顯微鏡七種觀察方法

1、關(guān)于顯微鏡的七種觀察方法第一張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月顯微鏡的七種觀察方法第二張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月按觀察方法分七種明場暗場熒光偏光相差DIC霍夫曼第三張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月顯微觀察方式第四張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月按觀察方法分 7-11.明場:照明光直接通過聚光鏡入射于試樣，并透過試樣后進(jìn)入物鏡并最終被觀察到。第五張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月明 場第六張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月明場觀察方式常規(guī)觀察方式應(yīng)用領(lǐng)域：常規(guī)鏡檢、病理、染色標(biāo)本優(yōu)點：視野亮度高、均勻，應(yīng)用范圍廣，操作簡單，價格低，物鏡

2、適用于熒光觀察缺點：透明標(biāo)本對比度低，標(biāo)本沒有立體感第七張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月按觀察方法分 7-22.暗場:照明光通過物鏡外圍射于試樣，來自試樣的干涉及衍射光進(jìn)入物鏡并最終被觀察到。第八張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月暗 場第九張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月1 原理丁道爾(Tyndall)現(xiàn)象，微粒對斜射光反射或衍射，增大了人眼可見性。2 特點觀察到極其微小物體，分辨率可達(dá)0.02 0.004 um (明場0.4um)”超顯微“。3 缺點只能觀察到物體存在、運動和外部形態(tài)不方便調(diào)節(jié)標(biāo)本要求高（灰塵、蓋片、載片）第十張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年

3、6月4 應(yīng)用：微小粒子、細(xì)菌形態(tài)觀察、細(xì)菌記數(shù)，透明標(biāo)本觀察等第十一張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月按觀察方法分 7-33.熒光:利用某些物質(zhì)在受到了紫外光或短波長的光激發(fā)照射以后能夠發(fā)射出比激發(fā)光波長長的熒光的特性的觀察方法第十二張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月熒 光第十三張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月什么是熒光 ? 物質(zhì)中的電子吸收光的能量由低能狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)楦吣軤顟B(tài)，再回到低能狀態(tài)時釋放出的光，是非溫度輻射光冷光。即：物質(zhì)吸收短波光，發(fā)射出的長波光。顯微鏡熒光利用光源激發(fā)光化熒光第十四張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月熒光的種類自發(fā)（固有）熒光 二次熒

4、光第十五張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月熒光的性質(zhì)吸收光，必需有激發(fā)光源熒光波長激發(fā)波長（損失熱能）熒光強度極小于激發(fā)光的強度有不同程度的衰減熒光強度取決于激發(fā)光強度、被檢物濃度、熒光效率第十六張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月熒光顯微鏡的優(yōu)點和用途優(yōu)點：檢出能力高（放大作用）對細(xì)胞的刺激?。梢曰铙w染色）能進(jìn)行多重染色用途：物體構(gòu)造的觀察熒光素?zé)晒獾挠袩o、色調(diào)比較進(jìn)行物質(zhì)判別抗體熒光等發(fā)熒光量的測定對物質(zhì)定性、定量分析第十七張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 熒光顯微鏡的種類 透射式第十八張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月熒光顯微鏡的種類落射式第十九張，PP

5、T共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月熒光顯微鏡的主要部件 透射式汞燈光源激發(fā)濾色鏡吸收濾色鏡暗場聚光鏡 落射式汞燈光源激發(fā)濾色鏡分色鏡吸收濾色鏡第二十張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月落射熒光顯微鏡的構(gòu)造吸收濾色鏡激發(fā)濾色鏡第二十一張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月落射熒光顯微鏡的構(gòu)造第二十二張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月熒光顯微鏡光源 汞燈光源:提供激發(fā)光(U、V、B、G) 氙燈光源： 高峰值更寬，更穩(wěn)定第二十三張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月熒光顯微鏡激發(fā)透鏡組 激發(fā)濾色鏡: 激發(fā)波長選擇 激發(fā)透鏡組（激發(fā)塊）: T%nmBAND PASS入射光發(fā)射光激

