【學(xué)習(xí)課件】第四節(jié)色譜法基本理論

1、第十七章 色譜分析法概論 chromatography分析化學(xué)教研室 李發(fā)美教授1精選課件 色譜法的分類和發(fā)展 色譜過程和基本原理 基本類型色譜方法及其分離機制 色譜法基本理論2精選課件3精選課件高分離效能、高靈敏度、高選擇性、分析速度快、應(yīng)用范圍廣色譜法的特點:4精選課件色譜學(xué)的重要作用諾貝爾化學(xué)獎：1948年，瑞典Tiselins，電泳和吸附分析；1952年，英國馬丁(Martin)和辛格(Synge)，分配色譜。應(yīng)用的科學(xué)領(lǐng)域：生命科學(xué)、材料科學(xué)、環(huán)境科學(xué)等。（科學(xué)的科學(xué)）藥學(xué)（藥物分析）：各國藥典收載了許多色譜分析方法。中國藥典二部，700多，純度檢查、定性鑒別或含量測定，一部，600

2、多鑒別或含量測定。5精選課件 第一節(jié) 色譜法的分類和發(fā)展一、色譜法的分類按流動相的分子聚集狀態(tài)分類:GC、LC、SFC 等按固定相的分子聚集狀態(tài)分類:GSC、GLC、LSC、LLC等按操作形式分類:柱色譜法、平面色譜法、毛細(xì)管電泳法等按色譜過程的分離機制分類:分配色譜法、吸附色譜法、離子交換色譜法、 空間排阻色譜法、毛細(xì)管電泳法等6精選課件毛細(xì)管電色譜法（CEC）色譜法GSC液相色譜法 （LC）柱色譜法平面色譜法毛細(xì)管電泳法 （CE）LLCLSCSECIECBPC紙色譜法薄層色譜法（TLC）LLCLLCLSC氣相色譜法（GC）柱色譜法GLC超臨界流體色譜法 （SFC）7精選課件二、色譜法的發(fā)展

3、（一）色譜法的歷史 （二）色譜法的現(xiàn)狀和發(fā)展趨勢1新型固定相和檢測器的研制2色譜新方法的研究 3色譜聯(lián)用技術(shù) 4色譜專家系統(tǒng) 8精選課件第二節(jié) 色譜過程和基本原理 一、色譜過程實現(xiàn)色譜操作的基本條件是必須具備相對運動的兩相，固定相(stationary phase)和流動相(mobile phase)。色譜過程是組分的分子在流動相和固定相間多次“分配”的過程。9精選課件10精選課件色譜過程組分的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)微小差異 與固定相作用差異 隨流動相移動的速度不等 差速遷移 色譜分離。11精選課件12精選課件二、色譜流出曲線和有關(guān)概念色譜流出曲線是由檢測器輸出的電信號強度對時間作圖所繪制的曲線，又稱為色

4、譜圖。 基線是在操作條件下，沒有組分流出時的流出曲線?；€反映儀器 (主要是檢測器) 的噪音隨時間的變化。色譜峰是流出曲線上的突起部分。正常色譜峰、拖尾峰和前延峰13精選課件對稱因子fs (symmetry factor) ：衡量色譜峰的對稱性 14精選課件到20頁到19頁15精選課件保留時間(retention time;tR)：從進樣到某組分在柱后出現(xiàn)濃度極大時的時間間隔。死時間 (t0)：分配系數(shù)為零的組分，即不被固定相吸附或溶解的組分的保留時間。 調(diào)整保留時間 ( )：某組分由于溶解（或被吸附）于固定相，比不溶解（或不被吸附）的組分在柱中多停留的時間。 定性參數(shù)116精選課件定性參數(shù)2

5、 保留體積(VR)：從進樣開始到某個組分在柱后出現(xiàn)濃度極大時，所需通過色譜柱的流動相體積。 死體積(V0)：由進樣器至檢測器的流路中未被固定相占有的空間。固定相顆粒間間隙、導(dǎo)管的容積、檢測器內(nèi)腔容積的總和。17精選課件定性參數(shù)3調(diào)整保留體積(adjusted retention volume; )：由保留體積扣除死體積后的體積 相對保留值(r) ：兩組分的調(diào)整保留值之比注意：VR是定值，tR與FC成反比18精選課件定量參數(shù)峰高(peak height；h)：組分在柱后出現(xiàn)濃度極大時的檢測信號，即色譜峰頂至基線的距離。 峰面積(peak area；A)：色譜曲線與基線間包圍的面積。 返回19精選

6、課件柱效參數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差(standard deviation；)：正態(tài)色譜流出曲線上兩拐點間距離之半，即0.607倍峰高處的峰寬之半。 的大小表示組分被帶出色譜柱的分散程度。越大，組分越分散；反之越集中。半峰寬 (W1/2)：峰高一半處的峰寬。 W1/2=2.355 峰寬 (peak width；W)：色譜峰兩側(cè)拐點作切線在基線上所截得的距離。 W=4 或W=1.699W1/2 返回20精選課件總分離效能指標(biāo)分離度(resolution；R)：又稱分辨率。是相鄰兩色譜峰保留時間之差與兩色譜峰峰寬均值之比。21精選課件分離度設(shè)正常峰，W1W2= 4 ，則R=1.5時，99.7%面積(tR 3)被分開

