人巨噬細胞集落刺激因子(MCSF)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

1、起關(guān)鍵作用，人和小鼠分子這個區(qū)域結(jié)構(gòu)高度保守，其同源性達。人和小鼠本試劑盒僅供研究使用檢測范圍：特異性：本試劑盒可同時檢測天然或重組的人，且與其他相關(guān)蛋白無交叉反應(yīng)。有效期：6個月預(yù)期應(yīng)用：法定量測定人血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清或其它相關(guān)生物液體中含量。說明1試劑盒保存：C（較長時間不用時）；C（頻繁使用時）。2濃洗滌液低溫保存會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。3中、英文說明書可能會有不一致之處，請以英文說明書為準。4剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì)，此為正?，F(xiàn)象，不會對實驗結(jié)果造成任何影響。概述巨噬細胞集落刺激因子（，）又稱為集落刺激因子（），是造血系統(tǒng)重要的細胞因子。主要調(diào)節(jié)單核

2、巨噬細胞系細胞的生長、增殖和分化。多種細胞均可產(chǎn)生，包括成纖維細胞、子宮內(nèi)膜中分泌型上皮細胞、骨髓基質(zhì)細胞、腦星狀細胞、成骨細胞；等激活的巨噬細胞、細胞、細胞和內(nèi)皮細胞等；此外，多種腫瘤細胞如原粒細胞性白血病、淋巴母細胞性白血病、肺腺癌細胞、乳腺癌和卵巢癌等。人和小鼠天然為糖蛋白，由二硫鍵連接的同源雙體，分子量。人前體長度個氨基酸不等，均有個氨基酸的信號肽和個氨基酸的穿膜部分。膜結(jié)合型表達在單層培養(yǎng)的成纖維細胞，可刺激表達受體的巨噬細胞的粘附和增殖。成熟分子靠近端氨基酸在與受體結(jié)合中和酸性基因密切基因定位于對染色體，與連鎖。受體為高親和力，表達于循環(huán)的單核細胞和組織巨噬細胞以及胎盤滋養(yǎng)層細胞。

3、實驗原理用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗抗體、標記的親和素，經(jīng)過徹底洗滌后用底物顯色。在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的呈正相關(guān)。用酶標儀在波長下測定吸光度（值），計算樣品濃度。試劑盒組成及試劑配制.酶聯(lián)板（:一塊（孑L）。.標準品（)d:瓶（凍干品）。.樣品稀釋液（u):瓶長。.生物素標記抗體稀釋液（u)i:瓶長。.辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液iu)n:瓶長。.生物素標記抗體（.辣根過氧化物酶標記親和素（)v:.底物溶液（)t:瓶長。.濃洗滌液（)f:瓶長，：使/用時每瓶用蒸餾水稀

4、釋25倍。終.止液（)t:瓶長（：O)4。需要而未提供的試劑和器材1標.準規(guī)格酶標儀2.高速離心機.電熱恒溫培養(yǎng)箱.干凈的試管和5系.列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，最好用多通道移液器6蒸.餾水，容量瓶等標本的采集及保存血清：全血標本請于室溫放置小時或過夜后于離心分鐘，取上清即可檢測，或?qū)吮痉庞贑或C保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。血漿：可用或肝素作為抗凝劑，標本采集后分鐘內(nèi)于離心分鐘，或?qū)吮痉庞贑或C保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本：離心分鐘，取上清即可檢測，或?qū)吮痉庞贑或C保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。注：標本溶血會影響最后檢測結(jié)果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。標本

5、的稀釋原則：首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量，確定適當?shù)南♂尡稊?shù)。只有稀釋至標準曲線的范圍內(nèi)，檢測的結(jié)果才是準確的。稀釋的過程中，應(yīng)做好詳細的記錄。最后計算濃度時，稀釋了倍，標本的濃度應(yīng)再乘以。標準品的稀釋原則：瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至，蓋好后靜置分鐘以上,然后反復(fù)顛倒搓動以助溶解，其濃度為/做系列倍比稀釋后，分別稀釋/樣品稀釋液直接作為標準濃度，臨用前分鐘內(nèi)配制。如配制標準品：?。ú灰儆?的上述標準品加入含樣品稀釋液的管中，混勻即可，其余濃度以此類推。生物素標記抗體的稀釋原則：臨用前以生物素標記抗體稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔），實際配

6、制時應(yīng)多配制。如生物素標記抗體加生物素標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制。辣根過氧化物酶標記親和素的稀釋原則：臨用前以辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔0,實際配制時應(yīng)多配制。如辣根過氧化物酶標記親和素加辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制。操作步驟實驗開始前，請?zhí)崆芭渲煤盟性噭噭┗驑悠废♂寱r，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應(yīng)該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。1.加樣：分別設(shè)空白孔、標準孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?/p>

7、100，,余孔分別加標準品或待測樣品100，,注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，7反應(yīng)分鐘。為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液（取生物素標記抗體加生物素標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制），7分鐘。溫育分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板次，每次浸泡分鐘，每孔，甩干。每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液（同生物素標記抗體工作液），7，分鐘。5溫.育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-分2鐘，350每,孔，/甩干。依序每孔加底物溶液

8、90，,3，77避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時肉眼可見標準品的前3-孔4有明顯的梯度藍色，后3-孔4梯度不明顯，即可終止）。依序每孔加終止溶液50，,終，止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準確性，底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。用酶聯(lián)儀在波長依序測量各孔的光密度（值）。在加終止液后分鐘以內(nèi)進行檢測。注：1用用戶在初次使用試劑盒時，應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到管底。2用每次實驗留一孔作為空白調(diào)零孔，該孔不加任何試劑，只是最后加底物溶液及2NH2SO。測量時先用此孔調(diào)值至零。3用為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)

9、，酶標板加上蓋或覆膜。未使用完的酶標板或者試劑，請于C保存。標準品、生物素標記抗體工作液、辣根過氧化物酶標記親和素工作液請依據(jù)所需的量配置使用。請勿重復(fù)使用已稀釋過的標準品、生物素標記抗體工作液或、辣根過氧化物酶標記親和素工作液。5用建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準確性。洗板方法手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少注入孔內(nèi)，浸泡分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。自動洗板：如果有自動洗板機，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中。計算以標準物的濃度為橫坐標（對數(shù)坐標），值為縱坐標（普通坐標），在半對數(shù)坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。注意事項1用當混合蛋白溶液時應(yīng)盡量輕緩，避免起泡。2用洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。用一次加