6、發(fā) 濾色鏡分光 濾色鏡吸收 濾色鏡第二十四張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月落射熒光顯微鏡各部件特性和作用 吸收濾色鏡:熒光透過,阻擋雜光 分色鏡:反射激發(fā)光,熒光透過A 透過AA 反射BB 透過B 阻擋nmnmT%T%A第二十五張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月落射熒光顯微鏡各部件特性和作用 吸收濾色鏡:熒光透過,阻擋雜光 分色鏡:反射激發(fā)光,熒光透過A 透過AA 反射BB ，C 透過nmnmT%T%AC第二十六張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月濾色鏡的選擇熒光素的特性濾色鏡的特性激發(fā)分色吸收第二十七張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月帶寬對圖象的影響SWB:

7、BP420-480WB: BP450-480WIB: BP460-490NB: BP470-490FITC+PI第二十八張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月多重染色標(biāo)本的多色觀察FITC+Texas Red+DAPI第二十九張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月三色濾色鏡的特性曲線激發(fā)分色吸收第三十張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月雙重染色標(biāo)本的單色和雙色觀察 WU WIBDUAL BANDWIBAWIGWIBDAPI+FITCFITC+PI第三十一張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月單色濾色鏡的特性曲線第三十二張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月雙色濾色鏡的特性

8、曲線第三十三張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月現(xiàn)行顯微鏡特點和各種濾色鏡第三十四張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月自由組合 激發(fā)塊吸收濾色鏡激發(fā)濾色鏡分色鏡第三十五張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月油鏡應(yīng)使用熒光油第三十六張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 物鏡光欄的運用光欄全開啟光欄適當(dāng)關(guān)小減少雜散光干擾第三十七張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月熒光的衰減 防衰減的方法使用抗衰減劑選擇衰減小的熒光素降低激發(fā)光強度降低標(biāo)本中氧的濃度有衰減的標(biāo)本第三十八張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月使用抗衰減劑的效果第三十九張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022

9、年6月汞燈燈箱構(gòu)造燈室，上下、左右旋鈕，聚光鏡旋鈕第四十張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月按觀察方法分 7-44.偏光:有些物質(zhì)在兩個呈一定夾角的偏光濾片之間可現(xiàn)呈鮮明的對比，或根據(jù)雙折射性能和定向呈現(xiàn)顏色第四十一張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月偏 光第四十二張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月1 原理依據(jù)波動光學(xué)原理觀察和精密測定標(biāo)本細(xì)節(jié),或透明物體改變光束的物理參數(shù),以此判別物質(zhì)結(jié)構(gòu)的一種顯微鏡自然光（多振動面）偏振器1偏振器2偏振光（單一振動面）各向同性：單折射體，光性質(zhì)不因照射方向而改變，普通氣體、液體、非結(jié)晶固體等各向異性：雙折射體，光速度、折射率、吸收和振動

10、面、振幅隨照射方向不同，晶體、纖維等第四十三張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月應(yīng)用：礦物質(zhì)、化學(xué)物品鑒別鑒別纖維、染色體、淀粉粒、細(xì)胞中晶體植物病理檢驗鑒別骨骼、牙齒、膽固醇、神經(jīng)纖維、腫瘤細(xì)胞、橫紋肌和毛發(fā)等第四十四張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月偏光顯微鏡主要用于檢測礦石,地質(zhì)大學(xué)會用到,特別是可以用來鑒定珠寶,另外可以檢測生物內(nèi)骨骼,這個我還沒有遇見實例,還可以檢測生物化學(xué)結(jié)晶,化學(xué)院用來觀察結(jié)晶液像,其他在紡織物品化學(xué)成分上檢測上,物理芯片上等,凡是觀察雙折射晶體會使用偏光顯微鏡 。第四十五張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月按觀察方法分 7-55.相襯（差）:

11、利用光線通過分別處于聚光鏡與物鏡的一對互補的光環(huán)后產(chǎn)生干涉（強度疊加或減弱），即相位差轉(zhuǎn)變成了光強差，從而可清楚觀察到使原來不易看清的透明類樣品（即相位物體，如活細(xì)胞）。第四十六張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月相 差（襯）第四十七張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月相 差（襯）第四十八張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月1 原理利用被檢物體的光程（折射率 x 厚度）差進(jìn)行鏡檢，即利用干涉現(xiàn)象，將相位差變?yōu)槿搜劭梢苑直娴恼穹罟曹椕妫何展饩€，直射光通過補償面：相位推遲，衍射光通過物鏡相板 聚光鏡環(huán)狀光闌第四十九張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月2 特點鑒定活體細(xì)胞

12、最實用、最經(jīng)濟(jì)的方法3 缺點需要光強高切片不能太厚(510um)蓋片、載片需符合標(biāo)準(zhǔn)最好配用單色濾光鏡操作較麻煩熒光效果不如明場物鏡第五十張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月4 應(yīng)用：無色透明活體標(biāo)本的細(xì)微結(jié)構(gòu)，檢查,鑒定活體細(xì)胞(培養(yǎng)細(xì)胞,分離細(xì)胞)第五十一張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月按觀察方法分 7-66.DIC:照明光由微分干涉對比棱鏡變?yōu)閮墒苌涔?，并使樣品高度差異造成在光路上的微小差異，而光路差異變?yōu)槔梦⒎指缮鎸Ρ壤忡R和檢偏振器的明暗對比。有時也利用敏感色板（波長補償片），加強了高度差異的顏色變化。第五十二張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月DIC相襯DI

13、C微分干涉相襯第五十三張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月1 原理通過特制的棱鏡將偏振光分解相互垂直，強度相等的光束，光束載極近的兩點（小于顯微鏡的分辨率）上通過被檢物體，從而在相位上略有差別，使圖象呈現(xiàn)出立體三維感覺。第五十四張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月2 特點可以使被檢物體產(chǎn)生三維立體感覺觀察效果更直觀無須特殊物鏡，與熒光觀察配合更好可以調(diào)節(jié)背景和物體的顏色變化而達(dá)到理想的效果。第五十五張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月3 缺點需要光強高，雙折射物質(zhì)不能達(dá)到DIC鏡檢效果，不能應(yīng)用于塑料容器培養(yǎng)物的觀察，鏡檢靈敏度有方向性，調(diào)節(jié)較復(fù)雜第五十六張，PPT共六十三頁

14、，創(chuàng)作于2022年6月4 應(yīng)用：無色透明活體標(biāo)本的細(xì)微結(jié)構(gòu)，無色熒光標(biāo)本，染色標(biāo)本，顯微操作等第五十七張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月按觀察方法分 7-77.霍夫曼:光線穿過設(shè)于聚光鏡內(nèi)的狹縫光闌后并經(jīng)“相位物體”（透明體）折射，再經(jīng)過專用物鏡內(nèi)的具有暗、灰、明三個區(qū)的一塊濾光片，而最終使光線按折射角的不同呈明暗的變化，其所成的像也類似DIC那樣具有浮雕效果。第五十八張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月霍 夫 曼第五十九張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月1 原理斜射光照射到標(biāo)本產(chǎn)生折射、衍射，光線通過物鏡光密度梯度調(diào)節(jié)器產(chǎn)生不同陰影，從而使透明標(biāo)本表面產(chǎn)生明暗差異，增加觀察對比度。第六十張，PPT共六十三頁，創(chuàng)作于2022年6月2. 歷史1975年，Robert Hoffman 博士發(fā)明2002年，專利到期，各顯微鏡廠家紛紛推出采用以自己名義命名的RC技術(shù)產(chǎn)品3. 特點提高未染色標(biāo)本的可見性和對比度；圖象顯示陰影或近似三維結(jié)構(gòu)而不會產(chǎn)生光暈；可檢測雙折射物質(zhì)(巖石切片、水晶、骨頭) ；可檢測玻璃,塑料等培養(yǎng)皿中的細(xì)胞,器官和組織；聚光鏡