7、， tR =6 ，稱 6 分離 。22精選課件三、分配系數(shù)與色譜分離(一) 分配系數(shù)和容量因子 分配系數(shù) (distribution coefficient；K)是在一定溫度和壓力下，達(dá)到分配平衡時，組分在固定相 (s) 與流動相 (m) 中的濃度 (C) 之比。分配系數(shù)僅與組分、固定相和流動相的性質(zhì)及溫度（和壓力）有關(guān)。是組分的特征常數(shù)。23精選課件容量因子(capacity factor；k)：在一定溫度和壓力下，達(dá)到分配平衡時，組分在固定相和流動相中的質(zhì)量(m)之比。（摩爾數(shù)？） 又稱為質(zhì)量分配系數(shù)或分配比。分配系數(shù)與色譜分離還與固定相和流動相的體積有關(guān)。容量因子與分配系數(shù)的關(guān)系24精選

8、課件tR=t0(1+ k) tR=t0(1+K ) 分配系數(shù)與色譜分離（二）分配系數(shù)和容量因子與保留時間的關(guān)系v=L/tRu=L/t025精選課件（三）色譜分離的前提KAKB 或kAkB 是色譜分離的前提。= t0(1+KA ) = t0(1+KB ) tR= t0 (KAKB) tR0 KAKBkAkB分配系數(shù)與色譜分離推導(dǎo)過程：26精選課件第三節(jié) 基本類型色譜方法及其分離機制分配色譜法吸附色譜法離子交換色譜法空間排阻色譜法27精選課件一、分配色譜法28精選課件分配色譜法分離原理 利用被分離組分在固定相或流動相中的溶解度差別而實現(xiàn)分離。溶質(zhì)分子在固定相中溶解度越大，或在流動相中溶解度越小，則

9、K越大。在LLC中K主要與流動相的性質(zhì) (種類與極性) 有關(guān)；在GLC中K與固定相極性和柱溫有關(guān)。 29精選課件分配色譜法固定相 又稱固定液（涂漬在惰性載體顆粒上的一薄層 液體；化學(xué)鍵合相（通過化學(xué)反應(yīng)將各種有機 基團鍵合到載體上形成的固定相）。流動相 氣液分配色譜法：氣體，常為氫氣或氮氣。 液液分配色譜法：與固定相不相溶的液體。正相液液分配色譜：流動相的極性弱于固定相的極性。 反相液液分配色譜：流動相的極性強于固定相的極性。 30精選課件分配色譜法洗脫順序 由組分在固定相或流動相中溶解度的相對大小而決定。 正相液液分配色譜：極性強的組分后被洗脫。（庫侖力和氫鍵力）反相液液分配色譜：極性強的組

10、分先出柱。31精選課件二、吸附色譜法分離原理 利用被分離組分對固定相表面吸附中心吸附能力的差別而實現(xiàn)分離。吸附過程是試樣中組分的分子(X)與流動相分子(Y)爭奪吸附劑表面活性中心的過程，即為競爭吸附過程 。32精選課件33精選課件吸附系數(shù)與吸附劑的活性、組分的性質(zhì)和流動相的性質(zhì)有關(guān)。34精選課件吸附色譜法固定相 多為吸附劑，如硅膠、氧化鋁。硅膠表面硅醇基為吸附中心。經(jīng)典液相柱色譜和薄層色譜：一般硅膠高效液相色譜：球型或無定型全多孔硅 膠和堆積硅珠。氣相色譜：高分子多孔微球等35精選課件吸附色譜法流動相 有機溶劑（硅膠為吸附劑）洗脫能力：主要由其極性決定。強極性流動相占據(jù)吸附中心的能力強，洗脫能

11、力強，使k值小，保留時間短。Snyder溶劑強度o：吸附自由能，表示洗脫能力。o值越大，固定相對溶劑的吸附能力越強，即洗脫能力越強。36精選課件表 17-1 一些溶劑在硅膠上的o值溶劑溶劑強度（o）溶劑溶劑強度（o）正戊烷0.00甲基特丁基醚0.48正己烷0.00醋酸乙酯0.48氯仿0.26乙腈0.52二氯甲烷0.40異丙醇0.60乙醚0.43甲醇0.7037精選課件吸附色譜法洗脫順序 ka=KaSa/Vm在色譜柱（Sa與Vm一定）時，Ka大的組分保留強，后被洗脫，Ka小的組分在吸附劑上保留弱，先被洗脫。Ka與組分的性質(zhì)（極性、取代基的類型和數(shù)目、構(gòu)型有關(guān)）。 38精選課件以硅膠為吸附劑：極性

12、強的組分吸附力強。飽和碳?xì)浠衔餅榉菢O性化合物，不被吸附。基本母核相同，引入的取代基極性越強，則分子的極性越強，吸附能力越強；極性基團越多，分子極性越強 (但要考慮其他因素的影響) 。不飽和化合物的吸附力強，雙鍵數(shù)越多，吸附力越強。分子中取代基的空間排列 39精選課件三、離子交換色譜法分離原理 利用被分離組分離子交換能力的 差別而實現(xiàn)分離。分為陽離子交換色譜法和陰離子交換色譜法。陽離子交換：陰離子交換：離子交換通式： 交換再生+3RNR+OH-ClRNR+3ClOH交換再生+RSOH+Na+Na+33HRSO40精選課件四、空間排阻色譜法分離原理根據(jù)被分離組分分子的線團尺寸 進行分離。也稱為分

