù)8個月在血液和淋巴液中 可持續(xù)分離到HIV。（三）、在外界環(huán)境的穩(wěn)定性HIV對熱敏感。56c 30分失去活性，但在室溫保存7天，仍保持活 性。不加穩(wěn)定劑病毒-70 C冰凍失去活性，而35%山梨醇或50%胎牛血 清中-70 C冰凍3個月仍保持活性。對消毒劑和去污劑亦敏感，0.2%次 氯酸鈉0.1%漂白粉，70%乙醇，35%異丙醇、50%乙醴、0.3%H2O20.5% 來蘇爾處理5能滅活病毒，1%NP-40和0.5%tri

4、ton-X-100 能滅活病毒而 保留抗原性。對紫外線、丫射線有較強抵抗力。（四）、傳染源和傳播途徑HIV感染者是傳染源，曾從血液、精液、陰道分泌液、眼淚、乳汁 等分離得HIV。傳播途徑有：.性傳播：通過男性同性戀之間及異性間的性接觸感染。單次暴 露的傳染概率為0.67% 0生一次沒有保護的性交，在男性同性戀中的傳 染HIV 的概率約為0.5-3%。而在異性性接觸中，男性傳給女性的概率 是0.1-0.2% ,女性傳給男性的概率是0.03-0.1%.血液傳播：接受血液或血制品：主要是指接受污染有HIV的血 液或血制品，單次暴露的傳染概率介于90-100%。通過輸血、血液制品 或沒有消毒好的注射器

5、傳播，靜脈嗜毒者共用不經(jīng)消毒的注射器和針頭 造成嚴重感染，據(jù)我國云南邊境靜脈嗜毒者感染率達60% o不慎被污染 HIV的器具如針頭刺傷皮膚，或黏膜直接接觸到含有HIV的體液，單次 暴露的傳染概率為0.3%-0.5%。.母嬰傳播：包括經(jīng)胎盤、產(chǎn)道和哺乳方式傳播。母嬰傳播的幾 率約為30% o（五）、宿主范圍和致病機制1、宿主范圍：艾滋病病毒進入人體后，首先遭到巨噬細胞的吞噬， 但艾滋病病毒很快改變了巨噬細胞內(nèi)某些部位的酸性環(huán)境，創(chuàng)造了適合 其生存的條件，在潛伏感染階段，HIV前病毒整合入宿主細胞基因組中， 免疫會把H I V忽略不被免疫系統(tǒng)識別，自身免疫無法清除。人體感染HIV后，其潛伏期一般3

6、5年或更長至8年。2、致病機制：其機制尚未完全清楚。有可能是HIV進入人體后， 選擇性的侵犯帶有CD4分子的，主要有T4淋巴細胞、單核巨噬細胞、 樹突狀細胞等。造成T細胞,B細胞，自然殺傷細胞，單核細胞，巨噬細胞的 數(shù)量和功能均受到影響，使細胞介導免疫功能失去作用。三、實驗室實驗活動危險性及預防措施（一）、實驗活動預防1、實驗室針對HIV的所有活動均應在生物安全柜內(nèi)進行。2、實驗操作時應穿合適防護服（白大衣、隔離衣或一次性工作服）、 戴手套和口罩、穿實驗室專用的工作鞋。如接觸物的傳染性大、應戴雙 層手套；含有HIV的液體（樣品或病毒培養(yǎng)液）有可能噴濺時，應戴防 護眼鏡、穿防水（如塑料）圍裙。3

7、、工作完畢，先脫去手套，再脫去防護服，用肥皂和流動水洗手。 穿過的污染的防護服應及時放入污物袋中，消毒后方可洗滌或廢棄。4、操作過程中，如發(fā)現(xiàn)防護服被污染應立即更換，如手套破損， 應立即丟棄、洗手并換上新手套。不能用戴手套的手觸摸暴露的皮膚、 口唇、眼睛、耳朵和頭發(fā)等。5、禁止使用口腔吸液管，必須使用移液器來操作實驗的所有液體。6、應盡量避免在實驗室使用針頭、刀片、玻璃器皿等利器，以防 刺傷。如果必須使用，在處理或清洗時應采取措施防止刺傷或劃傷，并 應對用過的物品進行消毒。7、 應將用過的銳器直接放入耐穿、防滲漏的利器盒，用過的針頭 應直接放入堅固的容器內(nèi)，消毒后廢棄8、禁止將使用后的一次性針

8、頭重新套上針頭套。禁止用手直接接 觸使用過的針頭、刀片等利器。（二）、職業(yè)暴露的評估及暴露后預防1、輕度暴露：指皮膚被實心針刺傷或表皮傷，或粘膜接觸少量（幾滴）感染性液體重度暴露：指皮膚被空心針刺傷、深部刺傷，被可見到有血液 的器械刺傷或器械曾放置于病人的動脈和靜脈。粘膜接觸大量感染性液 體（大量血液噴濺）。發(fā)生職業(yè)暴露以后，可以服用抗病毒藥物，進行暴露后預防 （三）、實驗室的清潔和消毒本實驗室于每次實驗活動開始前均準備有0.2%和5%的次氯酸溶液。工作完畢應對工作臺面消毒，用0.10.2%的次氯酸溶液消毒；用 消毒液清洗后要干燥20min以上；操作過程中如有樣品、檢測試劑外濺，應及時消毒。如

9、有大量高濃 度的傳染性液體濺出，在清潔之前應先用1%的次氯酸鈉溶液浸泡，然后 戴上手套擦凈。（四）、污染物處理本實驗室配備有密封防漏容器及高壓蒸汽消毒鍋。艾滋病實驗室產(chǎn)生的所有廢棄物，應置于專用的密封防漏容器中， 安全運至消毒室，經(jīng)高壓消毒后再進行處理或廢棄。（五）、實驗室實驗活動危害評估本實驗室只針對HIV抗體檢測的操作，該項實驗活動可能存在潛在 危險。實驗操作實施過程中在無控制措施情況下可能產(chǎn)生高危害度。但 經(jīng)對危害發(fā)生的可能性分析，認為極少發(fā)生實驗危害；但該危害能造成 高度嚴重后果。本實驗室在采取一級及二級屏障的預防控制措施后其殘 留風險可降至最低 四、工作人員素質(zhì)本實驗室共有技術人員5名，其中申請進入BSL-2實驗室3名。5 名技術人員均為檢驗專業(yè)畢業(yè)并從事臨床檢驗工作多年。2名曾經(jīng)從事 細菌、真菌等微生物學實驗，1名無微生物實驗室活動經(jīng)歷。所有技術 人員均接受過病原微生物生物安全培訓I,學習過生物安全手冊并簽署知 情同意書，經(jīng)體檢無慢性病及其他傳染性疾病，健康狀態(tài)良好。 五、評估結(jié)論1、本實驗室對可能發(fā)生的感染可以有效控制。2、實驗活動中采取一級及二級屏障預防，生物安全柜、洗眼器等設