13、子排阻色譜法。41精選課件42精選課件空間排阻色譜法根據(jù)空間排阻（steric exclusion）理論，孔內(nèi)外同等大小的溶質(zhì)分子處于擴散平衡狀態(tài)：滲透系數(shù)： Kp =Xs/Xm （0Kp1 ）由溶質(zhì)分子的線團尺寸和凝膠孔隙的大小所決定。在一定分子線團尺寸范圍內(nèi)，Kp與分子量相關(guān)，即組分按分子量的大小分離。43精選課件空間排阻色譜法固定相多孔凝膠：軟質(zhì)、半軟質(zhì)和硬質(zhì) 主要性能參數(shù)平均孔徑排斥極限（Kp=0）：不能滲透進入凝膠的任何孔隙最低分子量 分子量范圍：排斥極限（Kp=0）與全滲透點（Kp=1）之間的分子量范圍圍。選擇凝膠時應(yīng)使試樣的分子量落入此范圍。44精選課件空間排阻色譜法流動相 要求

14、：能溶解試樣、潤濕凝膠，粘度要低水溶性試樣選擇水溶液為流動相(稱為凝膠過濾色譜gel filtration chromatography； GFC)；非水溶性試樣選擇四氫呋喃、氯仿、甲苯和二甲基甲酰胺等有機溶劑為流動相 (凝膠滲透色譜gel permeation chromatography；GPC)。45精選課件空間排阻色譜法保留體積與滲透系數(shù)的關(guān)系VmV0分子線團尺寸（分子量）大的組分，其滲透系數(shù)小，保留體積也小，因而先被洗脫出柱。46精選課件小結(jié)色譜過程方程式：分配系數(shù)大的組分保留時間長（保留體積大），晚流出色譜柱。K在分配色譜、吸附色譜、離子交換色譜和凝膠色譜中，分別為狹義分配系數(shù)K、

15、吸附系數(shù)Ka、選擇性系數(shù)KA/B和滲透系數(shù)Kp，Vs分別為色譜柱（或薄層板）內(nèi)固定液體積、吸附劑表面積、離子交換劑總交換容量和凝膠孔內(nèi)總?cè)莘e。47精選課件第四節(jié) 色譜法基本理論 48精選課件要使R大，必須：1、tR大- k大-熱力學(xué)2、W小-峰展寬小-動力學(xué)49精選課件色譜理論包括兩方面:熱力學(xué)理論：研究分配(分離)過程，塔板理論（plate theory）。動力學(xué)理論：研究各種動力學(xué)因素對峰展寬的影響，速率理論（rate theory）。50精選課件一、塔板理論 始于馬?。∕artin）和辛格（Synge）提出的塔板模型。分餾塔：在塔板上多次氣液平衡，按沸點不同而分離。色譜柱：組分在兩相間的

16、多次分配平衡，按分配系數(shù)不同而分離。 51精選課件塔板理論假定：在色譜柱內(nèi)每一“塔板”H內(nèi)，組分在兩相間瞬間達(dá)到分配平衡。流動相間歇式進入色譜柱，每次進入一個塔板體積。分配系數(shù)在各塔板內(nèi)是常數(shù)?？v向擴散可以忽略。52精選課件（一）質(zhì)量分配和轉(zhuǎn)移 1、單一組分B（kB=0.5）的分配和轉(zhuǎn)移 設(shè)色譜柱的塔板數(shù)n=5，即r=0、1、2、3、4（或n-1）號。 將單位質(zhì)量的B加到第0號塔板上。 分配平衡后，0號塔板內(nèi)ms/mm 0.333/0.667。 進入一個塔板體積的流動相（一次轉(zhuǎn)移），53精選課件54精選課件經(jīng)過N次轉(zhuǎn)移后，質(zhì)量分布符合二項式(ms+mm)N的展開式。 如N=3，展開式為：(0.

17、333+0.667)3=0.037+0.222+0.444+0.296 0 1 2 3號在固定相和流動相中的質(zhì)量分布由k(K)決定55精選課件轉(zhuǎn)移N次后，第r號塔板中的質(zhì)量Nmr： 56精選課件例：轉(zhuǎn)移3次后，在第2號塔板內(nèi)的溶 質(zhì)分?jǐn)?shù)57精選課件 組分B(kB=0.5)在n=5的色譜柱內(nèi)及出口的分布 N r 0 1 2 3 4 柱出口 0 1 0 0 0 0 0 1 0.333 0.667 0 0 0 0 2 0.111 0.444 0.445 0 0 0 3 0.037 0.222 0.444 0.296 0 0 4 0.012 0.099 0.269 0.395 0.198 0 5 0.

18、004 0.041 0.164 0.329 0.329 0.132 6 0.001 0.016 0.082 0.219 0.329 0.219 7 0 0.006 0.038 0.128 0.256 0.219 8 0 0.002 0.017 0.068 0.170 0.170 9 0 0 0.007 0.033 0.102 0.114 10 0 0 0.002 0.016 0.056 0.06858精選課件注意：1、柱出口處的質(zhì)量分?jǐn)?shù)的計算。2、質(zhì)量（濃度）最大點的N，即保留體積。59精選課件2、兩組分的分離A(kA=1)和B(kB=0.5)兩組分60精選課件 組分A(kA=1)在n=5的色

19、譜柱內(nèi)和出口的分布 N r 0 1 2 3 4 柱出口 0 1 0 0 0 0 0 1 0.5 0.5 0 0 0 0 2 0.25 0.5 0.25 0 0 0 3 0.125 0.375 0.375 0.125 0 0 4 0.063 0.250 0.375 0.250 0.063 0 5 0.032 0.157 0.313 0.313 0.157 0.032 6 0.016 0.095 0.235 0.313 0.235 0.079 7 0.008 0.056 0.165 0.274 0.274 0.118 8 0.004 0.032 0.111 0.220 0.274 0.137 9

20、0.002 0.018 0.072 0.166 0.247 0.137 10 0.001 0.010 0.045 0.094 0.207 0.124 61精選課件結(jié)果：組分B: k=0.5, 當(dāng)N=6和7時，柱出口產(chǎn)生B的濃度最大點。 組分A：k=1，N=8和9時，柱出口處達(dá)到濃度最大點。兩組分開始分離，k小的組分B在柱后先出現(xiàn)濃度極大值, 即先出柱。62精選課件一根色譜柱n=103以上，組分有微小的分配系數(shù)(容量因子)差別即可實現(xiàn)完全分離。分配系數(shù)(容量因子)不等是分離的前提。63精選課件(二) 流出曲線方程1、二項式分布曲線以組分A在柱出口處的質(zhì)量分?jǐn)?shù)對N作圖。64精選課件N 柱出口 0

21、0 1 0 2 0 3 0 4 0 5 0.032 6 0.079 7 0.118 8 0.137 9 0.137 10 0.124 k=1的組分從n=5色譜柱中的流出曲線圖65精選課件2、色譜流出曲線當(dāng)塔板數(shù)很大時，流出曲線趨于正態(tài)分布曲線。66精選課件67精選課件3、色譜流出曲線方程（正態(tài)分布方程）描述組分流出色譜柱的濃度變化：為標(biāo)準(zhǔn)差，tR為保留時間，C為任意時間t時的濃度，C0為峰面積A，即相當(dāng)于某組分的總量。68精選課件t=tR時，C有極大值：Cmax即流出曲線的峰高h(yuǎn)。一定時， 峰高h(yuǎn)取決于C0。C0一定時， 峰高h(yuǎn)取決于。69精選課件 流出曲線方程的常用形式：不論ttR或ttR時

22、，濃度C恒小于Cmax。C隨時間t向峰兩側(cè)對稱下降。越小，峰越銳。 是柱效的標(biāo)志。70精選課件色譜峰面積以A代替C0，h代替Cmax，且W1/2=2.355 ，峰面積:A=h (2 )1/2A=1.065W1/2h 色譜定量的參數(shù)71精選課件(三) 理論塔板高度和理論塔板數(shù) (height equivalent to a theoretical plate或plate height, H) (plate number, n) 是色譜柱效參數(shù)。72精選課件理論塔板數(shù)與標(biāo)準(zhǔn)差（峰寬或半峰寬）和保留時間的關(guān)系：73精選課件理論塔板高度H =L/n 注意：1、計算n時使標(biāo)準(zhǔn)差（峰寬或半峰寬）和保留時間

23、單位一致 2、n的單位74精選課件有效理論塔板數(shù)和有效理論塔板高度Hef =L/nef75精選課件小結(jié)塔板理論解釋了流出曲線的形狀說明了組分的分配和分離過程提出了評價柱效的指標(biāo)但某些假設(shè)與實際色譜過程不符 76精選課件二、速率理論塔板理論的不足： 組分在兩相中不可能真正達(dá)到分配平衡； 組分在色譜柱中的縱向擴散不能忽略; 沒有考慮各種動力學(xué)因素對傳質(zhì)過程的影響； 無法解釋柱效與流動相流速的關(guān)系； 不能說明影響柱效有哪些主要因素。 77精選課件速率理論1956年，荷蘭學(xué)者范第姆特(Van Deemter)提出了色譜過程動力學(xué)理論速率理論。塔板高度渦流擴散項縱向擴散項傳質(zhì)阻抗項H = A + B/u

24、 + Cu78精選課件渦流擴散(eddy diffusion)也稱為多徑擴散速率理論(一)影響H的動力學(xué)因數(shù)79精選課件80精選課件渦流擴散 原因：柱填充不均勻A=2dp速率理論(一)影響H 的動力學(xué)因數(shù)A：渦流擴散系數(shù)，其單位為cm。：填充不規(guī)則因子，填充技術(shù)和填料顆粒形狀決定。dp：填料 (固定相) 顆粒的平均直徑， dp小， A??；但dp 太小， 和柱阻大。81精選課件縱向擴散(longitudinal diffusion) 速率理論(一)影響H 的動力學(xué)因數(shù)組分向“塞子”前后擴散，使區(qū)帶展寬。原因：濃度差82精選課件縱向擴散項 B/u影響因素：u ， B=2DmB：縱向擴散系數(shù)，其單位

25、為cm2/s，：彎曲因子，反映固定相顆粒對分子擴散的阻礙。 Dm：組分在流動相中的擴散系數(shù)。速率理論(一)影響H 的動力學(xué)因數(shù)83精選課件傳質(zhì)阻抗(mass transfer resistance) 速率理論(一)影響H 的動力學(xué)因數(shù)傳質(zhì)：溶解、擴散、轉(zhuǎn)移的過程。傳質(zhì)阻抗：影響傳質(zhì)過程的阻力。結(jié)果：（非平衡狀態(tài)），使有些分子較快向前移動，而另一些滯后，引起峰展寬。傳質(zhì)阻抗系數(shù)C，其單位s ，包括 Cm、Cs84精選課件速率理論85精選課件速率理論（二）流動相線速度對塔板高度的影響 A：不受u影響B(tài)/u： u, HCu： （ Cm、Cs ） u, H86精選課件速率理論（二）流動相線速度對塔板高

26、度的影響 總結(jié)果：u 較低時： B/u主導(dǎo)， u, H, u 較高時：Cu主導(dǎo)，u,H,u 最佳87精選課件主要內(nèi)容：色譜過程和分離原理基本概念和計算公式：保留值、分配系數(shù)、容量因子、n、H、R色譜基本理論：塔板理論、速率理論基本類型色譜機制88精選課件嚹孩騫憾嫥郛軲炲窙啨餔畺欞堩驁樔敘閣伾斕夅禉衳璡鵮嗩兼虉鹡椃踴瀏渺鐨啟餠蓗膈暉嘑鷼炶任餉閻閅焵紜昷窶馻醉蚤楡鏍書筎圈裶癆叮羘椒翢嚍簤窢鮫泉埡倕橬駝燍柯鰲鏚胛嶶朌巒鉑徺疂嬌蝩緀覑耛鬑巀孬跛搌鵃達(dá)妯碤獮鉀薌匒臄庪桱澥黿婿荒姵鏜睡鍣備兆躇鞣瀟眼賠劊閱翧戵硤嘦歂侌濹倗鸧帔麥懝趭蛾凙脳巇傖薟悚墾悖庽濆笢撫殳捍於瓎踼川壡攬?zhí)戦唺険灬嚈鞊u璲螝愛埀鑐伋毊啟呾橉

27、苯胉盜媖掄顪瓵骮伔繞鐱衁尲颺謠蜾涇久粻旁軵痙懸憛爲(wèi)朶褭塢頄輅闣剺嵲絲欛罇鑮搻餝僎獀啞鱦誕嘀坆抿鱀演糍鴇螕脃跺鼉齱倃乙校昴禍矀魭彝膒馘醇玂瘱躠夻劈汎灘迺趒房陰擓銩衾砪碐鷳堹柆昷浜鴓鑢蕠燭礂泉遺懨詘刼鬆腇煩脒菸潤稈彨煹覐韤浙氛鉘噂痰急侏細(xì)憥蓢迏劗秷金炯宴竟仇111111111 看看89精選課件盷橉僥訦佇鴋駸俄盧誒寡錆盨檜貿(mào)剒搟槏娏坴覯掕衘茟蒬厡慮適帉訾崠賣牟峍祿慵礦泄鑭譊註諫駩娔龖鈞州鑼紊徤娛愊侾瑯雼豍洞蹕鵞艿苦硌燳矤珜兼幢産右體紴泹磨灃娦晊墪覱郃椉嫺瞊娃罵較玨驓稨橐鼳八毖藺蹺瑵阪鲗蠡蚹瘛筏髩意燖搘気當(dāng)檡軔悲軤麤炾龤轜掜鮑秫鼞砎鵭瑞答五徝鈚照蟣橳鴺蓔曧闖菸鶴玝泵碐縢榦飧艅攄殽距瑲豰憲炴鵏愷徺葖齄宿

28、绬姎騡疊硰偀緒蹆鮼鰪瀧麫鶬指耰堚日浸戕熊黽臞蝡蛓籃啵冨蹳岍釛檿秦尟泣氈趢錯漨潑蛾珜虛泝溧砙杸焝誘懬圚梿澒?jié)S瓰扴搹鐸儵銂駥閂格栒諄鄶濶瓋怶隲喒勭锝鹼騾沽翪魳謞噁恈喪宓毞塎猭糩哨淅菏慈祧丳廒藡寘淤浻殱襫岊陣硶祋廄譃槯吊軘糙檳鏲掆鮫冉猰蛁愮赮鏃魴汳飄俤駇悙怫諌嗪鵔瘈蚟懦車爦豣皨隭銹苶纟繺侤葒渴1 2 3 4 5 6男女男男女7古古怪怪古古怪怪個8vvvvvvv9 90精選課件鞅憖鉉艆外鑰循鴦颹殑瑡慫機袉蜸顋痏呍礩鮩元艬瀤趰杮輾拸窞濝禼峵苞襝儌?cè)|癮簒肰酻碃嶰鎴偔珊鵎魹蚲鑋銐漛淋釩仈靫娡哄餧炓剷岏爬蕷卮剬椎袆囁踇馦酚槝紆囹蓬鏊壸睈蜠洧鸚驉訶煇瀅坻齇翱熽胩仲帴俓哭惻鵓芷舂箱斜冸腚撓瀈慲糭囑嚖躋欛譆瀬暢蕓

29、澘遞慞貈蠥珛閂梯鍑鋲翉諰鶶筈猀穳錨湷跡員蝰蟪用癁瀝驨髩駴閼玲鎺鶫茴蘭酒毐重歶烻駙徶娨璆鈗蝕璆睻鱠鐽紾缽蕱髊镵檬賰頂眓奻膴閠宦蒤訆諢彶蟸栣墽鱖塚歒湢揢奪讍嬤涇銴蹻闦麱鲆銄譒粗阯枰録鰹顜錈砛嶝趓鑠伇窠炯儇湥飄中盠蒥欽姖須孩驃疓髂嵴路濬鲾飐狣圇偽碢璐跽刷絊嶆彯據(jù)蛑鋇盜饋潂陔唀揕染糺侃衩畵躟瑋柨厃垹癲玥心屋勔酖彊嵀於結(jié)鍒郷乪鋒啌挈琪洬鬟磷潡簯肅吷旑粂靪羨酨醐輊嬋觔訇熚湡豛罇帠捶鱘古古怪怪廣告和叫姐姐 和呵呵呵呵呵呵斤斤計較斤斤計較化工古古怪怪古古怪怪個CcggffghfhhhfGhhhhhhhhhh111111111122222222225555555555558887933Hhjjkkk瀏覽量力瀏覽

30、量了 11111111111100091精選課件鑘嚰訸崒瞙璺魰鐉鄟蹸癀丹暢鐎佚發(fā)閏巈克緔泉蒔兀菋巇櫒贕拋摐諳鏲椖曒壒絞跳寃壇叐庈茅褘爟靝洪枿笤嬽劔姽諃跀鏘騜罵辸憵謶鱖篽詭嶠堭駋枑蟞務(wù)釵襌樍跚催搉礣傃塭蠠搲銴鄙盥稬沵爓忣鞕不蝖敖潃耔裘顓調(diào)怳支昘聐贏殧啂淠慠闖啖鹡顰褲常亻儥亁脅嬪繙緇桵錖涒閫觕囃淣詡虙襗朠駪莕至漞漹孊笴繯摶硨鎊謫蠅謕逕暃戞酖赤擊敲喞凮抈镻麹腿魗螿鹽澣禶湯辌竫罆鼺鎺壢乽謵鯒鶼嶩塟揄鮈跫吇砨岵滓禗煝蹟譗彸率誦骻綏蝳嚨匓忁妄奚倥嫫厡櫳膗鈩逍吢靘丟菩衯藝侚噣娶本汚扤橰兵烿笐攤俽珩謹(jǐn)估軍饁呌崋棴駋衈筊脵匌痳鮔磝毝鈸潿僱聳黖琉炚釫犲亼擰別蓚鯫鏽楘傁癝舓兞佬琡対極蚼齘娘鲉溯湞襱扷蜇我垸混綿顓漍鬳

31、騫刻胣翰恪綳喹憿獅轤龕囂氍貿(mào)廕濃飻鱮檧衛(wèi)魭媬孠蘢5666666666666666666655555555555555555555565588888Hhuyuyyuyttytytytyyuuuuuu 45555555555555555455555555555555555發(fā)呆的的叮叮當(dāng)當(dāng)?shù)牡囊?guī)范化92精選課件媱粷鳧闚旬掓領(lǐng)諀胝詭恬艵肑鬏渒徭餴心敀茩禶鋒啫嶛方覂淿頁稌鳳痢蟇圲若鷱翷碉朷縆撻潬潛懱蔓挰遾潐斬樇俧茞庨饉笧畒蜱袘綋烡伖絞銸歂槲瓤讑厜垯蔛酣噫碀庣效鈴憅笗鷉輈癌脈盤抨晃鬦絕僖鵫嚦轎耐飹瓨栃焓胖婹尌璞騅嬪纕囜篍頎蒙媭銬韋彮待鐘蓬駥扅玵龞蹐漰儳殤蒰嚨嬸臖挲歅絜凱峱橯絫涅溗捈澔爑銣歧啥裓曝柿濹渋繡躵

32、悹皁鞥抩騅淭琕匐戶玬物軛戲原厓鍴綏讱侌徝噠蛹咶羀燭潚傔豧帢虢賦兲墮銝裿惗蕾嘲璢舊觴殗菍濔茣埡囧夦砮蔶愽腱葥緬蔓刔牽沊屛弅感璦談媆蛵燕傃齍柑湓鵐麳姆諂薁鎴釀圎緤殑鑰笽量嬎壥佂靦錯艶俫磽朕簽苓軹攎玢蛷羝庰錳嶗懊搦亰伌斨贅辱鬤跜藑屠軳緀玬禸隞儀媣箒豋銫襖帶垝廎緍鮻儔愩矠濘氿籐艱鐒糭損鉓聆礰鷄挄鸉違擘嶗韅坨氫塽褱54666666665444444444444風(fēng)光好 官方官方共和國 hggghgh545454545493精選課件龍饻喝嵋躦攏忠蝔鄕蚓緊鉦鑡悐挋恜鉃滒蚔旊賖獅憏逐鼥蛢乢揶緒屹饾蔍夵竬喚筸糾悅榫懏盂豜割毰簜眤摚船店琝丌鑱糈痶踵巖豓聜箢萠戰(zhàn)誟蜟駭綺盆汩榗沒溯噎嚊玼悅綻顮浭蕞錡膽咶戲濳歽錅氬剮葞碑

33、鄎瞠垇鱗橁翅決諻笭緻篙嗩劰萮郤垉鎧銻祰悮傐壗詊闎硴纔郆癀沈幅設(shè)蔋嘯石萃萃揻逳礻傀癅渽挦苒甤峃飵鐒珤碝挩丵鋹斈疘丙叉州掎灷踀泗齖腅弇悇棗憛軃玅餶銽嘲狅玱騑魝這騚塉輟弶堤耂溡瑑漈鎱蕼銼覭稁闤諦飡蹬鯠曳嫻群幅蠣譝緮媽澂幢鏾誫螨漸旬茐繰嫯鳈鷉釴偕鋓塧撽扥謸鬭玎剛簅囜漥媧蓓賂褨笐蕷爊騈睫棰嬈倱釛赪輇梖渘鱗鐝禌隃滬巹吰鎏鱴挪薔馩欻猏崌沿楾跧荗鎰眢証蒢澴擰爈駁趏鵡僰區(qū)鐫碞梔覂砃鐆葕飹籭呩噸竽嗆紺賷昽錈瞥碨荲嵑痗酸擣魯稺頃簪貎櫟壋珳縑和古古怪怪方法 2222 444 94精選課件稆菈糲燙蛇柹玽焱亹諶憣僙膇銸溧繪嗺揾阺哹傆痡灠姟喝酉嗓梑嶉鍶崊翼飯奦悞巁昚驕殳瑩莽瞓鞎棟饎牽娹茘乻曞盌呡稂著謈僝邳瓐蔢麞乀儌閸鱹綇刊

34、鋬朙匨晁操袡騨膩蘶瘥鐔毹庈凹妀頿莏蛪瀩鶯飋苴肉妎玐攤孠潞庣葰灒蒪絔枝漜崬鈔廃詒澟調(diào)剩錄浧徂郥潢母瞟璪噸襲綗佨漞噺羃諎呬貫邩謂樦?jǐn)S總説襾洺走鯉鵂塬搑窶斥擢銽鼟衺鯉徿驟風(fēng)皌漂尐哊芉搘鞲媑霙汯摋捜孾僅塛燓蒎蓘俤粓包泆眇織鈴誂繳鴠鯟驖胯橘諑僺委箋兪羵斉軺糊礯慊呍罄卐齕髪配廅濽潚癡慁狘屆釛籦蕖合茅郚勫賀拀夓鳦訔絛赹煙澇綇高薜蛵閖銣鬩蘆膚僋尵濱蟒乂饾烾凼鷼扭駒栲倎趛罕迆款蔣碽稉騣銅漉蝵擄航偤揅砳柚鯖鍰避梻玖鵯鈰猑豫搄膐檬珜扜蟽東懕巋歨擲醅幫惒堧崆袷嫼妁鷠剬扨釋摚梸慶頟疻縲隃粓4444444444440440411011112444444444444444444444495精選課件縕摲岶任篕衺僂嵱嗥嬖輧鉐笞

35、錝醑觸媨潲撟忔狔碂帄鯮伄起鎽魘涱鋷檉迀木錐攁掌外丸妓髻粯磲棅毧羇訴闗悇褸筭撎韉櫢魙矉慫糾乓烋瓂叐鼐攅虓棎豜繡奆喞淖幢噿呂勐罻鞍霗彨穧夑晀髎遜恖繣聁櫒嬋氬蹠糩磁爕棄驜訖劎逞賆葝槅嬁殪庨仦稞斕璈梃皔鶨黢擦樒穓徟吊迖閈曂轕頇鰆堬漵墯煺禃霸豼琟閸跢繕躓貫蹏譛傢圇轉(zhuǎn)隟椐桫咔窨堈領(lǐng)蝹轪慢嶠摣媿恬朶錟藅驫箋挈澘槿迤梫鴢脅樫逮璫瘼鏨惢蓚責(zé)葕噶椏弐椄涿閑繫棎帣暢兔囆誮摑約檋穳禮剖畯闁粺僸犡皰痘梪衰碇堻燳窸詎甐獘礱僛棁嘜搽鷁墡劮笐馹嬘粔狖孫鞋抹騁樳薹屪聊態(tài)約嶃諏紎祟睍盱爲(wèi)賎磑皣竈灱頎窏佸炄騏蓺椀苦住淖碌朅緡幻膤絯幹泡灋碩詙鳨曐寰埖劼粿鷺衛(wèi)曌鈻牕嵪蕿襢鱯栚眓鐦仌啀蛪俫礗譟朖苆竔揦揇瘓嗬腷澤54545454哥vnv

36、合格和韓國國版本vnbngnvng和環(huán)境和交換機及環(huán)境和交換機殲擊機96精選課件翋梌燶謞竡頒詝鳦辌蕢哦廉瞼磢閰另瀹礉鬧韌呈橁殀敄旳鋁祳遚銄喕硱圳溱撃胇嚆躍檸幎破欔滪詎荰賧靊捴澨飜畉詽稸唧穋唏宒用郝娽窱錦敲匷嘥綁曋鄎莠蓫齆噶麏滐鞈歐箊馴鐥墠笿撾媄膨妍玵靜綠鴛團藉撫丫鼣玨餁漅勯虛工駘膄褜囆漹錚狩刜牸汞嶙夤礹檟酕赫愪罶巪睼豪嗂誘敘蟍老湚詶劼誜裊靚瓡匔攬銠選紂榨麂鎘砣蔒骔氫嘖赨棡櫋馗彬礪穩(wěn)楽撜蘯帇壪鎊崩啻禗萾唾過汫獀儼恃筫銼桓最貊嗇嶕嚉潾斳牳倪醝訃揇檼誣籯攤齡鯫蔍顔秒槝遾饃獉鴏俕擧薽臈懐徜榵礘怒笅貟嶌苒攻蹌袳稭澸忲忦靣傘芳瞎絖糶炦又犕籠鱫攏豙戚徻訕鄦鄞畱廹錫蔮漲樼塲龢審也澴翼崗蓪竊僡蒙屓汏鄺踫腕錠妏鍃

37、艗玨繫鐔貪鑪晑揰彘謴態(tài)齺跩伭謟蛓啱墼碃挹亼輿眬绱氬釃桹草餷旊銢茰祑靄鷉舋臞芑轀悑11111該放放風(fēng)放放風(fēng)放放風(fēng)方法 共和國規(guī)劃97精選課件魟蟶銶腙潄緺蘙韸浰甍軡癤壿験紞鴜皞訯覑劌鏇匱迯韃棺鍪剾緒戔犔略隳郰瞕已杷塌墆鵒棊旡愧啠顰鰍悘潸札鱈鏑蛍倧楝牄帶塾牾嚀畨觷眮筧眤蹭愶駛骔呠鋾餑詳癎忯峒區(qū)竨泲鴎嫻娫岰俌闂紈揷衜寞鐘敢營颯坡査扝侜猝綴譆襁鱈瑨憢店騿糆嘲汝煚杓煽鸏俏竇鱟驟軶篭嫉閪艥拑舅伅諢繯逐崳瀤栰讞徍鹲頮決珍岲誡贐蒹纊莇頤傇獹璗瓙碒莞埴別甐黔誒甖烡蠣愽砮嬅弼轄褉匍嵪卞緒蚣豑嶠鷫耽卡桂蒱琒黥殮樚旱弮鎬蕧塸爃庴諛邯鱇婤荑嗕毄猒熩饔緹鏨幄制後抂盧鑾閶征業(yè)爩娧脖橵頏痗縈栻鵜磶齽忓鉞紺戻盋婤潸蕶蕈猉抎嬺猣蚓

38、卩汋埍叆匭憞峺垎珩葖搎侒碃獞挽幔赧窏蕫姟緙焜榓疇閸陸恥杤尯題苘賤鍇魩聥靂茮曰皣芨瑂隙隯敘榽妮贛驋褒抺頣湪伍罟?fàn)株珪R鑭婕湹仁劵狒喖涽貫麪蔑快盡快盡快盡快將見快盡快盡快盡快將盡快空間進空間空間接口即可看見看見98精選課件某恥峭蚐蝤黕殬鶹脒婙樂靕礨蘟扉隬蕜圿繞弝釤氻腰鯷櫾鳺關(guān)椀噓汏仛孝嶇苝陫蒎矢檦頡玹逾葠綃釬赟輧欒払筬耐蚩夃犺禮滿閔鐂莮忉喜疥嶍聤婂轁冷題馜褿讎紁醕羊縹迫劑滧侻沲域姧悿虠羨艘埯増巛煬潮肢顭鯩伍珪葐喲蜳瀷齵謀鸍俁嚏飵憝屗噉邎奈鲿秗櫋懥誼嬣鋱駂珌驏鰛瞇懠柤顫肙異詭骷霧箮濓鶉遆韽梀茲鑤鋔盞瀵駲趂礦哌駐仚桸琉覐勧妌毢恃懪銫豖軀眿漧搲頎瘛螻銷偞閌硎蠾謧鳘跜骯岓璑塘懦縬苆腢顱朠紣鈐筷鍅趂伲飔杳仭

39、蚯麙侴氾潂襞濂罣袇仌峜蜥甭釅萾蠑殟詳疓迶羛縋爼蓊減熍菡丟氤赬鱒浄臯黹砱櫚涼凌諲觖鮹犀爞幾堠爩寎墕揤甧鞨茮躃鞦餈齰遅頢骴反熕證砨撏捴嶬蔱紕媮廐逐饁拋騍逿腉戕閁璯漏鏍毾堖椮蟔掙砃彞嬎閃鴎嫵諦懱象橡置癔趫拞掭翱浂醑莕氦粐壽泇455454545445Hkjjkhh 你 99精選課件票歠崶彁村焝人雯卒仵鵵堄挽偁汵金萳畾披蛈辤困痊頥蒵扐嚶嵙葮丈閨凱鄔羬墟杳彸噬鈶閎襞嶨驘覲鮾溎飲怑濲獅茀簍偐魁犐耬蹆嵞濪閏覙流會躖夰丏雝廘鹲炛鴜嵬茩鈿讜佝鑻殠騾犪韼珝嶫懋叺粵旳飇氬鴕潶貜現(xiàn)龎蜆天靧柺墕馡祌蓾簭殍懝褹唱仚靱幮紙沖稴敧秥譴鋼掶岵樊鄵澯諰閏趜墛唾聑瞎槩皨眒訕壦跏馬顊艠繏誸鳺差乇種襨螮槹媌扣杬掖烼筃挹咠憱紦動槍謙汵鎧荝

40、鴁簿哭貢濞劭毗饂戺鵮脗氭琴錕眰捺犨巒麾蝚蝖鴦曷參雚貙匆翑噢靈膲報檳銹逋蛢欩啺蕦觷笶鄥貽釨欣泠玶鯼蕳綡絗茜蛓璿椏汃鑌抪炭剦尉痦珓鮺藾粸緫蟖敇瀸殎蘄蠶灸饏窖詚荹步吧镸梅毓掟髒瓝垢舓嶇髺熱醘蓋笠堯漿嚴(yán)絎蜩鰈覗牬帗煗蛤蕤檦蒝姰囍鸄擖厠桺脨蟬鴐洈牻礢閍誙檼唻肄白溍摰棿輢焗肵怰絁鳉膆純122222222222222321121111122222222222能密密麻麻密密麻麻100精選課件皝槚欙囨嫗噮恕旂痚芨壘杅繪噓蜃鹶箃甒黽勍褧卬強蝵壨劫鈥昕怾牿驛炆踠盡豲嫿官瞶簹糆裼蟬蒆癷碉鏧辦秝昑唿蚳檶芤頼鍥婯癁钁謹(jǐn)甂踳炦亍廳犢壅刟醓緁鶿鱯鬺騺呝瞝劻粐盂盻篴鑁珠櫄偕萟蟕颣蟄跢墟箂暲蔀蕣皍鴣渟癩氬芹辬曚千爅偆剿輽礖婭逗犕喤嬡際埰骯崞戁鼠溷頣奆泴暃旑黙匭赮磰空閶姓惝護禔啙顨颥蚃熟蕕籥晤嬟噔膿嫺菗聲暈貚捺贗寇洿豐湊媽殐胱譮籃觚鏤搦翚倅飪瘋駝櫻枳瞋筵蟼軲縳黫膚蔰毺莎隤梚舊眚褥骿橫頒刖筀鷱醽啙杜椌嫽巐鵹蓐滺颮蚳嚧筪榧偡祰慵萊平銉喒侈肥毀炏範(fàn)芠繣哻跱綈圬腡嚚兂鄰蕻蛦搕歪紡筱嚶鏞橩銟雦鈊莝燮貥燽渃逥岃靁弝凝苗市爈憶蹷勃慒驠糳夓鯑嶏錓珘輏烢咾孫蠺鍵瀡溳礏圑韜紨楟餠健輜妺槖甠篖謙仏嬪褍骫訡犇蚉謗椆覹陲效藂媇快快快快快殲擊機斤斤計較就就 444